中药制剂分析1.ppt

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1、中药制剂分析1 Still waters run deep.流静水深流静水深,人静心深人静心深 Where there is life,there is hope。有生命必有希望。有生命必有希望 二、中药制剂分析的特点二、中药制剂分析的特点 一）中药制剂分析的对象是复杂的混合物。一）中药制剂分析的对象是复杂的混合物。1.1.组成中成药的组成中成药的中药材中药材具有复杂性。具有复杂性。中中药药材材的的同同名名异异物物，同同物物异异名名现现象象普普遍遍存存在在。有的中药更由于形态相似，容易容易误用。2.2.中成药中成药化学成分化学成分的多样性、复杂性。的多样性、复杂性。1 11 1）由多味中药组成

2、的复方制剂，其化学成分极为复杂多样。由多味中药组成的复方制剂，其化学成分极为复杂多样。2)2)各种化学成分在中药中的含量相差悬殊。各种化学成分在中药中的含量相差悬殊。3 3）中药制剂由多种单味药材组成，所含化学成分相互影响。）中药制剂由多种单味药材组成，所含化学成分相互影响。3.3.中中成成药药的的剂剂型型繁繁多多，所所用用之之辅辅料料多多种种多多样样，在在测测定定前前，样样品品必必须须经经过过预预处处理理，以以排排除除各各种种辅辅料料的的干干扰扰，必必要要时时还还须须进进行行辅辅料的检查和测定。料的检查和测定。4.4.工工艺艺各各异异，很很多多在在单单味味中中药药鲜鲜品品中中存存在在的的化化

3、学学成成分分，经经过过炮炮制制或或制制备备工工艺艺中中经经加加热热处处理理后后已已不不复复存存在在，或或在在制制备备过过程程中中因因挥挥发、分解、成盐发、分解、成盐(沉淀沉淀)反应等增加了中成药分析工程的困难。反应等增加了中成药分析工程的困难。二二）首首先先进进行行组组方方分分析析，随随方方决决定定测测定定主主药药，选选择择合合适适的的检检测测指标，是目前质量分析方法的特点之一。指标，是目前质量分析方法的特点之一。在在进进行行质质量量分分析析时时首首先先以以中中医医理理论论和和用用药药原原则则为为指指导导，进进行行组组方方分分析析，按按功功能能主主治治分分出出主主、辅辅、从从、次次药药味味和和

4、药药群群，选选择择某某合合适适的化学成分为指标来说明其与质量的关系。的化学成分为指标来说明其与质量的关系。三、影响中药制剂质量的因素三、影响中药制剂质量的因素 (一一)原原料料药药材材的的品品种种、规规格格、产产地地、药药用用部部位位、采采收收季季节节、加加工方法的影响工方法的影响 (二二)炮制方法的影响炮制方法的影响 （三）（三）生产工艺的影响生产工艺的影响 (四四)中药制剂的包装、贮藏、保管的影响中药制剂的包装、贮藏、保管的影响 四、中药制剂质量控制的现状和发展趋势四、中药制剂质量控制的现状和发展趋势 一）国外药物分析发展趋势一）国外药物分析发展趋势 基基本本的的方方法法主主要要为为：分分

5、离离分分析析法法、电电化化学学法法、光光谱谱法法和和联联用用分分析方法等析方法等。各各种种色色谱谱及及其其联联用用技技术术已已成成为为占占主主导导地地位位的的常常规规分分析析方方法法，如HPTLCHPTLC、HPLCHPLC、GCGC、HPCEHPCE、LC-MSLC-MS联用等联用等。体体内内药药物物分分析析研研究究，趋向于采用在在线线的的联联用用微微透透析析分分析析技技术术，如on-line MD-CEon-line MD-CE、on-line MDon-line MDLCLC等。手性药物手性药物作为化学药物的特殊群体，以以HPLCHPLC和和CECE为主要拆分手为主要拆分手段的手性药物分

6、析段的手性药物分析方兴未艾，已成为全世界药物分析的研究热点。二）国内中药制剂分析现状与发展趋势）国内中药制剂分析现状与发展趋势 1、国内中药制剂分析现状国内中药制剂分析现状 1 1）光谱法的应用）光谱法的应用 A A 比色法比色法 如丹参素如丹参素/丹参注射液，阿魏酸丹参注射液，阿魏酸/当归浸膏当归浸膏-定量定量B紫外紫外-可见分光光度法可见分光光度法单波长法单波长法如蒽醌如蒽醌/何首乌，香豆素何首乌，香豆素/祖师栗膏祖师栗膏-定量定量；双波长法双波长法靛蓝、靛玉红靛蓝、靛玉红/喉痛消炎丸喉痛消炎丸-定量定量；三波长法三波长法小檗碱小檗碱/三黄片三黄片-定量定量；一阶导数光谱法一阶导数光谱法绿

7、原酸绿原酸/感冒咳嗽冲剂，麻黄碱感冒咳嗽冲剂，麻黄碱/哮喘丸哮喘丸-定量定量二阶导数光谱法二阶导数光谱法胆酸胆酸/清宫冲剂，血竭清宫冲剂，血竭/七厘散七厘散-定量定量；三阶导数光谱法三阶导数光谱法氢溴酸东莨菪碱氢溴酸东莨菪碱/中麻中麻2号注射液号注射液-定量定量。等。等C荧光法荧光法丹参素丹参素/丹参注射液丹参注射液D红外分光光度法红外分光光度法-体、体、-体体/山道年；番木鳖碱、马钱子碱山道年；番木鳖碱、马钱子碱/马钱子马钱子E质谱法质谱法F核磁共振光谱法核磁共振光谱法2）色谱法的应用）色谱法的应用A纸色谱法纸色谱法已较少应用；已较少应用；B薄层色谱法薄层色谱法应用广泛；应用广泛；C棒状薄层

8、色谱法棒状薄层色谱法小檗碱小檗碱/复方黄柏制剂、人参皂甙复方黄柏制剂、人参皂甙/人参、人参、胆酸和去氧胆酸胆酸和去氧胆酸/熊胆熊胆-定量；定量；D气相色谱法气相色谱法挥发性成分定量挥发性成分定量冰片冰片/复方丹参片复方丹参片/牛黄解毒丸牛黄解毒丸/冠心苏合丸等；冠心苏合丸等；厚朴酚、和厚朴酚厚朴酚、和厚朴酚/藿香正气水，麻黄碱藿香正气水，麻黄碱/葛根汤；葛根汤；E高效液相色谱法高效液相色谱法应用广泛，以反相应用广泛，以反相HPLC为主；为主；黄连素黄连素/半夏泻心汤，红景天甙半夏泻心汤，红景天甙/红景天口服液，甘草酸红景天口服液，甘草酸/千金升千金升白冲剂等白冲剂等。3）电化学分析法的应用）电

9、化学分析法的应用A库仑法库仑法B电位法电位法药物电极测定法和电位溶出分析法药物电极测定法和电位溶出分析法4）其他）其他A原子吸收光谱法和冷原子技术原子吸收光谱法和冷原子技术B原子发射光谱原子发射光谱CX射线分析法射线分析法 目前，中药体系存在的突出问题具体表现在：目前，中药体系存在的突出问题具体表现在：(1)(1)定量分析指定量分析指标与其主要药效作用间缺乏相关性；标与其主要药效作用间缺乏相关性；(2)(2)与化学药物相比，中药是与化学药物相比，中药是一个由多成分、多因素构成的复杂体系，目前还没有建立起一套有一个由多成分、多因素构成的复杂体系，目前还没有建立起一套有效的中药复杂体系定量分析标准

10、。效的中药复杂体系定量分析标准。2 2。国内中药制剂分析发展趋势。国内中药制剂分析发展趋势 (1)(1)中中药药有有效效成成分分的的筛筛选选与与确确定定；应应用用仿仿生生学学、基基因因组组学学等等学学科科的的理理论论和和进进展展，发发现现新新的的药药物物靶靶标标，从从分分子子、基基因因、受受体体、组组织织和整体水平系统准确地确定中药复杂体系中的药效物质；和整体水平系统准确地确定中药复杂体系中的药效物质；(2)(2)中中药药有有效效成成分分的的提提取取与与分分析析；中中药药化化学学成成分分非非常常复复杂杂，而而且且有有效效成成分分也也具具有有相相对对性性。为为了了高高效效率率地地提提取取中中药药

11、有有效效成成分分，应应用用各各种种现现代代提提取取技技术术，如如SFESFE、SWESWE、UAEUAE等等，可可用用于于中中药药复复杂杂体体系系中中有有效效成成分分的的提提取取，利利用用准准确确的的仪仪器器分分析析方方法法和和计计算算机机技技术术，通通过过因因子分析方法对中药复杂体系进行定性定量评价；子分析方法对中药复杂体系进行定性定量评价；(3)(3)中中药药药药效效物物质质与与中中医医药药理理论论相相关关性性研研究究；利利用用现现代代分分析析方方法法研研究究中中药药复复杂杂体体系系中中药药效效物物质质与与中中医医药药理理论论的的定定量量关关系系，并并结结合合现现代代医医学学理理论论，阐阐

12、明明其其作作用用机机制制，在在此此基基础础上上对对中中药药及及其其复复方方进进行行全面质量控制。全面质量控制。第二节第二节中药制剂分析工作的基本程序中药制剂分析工作的基本程序中中药药制制剂剂分分析析程程序序一一般般可可分分取取样样、测测试试样样品品溶溶液液的的制制备备和和测测定定（包括定性鉴别、杂质检查、含量测定）等。（包括定性鉴别、杂质检查、含量测定）等。一、一、取样取样1供试品要具有代表性：原则是均匀、合理。供试品要具有代表性：原则是均匀、合理。2严严格格按按照照规规定定的的取取样样方方法法进进行行取取样样：一一般般应应从从每每个个包包装装的的四四角角和和中中央央五五处处取取样样，深深度度

13、可可达达1/3 2/3处处。取取得得的的样样品品装装入入清清洁洁、干干燥燥、具具磨磨口口塞塞的的容容器器或或密密封封的的塑塑料料袋袋中中，并并注注明明品品名名、批批号号、数数量、取样日期及取样人量、取样日期及取样人。3抽抽取取供供试试品品的的数数量量：各各类类中中药药制制剂剂取取样样大大致致是是至至少少够够3次次检检验的用量。贵重药品可酌情取样。验的用量。贵重药品可酌情取样。粉粉状状制制剂剂（散散剂剂、颗颗粒粒剂剂）一一般般取取样样100g，可可从从包包装装的的上上、中中、下下三三层层及及周周围围间间隔隔相相等等部部位位取取样样若若干干，将将所所得得样样品品混混匀匀，按按四四分分法从中取出所需

14、供试量。法从中取出所需供试量。液体制剂（口服液、药酒、糖浆、酊剂等）一般取样液体制剂（口服液、药酒、糖浆、酊剂等）一般取样200ml。同。同时须注意均匀取样。时须注意均匀取样。固体中成药（丸剂、片剂）成品取样一般为固体中成药（丸剂、片剂）成品取样一般为100g，压片后取样，压片后取样200片。丸剂一般取片。丸剂一般取10丸。丸。胶囊剂胶囊剂称取不少于称取不少于20个胶囊，倾出其中的药料，称定空胶囊个胶囊，倾出其中的药料，称定空胶囊的重量，由总重中减去，即为胶囊内药料的重量的重量，由总重中减去，即为胶囊内药料的重量。依标示量及供试依标示量及供试量称取部分药料供分析。一般取样量为量称取部分药料供分

15、析。一般取样量为100g。注射液的取样，灌注、熔封，灭菌前后应经过两次分析。灌封注射液的取样，灌注、熔封，灭菌前后应经过两次分析。灌封前将注射液混合均匀，如前将注射液混合均匀，如液体取样原则取样，再按标示量及供试量液体取样原则取样，再按标示量及供试量分别取部分进行检验；经灭菌后的注射液须按原来的方法进行分析分别取部分进行检验；经灭菌后的注射液须按原来的方法进行分析检验。已封好的安瓿，取样量一般为检验。已封好的安瓿，取样量一般为200支。支。其它剂型的中成药，可根据具体情况随意抽取一定数量，作为其它剂型的中成药，可根据具体情况随意抽取一定数量，作为随机抽样。随机抽样。供试样品检验完毕，应保留一半

16、数量作为留样观察。供试样品检验完毕，应保留一半数量作为留样观察。二、二、测试样品溶液的制备测试样品溶液的制备中药制剂测试样品溶液的制备一般分为提取、分离、净化等过中药制剂测试样品溶液的制备一般分为提取、分离、净化等过程。程。1.中药制剂样品的提取中药制剂样品的提取冷冷浸浸法法，61020倍倍药药重重溶溶剂剂，称称重重，浸浸泡泡122448小小时时，称称重重,，等分取样或取总样测定。适宜遇热不稳定的有效成分；，等分取样或取总样测定。适宜遇热不稳定的有效成分；连连续续回回流流法法，样样品品置置索索氏氏提提取取器器中中，利利用用溶溶剂剂反反复复提提取取，提提取取效率高，溶剂少，遇热不稳定的有效成分不

17、宜用此法；效率高，溶剂少，遇热不稳定的有效成分不宜用此法；超超声声波波提提取取法法，样样品品置置容容器器中中，溶溶剂剂提提取取，效效率率高高，一一般般样样品品30min内即可完成。内即可完成。2中药制剂样品的预处理中药制剂样品的预处理液液-液萃取法液萃取法:溶剂直接萃取、离子对萃取，操作繁，易乳化。溶剂直接萃取、离子对萃取，操作繁，易乳化。沉淀法：沉淀法：采用某些试剂沉淀杂质或沉淀待测成分。采用某些试剂沉淀杂质或沉淀待测成分。蒸蒸馏馏法法：利利用用待待测测成成分分或或其其分分解解产产物物具具有有挥挥发发性性的的特特点点，采采用用蒸蒸馏馏法法、收收集集馏馏液液进进行行含含量量测测定定，必必须须明

18、明确确测测定定成成分分的的结结构构才才可可用此法。用此法。色色谱谱法法（液液-固固萃萃取取法法），常用净净化化剂剂有有三三氧氧化化二二铝铝、氧氧化化镁镁、硅硅胶胶、活活性性炭炭、大大孔孔树树脂脂、离离子子交交换换树树脂脂、硅硅藻藻土土、键键合合相相硅硅胶胶C18、C8等等。其其中中离离子子交交换换树树脂脂、硅硅藻藻土土、键键合合相相硅硅胶胶C18、C8等等目目前前有有较较多多商品预处理柱，使用方便，操作简单，净化效率高。商品预处理柱，使用方便，操作简单，净化效率高。三、定性鉴别、检查和含量测定三、定性鉴别、检查和含量测定1定性鉴别定性鉴别1）性性状状鉴鉴别别系系指指中中成成药药的的形形状状、颜

19、颜色色、气气味味等等，凡凡药药典典收收载载品品，在药典中均有规定，可按要求进行检查。在药典中均有规定，可按要求进行检查。2）显显微微鉴鉴别别因因为为含含有有中中药药原原粉粉的的中中成成药药均均保保留留中中药药材材的的显显微特征。可以通过这些特征，对中成药进行定性鉴别。微特征。可以通过这些特征，对中成药进行定性鉴别。3）理理化化鉴鉴别别药药典典中中常常用用的的方方法法有有：荧荧光光法法、显显色色法法、沉沉淀淀法、微量升华法；纸色谱法、薄层色谱、液相色谱、气相色谱等。法、微量升华法；纸色谱法、薄层色谱、液相色谱、气相色谱等。中中药药定定性性鉴鉴别别应应选选择择其其中中主主药药（君君药药）、辅辅药药

20、（臣臣药药）作作为为主主要对象要对象，其次应鉴别毒剧药及贵重药材。其次应鉴别毒剧药及贵重药材。2检查检查按我国药典要求，中药制剂需要检查的项目大致可分为三类：1）污污染染型型中中成成药药一一般般杂杂质质检检查查项项目目有有：异异物物、灰灰分分、酸酸不不溶溶性性灰灰分分、重重金金属属、砷砷盐盐等等；卫卫生生学学检检查查：微微生生物物细细菌菌检检查查；以以及及有有的产品要求农药残留量的检测。的产品要求农药残留量的检测。2）特殊杂质型）特殊杂质型原料药材掺假、有毒成分的限量检查原料药材掺假、有毒成分的限量检查。3）剂型的要求检查类型（制剂通则要求检查项目）剂型的要求检查类型（制剂通则要求检查项目）中

21、中成成药药一一般般质质量量要要求求的的检检查查有有：挥挥发发油油测测定定、水水分分测测定定（固固体体制制剂剂）、乙乙醇醇含含量量测测定定、总总固固体体、相相对对密密度度、pH值值（酊酊剂剂、药药酒酒）、装装量量差差异异（片片重重差差异异）、崩崩解解度度（片片剂剂、胶胶囊囊剂剂）、熔熔点点测测定定、旋旋光度测定等。光度测定等。3含量测定含量测定中中成成药药含含量量测测定定所所采采用用的的方方法法除除经经典典的的重重量量法法、容容量量法法(包包括括中中和和法法、容容量量沉沉淀淀法法、络络合合滴滴定定法法、氧氧化化还还原原法法及及非非水水溶溶液液滴滴定定法法等等)外外，还还可可采采用用电电位位法法、

22、库库伦伦滴滴定定法法、比比色色法法、可可见见-紫紫外外分分光光光光度度法法、红红外外分分光光光光度度法法、液液相相色色谱谱法法、薄薄层层色色谱谱法法、气气相相色色谱谱法法、高效液相色谱法、双波长薄层扫描法等。高效液相色谱法、双波长薄层扫描法等。1）对有效成分明确的中药制剂要进行有效成分的含量测定）对有效成分明确的中药制剂要进行有效成分的含量测定。2）大致明确有效成分，要求测定这些成分的总量。）大致明确有效成分，要求测定这些成分的总量。3）对对有有效效成成分分已已知知但但无无理理想想的的测测定定方方法法的的中中药药制制剂剂，可可通通过过测测定其中某些化学成分的含量间接控制有效成分的含量。定其中某

23、些化学成分的含量间接控制有效成分的含量。4）对对有有效效成成分分不不明明确确的的中中药药制制剂剂可可采采用用以以下下方方法法：选选择择可可能能的的有有效效成成分分或或主主要要成成分分（指指示示性性成成分分）进进行行含含量量测测定定；测测定定药药物物的的总总固固体体量量；选选择择在在原原料料加加工工炮炮制制时时或或制制备备、贮贮存存过过程程中中易易损损失失、破破坏坏的成分进行含量或限量测定。的成分进行含量或限量测定。5）中药制剂中含有剧毒性成分则要测定其含量。）中药制剂中含有剧毒性成分则要测定其含量。6）贵重药材在制剂中投料量应加以测定。）贵重药材在制剂中投料量应加以测定。第二章第二章中药制剂定

24、量分析方法中药制剂定量分析方法第一节第一节可见可见-紫外光谱法紫外光谱法一、单一物质的定量一、单一物质的定量定定量量依依据据是是Beer-Lambert定定律律，A=lC。测测定定单单一一物物质质时时，先先测测定定物物质质的的吸吸收收光光谱谱，然然后后选选择择最最大大吸吸收收峰峰的的波波长长 max进进行行定定量量分分析。析。一一个个物物质质若若有有几几个个吸吸收收峰峰时时，可可选选择择吸吸收收峰峰较较高高，在在此此吸吸收收峰峰处处吸吸光光度度随随波波长长变变化化较较小小，并并且且其其它它物物质质无无吸吸收收的的波波长长作作为为定定量量条条件。件。一般不选择光谱最左边的末端吸收峰作定量测定的波

25、长。一般不选择光谱最左边的末端吸收峰作定量测定的波长。常用定量方法：常用定量方法：1.对对照照法法C样样=C标标 A样样/A标标；C标标 A样样/（A标标 C 样样）=样样品品%，C样样和和C标标分别为样品浓度和标准品浓度，分别为样品浓度和标准品浓度，C 样样为样品标示浓度。为样品标示浓度。2.标准曲线法：从标准品吸光度标准曲线法：从标准品吸光度-浓度曲线求得样品浓度。浓度曲线求得样品浓度。二、二、混合物的含量测定混合物的含量测定一一）混混合合物物中中有有a，b两两种种组组分分，若若两两者者的的最最大大吸吸收收峰峰不不重重合合，且且在在a的的 1max处处，b无无吸吸收收；在在b的的 2max

26、处处，a无无吸吸收收。可可分分别别在在 1max、2max处用单一物质的定量方法从混合物中测定处用单一物质的定量方法从混合物中测定a、b的浓度。的浓度。二二）混混合合物物中中有有a，b两两种种组组分分，吸吸收收光光谱谱部部分分重重叠叠，在在a的的 1处处，b无无吸吸收收；在在b的的 2处处，a有有吸吸收收。先先在在 2处处测测定定总总吸吸收收Aa+b，再再在在 1处处测测定定Aa 1；先先从从Aa 1直直接接求求出出a的的浓浓度度，根根据据a的的浓浓度度求求出出Aa 2。再从再从Aa+b减去减去Aa 2后求得后求得Ab 2，就可求得，就可求得b的浓度。的浓度。（三）双波长测定法三）双波长测定法

27、中药制剂分析中常用的方法为等吸收波长法和系数率法。中药制剂分析中常用的方法为等吸收波长法和系数率法。1等吸收波长法等吸收波长法1）基本原理）基本原理根据左图选出两个波长根据左图选出两个波长 1与与 2，其选择原则，其选择原则是干扰组分是干扰组分a在在 1与与 2处吸收度相等，即处吸收度相等，即Aa 1=Aa 2。而待测组分。而待测组分b在在 1与与 2处的差吸处的差吸收度收度 A应比较大，再在应比较大，再在 1与与 2处测混合组分处测混合组分溶液的差吸度溶液的差吸度 A。设设 1为参比波长，为参比波长，2为测量波长，则为测量波长，则等吸收波长法原理示意图等吸收波长法原理示意图 A=Aa+b 2

28、-Aa+b 1=（Aa 2+Ab 2）-（Aa 1+Ab 1）=Ab 2-Ab 1=（b 2-b 1）CbL 2）应用举例）应用举例喉痛消炎丸中靛蓝、靛玉红的测定喉痛消炎丸中靛蓝、靛玉红的测定）选选择择等等吸吸收收波波长长：用用28 g/ml的的靛靛蓝蓝及及靛靛玉红的氯仿溶液在分光光度计上扫描，并用同玉红的氯仿溶液在分光光度计上扫描，并用同法扫描出空白样品溶液的吸收曲线。法扫描出空白样品溶液的吸收曲线。从左图可知靛蓝在从左图可知靛蓝在540nm、634.4nm处有合适处有合适的等吸收波长；靛玉红却是在的等吸收波长；靛玉红却是在5142nm和和566nm处有等吸收波长，而空白样品液在上述处有等吸

29、收波长，而空白样品液在上述波长处的吸收曲线几乎成一条直线、不干扰测波长处的吸收曲线几乎成一条直线、不干扰测图图2-1-3靛蓝、靛玉红的吸收曲线靛蓝、靛玉红的吸收曲线(1)靛蓝靛蓝(2)靛玉红靛玉红(3)无青黛样品无青黛样品定，选取靛蓝的测定波长定，选取靛蓝的测定波长 s1566nm、参比、参比波波长长 R1=514.2nm。可可选选靛靛玉玉红红的的测测定定波波长长 s2=540nm、参参比比波波长长 R2=634.4nm。)标准曲线：精密吸取靛蓝对照品溶液标准曲线：精密吸取靛蓝对照品溶液0.25、0.50、2.0ml；靛玉红对照品溶液；靛玉红对照品溶液0.20、0.40、1.40ml，分别放入

30、，分别放入10ml量瓶量瓶中，用氯仿稀释至刻度，分别在上述等吸收波长处测其差吸收度：中，用氯仿稀释至刻度，分别在上述等吸收波长处测其差吸收度：A1=A566nm-A514.2nm；A2=A540nm-A634.4nm；然后用然后用 A对对C作标准曲线；并求出其一元回归方程：作标准曲线；并求出其一元回归方程：A10.02241C1(r11.0000)A20.04060C2+0.0055(r21.0000)含含量量测测定定：精精称称喉喉痛痛消消炎炎丸丸细细粉粉约约0.2g于于索索氏氏提提取取器器中中，用用氯氯仿仿提提取取至至无无蓝蓝色色，用用氯氯仿仿定定容容于于50ml量量瓶瓶中中，再再精精密密吸

31、吸取取5ml置置10ml量量瓶瓶中中，加加氯氯仿仿至至刻刻度度即即为为样样品品溶溶液液。将将样样品品溶溶液液在在 s1与与 R1，处处测测出出 A样样1值值，用用以以上上 A1式式求求出出靛靛蓝蓝的的浓浓度度及及样样品品中中靛靛蓝蓝的的含含量量。同同样样，在在 s2与与 R2处处测测出出 A样样2，用用以以上上 A2式式求求出出靛靛玉玉红红的的浓浓度及样品中靛玉红的含量。度及样品中靛玉红的含量。2联立方程法联立方程法Aa+b 1=Aa 1+Ab 1=a 1CaL+b 1CbLAa+b 2=Aa 2+Ab 2=a 2CaL+b 2CbL （四）三波长测定法四）三波长测定法 此此法法要要求求在在任

32、任一一吸吸收收曲曲线线上上，能能找找出出满满足足下下述述条条件件的的三三个个波波长长：即即在在干干扰扰组组分分的的吸吸收收曲曲线线上上，与与三三个个波波长长相相应应的的点点，能能在在一一条条直直线线上。上。1 1基本原理基本原理 左图中左图中 1 1、2 2、3 3为在任一吸收曲线上，任意为在任一吸收曲线上，任意 选择的三个波长。选择的三个波长。A A1 1、A A2 2、A A3 3为在三个波长处为在三个波长处 分别测出的吸收度。分别测出的吸收度。根据相似三角形的等比性质，可推导出下式，根据相似三角形的等比性质，可推导出下式，A=A A=A2 2-（m Am A1 1+nA+nA3 3）/（

33、m+nm+n）=2 2（m 1 1+n 3 3）/（m+n）CL 三波长分光光度法的原理三波长分光光度法的原理 说明说明AA与待测组分浓度与待测组分浓度C C成正比。成正比。2应用举例应用举例 二陈丸中陈皮甙的测定二陈丸中陈皮甙的测定 1 1）总干扰组分的制备及其吸收光谱）总干扰组分的制备及其吸收光谱 )除除去去陈陈皮皮甙甙后后，陈陈皮皮其其他他组组分分提提取取液液的的制制备备：用用溶溶剂剂(含含0.10.1氢氢氧氧化化钠钠的的7575乙乙醇醇液液)提提取取陈陈皮皮粉粉，提提取取液液经经薄薄层层分分离离，刮刮取取除除陈陈皮皮甙甙以以外外的的所所有有斑斑点点洗洗脱脱，得得除除陈陈皮皮甙甙以以外外

34、陈陈皮皮其其他他组组分分提提取取液液(I)(I)。)二陈丸空白粉提取液的制备：按处方比例二陈丸空白粉提取液的制备：按处方比例 配制除陈皮以外的二陈丸空白粉，用上述溶配制除陈皮以外的二陈丸空白粉，用上述溶 剂提取，得二陈丸空白粉提取液剂提取，得二陈丸空白粉提取液()()。将将(I)(I)、()()按处方比例混合，得二陈丸总干按处方比例混合，得二陈丸总干 扰成分液扰成分液()()。分光光度计分别测定陈皮甙对。分光光度计分别测定陈皮甙对 照品和照品和()()的吸收光谱。见左图。其他成分对的吸收光谱。见左图。其他成分对 陈陈皮皮甙甙的的测测定定有有干干扰扰，用用6 6批批不不同同来来源源的的原原料料按

35、按上上法法制制备备()()，并并测测其其吸吸收收光光谱谱，结结果果谱谱形形相相似似。可可采采用用三三波波长长法消除干扰法消除干扰。2 2）选择三个测定波长）选择三个测定波长 作图法粗选，再计算精选在作图法粗选，再计算精选在()()的的 A=0A=0处，即为精选的三个波处，即为精选的三个波长：长：1 1=318.0nm=318.0nm，2 2=286.0nm=286.0nm，3 3=275.0nm=275.0nm。3 3）标标准准曲曲线线 配配制制不不同同浓浓度度的的陈陈皮皮甙甙对对照照品品溶溶液液，在在选选出出的的三三个个波波长长处处，分分别别测测定定吸吸收收度度，并并算算出出AA值值，对对A

36、A值值与与浓浓度度C C进进行直线回归，回归方程为：行直线回归，回归方程为：A=9.9059C 0.0024(r=0.9990)A=9.9059C 0.0024(r=0.9990)4 4）样样品品测测定定 精精密密称称取取二二陈陈丸丸细细粉粉约约0.1g0.1g，加加100.0ml100.0ml上上述述溶溶剂剂浸浸泡泡提提取取1515小小时时，过过滤滤，取取续续滤滤液液2.0ml2.0ml，用用溶溶剂剂稀稀释释至至5.0ml5.0ml，在在选选出出的的三三波波长长处处，分分别别测测定定吸吸收收度度，计计算算其其AA值值，再再按按回回归归方方程算出陈皮甙含量。本法平均回收率：程算出陈皮甙含量。本

37、法平均回收率：98.2898.28，RSDRSD：2.122.12。（五）差示光谱法（五）差示光谱法 1 1基本原理基本原理 差差示示光光谱谱法法的的关关键键有有二二，其其一一，提提供供一一个个近近似似理理想想的的参参比比溶溶液液。其其二二，使使待待测测组组分分发发生生特特征征光光谱谱变变化化，而而赋赋形形剂剂或或其其他他共共有有组组分分却却不引起光谱变化，因而可消除它们的干扰。不引起光谱变化，因而可消除它们的干扰。设设A Ax x、A Ay y分分别别代代表表两两种种不不同同介介质质中中待待测测组组分分在在测测定定波波长长处处的的吸吸收收度度，A Az z代代表表背背景景和和干干扰扰组组分分

38、的的吸吸收收度度，其其不不受受测测定定介介质质改改变变的的影影响响。根据吸收度加和性原理，则根据吸收度加和性原理，则 A=A A=A样样 -A-A参参=(A=(Ax x+A+Az z)-(A)-(Ay y+A+Az z)=A)=Ax x-A-Ay y =(=(x x-y y)CL)CL 差差示示光光谱谱中中的的振振幅幅，即即最最大大吸吸收收与与最最小小吸吸收收之之差差值值，也也可可进进行行定量测定，这可提高本法的专属性。定量测定，这可提高本法的专属性。2 2应用举例应用举例 差示光谱法测定含牛黄的中成药中胆红素的含量差示光谱法测定含牛黄的中成药中胆红素的含量 1 1）测测定定原原理理 胆胆红红

39、素素具具有有高高度度共共轭轭体体系系结结构构，在在波波长长453nm453nm处处为为最最大大吸吸收收，在在可可见见光光照照射射下下胆胆红红素素易易氧氧化化成成蓝蓝色色产产物物，在在453nm453nm处吸收度显著降低。处吸收度显著降低。2 2）选用日光下照射）选用日光下照射3030分钟或在红外灯下照射分钟或在红外灯下照射4 4小时测小时测AA值。值。3 3）精密称取胆红素）精密称取胆红素2mg2mg于于50ml50ml棕色量瓶中，棕色量瓶中，加入适量冷加入适量冷(10(10以下以下)的酸性氯仿的酸性氯仿(150ml(150ml氯氯 仿中含仿中含0.05ml0.05ml浓盐酸浓盐酸)，于冰水浴

40、中超声振，于冰水浴中超声振 荡荡2020分钟，稀释至刻度，制成储备液。准确分钟，稀释至刻度，制成储备液。准确 吸取吸取0 0，4 4、0 08 8、1 1，2 2、1.61.6、2.0ml2.0ml储备液储备液 于于10ml10ml量瓶中，加冷酸性氯仿至刻度，测其量瓶中，加冷酸性氯仿至刻度，测其 光照前后在光照前后在453nm453nm处的吸收度。回归方程处的吸收度。回归方程 胆红素在酸性氯仿溶液中的吸收光谱胆红素在酸性氯仿溶液中的吸收光谱 为为A=0.0804C+0.00570(r=0.9995)A=0.0804C+0.00570(r=0.9995)。a a光照前光照前 b b光照后光照后

41、除光照反应外，其余操作均需避光。除光照反应外，其余操作均需避光。4 4）分别制得六应丸、六神丸、牛黄消炎丸的空白样品对照液，）分别制得六应丸、六神丸、牛黄消炎丸的空白样品对照液，在在453nm453nm处测得各自光照前后的处测得各自光照前后的A A值，计算值，计算AA。实验表明三种成药。实验表明三种成药AA值为零或几乎为零。说明其他干扰组分在以上光照条件下不干值为零或几乎为零。说明其他干扰组分在以上光照条件下不干扰胆红素的测定。扰胆红素的测定。5 5）精密称取六应丸、六神丸各）精密称取六应丸、六神丸各60mg60mg，牛黄消炎丸，牛黄消炎丸120mg120mg置置10ml10ml带塞的试管中，

42、准确加入冷酸性氯仿带塞的试管中，准确加入冷酸性氯仿10ml10ml，冰水浴中振荡，冰水浴中振荡2020分钟，分钟，过滤，弃去初滤液，测续滤液光照前后的过滤，弃去初滤液，测续滤液光照前后的A A值，算出值，算出AA值。由回归值。由回归方程算得样品的含量。方程算得样品的含量。本法加样回收率：六应丸为本法加样回收率：六应丸为98.898.8，RSD=1.8RSD=1.8；六神丸为；六神丸为100.7100.7，RSD=2.2RSD=2.2；牛黄消炎丸为；牛黄消炎丸为93.093.0，RSDRSD1.11.1。（六）导数光谱法（六）导数光谱法 1 1导数光谱及其特征导数光谱及其特征 通常的吸收光谱，其

43、吸收度是波长的函数通常的吸收光谱，其吸收度是波长的函数 A=CE=CA=CE=C（）。对对波波长长求求导导，将将其其微微分系分系 数（数（d dn nA/dA/dn n）对波长扫描可得导数光）对波长扫描可得导数光 谱图。谱图。特征：特征：(1)(1)导数光谱的阶数愈高，峰形愈尖锐且数导数光谱的阶数愈高，峰形愈尖锐且数 量亦增多。量亦增多。(2)(2)在零阶光谱的极大处，其相应的奇阶光在零阶光谱的极大处，其相应的奇阶光 谱通过零点。在零阶光谱的两拐点处，奇阶谱通过零点。在零阶光谱的两拐点处，奇阶 导数光谱为极大或极小。导数光谱为极大或极小。(3)(3)偶阶导数光谱的形状与零阶光谱类似，偶阶导数光

44、谱的形状与零阶光谱类似，零阶光谱的峰值对应于偶阶导数光谱的极值，零阶光谱的峰值对应于偶阶导数光谱的极值，零阶光谱的拐点在偶阶导数光谱中通过零点。零阶光谱的拐点在偶阶导数光谱中通过零点。(4)(4)导数光谱谱带的极值数等于导数阶数加导数光谱谱带的极值数等于导数阶数加1 1。高斯曲线及其一至四阶导数曲线高斯曲线及其一至四阶导数曲线 导数分光光度的优点：导数分光光度的优点：a a能检出两个或两个以上的重叠吸收带；能检出两个或两个以上的重叠吸收带；b b能分辨在强吸收曲线能分辨在强吸收曲线“肩部肩部”的弱吸收带；的弱吸收带；c c能精密确定单一吸收峰位置；能精密确定单一吸收峰位置；d d能消除基线（背

45、景）的影响；能消除基线（背景）的影响；e e能进行定量测定。能进行定量测定。2 2基本原理基本原理 吸收光谱服从吸收光谱服从BeerBeer定律：定律：A ACLCL 根据导数光谱的定义，对上式求导，则：根据导数光谱的定义，对上式求导，则：dA/d=dA/d=（d/dd/d）CLCL；d d2 2A/dA/d2 2=（d d2 2/d/d2 2）CLCL；d dn nA/dA/dn n=（d dn n/d/dn n）CLCL；式式 中中 L L为为 定定 值值，给给 定定 物物 质质 在在 特特 定定 波波 长长 处处 的的 d/dd/d、d d2 2/d/d2 2ddn n/d/dn n也也

46、 是是 定定 值值，因因 此此，dA/dCdA/dC，d d2 2A/dA/d2 2CdCdn nA/dA/dn nCC。常用的定量参数的选择方法有：常用的定量参数的选择方法有：1 1）峰）峰-谷法谷法 测量相邻峰、谷之间的距离。测量相邻峰、谷之间的距离。左图中的左图中的h h1 1hh2 2(振幅，用振幅，用D D表示表示)。2 2）基线法）基线法 取相邻二同向峰取相邻二同向峰(正或倒正或倒)的的 公切线为基线，以中间的反向峰峰尖至基线公切线为基线，以中间的反向峰峰尖至基线 的距离为测量值。左图中的距离为测量值。左图中p p1 1。3 3）峰）峰-零法零法 测量峰值到零线间的垂直距测量峰值到

47、零线间的垂直距 离，左图中离，左图中p p2 2。4 4）面积法）面积法 根据一阶或二阶导数光谱面根据一阶或二阶导数光谱面 导数光谱的测量导数光谱的测量 积，积，进行定量测定。进行定量测定。3 3共存组分干扰吸收的消除共存组分干扰吸收的消除 1 1）一阶导数光谱法消除线性干扰吸收）一阶导数光谱法消除线性干扰吸收 A=A=CL+a+bCL+a+b dA/d=dA/d=（d/dd/d）CL+aCL+a 说说明明线线性性干干扰扰在在一一阶阶导导数数光光谱谱中中对对定定量量参参数数D(D(振振幅幅)没没有有影影响响，D D只与待测组分浓度成正比。只与待测组分浓度成正比。D=(dA/d)D=(dA/d)

48、峰峰-(dA/d)-(dA/d)谷谷 =(d/d)=(d/d)峰峰-(d/d)-(d/d)谷谷CLCL2 2）高阶导数光谱法消除非线性干扰吸收及用于重叠）高阶导数光谱法消除非线性干扰吸收及用于重叠峰的分离，定量峰的分离，定量 若若干干扰扰组组分分吸吸收收对对波波长长呈呈非非线线性性，为为一一近近似似的的二二次次吸吸收收曲曲线线，则总吸收度为则总吸收度为 A=A=CL+eCL+e2 2+f+g+f+g 对其求一阶、二阶导数得：对其求一阶、二阶导数得：dA/d=dA/d=（d/dd/d）CL+eCL+e +f+f d d2 2A/dA/d2 2=（d d2 2/d/d2 2）CL+eCL+e 4.

49、4.导数光谱法中的主要参数导数光谱法中的主要参数 1)1)微微分分阶阶数数(n)(n)n n的的选选择择主主要要由由干干扰扰组组分分吸吸收收曲曲线线的的形形状状而而定。定。n n越大，分辨力愈强，但信噪比将降低。越大，分辨力愈强，但信噪比将降低。2)2)波波长长间间隔隔()()愈愈大大，测测量量灵灵敏敏度度增增大大，但但分分辨辨率率降降低，通常低，通常选选1 12nm2nm为好。为好。3)3)中中间间波波长长(m m)通通常常需需选选两两个个m m，即即m1m1、m2m2 。其其选选择择原原则则：待待测测组组分分的的导导数数曲曲线线在在m1m1、m2m2处处的的形形状状易易辨辨认认，较较特特征

50、征；而干扰组分在此处的导数值相等或相近。而干扰组分在此处的导数值相等或相近。5.5.应用举例应用举例 1)1)肺露中丹皮酚含量的测定肺露中丹皮酚含量的测定 ()()干扰丹皮酚测定情况的考察：干扰丹皮酚测定情况的考察：按处方配比，分别取药材，加水适按处方配比，分别取药材，加水适量，蒸馏提制成量，蒸馏提制成2222味药材的模拟液，以味药材的模拟液，以水为空白，分别绘制紫外吸收光谱图。水为空白，分别绘制紫外吸收光谱图。从图中看出，牡丹皮蒸提液紫外吸从图中看出，牡丹皮蒸提液紫外吸收很强，枇杷叶和芦根蒸提液紫外吸收收很强，枇杷叶和芦根蒸提液紫外吸收较弱，干扰丹皮酚的测定，实验表明：较弱，干扰丹皮酚的测定