最新微生物代谢和生长PPT课件.ppt
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1、微生物代谢和生长微生物代谢和生长(1 1)琼脂)琼脂(2 2)先调)先调PHPH,后灭菌,后灭菌(3 3)选择选择 硝酸铵硝酸铵(4 4)芽孢)芽孢(5 5)将)将SP1SP1菌接种在含不同浓度氯苯的菌接种在含不同浓度氯苯的号培养液中培养,得到生长曲线(如图号培养液中培养,得到生长曲线(如图2 2)。)。从图从图2 2可知可知SP1SP1菌在菌在_培养条件培养条件下最早停止生长,其原因是下最早停止生长,其原因是_。(5 5)20mg/L20mg/L氯苯氯苯 碳源最早耗尽碳源最早耗尽微生物的代谢调节 酶合成的调节酶合成的调节组成酶:组成酶:诱导酶:诱导酶:微生物细胞内一直存在的酶,它们的合成只受
2、微生物细胞内一直存在的酶,它们的合成只受遗传物质的控制遗传物质的控制在环境中存在某种物质的情况下才能合成的酶在环境中存在某种物质的情况下才能合成的酶意义:意义:既保证了代谢的需要,又避免了细胞内物质和既保证了代谢的需要,又避免了细胞内物质和能量的浪费,增强了微生物对环境的适应能力能量的浪费,增强了微生物对环境的适应能力 酶活性的调节酶活性的调节 示例:谷氨酸棒状杆菌合成谷氨酸的过程示例:谷氨酸棒状杆菌合成谷氨酸的过程特点:快速、精细特点:快速、精细 通过改变已有酶的催化活性来调节代谢的速率通过改变已有酶的催化活性来调节代谢的速率谷氨酸棒状杆菌生产谷氨酸谷氨酸棒状杆菌生产谷氨酸黄色短杆菌合成赖氨
3、酸黄色短杆菌合成赖氨酸酶活性调节和酶合成调节的区别 a.a.从调节对象看:从调节对象看:b.b.从调节效果看:从调节效果看:c.c.从调节机制看:从调节机制看:酶合成的调节是通过酶量的变化控制代谢速率酶合成的调节是通过酶量的变化控制代谢速率而酶活性的调节是对已存在的酶活性进行控制,它不涉及而酶活性的调节是对已存在的酶活性进行控制,它不涉及酶量变化酶量变化酶活性调节直接而迅速酶活性调节直接而迅速酶合成调节间接而缓慢酶合成调节间接而缓慢酶合成调节是基因水平调节,它调节控制酶合成酶合成调节是基因水平调节,它调节控制酶合成酶活性调节是代谢水平调节,它调节酶活性。酶活性调节是代谢水平调节,它调节酶活性。
4、两种调节方式同时存在,两种调节方式同时存在,密切配合,高效、准确地密切配合,高效、准确地控制代谢的正常进行控制代谢的正常进行调节调节方式方式调节对象调节对象调节调节结果结果调节机制调节机制调节调节特点特点调节调节意义意义酶合成酶合成的调节的调节诱导酶诱导酶酶的种酶的种类和数类和数量量基因诱基因诱导物导物保证代保证代谢经济谢经济而高效而高效地进行地进行酶活性酶活性调节调节组成酶和组成酶和诱导酶诱导酶已有酶已有酶的活性的活性代谢产物代谢产物与酶可逆与酶可逆性结合性结合快速快速精细精细遗传遗传控制控制积累积累(09(09理综理综)2.)2.右图是某种微生物体内某一物质代谢右图是某种微生物体内某一物质
5、代谢过程的示意图。下列有关酶活性调节的叙述,错误过程的示意图。下列有关酶活性调节的叙述,错误的是的是A.A.丁物质既是酶丁物质既是酶催化生成的产物,又是酶催化生成的产物,又是酶的反的反馈抑制物馈抑制物B.B.戊物质通过与酶戊物质通过与酶结合导致酶结合导致酶结构变化而使其结构变化而使其活性下降活性下降C.C.当丁物质和戊物质中任意一种过量时,酶当丁物质和戊物质中任意一种过量时,酶的活的活性都将受到抑制性都将受到抑制D.D.若此代谢途径的终产物不断排出菌体外,则可消若此代谢途径的终产物不断排出菌体外,则可消除丙物质对酶除丙物质对酶的抑制作用的抑制作用答案:答案:C C已知物质是某微生物生长所必需的
6、,它的合成途径如下图已知物质是某微生物生长所必需的,它的合成途径如下图所示:野生型的在含所示:野生型的在含A A物质的培养基上就能正常生长。现发物质的培养基上就能正常生长。现发现有三种突变体(均只有某一基因发生突变),均不能在现有三种突变体(均只有某一基因发生突变),均不能在只含只含A A物质的培养基上正常生长。现设计一实验方案,区分物质的培养基上正常生长。现设计一实验方案,区分出三种突变体的突变基因,并预测实验结果。出三种突变体的突变基因,并预测实验结果。实验方案:实验方案:。预测结果:预测结果:如果如果 ,说明,说明A A基因突变。基因突变。如果如果 ,说明,说明B B基因突变。基因突变。
7、如果如果 ,说明,说明C C基因突变。基因突变。方案:将这三种突变体分别在只含方案:将这三种突变体分别在只含B B、只含、只含C C的培养基中培养,观察生长情况。的培养基中培养,观察生长情况。在只含在只含B B和只含和只含C C的培养基中能正常生长的培养基中能正常生长在只含在只含B B的培养基中不能生长,在只含的培养基中不能生长,在只含C C的的培养基中能生长培养基中能生长在只含在只含B B和只含和只含C C的培养基上都不能生长的培养基上都不能生长【解析】【解析】D D物质应是此微生物正常生命活动所必需的,物质应是此微生物正常生命活动所必需的,从培养基中获得从培养基中获得A A物质后,在野生型
8、微生物体内通过物质后,在野生型微生物体内通过一定的代谢途径,形成中间产物一定的代谢途径,形成中间产物B B、C C,最终得到,最终得到D D。而突变型由于基因突变,缺乏中间代谢的某种酶,而突变型由于基因突变,缺乏中间代谢的某种酶,此中间代谢的某一个环节不能正常进行,使反应不此中间代谢的某一个环节不能正常进行,使反应不能继续下去,得不到物质能继续下去,得不到物质D D,使野生型不能在此只含,使野生型不能在此只含A A的培养基上生活。根据此思路,设计以下方案。如的培养基上生活。根据此思路,设计以下方案。如若只能在含若只能在含C C的培养基上生长,在含的培养基上生长,在含A A、B B的培养基上的培
9、养基上均不能生长,说明均不能生长,说明A A到到C C或或B B到到C C反应受阻,缺乏反应受阻,缺乏B B酶酶(均只有某一基因发生突变),(均只有某一基因发生突变),B B基因突变;若在含基因突变;若在含A A、B B、C C三种物质的培养基上不能存活,说明三种物质的培养基上不能存活,说明C C到到D D的的反应受阻,缺乏反应受阻,缺乏C C酶,酶,C C基因突变基因突变 ;若在含;若在含A A的培养的培养基上不能生长,在含基上不能生长,在含B B、C C的培养基上均能生长,说的培养基上均能生长,说明明A A到到B B反应受阻,反应受阻,A A基因突变。基因突变。微生物群体微生物群体少量的少
10、量的恒定容积恒定容积定期定期细菌群体细菌群体调整或调整或适应适应快速分裂快速分裂动态平衡动态平衡最高峰最高峰超过超过活菌活菌调整期调整期对数期对数期稳定期稳定期衰亡期衰亡期典型的生长曲线典型的生长曲线(Growthcurve)延延滞滞期期对对数数期期稳定期稳定期衰亡期衰亡期时期的划分:按照生长速率常数(时期的划分:按照生长速率常数(growth race constant)不同)不同加速期减速期其它名称:迟滞期、其它名称:迟滞期、停滞期停滞期、适应期、适应期1.1.现象:现象:活菌数没增加,曲线平行于横轴。活菌数没增加,曲线平行于横轴。2.2.特点:生长速率特点:生长速率=0=0细胞形态变大或
11、增长细胞形态变大或增长细胞内细胞内RNARNA特别是特别是rRNArRNA含量增高含量增高合成代谢活跃(核糖体、酶类、合成代谢活跃(核糖体、酶类、ATPATP合成加快),易产生合成加快),易产生诱导酶诱导酶对外界不良条件敏感,(如氯化钠浓度、温度、抗生素等对外界不良条件敏感,(如氯化钠浓度、温度、抗生素等化学药物)化学药物)3.3.原因:适应新的环境条件,合成新的酶,积累必要的中间产原因:适应新的环境条件,合成新的酶,积累必要的中间产物物.调整期调整期菌种菌种 :繁殖速度较快繁殖速度较快(世代时间短世代时间短)的菌种的的菌种的调整期调整期一般较短;一般较短;接种物菌龄接种物菌龄 :用对数生长期
12、的菌种接种时,其用对数生长期的菌种接种时,其调整调整期期较短,甚至检查不到延迟期;较短,甚至检查不到延迟期;接种量:接种量:一般来说,一般来说,接种量增大可缩短甚至消除接种量增大可缩短甚至消除调调整期整期(发酵工业上一般采用发酵工业上一般采用1/101/10的接种量);的接种量);营养:营养:培养基成分培养基成分 在营养成分丰富的天然培养基上生长的调整期比在合在营养成分丰富的天然培养基上生长的调整期比在合成培养基上生长时短;成培养基上生长时短;接种后培养基成分有较大变化时,会使调整期加长,接种后培养基成分有较大变化时,会使调整期加长,所以发酵工业上尽量使发酵培养基的成分与种子培养基所以发酵工业
13、上尽量使发酵培养基的成分与种子培养基接近。接近。影响影响调整期调整期长短的因素:长短的因素:认识调整期的特点及形成原因对实践的指导意义:认识调整期的特点及形成原因对实践的指导意义:在工业上需设法尽量缩短调整期;采取的缩短在工业上需设法尽量缩短调整期;采取的缩短lag phase lag phase 的的措施措施有:有:增加接种量;增加接种量;(群体优势(群体优势-适应性增强)适应性增强)采用对数生长期的健壮菌种;采用对数生长期的健壮菌种;调整培养基的成分,在种子基中加入发酵培养调整培养基的成分,在种子基中加入发酵培养基的某些成分。基的某些成分。选用繁殖快的菌种选用繁殖快的菌种.对数期(对数期(
14、logarithmicphase)其他名称:指数期其他名称:指数期 现象:现象:细胞数目以几何级数增加,其对数与时间呈直线关系。细胞数目以几何级数增加,其对数与时间呈直线关系。特点:特点:生长速率最大,即代时最短生长速率最大,即代时最短菌体大小、形态、生理特征等比较一致菌体大小、形态、生理特征等比较一致代谢最旺盛代谢最旺盛细胞对理化因素较敏感细胞对理化因素较敏感影响因素:影响因素:菌种菌种代谢产物代谢产物营养物浓度营养物浓度 氧气氧气延长措施:延长措施:定时定量加入营养物质,同时排出代谢产物,定时定量加入营养物质,同时排出代谢产物,或使用连续培养。或使用连续培养。应用意义应用意义:由于此时期的
15、菌种比较健壮,增殖噬菌体的最适菌龄;由于此时期的菌种比较健壮,增殖噬菌体的最适菌龄;生产上用作接种的最佳菌龄;生产上用作接种的最佳菌龄;发酵工业上尽量延长该期,以达到较高的菌体密度发酵工业上尽量延长该期,以达到较高的菌体密度食品工业上尽量使有害微生物不能进入此期食品工业上尽量使有害微生物不能进入此期是生理代谢及是生理代谢及遗传研究或进行染色、形态观察等遗传研究或进行染色、形态观察等的良好的良好材料材料。.稳定期稳定期又称:又称:静止期静止期或最高生长期或最高生长期特点:特点:新增殖的细胞数与老细胞的死亡数几乎相等,微生物的新增殖的细胞数与老细胞的死亡数几乎相等,微生物的生长速率处于动态平衡,生
16、长速率处于动态平衡,培养物中的活细胞数目达到最高值培养物中的活细胞数目达到最高值。细胞分裂速度下降,细胞分裂速度下降,开始积累内含物开始积累内含物,产芽孢的细菌开始产芽产芽孢的细菌开始产芽孢。孢。此时期的微生物开始此时期的微生物开始合成次级代谢产物合成次级代谢产物,对于发酵生产来说,对于发酵生产来说,一般在稳定期的后期产物积累达到高峰一般在稳定期的后期产物积累达到高峰,是最佳的收获时期。,是最佳的收获时期。若若目标是菌体,则在稳定期初期就要及时收获菌体目标是菌体,则在稳定期初期就要及时收获菌体。产生原因:产生原因:营养物浓度的降低营养物浓度的降低 有害代谢废物的积累(酸、醇、毒素等)有害代谢废
17、物的积累(酸、醇、毒素等)物化条件(物化条件(pHpH、氧化还原势等)的改变、氧化还原势等)的改变;溶解氧供应不足溶解氧供应不足应用意义:应用意义:发酵生产形成的重要时期(抗生素、氨基酸等)发酵生产形成的重要时期(抗生素、氨基酸等),生产上应尽量延长此期,提高产量,措施如,生产上应尽量延长此期,提高产量,措施如下:下:补充营养物质(补料)补充营养物质(补料)调调pH pH 调整温度调整温度 .衰亡期(衰亡期(declinephase)特点:特点:细胞死亡数增加,死亡数大大超过新增殖的细胞数,群体细胞死亡数增加,死亡数大大超过新增殖的细胞数,群体中的活菌数目急剧下降,出现中的活菌数目急剧下降,出
18、现“负生长负生长”。出现多形态、畸形或衰退形,芽孢开始释放。出现多形态、畸形或衰退形,芽孢开始释放。因菌体本身产生的酶及代谢产物的作用,使菌体死亡。因菌体本身产生的酶及代谢产物的作用,使菌体死亡。衰亡期比其他各时期时间长,它的长短也与菌种和环境条衰亡期比其他各时期时间长,它的长短也与菌种和环境条件有关。件有关。产生原因:产生原因:生长条件的进一步恶化,使细胞内的分解代谢大大生长条件的进一步恶化,使细胞内的分解代谢大大超过合成代谢,继而导致菌体的死亡超过合成代谢,继而导致菌体的死亡调整期调整期 对数期对数期 稳定期稳定期 衰亡期衰亡期 代谢活跃,代谢活跃,V V增大,合成分裂所需增大,合成分裂所
19、需ATPATP、酶等、酶等 长短与菌种、培养条件有关长短与菌种、培养条件有关 快速分裂,呈等比数列递增快速分裂,呈等比数列递增特点:代谢旺盛,形态和生理特性稳定特点:代谢旺盛,形态和生理特性稳定 应用:作菌种缩短生产周期应用:作菌种缩短生产周期 数目最多数目最多 达达K K值值,种内斗争最剧烈种内斗争最剧烈 大量积累代谢产物,尤其是次级代谢产物,出现芽孢大量积累代谢产物,尤其是次级代谢产物,出现芽孢“连续培养连续培养”延长稳定期,提高产量,缩短生产周期延长稳定期,提高产量,缩短生产周期 死亡速率死亡速率 繁殖速率繁殖速率 活菌数目急剧下降活菌数目急剧下降 畸形分化以及解体并释放代谢产物畸形分化
20、以及解体并释放代谢产物 当细菌在含有葡萄糖和乳糖的培养基上生长时,细菌首先利当细菌在含有葡萄糖和乳糖的培养基上生长时,细菌首先利用葡萄糖,葡萄糖用完以后才开始利用乳糖。从生长曲线看,用葡萄糖,葡萄糖用完以后才开始利用乳糖。从生长曲线看,细菌生长经过一个上升期以后,出现一个停顿期,此时曲线细菌生长经过一个上升期以后,出现一个停顿期,此时曲线呈现平坦、然后又出现第二个上升期。这就是说,细菌在利呈现平坦、然后又出现第二个上升期。这就是说,细菌在利用乳糖之前,先要有一个用乳糖之前,先要有一个“适应过程适应过程”。下列能正确表示病毒在寄主内的繁殖曲线的是下列能正确表示病毒在寄主内的繁殖曲线的是以一定速度
21、以一定速度同样速度同样速度营养物质营养物质有害代谢产物有害代谢产物培养周期培养周期设备利用率设备利用率生长曲线的实践意义:生长曲线的实践意义:生产上常用对数期的细菌作为菌种,以生产上常用对数期的细菌作为菌种,以缩短生产周期。缩短生产周期。用连续培养法来有效延长稳定期、提高用连续培养法来有效延长稳定期、提高代谢产物的产量。代谢产物的产量。u这种方法已广泛应这种方法已广泛应用于酒精、丙酮、用于酒精、丙酮、丁醇等的生产中,丁醇等的生产中,优点:可缩短培养优点:可缩短培养周期,提高了设备周期,提高了设备的利用率,并且便的利用率,并且便于自动化管理。于自动化管理。Chemostat used for c
22、ontinuous cultures.Rate of growth can be controlled either by controlling the rate at which new medium enters the growth chamber or by limiting a required growth factor in the medium.Chemostat连续培养是通过认识稳定期到来的原因,并连续培养是通过认识稳定期到来的原因,并采取相应的有效措施而实施的。一方面以采取相应的有效措施而实施的。一方面以一定速度连续流进新鲜培养基,并立即搅一定速度连续流进新鲜培养基,并立
23、即搅拌均匀;另一方面,以同样的流速不断流拌均匀;另一方面,以同样的流速不断流出培养基,这样,培养基就达到动态平衡,出培养基,这样,培养基就达到动态平衡,其中的微生物可长期保持在指数期的平衡其中的微生物可长期保持在指数期的平衡生长状态和稳定的生长速率上。连续培养生长状态和稳定的生长速率上。连续培养应用于生产实践上,就是连续发酵。有许应用于生产实践上,就是连续发酵。有许多优点多优点高效,它简化了装料、灭菌、出高效,它简化了装料、灭菌、出料、清洗发酵罐等许多单元操作,减少了料、清洗发酵罐等许多单元操作,减少了非生产时间和提高了设备利用率。非生产时间和提高了设备利用率。缩短缩短调整期,使培养周期缩短。
24、调整期,使培养周期缩短。在在细细菌菌的的连连续续培培养养过过程程中中,要要以以一一定定速速度度不不断断添添加加新新的的培培养养基基,同同时时以以同同样样速速度度放放出出老老的的培培养养基基。右右下下图图表表示示培培养养基基的的稀稀释释率率(培培养养基基的的更更新新速速率率)与与培培养养容容器器中中营营养养物物质质浓浓度度、细细菌菌代代时时(细细菌菌数数目目增增加加一一倍倍所所需需的的时时间间)、细细菌菌密密谋谋的的关关系系。下下列列相相关关叙述不正确的是叙述不正确的是A在在稀稀释释率率很很低低的的情情况况下下,稀稀释释率率的的增增加加会会导导致致细细菌菌密密度增加度增加B稀稀释释率率从从a到到
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