最新大肠杆菌测定ppt课件.ppt

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1、大肠杆菌测定大肠杆菌测定测量意义：该菌源于粪便该菌源于粪便,故故以此作为粪便污染指标来评价食以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量品的卫生质量,推断食品中是否有推断食品中是否有污染肠道致病菌的可能污染肠道致病菌的可能.样液稀释充分振摇或研磨25g或25ml检样225mL稀释液含有玻璃珠的灭菌玻璃瓶或乳钵1:10稀释液。1ml1ml1ml9ml水1:1009ml水1:10009ml水1:10000B.初发酵初发酵(通常说的假定试验通常说的假定试验,目的在于检查样品中有目的在于检查样品中有无发酵产气的细菌无发酵产气的细菌)将待检样品接种于乳糖胆发酵管内将待检样品接种于乳糖胆发酵管内.接种量在接种

2、量在1ml以上者以上者,用双料管用双料管,1ml 及及1ml以下者以下者,用单料用单料管管.每一种稀释液接种每一种稀释液接种3管管.10*0.1双料l双料双料单料单料单料单料单料单料盐水1*0.11*0.011ml0.1ml0.01ml0.010.1稀释液361OC培养箱内培养箱内.培养培养2412h 如发酵都不产气如发酵都不产气,则报告大肠阴则报告大肠阴性如发酵有产气性如发酵有产气进行下步试验进行下步试验C.分离培养分离培养将产气的样品接种伊红美兰培养基上将产气的样品接种伊红美兰培养基上,361OC培养箱内培养培养箱内培养,1824h 观察菌落形态观察菌落形态,并做革兰氏染色证实实验并做革兰

3、氏染色证实实验 菌落形态菌落形态:深紫黑色深紫黑色,具有金属光泽的菌落具有金属光泽的菌落 紫黑色紫黑色,不代或略带金属光泽的不代或略带金属光泽的 菌落菌落 淡紫黑色淡紫黑色,中心色较深的菌落中心色较深的菌落 (可疑菌落可疑菌落)粉红色粉红色,中心色无较深的菌落中心色无较深的菌落倒平板熔化已灭菌的培养基并冷却至45左右倒平板，每种培养基每个稀释度各三只平板。菌落类型D.证实实验证实实验(复发酵复发酵)在上述平板上在上述平板上,挑选典型菌落接种在乳糖发酵挑选典型菌落接种在乳糖发酵管中管中,置置361oc培养箱内培养箱内,培养培养242h,观察观察产气情况产气情况.凡乳糖产气凡乳糖产气,革兰氏染色为

4、阴性的无芽孢杆革兰氏染色为阴性的无芽孢杆菌菌,即可报告为大肠菌群阳性即可报告为大肠菌群阳性.注意事项注意事项(1).初发酵和证实试验初发酵和证实试验:乳糖发酵实验系样品乳糖发酵实验系样品发酵发酵,不是纯菌的发酵实验不是纯菌的发酵实验,所以初发酵阳性所以初发酵阳性并不代表大肠菌群阳性并不代表大肠菌群阳性,因此因此,必须做进一步必须做进一步证实实验证实实验.(2).产气量与倒气管产气量与倒气管:用于初发酵或复发用于初发酵或复发 酵的导气管内应无酵的导气管内应无气泡气泡,作空作空 白对照白对照 应以产气为主应以产气为主,产酸仅作参考产酸仅作参考 导气管口被样品颗粒封住导气管口被样品颗粒封住,影响结果

5、影响结果3)挑选菌落挑选菌落:在平板呈黑色在平板呈黑色,有或无金属光泽有或无金属光泽,检出率最高检出率最高,粉红色粉红色,粉色检出率最低粉色检出率最低.只挑选只挑选一个菌落影响大肠菌群的检出率一个菌落影响大肠菌群的检出率,当菌落不当菌落不典型时典型时,应挑选应挑选23个菌落作证实试验个菌落作证实试验,以免以免出现假阴性出现假阴性.(4)MPN检索表检索表:本表采用本表采用3个稀释度个稀释度,即即1ml(g),0.1ml(g),0.01ml(g)若改用若改用10ml(g),1ml(g),0.1ml(g)时时,表内数表内数字应相应字应相应降低降低10倍倍.若改用若改用0.1ml(g),0.01ml

6、(g),0.001ml(g)时时,表内数字应相应表内数字应相应增加增加10倍倍.快速测定方法最可能数法平板法步骤步骤与乳糖法相似。培与乳糖法相似。培养条件相同养条件相同最可能数（MPN)法原理：大肠菌群可产生-半乳糖苷酶。分解液体培养集中的酶底物MUGal,使4-甲基伞形酮游离，在336nm的紫外光灯下呈现蓝色荧光。可根据产生状况结合MPN表对大肠菌群进行测定平板法原理：大肠菌群可产生-半乳糖苷酶。分解液体培养集中的酶底物 Aliz-gal ，使茜素有了并与固体培养基中的铝 铁 钾 铵离子结合形成紫色（或红色）络合物，使菌落呈现相应颜色 计数当平板上的紫色（或红色）菌落不高于150个，且其中至少有一个平板紫色（或红色)菌落不少于15个则可按下式计数快速测定流程检样稀释MUGal肉汤（MPN)法336nm紫外灯下暗处观察有荧光无荧光阳性阴性报告Aliz-gal琼脂（平板法）报告计数紫色（或红色）菌落其他检验方法LTSE快速检测法疏水网膜法TTC显色法DC(去氧胆酸法)半固体试管法纸片法显色荧光法PCR法