临床生物化学讲义完整版.ppt
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1、山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义临床生物化学讲义完整版 Still waters run deep.流静水深流静水深,人静心深人静心深 Where there is life,there is hope。有生命必有希望。有生命必有希望山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义内容简介1.临床生物化学常用的检测方法2.肝胆疾病的生物化学检测3.肾脏疾病的生物化学检测4.血清脂类及脂蛋白生物化学检测山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义内容简介5.糖及其代谢物的生物化学检测6.心脏疾病的生物化学检测7.无机离子的生物化学检测8.化学比色法常见的几种类型山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义临床生物化学常
2、用的检测方法|化学比色法|免疫比浊法|离子选择性电极电位法|电泳法山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义化学比色法l基本原理：根据比尔定律，特定波长的光通过溶液时，溶液的吸光度与溶液的浓度成正比。待测物经过一定的化学反应生成的产物，对特定波长的光具有吸收峰，从而对物质进行定量检测。这是最常用的一种方法。l举例：总蛋白，白蛋白的测定山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义免疫比浊法l基本原理：抗原抗体在特殊缓冲液中快速形成抗原抗体复合物，使反应液出现浊度。当反应液中保持抗体过剩时，形成的复合物随抗原量增加而增加，浊度亦增加。如检测散射光强度则为散射比浊，如检测透过光则为透射比浊。我们所用为透射比浊l举
3、例：前白蛋白，载脂蛋白等蛋白的测定山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义离子选择性电极电位法l基本原理：根据能斯特方程，离子选择性电极法通过检测电极表面电位的改变，比较测定电极与参比电极表面电位变化的差值大小来计算样本中离子的含量。l举例：钾、钠、氯的测定山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义电泳法l基本原理：在直流电场中，带电粒子具有向带相反电极移动的现象。血清中的蛋白质为双性离子，在碱性环境中带负电荷，在电场中向正极移动。不同蛋白具有不同大小、分子量和电荷，带电荷多，分子量小则泳动快，反之则慢，从而将不同蛋白分离。l举例:血清蛋白电泳山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义思考题l简述临床生物化学
4、常用的几种检测方法，并各举一例。山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义肝胆疾病的生物化学检测山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义1.肝脏的生理功能肝脏的生理功能1.代谢功能：三大物质（糖、蛋白质和脂类）的代谢功能：三大物质（糖、蛋白质和脂类）的同化、储存和异化；核酸代谢、维生素的活同化、储存和异化；核酸代谢、维生素的活化和储藏；激素的灭活及排泄；胆红素、胆化和储藏；激素的灭活及排泄；胆红素、胆酸的生成；铁、铜等金属的代谢酸的生成；铁、铜等金属的代谢2.排泄功能：对胆红素和某些染料的排泄排泄功能：对胆红素和某些染料的排泄3.解毒功能：生物转化功能（同化、异化）解毒功能：生物转化功能（同化、异化）4
5、.物质合成功能：凝血和纤溶因子、纤溶抑制因物质合成功能：凝血和纤溶因子、纤溶抑制因子的生成及对活性凝血因子的灭活清除子的生成及对活性凝血因子的灭活清除山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义2.肝功能实验的内容肝功能实验的内容蛋白质代谢功能检查蛋白质代谢功能检查胆红素代谢检查胆红素代谢检查胆汁酸代谢检查胆汁酸代谢检查摄取、排泄功能检查摄取、排泄功能检查血清肝酶谱的检查血清肝酶谱的检查山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义蛋白质代谢功能检查蛋白质代谢功能检查肝脏是蛋白质代谢的主要的器官，许多蛋白质如白蛋肝脏是蛋白质代谢的主要的器官，许多蛋白质如白蛋白、糖蛋白、凝血因子、纤溶因子及各种转运蛋白等白、糖蛋
6、白、凝血因子、纤溶因子及各种转运蛋白等都由肝细胞合成，当肝细胞受损时，合成上述蛋白的都由肝细胞合成，当肝细胞受损时，合成上述蛋白的功能降低，蛋白质的合成量就减少功能降低，蛋白质的合成量就减少 球蛋白虽然不是肝细胞合成，但当肝实质细胞受损，球蛋白虽然不是肝细胞合成，但当肝实质细胞受损，间质细胞增生时，球蛋白的生成增加间质细胞增生时，球蛋白的生成增加因此，在肝脏疾病时，可表现出血液中蛋白质质和量因此，在肝脏疾病时，可表现出血液中蛋白质质和量的改变的改变其主要表现为白蛋白减少，纤维蛋白原减少，球蛋白其主要表现为白蛋白减少，纤维蛋白原减少，球蛋白的增多等的增多等因此，测定血清中蛋白质含量和分析其组分的
7、变化，因此，测定血清中蛋白质含量和分析其组分的变化，可以了解肝脏蛋白质代谢的功能可以了解肝脏蛋白质代谢的功能山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义1.总蛋白、白蛋白的检测总蛋白、白蛋白的检测l总蛋白：双缩脲法总蛋白：双缩脲法l蛋白质是由许多氨基酸通过肽键相互结蛋白质是由许多氨基酸通过肽键相互结合而成的，二价铜离子在碱性溶液中与合而成的，二价铜离子在碱性溶液中与蛋白中的肽发生反应形成紫红色络合物，蛋白中的肽发生反应形成紫红色络合物，在在540nm有吸收峰，并与蛋白含量有吸收峰，并与蛋白含量 成正成正比。比。l蛋白蛋白+Cu2+Cu 蛋白络合物（紫红色）蛋白络合物（紫红色）山东省千佛山医院检验科生化
8、室系列讲义白蛋白的检测白蛋白的检测l溴甲酚绿终点法l血清中白蛋白与溴甲酚绿在pH4.2环境中结合生成绿色复合物，溶液由黄色变为绿色，在630nm有吸收峰，其颜色深浅与白蛋白浓度成正比，从而测出白蛋白含量。l白蛋白+BCG白蛋白溴甲酚绿复合物山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义与溴甲酚紫法的比较l溴甲酚绿法操作简单、快速，即可手工操作，也能自动化分析，是目前国内最常用方法。l溴甲酚绿法除与白蛋白结合外，还与部分球蛋白结合，对血清白蛋白特异性较溴甲酚紫法差l溴甲酚紫法测定白蛋白具有高特异性山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义临床意义临床意义血清总蛋白与白蛋白升高血清总蛋白与白蛋白升高急性失水、肾上
9、腺皮质功能亢进急性失水、肾上腺皮质功能亢进血清总蛋白与白蛋白降低血清总蛋白与白蛋白降低肝细胞损害合成减少：肝炎、肝硬化、肝肝细胞损害合成减少：肝炎、肝硬化、肝癌癌总蛋白总蛋白60g/L,白蛋白白蛋白25 g/L，低蛋白血，低蛋白血症症营养不良：摄入不足营养不良：摄入不足丢失过多：肾病、烧伤、大出血丢失过多：肾病、烧伤、大出血消耗增加：结核、甲亢、恶性肿瘤消耗增加：结核、甲亢、恶性肿瘤山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义血清总蛋白与白蛋白升高血清总蛋白与白蛋白升高 TP80g/L（高蛋白血症）（高蛋白血症）G35g/L（高球蛋白血症）（高球蛋白血症）慢性肝病、慢性肝病、M蛋白血症、自身免疫性疾病
10、、慢性蛋白血症、自身免疫性疾病、慢性炎症和感染如结核、麻风、慢性血吸虫病炎症和感染如结核、麻风、慢性血吸虫病血清血清TP降低降低生理性减少（生理性减少（e.g.3y）、免疫功能抑制、先天性低）、免疫功能抑制、先天性低TPA/G倒置倒置肝功能损伤、肝功能损伤、M蛋白血症。如慢性肝炎、肝硬化、蛋白血症。如慢性肝炎、肝硬化、肝癌、多发性骨髓瘤肝癌、多发性骨髓瘤山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义血清前白蛋白测定血清前白蛋白测定l免疫比浊法l标本中PAB与特异性抗体反应形成不溶性复合物，可在340nm测定该复合物的浊度，与同样处理的标准品比较，得出标本中PAB的含量。山东省千佛山医院检验科生化室系列讲
11、义临床意义临床意义l降低：营养不良、慢性感染、肿瘤、肝降低：营养不良、慢性感染、肿瘤、肝炎、肝硬化、肝癌，对早期肝炎、急性炎、肝硬化、肝癌，对早期肝炎、急性重肝具有特殊诊断价值重肝具有特殊诊断价值l升高：升高：Hodgkin病病山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义胆红素代谢检查胆红素代谢检查胆红素主要是在网状内皮系统中，由衰老胆红素主要是在网状内皮系统中，由衰老RBCRBC的血红蛋白分解后形成的血红蛋白分解后形成生成后在血液中与白蛋白聚合，此时尚未与生成后在血液中与白蛋白聚合，此时尚未与其它化合物结合，称为非结合胆红素（间接其它化合物结合，称为非结合胆红素（间接胆红素或游离胆红素）胆红素或游离
12、胆红素）非结合胆红素被转运到肝脏，经肝细胞摄取非结合胆红素被转运到肝脏，经肝细胞摄取后，通过肝脏的生物转化作用，与葡萄糖醛后，通过肝脏的生物转化作用，与葡萄糖醛酸结合后酸结合后 称为结合胆红素（直接胆红素）称为结合胆红素（直接胆红素）山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义胆红素代谢检查胆红素代谢检查结合胆红素由胆道排入肠腔，被细菌还原成结合胆红素由胆道排入肠腔，被细菌还原成尿胆原尿胆原尿胆原一部分被肠粘膜吸收进入体内被肝细尿胆原一部分被肠粘膜吸收进入体内被肝细胞摄取，其中大部分又转变成胆红素随胆汁胞摄取，其中大部分又转变成胆红素随胆汁排入肠腔，形成排入肠腔，形成“肝肠循环肝肠循环”残留肠腔的尿胆
13、原氧化后，以粪胆素排出残留肠腔的尿胆原氧化后，以粪胆素排出因此，当胆红素生成过多或肝细胞的摄取、因此，当胆红素生成过多或肝细胞的摄取、结合、转运、排泄等过程发生障碍，可导致结合、转运、排泄等过程发生障碍，可导致血中胆红素增高，形成黄疸。血中胆红素增高，形成黄疸。山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义总胆红素(T-BIL)l重氮盐法l总胆红素在强酸环境中，加入溶解剂，与重氮试剂反应，产生偶氮胆红素l胆红素+2P-苯磺基重氮1，5-萘二磺酸盐2-偶氮胆红素l生成的偶氮胆红素，在波长545nm处有一吸收峰，吸光度的变化与总胆红素含量成正比。山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义直接胆红素(D-BIL)l
14、重氮盐法l结合胆红素可直接与重氮试剂反应，产生偶氮胆红素l直接胆红素+2P-苯磺基重氮1，5-萘二磺酸盐偶氮胆红素l生成的偶氮胆红素，引起波长545nm处吸光度的上升，吸光度的变化与直接胆红素含量成正比。山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义临床意义 l增高见于肝脏疾病，如原发性胆汁性肝硬化、急性黄疸性肝炎、慢性活动性肝炎、病毒性肝炎、阻塞性黄疸、肝硬化等。肝外疾病如溶血性黄疸、新生儿黄疸、胆石症、胰头癌、输血错误等总胆红素也增高。山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义胆汁酸测定胆汁酸测定l酶循环法l胆汁酸被3-羟基类固醇脱氢酶及Thio-NAD特异性地氧化，生成3-酮类固醇及Thio-NADH，
15、3-酮类固醇在3-羟基类固醇脱氢酶及NADH存在下，生成胆汁酸和NAD，循环往复从而放大微量的胆汁酸量，测定生成的Thio-NADH的吸光度与标准比较，得出胆汁酸含量。山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义临床意义临床意义血清总胆汁酸升高血清总胆汁酸升高肝损害：肝炎、肝硬化、肝癌肝损害：肝炎、肝硬化、肝癌胆道阻塞：胆管梗阻胆道阻塞：胆管梗阻门脉分流门脉分流山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义血清酶学检查血清酶学检查肝脏是酶含量最丰富的器官，肝细胞损肝脏是酶含量最丰富的器官，肝细胞损伤时，许多酶如伤时，许多酶如ALT、AST、GGT、ALP释放入血，导致血浆酶水平升高释放入血，导致血浆酶水平升高1
16、.肝脏疾病时酶活力改变的机制肝脏疾病时酶活力改变的机制酶合成异常酶合成异常肝细胞释放增加肝细胞释放增加 2.分类分类山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义血清酶学检查血清酶学检查反映肝细胞病变和坏死的酶反映肝细胞病变和坏死的酶反映肝、胆淤滞的酶反映肝、胆淤滞的酶反映肝纤维化的酶反映肝纤维化的酶反映肝细胞合成功能的酶反映肝细胞合成功能的酶山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义肝细胞病变和坏死的酶肝细胞病变和坏死的酶l谷氨酸氨基转移酶（谷丙转氨酶，谷氨酸氨基转移酶（谷丙转氨酶，ALT）l连续监测法连续监测法 lALT催化催化L-丙氨酸的氨基转移，生成丙丙氨酸的氨基转移，生成丙酮酸。丙酮酸与酮酸。丙酮酸
17、与NADH在在LDH的催化下的催化下反应生成乳酸和反应生成乳酸和NAD+。NADH在在340nm处有特异吸收峰，其被氧化的速率与血处有特异吸收峰，其被氧化的速率与血清中清中ALT的活性成正比，在的活性成正比，在340nm处测处测定定NADH下降速率，即可测出下降速率，即可测出ALT活性。活性。山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义天门冬氨酸氨基转移酶（谷草转天门冬氨酸氨基转移酶（谷草转氨酶，氨酶，AST）l连续监测法lAST催化L-天冬氨酸的氨基转移与MDH催化的反应偶联，使NADH氧化生成NAD+。NADH在340nm处有特异吸收峰，其被氧化的速率与血清中AST的活性成正比，在340nm处测定
18、NADH下降速率，即可测出AST活性。山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义与赖氏法的比较l连续监测法多用于自动化生化分析仪，准确性好、精确性好l赖氏法多用于手工操作，实验条件要求不高，便于基层医疗单位开展，但重复性差，准确性差。山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义临床意义临床意义急性病毒肝炎急性病毒肝炎ALT：500-1000U/L ASTALT多见多见 一些药物或毒物所致升高：氯丙嗪、异烟肼、一些药物或毒物所致升高：氯丙嗪、异烟肼、奎宁和酒精、铅、汞、四氯化碳、有机磷中奎宁和酒精、铅、汞、四氯化碳、有机磷中毒毒山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义肝细胞合成酶肝细胞合成酶l胆碱酯酶（胆碱酯酶（
19、AChE)l实验方法：实验方法：l临床意义：肝脏合成临床意义：肝脏合成AChE,肝实质细胞肝实质细胞损害时，损害时，AChE活力降低活力降低山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义胆道梗阻的酶胆道梗阻的酶l碱性磷酸酶（碱性磷酸酶（ALP）的测定）的测定l连续监测法连续监测法 l无无色色的的对对-硝硝基基苯苯磷磷酸酸二二钠钠在在ALP作作用用下下，生生成成在在405nm处处有有特特异异吸吸收收峰峰的的淡淡黄黄色色对对-硝硝基基苯苯酚酚，通通过过测测定定在在405nm处处吸吸光光度的变化速率计算度的变化速率计算ALP活性。活性。山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义临床意义临床意义血清中的碱性磷酸酶主要
20、来自肝脏和骨骼血清中的碱性磷酸酶主要来自肝脏和骨骼肝胆系统疾病：阻塞性黄疸、急、慢性黄肝胆系统疾病：阻塞性黄疸、急、慢性黄疸肝疸肝 炎、肿瘤引起的胆汁淤积，可增高炎、肿瘤引起的胆汁淤积，可增高520倍倍黄疸的鉴别诊断：肝外胆道阻塞黄疸的鉴别诊断：肝外胆道阻塞+患者常升患者常升高高骨骼疾病：纤维性骨炎、佝偻病、骨软化骨骼疾病：纤维性骨炎、佝偻病、骨软化病、骨转移癌、骨折愈合期病、骨转移癌、骨折愈合期生理性升高：生长期的儿童和青少年生理性升高：生长期的儿童和青少年 山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义-谷氨酰转肽酶（谷氨酰转肽酶（GGT）的检测）的检测l原理：原理：GGT分布在胆管或胆道系统分布在
21、胆管或胆道系统l连续监测法连续监测法 lr-谷谷氨氨酰酰-3-羧羧基基-对对硝硝基基苯苯胺胺和和双双甘甘肽肽在在-GT作作用用下下，生生成成对对硝硝基基苯苯胺胺及及r-谷谷氨氨酰酰双双甘甘肽肽，所所释释放放出出的的对对硝硝基基苯苯胺胺与与-GT活活性性成成正正比比，通通过过在在405nm处处测测定定对对硝基苯胺的变化，可求出硝基苯胺的变化，可求出-GT活力。活力。山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义临床意义临床意义l胆道阻塞性疾病，升高明显，可达胆道阻塞性疾病，升高明显，可达530倍倍l急、慢性病毒性肝炎、肝硬化急、慢性病毒性肝炎、肝硬化l酒精性肝炎酒精性肝炎l其他：脂肪肝、胰腺炎、前列腺肿瘤
22、其他：脂肪肝、胰腺炎、前列腺肿瘤山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义其它酶类l l酶类肿瘤标志物检测酶类肿瘤标志物检测 -L-岩藻糖苷酶（岩藻糖苷酶（AFU）与原发性肝癌诊断）与原发性肝癌诊断标志（标志（81.2%），），AFP联合检测可提高肝癌联合检测可提高肝癌检出率检出率l l肝纤维化的酶学检查肝纤维化的酶学检查单氨氧化酶单氨氧化酶山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义思考题思考题1.肝损害蛋白检查的意义。2.血清酶学在肝胆疾病检查的意义。名词解释1.结合胆红素2.非结合胆红素山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义填空题1.正常成人血清总蛋白正常参考值为 ，白蛋白正常参考为 ，球蛋白正常参考为
23、 ，A/G正常参考为 。2.临床上多用 法测定总蛋白，法测定白蛋白。当血清总蛋白 g/L或球蛋白 g/L时，称为高蛋白血症或高球蛋白血症。3.血清蛋白电泳结果中，按泳动速度从正极起分为 、。4.当胆红素生成过多或肝细胞的摄取、结合、转运、排泄等过程发生障碍，可导致血中胆红素增高，从而发生 。山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义肾脏疾病的生物化学检测山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义肾脏功能l排泄水分、代谢产物、废物，保留有用物质l调节水分和渗透压l调节电解质及酸碱平衡l制造某些重要的生理活性物质山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义肾小球功能检查l肾小球滤过率（GFR）是反映肾小球滤过功能的客
24、观指标，用单位时间内两肾生成的超滤液量即原尿的生成量来表示l肾清除率是指双肾于单位时间（min）内，能将多少毫升血浆所含的某物质全部清除，结果以ml/min或L/24h表示山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义肾清除率山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义肾清除率可分别测定肾小球滤过率、肾血流量、肾肾清除率可分别测定肾小球滤过率、肾血流量、肾小管对各种物质的重吸收和分泌作用小管对各种物质的重吸收和分泌作用1.全部由肾小球滤出，肾小管不吸收、不分泌，如菊粉，可作为肾小球滤过率测定的理想物质，能完全反映肾小球滤过率2.由肾小球滤出，肾小管也排泌，如尿素、肌酐等，反映肾小球滤过率不如菊粉准确3.全部由肾
25、小球滤出，又被肾小管全部吸收，如葡萄糖，可作为肾小管最大吸收率的测定4.除肾小球滤过外，大部分通过肾小管分泌排出，如对氨马尿酸等，可作为肾血流量的测定山东省千佛山医院检验科生化室系列讲义1.内生肌酐清除率l肌酐为肌肉中磷酸肌酸的代谢产物，是反映肾小球的滤过功能的较好指标l原理原理血浆肌酐种类：内源性和外源性血浆肌酐种类：内源性和外源性血浆肌酐的代谢：大部分从肾小球滤过，不被肾血浆肌酐的代谢：大部分从肾小球滤过，不被肾小管重吸收，且肾小管的排泌量很少小管重吸收，且肾小管的排泌量很少条件：在严格控制饮食和肌肉活动相对稳定的情条件：在严格控制饮食和肌肉活动相对稳定的情况下，血浆肌酐的生成量和在尿中的
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