2022年植物组织培养实验参考答案.docx

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1、精选学习资料 - - - - - - - - - 植物组织培育试验复习题一、名词说明1、大量元素 : 指含量占生物总重量万分之一以上的元素,包括 Mg等；2、微量元素 : 含量占生物总重量万分之一以下的元素；C、H、O、N、P、S、K、 C、3、植物生长调剂剂 : 人工合成的对植物的生长发育有调剂作用的化学物质；4、外植体：把由活植物体上切取下来以进行培育的那部分组织或器官 5、细胞全能性：植物体的每个细胞都含有该植物全部的遗传信息；6、基础培育基：依据植物养分原理和植物组织离体培育的要求而人工配置的养分基质；7、愈伤组织 : 人工培育基上由外植体组织的增生细胞产生的一团不定形的疏松排列的薄壁

2、 细胞；8、褐变 : 植物组织中多酚氧化酶被激活,使酚类物被氧化成醌类物,可抑制其他酶活性,毒害外植体；9、茎尖脱毒 : 茎尖分生区的病毒传播速度很慢,利用茎尖组培获得无病毒苗,来达到脱毒 的目的；10、不定芽：凡从叶、根或芽节间或是离体培育的愈伤组织上等通常不形成芽的部位生出 的芽；11、污染率：污染数除以接种数,再乘以 100%；100%；12、诱导率：愈伤数除以未污染数,再乘以 13、成活率：成活数除以未污染数,再乘以 100%；14、接种：将表面消毒的外植体转接到无菌的培育基上的过程；15、消毒：毁灭材料上的病菌（不损耗植物材料）；16、灭菌：利用物理或化学的方法,达到组织培育所学的无

3、菌环境；17、母液：欲配培育液的浓缩液；18、无病毒苗：指不含该种植物的主要危害病毒,即经检测主要危害病毒在植物内的存在 表现为阴性反应的苗木；19、植物组织培育：在无菌条件下,将离体的植物器官、组织、细胞以及原生质体,培育 在无菌培育基上和人工掌握的环境中,使其生长、分化、增殖,甚至长出新的植株的过程 和技术；20 快速繁衍：利用植物组织培育技术对外植体进行离体培育,在短期内获得遗传一样的大 量再生植株；21、继代培育：继代培育是指愈伤组织在培育基上生长一段时间后,养分物枯竭,水分散 失,并已经积存了一些代谢产物,此时需要将这些组织转移到新的培育基上的培育方式；22、生根培育：将长到肯定长度

4、的微枝（10mm）转移到生根培育基上培育；23、玻璃化现象：试管苗的茎叶变成透亮水渍状,生长畸形,增殖系数明显下降,难以诱 导生根,即使诱导生根,其根系质量极差,移栽成活率极低；24、暗培育：在组织培育某一阶段为了诱导愈伤组织进行的一种无光或少光的培育方式；25、液体培育：将所需培育物的悬浮液在液体培育基中培育的方法；26、脱分化：一个成熟细胞回复到分生状态或胚性细胞状态的现象；27、分化：由于细胞的分工而导致的细胞结构和功能的转变或发育方式转变的过程；28、热处理脱毒：利用高温下使植物组织中的病毒部分钝化或完全失去活性的方法；29、微尖嫁接技术：把微小（0.2mm）的茎尖作为接穗嫁接到实生砧

5、木上（无菌种子培育1 / 6 名师归纳总结 - - - - - - -第 1 页,共 6 页精选学习资料 - - - - - - - - - 获无菌苗,种子实生苗不带毒）,然后将嫁接的砧木接种到新的培育基上培育；30、胚抢救：是指对由于养分或生理缘由造成的难以播种成苗或在发育早期阶段就败育、退化的胚进行早期分别培育；二、问答题1、简述植物生长调剂物质在组织培育中的作用？并列举常见的种类；（1）伸长和分裂,促进生根、抑制器官脱落、性别掌握、延长休 2,4眠、顶端优势、单性牢固IAA （吲哚乙酸） NAA 萘乙酸 IBA 吲哚 -3-丁酸 D2,4 二氯苯氧乙酸、 NOA 萘氧乙酸 26BA6 苄

6、基腺嘌呤 、 Kt 兴奋素 、Zt 玉 M 素 2、植物组织培育主要应用在哪些方面？植物快速繁衍脱除病毒培育新品种种质资源的储存人工种子的讨论次生代谢产物的生产3、MS 培育基的主要成分包括哪些？4、简述一般组织培育的操作工序；大量元素、微量元素、铁盐、有机物、激素培育器皿的清洗、培育基的配制、分装和高压灭菌；无菌操作材料的表面灭菌和接种,培育；试管苗的驯化、移栽与初期治理5、在我们试验室如何配制 1L：MS+IAA 30g/L 蔗糖 +8g/L 琼脂（ pH 5.8 ）的培育基？（1）配母液： MSI 20x MSII-MSV 200x 及 IAA 贮备（2）配培育基： 1、取约 750ml

7、 蒸馏水,琼脂 8g 煮沸溶解,加入 30g 蔗糖2、取母液 MSI 50ml , MSII-V 5ml ,IAA 于小烧杯,搅拌匀称3、将 2 倒入 1 中,蒸馏水定容至 1L ,调 PH 值pH=5.8 4、分装试管封口灭菌存放；6、简述高压灭菌锅对培育基进行灭菌的操作要点；第一将内层灭菌桶取出,在向外层锅加入与三脚架齐平的水； 放回灭菌桶,并装入灭菌物品； 加盖,并将盖上的排气软管插入内层桶的排气槽内,在以两两对称的方式同时旋紧相对的两个螺栓,螺栓松紧一样,勿漏气；打开电源加热,待压力上升到 0.05MPa时打开气阀,排净冷空气,待压力降到 0MPa 时关上排气阀,当锅内压力上升到 0.

8、1Mpa 时开头计时,掌握热源,维护压力在 0.1MPa-0.15MPa 之间 20min； 灭菌所需时间到后,切断电源,让锅内温度自然下降,当压力下降到零时,打开排气阀,旋松螺木栓,打开锅盖,取出物品7、规划一个植物组织培育室,绘制试验室的分区结构示意图,需要购置哪些必需仪器？洗涤室、化学试验室、培育基配置室、灭菌室、缓冲室、接种室、培育室、温室2 / 6 名师归纳总结 - - - - - - -第 2 页,共 6 页精选学习资料 - - - - - - - - - 仪器：超净工作台、高压灭菌器、 空调机、天平 、 显微镜 、 蒸馏水发生器、酸度计等8、如何对菊花茎段进行消毒？流水冲洗 10

9、min摘掉叶片,切成合适茎段装入消毒瓶超净工作台处用 75%酒精浸泡30S无菌水漂洗 1 次 0.1%升汞浸泡 10min 后倒入回收瓶无菌水冲洗 3 次, 3min/ 次封存备用；9、如何对月季茎段进行消毒？0.1%KMnO430min 自来水冲洗 在超净工作台处用75%酒精浸泡 30S无菌水漂洗1 次（3min ） 0.1%升汞浸泡 10min 后倒入回收瓶无菌水冲洗3 次, 3min/ 次封存备用；10、以大蒜茎尖脱毒为例,简述无菌接种操作的流程和留意事项；流程：消毒接种工具并冷却体视显微镜下剥茎尖接种至 DS 培育基留意事项：进无菌室之前,操作人员需着经灭菌的白色工作服,戴口罩；操作人

10、员双手必顺进行灭菌；11、以石斛播种为例,简述无菌接种操作的流程和留意事项；答：操作流程：超净工作台及工具的预备 接种工具灭菌 用注射器吸取 0.2ml 石 斛种子悬浮液 打开石斛种子培育基 注射进培育基中上部 封口 留意事项： 每次使用注射器之前,轻甩注射器,将其中酒精甩出,用完后,需放入装有酒精的锥形瓶中；接种时试管最好不要倾斜,以免悬浮液流到试管壁上接种封口后,轻轻摇动试管,使悬浮液匀称的布满培育基表面；12、以银杏胚培育为例,简述无菌接种操作的流程和留意事项；答：操作流程：超净工作台及工具的预备 银杏种子消毒 接种工具灭菌 用接种刀从中间切开银杏种子,取出银杏胚 打开培育基,用镊子夹取

11、银杏胚,将其接到培育基上；封口 留意事项： 防止污染：接种全过程要求无菌操作；为削减污染,要求方法简 单、操作快速 ；银杏胚接种时,切忌接种过深 留意胚的外形学上端,不要接倒了；13、继代培育有什么作用,以菊花为例,简述其继代培育的操作方法答： 作用：改善培育环境扩大繁衍系数掌握突变操作方法： 超净工作台及工具的预备 接种工具灭菌 将菊花茎段从试管中取出,放于接种盘上 用接种刀和镊子,将菊花茎段上的新奇茎段切下 打开继代培育基 将切下的外植体快速的接入培育基上 封口3 / 6 名师归纳总结 - - - - - - -第 3 页,共 6 页精选学习资料 - - - - - - - - - 14、

12、简述离体培育污染的缘由及防止措施；缘由：外植体材料消毒不完全培育基灭菌不完全操作环境不洁净操作不规范；措施：挑选无菌或带菌少的植物材料外植体、培育基、及仪器等严格消毒灭菌无菌室的消毒 规范操作15、无菌操作时应留意哪些事项？1 在接种 4h 前接种室灭菌；2 在接种前 15-20min ,打开超净工作台的风机以及台上的紫外灯；3 接种员先洗净双手,在缓冲间换好专用试验服,并换穿拖鞋等；4 上工作台后,用酒精棉球擦拭双手及工作台面；5 接种工具蘸 95%酒精,灼烧；6 接种时将试管斜着,使试管口在酒精灯火焰上转动,灼烧数秒钟；接完种后,将管 口在火焰上再灼烧数秒钟；7 接种时,接种员双手不能离开

13、工作台,不能说话、走动和咳嗽等；8 接种完毕后要清理洁净并用酒精擦工作台；16、与常规苗相比,试管苗具有哪些特点？1 2光合作用差 3 4根的吸取功能弱 5对逆境的适应和抗击才能差17、在植物组织培育中,通过哪些途径可以得到完整的植株？外植体愈伤组织根、芽试管苗再长芽 外植体胚状体试管苗 外植体根、芽试管苗18、组织培育中常用的灭菌方法？高压蒸汽灭菌过滤灭菌19、植物脱毒的主要方法有哪些？其主要原理是什么？答：热处理脱毒法,在肯定范畴内,用高于常温处理可钝化病毒活性并加速植物细胞分 裂；微茎尖培育脱毒法,病毒在植物内分布不匀称,越接近顶端分生组织,病毒浓度越 稀愈伤组织培育脱毒法,病毒在植物内

14、分布不匀称,病毒在愈伤组织增殖中逐步降低且在继代培育中产生抗性变异；珠心组织培育脱毒法,病毒通过维管组织传播,而珠心组 织和维管束系统无直接联系；微体嫁接离体培育脱毒法,微茎尖带毒机率小并嫁接在无 菌的砧木上20、简述植物脱毒的意义；答： 产量提高 品质提高 抗病性增强21、植物组织培育技术主要包括哪些环节？各环节的主要工作内容？1、培育器皿的清洗2、培育基的配制、分装和高压灭菌3、无菌操作材料的表面灭菌和接种 4、将培育物放到培育室培育5、试管苗的驯化、移栽和初期治理；22、在培育基中加入活性炭有什么作用？1、主要是利用其吸附作用,削减一些有害物质的影响 根 3、对外形发生和器官形成有良好的

15、效应2、使培育基变黑有利于某些植物生23、在我们试验室如何配制 1L ：MS 培育基工作液？（1）10-1004 / 6 名师归纳总结 - - - - - - -第 4 页,共 6 页精选学习资料 - - - - - - - - - 元素、微量元素、铁盐、有机物和激素类等；（2）取适量的蒸馏水加入配制容器中 按需要量依次取母液及生长调剂物质 30g/L 定容 调 pH 值 加琼脂 6-10g/L 完全融解后分装至培育瓶中封口 高压灭菌24、简述培育基生长素 /细胞分裂素比值高低对外植体生长的影响；答： 低生长素 / 高细胞分裂素时,更易促进外植体长茎芽；生长素与细胞分裂素均衡时,促进外植体同时

16、茎芽和根,或愈伤组织；高生长素 / 低细胞分裂素时,更易促进外植体产生根；25、胚培育的作用有哪些？1在远缘杂交育种中的应用 :克服杂种胚不能正常发育 2克服珠心胚的干扰 ,提高育种效率 3缩短育种周期 4测定休眠种子的萌发率 5理论讨论中的应用26、如何进行试管苗的驯化？将长有完整试管苗的培育瓶由培育室转到伴遮荫的自然光下锤炼,并打开瓶盖注入少量自来水使幼苗逐步降低温度,转向有菌,最终转向与估计栽培条件相像进行培育；27、如何提高试管苗移栽的成活率？1、挑选壮苗 2、加入植物生长调剂物质 3、降低无机盐的浓度 4、加入少量活性炭5 供应适当的环境条件6 移栽过程中让试管苗从无菌向有菌逐步过渡

17、28、目前鉴定脱毒苗的方法有哪些？各有何特点？答： 视觉观看法：看植株的茎叶是否有该病毒全部的可见症状；病株较脱毒苗生长势 减弱,有矮化或畸形等症状；生物鉴定法（指示植物法）：将一些对病毒反应敏锐、病状特点显著地植物作为指示植 物,利用病毒在其他植物上产生的枯斑作为鉴别病毒种类的方法；这种方法条件简洁,操 作便利,为一种经济而有效的鉴定方法；电子显微镜鉴定法：可以直接观看是否有病毒存在,明白病毒颗粒的大小、外形和结 构,又可以鉴定病毒的种类；优点是方法先进,灵敏度高,能在植物粗提取液中定量测定 病毒,但需要肯定的设备和技术；抗血清鉴定法：用已知抗血清鉴定病毒的种类；这种方法特异性高,测定速度快

18、,所以 抗血清鉴定法成为植物病毒鉴定中最有用的方法之一；分光光度法：将已知浓度的病毒悬浮液,在260nm下测其光密度,并折算成消光密度,然后查找文献,测出全部核蛋白的浓度；这种方法可以定量病毒,但是需要肯定的设备和技术；29、接种后离体培育物对光、温、湿等环境条件的要求？1 光照：12-16h/d10005000lx ； 2 温度：一般 25 2 3 湿度：培育室内的湿度要求保持 70% 80%的相对湿度30、常用的培育基有哪些？说明其特点MS 培育基,特点是无机盐离子浓度较高 2 white 培育基,无机盐浓度较低适于生根培养； 3N6 培育基 KNO3 和（ NH4 2SO4 含量高不含钼；广泛应用于禾谷类植物的花粉和花 药培育；（ 4B5 培育基5 / 6 名师归纳总结 - - - - - - -第 5 页,共 6 页精选学习资料 - - - - - - - - - 双子叶植物特殊是木本植物的培育；6 / 6 名师归纳总结 - - - - - - -第 6 页,共 6 页