E2作业指导书.doc

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1、乙雌二醇(E2)分析原理采用竞争法原理，整个过程18分钟完成。 第1 步：35ml 标本与生物素化的抗雌二醇抗体混匀，形成复合物，其数量取决于标本中待测物的浓度。 第2 步：加入链霉亲和素包被的微粒和钌（Ru）标记的雌二醇衍生物。游离的、未结合生物素化抗体即与此衍生物结合，并且通过生物素、链酶亲和素之间的球上。让上述形成的复合物通过生物素与链霉亲和素间的反应结合到微粒上。 第3 步：反应混和液吸到测量池中，微粒通过磁铁吸附到电极上，未结合的物质被清洗液洗去，电极加电压后产生化学发光，通过光电倍增管进行测定。检测结果由机器自动从标准曲线上查出。此曲线由仪器通过2 点定标校正，由从试剂条形码扫描入

2、仪器的原版标准曲线而得。2：标本采集和准备：必须选择以下的标本进行测定血清：使用标准取样试管或含分离胶的试管采集。血浆：肝素、EDTA-K3 、枸橼酸钠或氟化钠/草酸钾抗凝均可。标本在28 度可稳定2 天，-20 度可稳定6 个月。只能冻融一次。含沉淀的标本使用前需离心。标本和质控品禁用叠氮钠防腐。标本、定标液和质控品在测定前的温度应与室温平衡；放入仪器后应在2 小时内测定以避免蒸发的影响。3：试剂、校准品、质控品和其他所需材料采用罗氏原装配套试剂。试剂：M：链霉亲和素包被的微粒（透明瓶盖），1 瓶，6.5ml 。链霉亲和素包被的微粒浓度0.72mg/ml，生物素结合能力：470ng 生物素/

3、mg 粒子。含防腐剂。R1：生物素化的兔抗雌二醇抗体（灰盖），1 瓶，8ml 。生物素化的兔抗雌二醇抗体浓度45ng/l 、甲二氢睾酮130ng/ml；MES 缓冲液0.05mol/l，pH6.0 。含防腐剂。R2：Ru(bpy)3 2+ 标记的雌二醇-多肽（黑盖），1 瓶，8ml 。Ru(bpy)3 2+ 标记的雌二醇-多肽浓度2.75ng/ml；MES 缓冲液0.05mol/l，pH6.0 。含防腐剂。校准品： 每批雌二醇II 试剂有一条形码标签，含有该批试剂定标所需的特殊信息。应用CalSet 定标液定标。质控品： Elecsys 通用质控品（PreciControl Universal

4、）1 和2 以及其它合适的质控品。 各浓度区域的质控至少每24 小时或每一次定标后测定一次。质控间隔期应适用于各 实验室的具体要求。检测值应落在确定的范围内，如出现质控值落在范围以外，应采取校正措施其他所需材料： 货号：，100 人份的Elecsys 雌二醇II 试剂盒包含： M 链霉亲和素包被的微粒 R1 生物素化的抗雌二醇II 抗体 R2 三联吡啶钌标记的雌二醇-多肽 需要的材料（未提供）： Elecsys 雌二醇II 定标液（CalSet II）货号 Elecsys 通用质控品（PreciControl Universal）货号 Elecsys 标本稀释液（雌二醇/孕酮）货号 Elecs

5、ys1010 、2010 或E170 分析仪 Elecsys1010/2010 分析仪需要 Elecsys 系统缓冲液（ProCell）货号 Elecsys 测量池清洗液（CleanCell）货号 Elecsys 添加剂液（SysWash）货号 Elecsys 系统清洗液支架（Adapter for SysClean)）货号 Elecsys 1010 反应杯（Assay Cup)货号 Elecsys 2010 反应杯（Assay Cup)货号 Elecsys 2010 吸样头（Assay Tip)货号 E170 分析仪需要 Elecsys 系统缓冲液（ProCell M）货号 Elecsys

6、测量池清洗液（CleanCell M）货号 Elecsys 系统缓冲液/测量池清洗液预热杯（PC/CC-Cup）货号 探针冲洗液，12x70ml,用于最终保养及完成试剂吸样后冲洗，货号 前清洗液，5x600ml Elecsys 反应杯/吸样头盒(AssayCups/AssayTips Combimagazine M) 货号 Elecsys 废物盒(wasteliner)货号 Elecsys 系统清洗液支架(SysClean Adapter M)货号 各种分析仪均适用的材料 Elecsys 系统清洗液（SysClean）货号 Elecsys 系统缓冲液（ProCell）货号 Elecsys测量池

7、清洗液（CleanCell）货号 Elecsys 添加剂液（SysWash）货号 Elecsys 系统清洗液（SysClean）货号仪器和校准使用仪器：瑞士罗氏诊断公司生产Elecsys 2010/E 170/E 411全自动电化学发光免疫自动分析仪仪器校准：每批雌二醇试剂盒必须用新鲜试剂和雌二醇Cal 1,Cal 2定标一次。另外，以下情况需要再次定标：Elecsys2010： 一个月（同一批号试剂） 7天（放置仪器上的同一试剂盒）各种分析仪均适用的情况：根据要求进行标定：如质控结果超出范围时；根据规定进行多次标定。操作步骤（以E 170为例）5.1 校准操作步骤：在编缉各项目的参数时，已经

8、在ApplicationCalib菜单中定义好了定标类型和几点定标。因此在对各项目进行定标时，只需在定标菜单Calibration中进行即可。3.2进入CalibrationStatus菜单，用鼠标选择需定标的项目，再根据需要点单点定标（BLANK键）或两点定标（TWO POINT键）、跨距定标（SPAN键）、多点定标（FULL键），再选择其它项目进行相应选择，最后点SAVE，将定标物放入在CalibrationCalibrator中定义好的位置，点Start，再点Start，仪器开始定标。 在CalibrationStatus菜单中看定标结果，点Calibration Result键看定标结

9、果，点Reaction Monitor键看每个定标物的反应曲线。5.2 样本检测程序： 单个样本输入，在主菜单下选择Workplace- Testslection，在Sequence No栏输入标本号，然后选择该标本所需做的单个项目或组合项目，点SAVE键，样本号自动累加。批量常规标本的输入，在主菜单下选择Workplace- Testslection，在Sequence No栏输入起始标本号，然后选择该标本所需做的单个项目或组合项目，点REPEAT，输入该批标本的最后一个标本号，点OK即可。进样分析，将标本按在Workplace菜单中输入的标本号顺序在样本架上排好，放入进样盘内,按START

10、键，输入该批上机标本的起始标本号，再点START键，仪器自动开始推架检测标本。质量控制用Elecsys 雌二醇质控品1和2 （PreciControl）。质控品1和质控品2至少每24小时或每一次定标后测定一次。质控间隔期应适用于各实验室的具体要求。检测值应落在确定的范围内，如出现质控值落在范围以外，应采取校正措施。计算方法 对每一个标本，仪器会自动计算雌二醇II 含量，单位是pmol/l 、pg/ml 或ng/l 。 换算方法 pmol/l50.273=pg/ml(ng/l) pg/ml53.67=pmol/l。参考范围18.4 15781 pmol/l 或5.00 4300pg/ml结果若低

11、于检测限，仪器将报告结果 18.4 pmol/l或15781 nmol/l或4300 pg/ml分析性能干扰因素该方法不受黄疸（胆红素66mg/dl）、溶血（血红蛋白1.0g/dl）、脂血（脂质1000mg/dl）和生物素5mg/天）治疗的病人，至少要等最后一次摄入生物素8 小时后才能采血。不受类风湿因子干扰（1200U/ml）。18 种常用药物经试验对本测定无干扰。偶尔会遇到抗链酶亲和素抗体以及其它免疫反应的干扰。Elecsys 雌二醇II 测定结果应结合病人病史、临床其他检查结果综合起来进行诊断。结果解释高于检测范围的标本可用雌二醇/孕酮稀释液稀释。建议1:5 稀释。稀释后的标本雌二醇含量

12、必须高于500pg/ml 或1835pmol/l 。如用手工稀释，结果应乘上稀释倍数。如果是机器自动稀释，机器会自动计算结果。临床意义雌激素负责女性第二性征的发展，与促孕激素共同控制女性生殖功能。生物活性最强的雌激素是17 -雌二醇，是一分子量为272道尔顿的类固醇激素。雌激素主要由卵巢产生，也有少量形成于睾丸及肾上腺皮质。怀孕过程中，雌激素主要形成于胎盘。约98的雌二醇与转运蛋白结合（SHBG为性激素结合蛋白）。检测雌二醇可用于解释下丘脑-脑垂体-性腺调节功能紊乱、男子女性型乳房、产生雌激素型的卵巢和睾丸肿瘤和肾上腺皮质增生等。另外还可用于生育治疗中的疗效监测以及体外受孕中排卵时间的确定。Elecsys 雌二醇测定采用了竞争法原理，应用对17 -雌二醇特异的多克隆抗体进行检测。标本中内源性的雌二醇与试剂中钌标记的雌二醇衍生物竞争性与生物素化的抗体结合。