最新实习二红细胞、网织红细胞检测PPT课件.ppt

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1、实习二红细胞、网织红细胞实习二红细胞、网织红细胞检测检测目的和要求目的和要求l熟悉正常红细胞和网织红细胞的形态学特点熟悉正常红细胞和网织红细胞的形态学特点l掌握血红蛋白测定方法、参考值和临床意义掌握血红蛋白测定方法、参考值和临床意义l掌握血细胞多参数报告单的正常值及其增减的临掌握血细胞多参数报告单的正常值及其增减的临床意义床意义l每升血液中红细胞数目每升血液中红细胞数目=五个中方格内红细胞个数五个中方格内红细胞个数5(变变为为0.1u1)10(变为变为1u1)106(变为变为1L)200(稀释稀释倍数倍数)=五个中方格内红细胞个数五个中方格内红细胞个数1010l清洁仪器：清洁仪器：l计数后，将

2、盖玻片及计数板用水冲洗干净，再用绸或细计数后，将盖玻片及计数板用水冲洗干净，再用绸或细布擦干布擦干l吸管先用蒸馏水，继用吸管先用蒸馏水，继用95%酒精，后用乙醚洗涤干净，酒精，后用乙醚洗涤干净，保存备用保存备用注意事项注意事项l不能在有水肿、炎症、淤血等部位或刺血过浅处采血不能在有水肿、炎症、淤血等部位或刺血过浅处采血l所用吸管、试管、滴管及血细胞计数板须干净无水所用吸管、试管、滴管及血细胞计数板须干净无水l操作迅速，充池一次完成，不能有气泡操作迅速，充池一次完成，不能有气泡l红细胞分布不均，每个中方格之间相差大于红细胞分布不均，每个中方格之间相差大于20个时要重个时要重新充池计数新充池计数血

3、红蛋白测定血红蛋白测定l方法：氰化高铁血红蛋白测定法l原理：l血红蛋白(Hb)被高铁氰化钾K3Fe(CN)6氧化为高铁血红蛋白（Hi），Hi与氰离子结合成氰化高铁血红蛋白（HiCN）l HiCN在540nm有一吸收峰l测定其光密度而得血红蛋白浓度浓度试剂与器材器材：l分光光度计l试管，试管架l取血吸管:一次性定量采血管(20ul)l刺血针 l蒸馏水l75%酒精及干棉球试剂：试剂：l氰化高铁血红蛋白稀释剂高铁氰化钾K3Fe(CN)6200mg氰化钾（KCN）50mg无水磷酸二氢钾140mgTriton X-100 1.0ml用蒸馏水溶解并稀释 至1Ll该试剂应呈透明、淡黄色，该试剂应呈透明、淡黄

4、色，pHpH在在7.07.07.47.4之间，以蒸馏水之间，以蒸馏水作空白，在作空白，在540nm540nm比色，读数是比色，读数是0 0l溶液应放置棕色试剂瓶中，塞紧后保存于冰箱中（但不宜溶液应放置棕色试剂瓶中，塞紧后保存于冰箱中（但不宜冻结），至少可稳定数月冻结），至少可稳定数月l如发现试剂变绿、浑浊则不能使用如发现试剂变绿、浑浊则不能使用l其中非离子表面活性剂可加速溶血，缩短转化时间，防止其中非离子表面活性剂可加速溶血，缩短转化时间，防止血浆蛋白改变引起的浑浊血浆蛋白改变引起的浑浊实验步骤 l在试管中准确加入HiCN稀释试剂5.0ml，作为测定管 l用血红蛋白吸管准确吸取全血20u1，擦

5、去管端血迹，置于试剂中，冲洗3次，混匀 l将混合液放置3分钟以后，倒入光径1cm比色皿，用分光光度计在540nm进行比色l以蒸馏水或HiCN稀释试剂作空白管，校正光密度到0点，读取测定管光密度读数 l计算：计算：血红蛋白（血红蛋白（g/Lg/L）=测定管光密度测定管光密度（64458/4400064458/44000）251 251 =测定管光密度测定管光密度A 367.7 367.7 l式中：式中：（1 1）64458 64458 是目前国际公认的血红蛋白分子量是目前国际公认的血红蛋白分子量 （2 2）44000 44000 是国际血液学标准化委员会公布的血红蛋白是国际血液学标准化委员会公布

6、的血红蛋白摩尔吸光度摩尔吸光度 （3 3）251251是稀释倍数是稀释倍数 方法评估方法评估 lHiCNHiCN法操作简便，试剂单一，显色快且稳定，可以根据吸法操作简便，试剂单一，显色快且稳定，可以根据吸光度直接计算结果被列为国际血红蛋白测定的参考方光度直接计算结果被列为国际血红蛋白测定的参考方法，也是我国推荐的首选方法法，也是我国推荐的首选方法l高球蛋白血症和白细胞明显增高可导致反应液浑浊而高球蛋白血症和白细胞明显增高可导致反应液浑浊而影响结果影响结果 注意事项注意事项 l用吸血管吸血过程应仔细、认真，准确把握住吸入的血液量是初学者的一个难点，也是实验结果准确与否的一个关键lHiCN稀释液不

7、能贮存在塑料瓶中，否则会使CN含量下降，测定结果偏低应贮存在棕色有塞玻璃瓶中l4冰箱保存一般可用数月，但不能在0以下保存，因为结冰可引起高铁氰化钾还原，使溶液褪色失效 注意事项注意事项 分光光度计使用要点分光光度计使用要点1、开启电源，指示灯亮，选择开关置于“T”，波长调置使用波长。仪器预热20分钟。2、打开试样室盖（光门自动关闭），调节“0”旋钮，使数字显示为“00.0”。盖上试样室盖，将比色皿架处于蒸馏水校正位置，使光电管受光，调节透过率“100%”旋钮，使数字显示为“100.0”。3调整仪器的“00.0”和“100%”，将选择开置于“A”，调节吸光度调零旋钮，使得数字显示为“.000”，

8、然后将被测样品移入光路，显示值即为被测样品的吸光度的值。注意事项注意事项 l氰化钾是剧毒品，配制稀释液时要按剧毒品管理程序保管、操作l配制好的HiCN稀释液中因氰化钾含量低，又有高铁氰化钾存在，毒性不是很大。若进入体内，高铁氰化钾氧化血红蛋白，生成高铁血红蛋白。后者结合CN，起到一定的解毒作用，但仍应妥善保管l测定后的废液不能与酸性溶液混合氰化钾遇酸可产生剧毒的氰氢酸气体l为防止氰化钾污染环境，比色测定后的废液集中于广口瓶中应注意废液处理，可用除毒液除毒l除毒方法l取硫酸亚铁（FeSO47H2O）二份加NaOH一份，在研钵中研细，配成100g/L的悬液。每1000ml废液加上述除毒液5ml，放

9、置3小时，不时搅拌，使剧毒的氰化钾成为无毒的亚铁氰化钾l废液加入等量的水，混合后每升加次氯酸铋液(安替福化)35 毫升，充分混匀后敞开容器，置室温 15 小时后，排入下水道参考值参考值多次检查多次检查红细胞数血红蛋白成年男性（4.05.5）1012/L (400550万/mm3)120160g/L(1216g/dl)成年女性（3.55.0）1012/L (350500万/mm3)110150g/L (1115g/dl)新生儿（6.07.0）1012/L (600700万/mm3)170200g/L (1720g/dl)临床意义临床意义l红细胞及血红蛋白增多单位容积血液中红细胞及血红蛋白增多单位

10、容积血液中RBC及血红及血红蛋白量高于参考高限蛋白量高于参考高限可分为相对性增多和绝对性增多两大类可分为相对性增多和绝对性增多两大类l红细胞及血红蛋白减少单位容积循环血液中红细胞及血红蛋白减少单位容积循环血液中RBC、血红蛋白量及红细胞比积低于参考值低限，称为贫血。血红蛋白量及红细胞比积低于参考值低限，称为贫血。l贫血可概括为两大类：即生理性减少和病理性减少贫血可概括为两大类：即生理性减少和病理性减少l各种贫血红细胞与血红蛋白的减低不一定呈平行关系各种贫血红细胞与血红蛋白的减低不一定呈平行关系RBC与与Hb小结小结RBCRBCHbHb增多增多减少减少相对增多相对增多绝对增多绝对增多原发增多原发

11、增多继发增多继发增多EpoEpo代偿性增多代偿性增多EpoEpo非代偿性增多非代偿性增多缺氧缺氧肿瘤肿瘤真性红细胞增多症真性红细胞增多症脱水脱水生理性减少生理性减少病理性减少病理性减少儿童，孕妇，老人儿童，孕妇，老人生成减少生成减少破坏增加破坏增加丢失过多丢失过多各种溶血各种溶血各种失血各种失血造血干造血干CC障碍障碍DNADNA合成障碍合成障碍再障再障巨贫巨贫HbHb合成障碍合成障碍多种机制多种机制缺铁贫缺铁贫白血病白血病造血原料缺乏造血原料缺乏RBC与与Hb小结小结红细胞（1012/L）血红蛋白（g/L）增多正常减少增多正常减少男性6.04.0-5.54.0170g120-160g120g

12、女性5.53.5-5.03.5160g110-150g110g类型MCVMCHMCHC临床意义大细胞性贫血100343236巨幼细胞贫血正细胞性贫血80100 27343236再障、骨髓病性急性失血性贫血小细胞性贫血8027 32缺铁性贫血铁粒幼细胞性贫血海洋性贫血单纯小细胞贫血80273236慢性感染，肝病，尿毒症，恶性肿瘤，风湿病网织红细胞计数网织红细胞计数l原理原理l网织红细胞是晚幼红细胞脱核后但尚未完全成熟的红网织红细胞是晚幼红细胞脱核后但尚未完全成熟的红细胞细胞l胞质中尚有核糖体、核糖核酸等嗜碱性物质残存胞质中尚有核糖体、核糖核酸等嗜碱性物质残存,经经煌煌焦油蓝焦油蓝或新亚甲蓝活体染

13、色后或新亚甲蓝活体染色后,胞质中可见蓝或蓝绿色胞质中可见蓝或蓝绿色枝点状甚至网织状结构枝点状甚至网织状结构l取材：人的外周血液（涂片）取材：人的外周血液（涂片）l方法：方法：煌焦油蓝煌焦油蓝活体染色法近年来还可通过某些血液活体染色法近年来还可通过某些血液自动分析仪及流式细胞术检测法进行网织红细胞计数自动分析仪及流式细胞术检测法进行网织红细胞计数l操作：取一滴血与煌焦油蓝染液混合操作：取一滴血与煌焦油蓝染液混合，制成涂片，制成涂片l在油镜下，观察红细胞胞质内蓝色的丝网状结构在油镜下，观察红细胞胞质内蓝色的丝网状结构计数计数10001000个红细胞个红细胞，求得其中网织红细胞百分数，求得其中网织红

14、细胞百分数染色及涂片要点染色及涂片要点l在洁净载玻片上加在洁净载玻片上加1煌焦油兰酒精液一滴；煌焦油兰酒精液一滴；待干待干l取新鲜血液一滴，取新鲜血液一滴，滴于载玻片的染液上滴于载玻片的染液上，轻轻搅拌，轻轻搅拌l保持载玻片上血液不致干涸，染色保持载玻片上血液不致干涸，染色5分钟或更长分钟或更长l常规涂片方法，推成薄而均匀的血膜片，常规涂片方法，推成薄而均匀的血膜片，自然干燥自然干燥l89.5 m，Wright染色呈嗜多色性红细胞RC小结小结RCRC参考值参考值绝对值绝对值百分数百分数0.50.5-1.5-1.5，平均，平均1 12424841084109 9/L/L临床意义临床意义观察病情观察病情鉴别诊断鉴别诊断诊断诊断减少减少增多增多观察病情观察病情鉴别诊断鉴别诊断诊断诊断造血不良造血不良造血良好造血良好营养性贫血营养性贫血溶血性贫血溶血性贫血失血性贫血失血性贫血再障性贫血再障性贫血试治有效试治有效高变低示好转，反之亦然高变低示好转，反之亦然试治无效试治无效由低逐渐增高示好转由低逐渐增高示好转