最新平面色谱技术03PPT课件.ppt

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1、平面色谱技术平面色谱技术031 1）纸色谱）纸色谱载体：滤纸（纤维素），可吸附载体：滤纸（纤维素），可吸附22%水，其中水，其中 6%与纤维素上的羟基结合（通过氢键和分子与纤维素上的羟基结合（通过氢键和分子 之间的偶极作用）形成固定相之间的偶极作用）形成固定相纸纸纸纸22%H22%H2 2OO6%H2O 固定相固定相流动相流动相S SS SS SS SS SS SS S纸色谱属于分配色谱纸色谱属于分配色谱纸色谱属于分配色谱纸色谱属于分配色谱 -正相和反相分配纸色谱正相和反相分配纸色谱正相和反相分配纸色谱正相和反相分配纸色谱(5)(5)(5)(5)薄层板的活化薄层板的活化薄层板的活化薄层板的活化

2、 吸附剂的表面及其孔隙的表面存在许多活性点，活性吸附剂的表面及其孔隙的表面存在许多活性点，活性吸附剂的表面及其孔隙的表面存在许多活性点，活性吸附剂的表面及其孔隙的表面存在许多活性点，活性点的强度和数目较大时，吸附剂的活度就高，吸附剂的点的强度和数目较大时，吸附剂的活度就高，吸附剂的点的强度和数目较大时，吸附剂的活度就高，吸附剂的点的强度和数目较大时，吸附剂的活度就高，吸附剂的保留能力也较高，被保留物质保留能力也较高，被保留物质保留能力也较高，被保留物质保留能力也较高，被保留物质R R 值就小。值就小。值就小。值就小。活化：活化：活化：活化：105120105120干燥干燥干燥干燥 0.51h

3、0.51h 级级级级 活度的标定：活度的标定：活度的标定：活度的标定：a.a.a.a.氧化铝薄层活度的标定氧化铝薄层活度的标定氧化铝薄层活度的标定氧化铝薄层活度的标定 染料溶液的配制：称取染料溶液的配制：称取染料溶液的配制：称取染料溶液的配制：称取偶氮苯偶氮苯偶氮苯偶氮苯30mg30mg30mg30mg和和和和对对对对-甲氧基偶甲氧基偶甲氧基偶甲氧基偶氮苯、苏丹黄、苏丹红、对氮苯、苏丹黄、苏丹红、对氮苯、苏丹黄、苏丹红、对氮苯、苏丹黄、苏丹红、对-氨基偶氮苯各氨基偶氮苯各氨基偶氮苯各氨基偶氮苯各20mg20mg20mg20mg溶于四溶于四溶于四溶于四氯化碳氯化碳氯化碳氯化碳50ml50ml50

4、ml50ml中，摇匀备用。中，摇匀备用。中，摇匀备用。中，摇匀备用。标定方法：取上述溶液标定方法：取上述溶液标定方法：取上述溶液标定方法：取上述溶液20l20l20l20l点于待测板上，用四点于待测板上，用四点于待测板上，用四点于待测板上，用四氯化碳展开，测量五种染料的氯化碳展开，测量五种染料的氯化碳展开，测量五种染料的氯化碳展开，测量五种染料的R R ，由下表中确定薄板，由下表中确定薄板，由下表中确定薄板，由下表中确定薄板的花度级别。的花度级别。的花度级别。的花度级别。染料染料染料染料活度级别（活度级别（活度级别（活度级别（R R 值）值）值）值）偶氮苯偶氮苯偶氮苯偶氮苯0.590.590.

5、740.740.850.850.950.95对对对对-甲氧基偶氮苯甲氧基偶氮苯甲氧基偶氮苯甲氧基偶氮苯0.160.160.490.490.690.690.890.89苏丹黄苏丹黄苏丹黄苏丹黄0.010.010.250.250.570.570.780.78苏丹红苏丹红苏丹红苏丹红0.000.000.100.100.330.330.560.56对对对对-氨基偶氮苯氨基偶氮苯氨基偶氮苯氨基偶氮苯0.000.000.030.030.080.080.190.19氧化铝薄层的活度级别氧化铝薄层的活度级别氧化铝薄层的活度级别氧化铝薄层的活度级别b.b.薄层活度的标定薄层活度的标定薄层活度的标定薄层活度的标定

6、 染料溶液的配制：称取对染料溶液的配制：称取对染料溶液的配制：称取对染料溶液的配制：称取对-二甲氨基偶氮苯、靛酚蓝、二甲氨基偶氮苯、靛酚蓝、二甲氨基偶氮苯、靛酚蓝、二甲氨基偶氮苯、靛酚蓝、苏丹红（苏丹苏丹红（苏丹苏丹红（苏丹苏丹红（苏丹）各）各）各）各20mg20mg溶于溶于溶于溶于1ml1ml氯仿中，摇匀备用。氯仿中，摇匀备用。氯仿中，摇匀备用。氯仿中，摇匀备用。标定方法：取上述溶液点于待测板上，用正己烷标定方法：取上述溶液点于待测板上，用正己烷标定方法：取上述溶液点于待测板上，用正己烷标定方法：取上述溶液点于待测板上，用正己烷-乙乙乙乙酸乙酯（酸乙酯（酸乙酯（酸乙酯（9 9：1 1）展开，

7、三种染料能分开，对）展开，三种染料能分开，对）展开，三种染料能分开，对）展开，三种染料能分开，对-二甲氨基二甲氨基二甲氨基二甲氨基偶氮苯在前缘，靛酚蓝在其次、苏丹红走在最后，这偶氮苯在前缘，靛酚蓝在其次、苏丹红走在最后，这偶氮苯在前缘，靛酚蓝在其次、苏丹红走在最后，这偶氮苯在前缘，靛酚蓝在其次、苏丹红走在最后，这样的硅胶活度与前述样的硅胶活度与前述样的硅胶活度与前述样的硅胶活度与前述级氧化铝的活度相当。级氧化铝的活度相当。级氧化铝的活度相当。级氧化铝的活度相当。（6 6 6 6）薄层板的预处理）薄层板的预处理）薄层板的预处理）薄层板的预处理 常用方法：常用方法：常用方法：常用方法：用氯仿用氯仿

8、用氯仿用氯仿-甲醇甲醇甲醇甲醇(1:1)(1:1)(1:1)(1:1)或所用展开剂先展或所用展开剂先展或所用展开剂先展或所用展开剂先展开一次空白薄层板（展距要大一些），在开一次空白薄层板（展距要大一些），在开一次空白薄层板（展距要大一些），在开一次空白薄层板（展距要大一些），在110110110110干燥干燥干燥干燥0.510.51h h h h，干燥器中保存备用。，干燥器中保存备用。，干燥器中保存备用。，干燥器中保存备用。除有特殊规定外，预制板在使用时不需任何预处除有特殊规定外，预制板在使用时不需任何预处除有特殊规定外，预制板在使用时不需任何预处除有特殊规定外，预制板在使用时不需任何预处理。

9、理。理。理。（7 7）烧结）烧结）烧结）烧结薄层板和棒状薄层薄层板和棒状薄层薄层板和棒状薄层薄层板和棒状薄层 机械强度高、热稳定性好、耐酸并可反复使用机械强度高、热稳定性好、耐酸并可反复使用机械强度高、热稳定性好、耐酸并可反复使用机械强度高、热稳定性好、耐酸并可反复使用2）点样：点样：（1 1）样品溶液的制备样品溶液的制备样品溶液的制备样品溶液的制备 纯品的溶解纯品的溶解纯品的溶解纯品的溶解 样品的提取与净化样品的提取与净化样品的提取与净化样品的提取与净化 a.a.a.a.溶剂提取法溶剂提取法溶剂提取法溶剂提取法 b.b.b.b.液液萃取法液液萃取法液液萃取法液液萃取法 c.c.c.c.液固萃

10、取法液固萃取法液固萃取法液固萃取法-亲脂型和亲水型固体萃取剂亲脂型和亲水型固体萃取剂亲脂型和亲水型固体萃取剂亲脂型和亲水型固体萃取剂溶剂的选择溶剂的选择溶剂的选择溶剂的选择 a.a.溶剂溶剂溶剂溶剂对溶质的溶解度相对较小，否则会出现点对溶质的溶解度相对较小，否则会出现点对溶质的溶解度相对较小，否则会出现点对溶质的溶解度相对较小，否则会出现点样环形色谱效应；样环形色谱效应；样环形色谱效应；样环形色谱效应；b.b.溶剂的溶剂的溶剂的溶剂的粘度不宜太高，以便于点样；粘度不宜太高，以便于点样；粘度不宜太高，以便于点样；粘度不宜太高，以便于点样；c.c.溶剂的沸点要适中。溶剂的沸点要适中。溶剂的沸点要适

11、中。溶剂的沸点要适中。(2)(2)点样点样点样点样 样品浓度样品浓度样品浓度样品浓度 0.011.00%0.011.00%点样体积点样体积点样体积点样体积 经典薄层经典薄层经典薄层经典薄层 15 15 l l 高效薄层高效薄层高效薄层高效薄层 0.10.5 0.10.5 l l 点样过多会造成原点点样过多会造成原点点样过多会造成原点点样过多会造成原点“超载超载超载超载”，展开剂产生，展开剂产生，展开剂产生，展开剂产生“绕行绕行绕行绕行”现象使斑点拖尾或重叠，严重影响分离。现象使斑点拖尾或重叠，严重影响分离。现象使斑点拖尾或重叠，严重影响分离。现象使斑点拖尾或重叠，严重影响分离。点样直径点样直径

12、点样直径点样直径 经典薄层经典薄层经典薄层经典薄层 5mm(5mm(一般一般一般一般3mm)3mm)高效薄层高效薄层高效薄层高效薄层 12mm12mm 点样间距点样间距点样间距点样间距 经典薄层经典薄层经典薄层经典薄层 1 12cm 2cm 高效薄层高效薄层高效薄层高效薄层 0.50.5 g g 荧光荧光荧光荧光 0.01ng0.01ng（2 2）蒸气检出法）蒸气检出法）蒸气检出法）蒸气检出法（3 3）试剂显色法）试剂显色法）试剂显色法）试剂显色法 显色方法显色方法显色方法显色方法 a.a.a.a.喷雾显色喷雾显色喷雾显色喷雾显色b.b.b.b.浸渍显色浸渍显色浸渍显色浸渍显色c.c.c.c.

13、超压衍生化超压衍生化超压衍生化超压衍生化d.d.d.d.展层展层展层展层-显色法显色法显色法显色法 显色试剂显色试剂显色试剂显色试剂a.a.通用显色剂通用显色剂通用显色剂通用显色剂 a)a)a)a)硫酸硫酸硫酸硫酸 组成：硫酸组成：硫酸组成：硫酸组成：硫酸-水（水（水（水（1:11:11:11:1），硫酸），硫酸），硫酸），硫酸-甲醇或乙醇甲醇或乙醇甲醇或乙醇甲醇或乙醇（1:11:11:11:1），），），），1.5M1.5M1.5M1.5M硫酸与硫酸与硫酸与硫酸与0.50.50.50.5 1.5M1.5M1.5M1.5M硫酸铵。硫酸铵。硫酸铵。硫酸铵。方法：喷后方法：喷后方法：喷后方法：喷后

14、110110110110烤烤烤烤15min,15min,15min,15min,不同有机物显不同颜不同有机物显不同颜不同有机物显不同颜不同有机物显不同颜 色。色。色。色。b)0.5%b)0.5%b)0.5%b)0.5%碘的氯仿溶液碘的氯仿溶液碘的氯仿溶液碘的氯仿溶液 c)c)c)c)中性中性中性中性0.05%0.05%0.05%0.05%高锰酸钾溶液高锰酸钾溶液高锰酸钾溶液高锰酸钾溶液 易还原化合物在淡红背景下显黄斑。易还原化合物在淡红背景下显黄斑。易还原化合物在淡红背景下显黄斑。易还原化合物在淡红背景下显黄斑。d)5%d)5%d)5%d)5%磷钼酸乙醇溶液磷钼酸乙醇溶液磷钼酸乙醇溶液磷钼酸乙

15、醇溶液方法：喷后方法：喷后方法：喷后方法：喷后120120120120烘烤，还原化合物显蓝斑，再用氨烘烤，还原化合物显蓝斑，再用氨烘烤，还原化合物显蓝斑，再用氨烘烤，还原化合物显蓝斑，再用氨气熏，则背景变无色。气熏，则背景变无色。气熏，则背景变无色。气熏，则背景变无色。b.b.b.b.专属显色剂专属显色剂专属显色剂专属显色剂（4 4）定性）定性）定性）定性 斑点的斑点的斑点的斑点的R R 值值值值斑点的显色特性斑点的显色特性斑点的显色特性斑点的显色特性 斑点的原位光谱扫描斑点的原位光谱扫描斑点的原位光谱扫描斑点的原位光谱扫描a.a.a.a.薄层色谱薄层色谱薄层色谱薄层色谱-紫外可见光谱扫描紫外

16、可见光谱扫描紫外可见光谱扫描紫外可见光谱扫描b.b.b.b.薄曾色谱薄曾色谱薄曾色谱薄曾色谱-三维光谱扫描三维光谱扫描三维光谱扫描三维光谱扫描与其它分析技术的联用与其它分析技术的联用与其它分析技术的联用与其它分析技术的联用 a.a.a.a.与其它色谱法：与其它色谱法：与其它色谱法：与其它色谱法：GCGCGCGC、HPLCHPLCHPLCHPLCb.b.b.b.与电化学法联用：与电化学法联用：与电化学法联用：与电化学法联用：阳极伏安法、脉冲极谱法、库仑滴阳极伏安法、脉冲极谱法、库仑滴阳极伏安法、脉冲极谱法、库仑滴阳极伏安法、脉冲极谱法、库仑滴定法定法定法定法c.c.c.c.与光谱法联用：与光谱法

17、联用：与光谱法联用：与光谱法联用：原子吸收、拉曼光谱、原子吸收、拉曼光谱、原子吸收、拉曼光谱、原子吸收、拉曼光谱、IRIRIRIR、MS MS MS MS、NMR NMR NMR NMR（）定量）定量）定量）定量平板色谱简单、方便、及操作费用低，平板色谱简单、方便、及操作费用低，可可以以在在一一块块层层析析板板上上同同时时展展开开多多个个试试样样及及将将多多条条滤纸同时展开。滤纸同时展开。采采用用方方形形薄薄层层板板还还可可以以方方便便的的进进行行二二维维展展开开，即即按按一一般般方方法法展展开开后后，改改变变方方向向和和展展开开剂剂再再次次展展开开，进进一步改善分离效果。一步改善分离效果。试

18、样一般不需要经过预处理即可分离。试样一般不需要经过预处理即可分离。.平板色谱特点及应用 缺缺缺缺点点点点：分分分分离离离离效效效效率率率率较较较较低低低低，不不不不适适适适用用用用挥挥挥挥发发发发性性性性试试试试样样样样分分分分离离离离。定性定量不便。定性定量不便。定性定量不便。定性定量不便。应应应应用用用用：平平平平板板板板色色色色谱谱谱谱法法法法在在在在染染染染料料料料、农农农农药药药药、医医医医药药药药、有有有有机机机机酸酸酸酸碱碱碱碱类类类类化化化化合合合合物物物物、糖糖糖糖类类类类化化化化合合合合物物物物、氨氨氨氨基基基基酸酸酸酸、蛋蛋蛋蛋白白白白质质质质及及及及中中中中草草草草药药

19、药药中中中中有有有有效效效效成成成成分分分分的的的的分分分分离离离离分分分分析析析析中中中中经经经经常常常常被被被被使使使使用用用用。也也也也可可可可以以以以用用用用于于于于无无无无机离子的分离。还经常作为液相色谱的一种机离子的分离。还经常作为液相色谱的一种机离子的分离。还经常作为液相色谱的一种机离子的分离。还经常作为液相色谱的一种预试方法预试方法预试方法预试方法。合成药物的分析方面的应用合成药物的分析方面的应用合成药物的分析方面的应用合成药物的分析方面的应用l药物的定性检鉴别药物的定性检鉴别药物的定性检鉴别药物的定性检鉴别l纯度检查纯度检查纯度检查纯度检查l合成药制剂的含量测定合成药制剂的含

20、量测定合成药制剂的含量测定合成药制剂的含量测定l稳定性考查稳定性考查稳定性考查稳定性考查l药物代谢研究药物代谢研究药物代谢研究药物代谢研究l合成工艺的监控及反应机制的研究合成工艺的监控及反应机制的研究合成工艺的监控及反应机制的研究合成工艺的监控及反应机制的研究谢谢！谢谢！n n各组分在薄板上的位置常用比移值（各组分在薄板上的位置常用比移值（各组分在薄板上的位置常用比移值（各组分在薄板上的位置常用比移值（R Rf f）来表示。）来表示。）来表示。）来表示。A A，B B为样品溶液点样的位置，如图为样品溶液点样的位置，如图为样品溶液点样的位置，如图为样品溶液点样的位置，如图1 1所示：所示：所示：

21、所示：1、比移值（Rf）起始线起始线a bcAB溶剂溶剂前沿前沿图图1、Rf值的测量示意图值的测量示意图A物质的物质的Rf=;B物质的物质的Rf=;所以所以Rf值与值与K之间关系可用下式表之间关系可用下式表示：示：Rf=1/1+K（Vs/Vm）原点至溶剂前沿的距离原点至溶剂前沿的距离原点至斑点中心的距离原点至斑点中心的距离=Rfabbcn n在一定色谱条件下，在一定色谱条件下，在一定色谱条件下，在一定色谱条件下，R Rf f值为常数，其值在值为常数，其值在值为常数，其值在值为常数，其值在0 011之之之之间间间间，若某若某若某若某组组组组分分分分R Rf f=0=0，表示它不随展开，表示它不随

22、展开，表示它不随展开，表示它不随展开剂剂剂剂移移移移动动动动，吸附，吸附，吸附，吸附剂对剂对剂对剂对它的吸附力很它的吸附力很它的吸附力很它的吸附力很强强强强，留在原点不，留在原点不，留在原点不，留在原点不动动动动。若。若。若。若R Rf f=1=1，表示吸，表示吸，表示吸，表示吸附附附附剂对剂对剂对剂对它基本不吸附，随着展开它基本不吸附，随着展开它基本不吸附，随着展开它基本不吸附，随着展开剂剂剂剂到达溶到达溶到达溶到达溶剂剂剂剂前沿，前沿，前沿，前沿，K=0K=0。R Rf f值值值值越小，表示越小，表示越小，表示越小，表示该组该组该组该组分分分分K K越大，极性越大。越大，极性越大。越大，极性越大。越大，极性越大。根据物根据物根据物根据物质质质质的化学的化学的化学的化学结结结结构不同，极性不同，在同一薄板构不同，极性不同，在同一薄板构不同，极性不同，在同一薄板构不同，极性不同，在同一薄板上展开，我上展开，我上展开，我上展开，我们们们们能能能能预测预测预测预测它它它它们们们们的的的的R Rf f值值值值大小大小大小大小 。结束语结束语谢谢大家聆听！谢谢大家聆听！44