明胶检验方法.ppt

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1、明胶检验方法明胶检验方法胶冻强度 原理：在严格规定的条件下，直径为12.7mm的圆柱，压入6.67%明胶胶冻表面以下4mm时，所施加的力代表胶冻强度，以Bloomg为单位。仪器和设备：冻力仪 冻力瓶：容量150ml，内径532mm，高度85mm。恒温槽：可控制水浴温度100.1（带制冷机）。水浴锅：可调节到651。测定步骤：称取胶样x克：将x克样品直接称于冻力瓶中，加蒸馏水至120克，盖上瓶塞，胶样吸水膨胀23小时，然后在651水浴槽中15分钟，水浴溶解成均匀胶液。取出于室温冷却至胶液温度约25，然后置于100.1低温槽内冷却1618小时。预先按冻力仪操作规程校正冻力仪。将冻胶瓶从恒温低温槽中

2、取出，迅速放在冻力仪圆台上进行测定。结果表示：直接从冻力仪中读出试验的凝冻强度，单位Bloomg表示。勃氏粘度(6.67%)原理：在60温度下，测定6.67%明胶溶液流过标准毛细管所经过的时间。仪器：粘度计 恒温槽 水浴锅：可调节到651 温度计：准确到0.1 三角烧瓶：250ml 秒表测定步骤：称取胶样x克 将x克样品直接称于三角烧瓶中，加蒸馏水至120克,加上瓶塞,胶样吸水膨胀23小时,将250mL三角烧瓶放在651水浴锅中溶解30分钟，并溶解成均匀溶液，待用。开启恒温槽，使粘度计夹套的温度保持在600.1。把胶液注入C型管上标线2cm处，将C管置于60恒温槽内，当胶液温度稳定在600.1

3、时，将胶液水平调节到上刻线，按下秒表，当胶液水平达到下刻线时，停下秒表，记下秒数。结果表示：粘度（6.67%）=秒数C型管常数1.008（mPas）粘度下降(6.67%)原理：测定6.67%粘度的胶液在37培养箱内，培养24小时后粘度的下降。仪器和设备：粘度计 恒温槽 秒表 三角烧瓶 温度计：准确至0.1 水浴锅 培养箱：可控制到371 测定步骤 将测定6.67%粘度的胶液在37培养箱内，培养24小时后取出，用C管按测定粘度的方法再测其粘度。结果表示：水分原理：取大约5克明胶，在105烘箱烘至恒重，根据质量的减少计算明胶中含水量。仪器和设备：平底铝制或不锈钢小盒：直径70mm75mm，高15m

4、m，质量小于20g；烘箱：可控制温度（1052）；分析天平：感量1mg；测定步骤：a）在已知恒重的平底铝制或不锈钢小盒中称取50.5克样，准确至0.001g；b）将小盒移至烘箱中，在（1052）下烘干。在烘箱中将小盒盖严，取出置于干燥器中，冷却至室温，在分析天平上称量；c）将小盒再移至烘箱中烘30min，重复b）操作。如此反复数次，直到两次质量相差小于3mg。结果计算：胶样含水量X1()按式(1)计算。m-m2m1空盒的质量，gX1()=100%m2空盒加烘干后胶样的总质量，gm-m1m空盒加原胶样总质量，g 允许误差：两次平行测定值相对误差应不超过0.4。灰分原理：明胶在550高温炉中灼烧，

5、留下白色或淡黄色灰分。称重，便可计算出灰分。仪器：高温炉；瓷坩埚；分析天平（精确到1mg）；保干器。测定步骤：a)预先将坩埚灼烧至恒重。b)称取胶样1g(以12水分计)，准确至1mg，置于坩埚中。c)将坩埚置于弱火上焙灼，直至有机物完全烧去。d)将坩埚置于550高温炉中灼烧，使黑色炭质氧化至坩埚中留下白色或淡黄色灰分为止。e)将坩埚放在保干器中冷却至室温,然后称其质量。f)重复d）和e）直至二次重量相差小于2mg为恒重。结果计算：灰分百分含量X3（%）按下式计算：G2-G1 G胶样加坩埚重，g X3（%）=100%G1坩埚重，g G-G1G2灼烧后坩埚与残渣总重，g允许误差：二次平行测定值绝对

6、误差不超过0.2。透明度原理：测5%的明胶溶液在40时在特制的玻璃管中的透明度程度。仪器和设备：透明度测管测定步骤：称取30克明胶样品，放入500mL的烧杯中，加蒸馏水570g，在室温下膨胀2小时。将烧杯置于60水浴中溶解均匀。沿透明度筒壁小心地倒入40以上的明胶溶液，直到从筒口看不清筒下的文字为止，然后慢慢地通过侧管放出胶液，同时观察文字，在能够看清胶液下面的文字时，停止放出胶液。结果表示：按筒壁刻度读出筒内留下胶液高度的毫米数就是该胶的透明度。透过率原理：在45温度下，用分光光度法来测定6.67%明胶溶液在450nm和620nm的 透过率。仪器：分光光度计测定步骤：a)配制6.67%明胶溶

7、液，温度冷却至48。b)将胶液倒入10mm比色皿，用蒸馏水作基准。c)将分光光度计波长调节到波长450nm。d)在45温度下，测定透过率。e)将波长620nm，立即测定透过率。结果表示：直接用二个波长的百分透过率来表示。允许误差：两次平行测定值绝对误差不超过2%。二氧化硫原理：将明胶中的亚硫酸盐转变成硫酸，用碱滴定，通过所消耗的碱量计算出二氧化硫含量。试剂：硫酸：分析纯，14；过氧化氢：30，分析纯，19；甲基红亚甲基蓝混合指示剂：0.5g甲基红和0.33g亚基蓝溶于200ml乙醇中。仪器：二氧化硫测定装置（附后）。测定步骤：在500ml烧瓶内放入75ml蒸馏水和20.0g胶溶胀后加入25ml

8、(14)的硫酸溶液，使烧瓶与冷凝管连接，另外在接受器内放入20ml(19)的过氧化氢，并中和至指示剂终点(在过氧化氢内加入2滴甲基红亚甲基蓝指示剂，颜色即呈浅紫色，用氢氧化钠中和到终点时，颜色呈草绿色)。将冷凝管用接管导入过氧化氢底部，加热煮沸三角烧瓶中的蒸馏水，将蒸气通入烧瓶的底部,收集80ml馏出液,包括20ml过氧化氢,接受器内溶液总体积为100ml,补加甲基红亚甲基蓝指示剂1滴，用氢氧化钠标准溶液滴定至颜色呈草绿色为终点。图2二氧化硫测定装置1-24#标准磨塞接管:2-1000ml24#标准磨口三角烧瓶(8009/1000/24):3-可调式控温电阻炉;4-乳胶管;5-24#标准磨塞接

9、管;6-500ml 24#标准磨口短颈平底烧瓶(8007/500/24);7-24#标准磨口平行三通连接管(U型连接管)(8053/243);8-24#标准磨口回液管(氮球)(8057/242);9-400mm 24#标准磨口直形冷凝管(8031/400/242);10-24#标准磨口蒸馏接受管(105)(8086/24);11-冷凝液接受瓶;12-冷水浴明胶二氧化硫含量(X3)按下式计算：M(V-V1)0.0641/2X3=106G式中：X3二氧化硫含量，mg/kg；M标准氢氧化钠溶液的摩尔浓度，mol/L；V消耗标准氢氧化钠溶液的体积，ml；V1空白消耗标准氢氧化钠溶液的体积，ml；0.0

10、64二氧化硫的毫摩值，即毫摩质量mg/mol。G称取样品重量，g。允许误差：二次平行测定值绝对误差不超过10mg/kg。pH值原理：在35，用pH仪测定1明胶溶液的pH值；仪器和试剂：pH仪：0.1刻度；磷酸二氢钾：pH6.0。测定步骤：用pH6.0的磷酸二氢钾溶液校正pH仪；配制1胶液，在35温度下，用pH仪测定胶液的pH值。结果表示：直接从pH仪上读出pH值。允许误差：两次测定允许误差为0.1pH。等电点原理：通过阳、阴离子交换树脂，将胶液去离子后，测定胶液的pH值。仪器：pH仪 恒温水浴锅试剂：再生阳离子732：用7%的盐酸溶液浸6090分钟，然后用纯水洗至pH45，备用。再生阴离子71

11、7：用4%氢氧化钠溶液浸120分钟，然后用纯水洗至pH89，备用。测定步骤：精确称取胶样0.50g，放有100mL纯水的250mL三角烧瓶中，在室温膨胀23小时，然后在60水浴锅中溶解。待胶液冷却至32左右时，称取阳、阴离子各3.0g，置于胶 液中，将三角烧瓶置于磁力搅拌器平台上，于302水浴中自动搅拌1小时。倾出胶 液，用pH仪测定pH值（要求胶液的电导率小于25us/mm）。结果表示：pH仪测定的pH值为胶的等电点。允许误差：两次测定允许误差为0.1pH。水不溶物原理：用玻璃坩埚过滤胶液而得出不溶物的量。仪器：600ml璃烧烧杯；3号砂芯玻璃坩埚。测定步骤：a)将玻璃坩埚在105110烘干

12、，称重(W1)。b)称取（101）g胶样(W)，准确至0.1g，倒入烧杯中，加蒸馏水膨胀，加热熔解成500g胶液；c)将胶液用抽滤法通过玻璃坩埚。d)用热水洗坩埚上残渣3次。e)将坩埚置于105110烘箱里烘干。f)从烘箱中取出坩埚，置于保干器中冷地至室温。g)取出坩埚称重。h)重复e)g)操作，直至恒重(W2)。结果计算：W2-W1 W1坩埚质量，g x=100%W2坩埚与残渣重量，g W W胶样质量，g 允许误差：两次平行测定值相对误差不超过1。铬的测定原理：用二苯碳铣二肼(二苯胺基脲)比色法，可使微量铬在540nm波长处呈现明显 的吸光度差别。仪器：分光光度计;马弗炉;试剂：a)、0.5

13、%高锰酸钾溶液：称取0.5g高锰酸钾(分析纯)，溶解并稀释至100ml，贮存于棕色瓶中；b)、10%尿素溶液：称取10g尿素(CO(NH2)2，分析纯)，溶解并稀释至100ml，贮存于棕色瓶中，置于暗冷处；c)、10%亚硝酸钠溶液：称取10g亚硝酸钠，溶解并稀释至100ml，贮存于棕色瓶中，置于暗冷处，或随用随配；d)、二苯碳酰二肼丙酮溶液：称取0.125g二苯碳酰二肼CO(NHNHC6H5)2分析纯，溶于由25ml丙酮和25ml水配成的混合液中，随用随配，放置于暗处；e)、0.5%焦磷酸钠溶液：称取0.5g焦磷酸钠(分析纯)，溶解并稀释至100ml，贮存于试剂瓶中；f)、铬标准溶液(0.02

14、mg/ml)：准确称取0.0566g重铬酸钾(优级纯，在玛瑙研钵中研细，并在105110干燥3h4h后，置于保干器中冷却)，置于小烧杯中，用水溶解，移入1000ml容量瓶中，加水至刻度；g)、1mol/L硫酸溶液：量取28ml硫酸(分析纯)，缓缓加入盛有一定量纯水的500ml容量瓶中，再加纯水至刻度；测定步骤：a)、绘制标准工作曲线：吸取铬标准溶液0,0.20,0.40,0.60,1.00,1.60,2.00,2.60ml，分别相当于溶液含铬0,4,8,12,20,32,40,52g。置于烧杯中，分别加入1mol/L硫酸溶液10ml及纯水10ml，加热煮沸，滴加0.5%高锰酸钾至溶液不褪色，冷

15、却，移入50ml容量瓶中，加入10%尿素溶液10ml，在剧烈振摇下滴加10%亚硝酸钠溶液至溶液褪色。加入0.5%焦磷酸钠溶液2.0ml，二苯碳酰二肼丙酮溶液0.5ml。补足纯水至刻度，摇匀，放置30min后于波长540nm处测定吸光度值，以吸光度值为横坐标，铬含量为纵坐标，在坐标纸上绘制出标准工作曲线。b)、样品预处理及测定：准确称取明胶样品(G)3.000g，于坩埚中，缓慢升温，使之炭化，冷却，加浓硝酸数滴，慢慢加热，气体停止逸出时移入马弗炉中，在600下加热至黑色颗粒消失(2h)，取出。待冷却后加1mol/L硫酸溶液10ml及纯水20ml使残渣溶解，在水浴上加热5min。滴加0.5%高锰酸

16、钾溶液煮沸，溶液紫红色消失时再滴加0.5%高锰酸钾溶液煮沸，如此反复直至紫红色不褪为止，冷却，加10%尿素溶液10ml，在剧烈振摇下滴加10%亚硝酸钠溶液，直至过量的高锰酸钾完全消除，溶液呈无色，如二氧化锰明显存在则过滤。把溶液移入50ml容量瓶中，加入0.5%焦磷酸钠溶液2.0ml，二苯碳酰二肼丙酮溶液0.5ml。补足纯水至刻度，摇匀，放置30min。取上述溶液，在540nm波长处测定吸光度值，即可在ccr-D540标准工作曲线上查到该称量明胶样品总的铬含量(G1)。G1 计算结果：明胶铬含量（mg/kg）=G样品的重量，g GG1在ccr-D540标准工作曲线上查到的铬含量g重金属（以铅计

17、）原理：在醋酸盐缓冲液(pH值3.5)中，重金属离子与硫代乙酰胺试液作用显色生成有色化合物，其颜色的深浅与重金属离子浓度成正比，用比色法测定。试剂和试液：盐酸（）；硝酸（）；醋酸盐缓冲液（pH值3.5）：取醋酸铵25g，加水25ml溶解后，加7mol/L盐酸38ml，用2mol/L盐酸溶液或5mol/L氨溶液准确调节pH值至3.5（电位法指示），用稀释至100ml，即得；硫代乙酰胺试液：取硫代乙酰胺4g，加水使溶解成100ml，置冰箱中保存。临用前取混合液由1mol/L氢氧化钠溶液15ml、水5.0ml及甘油20ml组成5.0ml，加上述硫代乙酰胺溶液1.0ml，置水浴上加热20秒钟，冷却，立

18、即使用；硝酸铅（），级；标准铅溶液：精密量取硝酸铅贮备液精密称取在105干燥至恒重的硝酸铅0.1598g(AR)于烧杯，加含有硝酸5mL与蒸馏水50mL，溶解后移入1000mL容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，1mL相当于0.1mg的铅10mL于100mL容量瓶中，加蒸馏水稀释，使全量成100mL。每1ml相当于10g的铅。测定步骤a)、取灰分测定中1克明胶全部灰分，加盐酸2ml与硝酸0.5ml，置于水浴上蒸干，加5ml蒸馏水继续蒸干，加醋酸盐缓冲液（pH值3.5）5ml和蒸馏水20ml，温热数分钟，加蒸馏水适量使成50ml；b)、除另有规定外，取25ml纳氏比色管两支，甲管中加标准铅溶液一定量与

19、醋酸盐缓冲液（pH值3.5）2ml后，加水稀释成25ml，乙管中加入上述方法制成的供试液25ml；若供试液带颜色，可在甲管中滴加少量的稀焦糖溶液或其他无干扰的有色溶液，使之与乙管一致；再在甲乙两管中分别加硫代乙酰胺试液各2ml，摇匀，放置2分钟，同置白纸上，自上向下透视，乙管中显示的颜色与甲管比较，不得更深。c)、如在甲管中滴加稀焦糖溶液仍不能使颜色一致时，可取二倍量的明胶样品，按“a)”加水使成30ml供试液，将试液分成甲乙两等份，乙管中加水稀释成25ml；甲管中加入硫代乙酰胺试液2ml，摇匀，放置2分钟，经滤膜（孔径3m）滤过，然后甲管中加入标准铅溶液一定量，加水使成25ml；再分别在乙管

20、中加硫代乙酰胺试液2ml，甲管中加水2ml，照上述方法比较，即得。d)、供试品如含高铁盐影响重金属检查时，可取该明胶样品规定方法制成的供试溶液，加抗坏血酸0.51.0g，并在对照液中加入相同量的抗坏血酸，再照上述方法检查。e)、配制供试品溶液时，如使用的盐酸超过1.0ml(或与盐酸1.0ml相当的稀盐酸)，氨试液超过2ml，或加入其他试剂进行处理者，除另有规定外，对照液中应取同样同量的试剂置瓷皿中蒸干后，加醋酸盐缓冲液（pH值3.5）2ml与水15ml，微热溶解后，移置钠氏比色管中，加标准铅溶液一定量，再用水稀释成25ml。砷的测定砷的测定原理：溴化汞试纸与砷接触生成砷斑，随砷量多少而有深浅不

21、同的颜色。仪器装置：（见下图）B为橡皮塞，中有一孔。C为全长180mm，上粗下细的玻璃管，自管口D向下至140mm，一般的管内径为6.5mm，自此以下渐狭细。末端内径约1mm3mm，距末端约10mm处管壁有一小孔（孔径2mm）。狭细部分紧密插入橡皮塞B中，使下部伸出小孔恰在塞下面。上面较粗部分装入乙酸铅棉花，长50mm60mm，上端距管口至少30mm。C管顶端D为粘固的有机玻璃平板两块。使用时将有机玻璃板E置于C管顶端D上，使两块有机玻璃板圆孔相互吻合，中间夹一溴化汞试纸，用橡皮筋或其他适宜的方法将E板与D板固定。试剂与溶液：a)盐酸（GB622）；b)碘化钾(GB1272)：15%溶液；c)

22、氯化亚锡（GB638）：40%盐酸溶液；d)无砷金属锌（GB2304）；e)三氧化二砷（GB673）：优级纯；f)乙醇溴化汞试液：取溴化汞2.5克，加乙醇50ml，微热溶解，置玻璃塞瓶内，暗处保存；g)溴化汞试纸：将滤纸条浸入乙醇溴化汞试液内，1小时后取出滤纸，放在表面皿上，在暗处干燥即得。该纸应避光保存；h)乙酸铅试液：取乙酸铅10克，加新煮沸过的冷蒸馏水溶解后，滴加醋酸使溶液澄清，再加新煮沸过的冷蒸馏水使成100ml，即得；i)乙酸铅棉花：取脱脂棉，浸入乙酸铅试液与水的等容混合液中湿透后，挤压除去过多的溶液，并使疏松，在100以下干燥后，置于玻璃塞瓶中干燥保存；j)标准砷溶液：精密称取在1

23、05干燥至恒重的三氧化二砷0.132g，置于1000ml容量瓶中，加氢氧化钠溶液（1+5）5ml，溶解后，用适量的10%稀硫酸中和，再加稀硫酸10ml及水稀释至刻度，摇匀，即为贮备液。精密量取贮备液10ml，置于1000ml容量瓶中，加稀硫酸10ml，用水稀释至刻度，摇匀。1ml1砷。本标准砷溶液需随用随配；k)标准砷班制备：精密量取标准砷溶液0.8ml，置于砷测定器A瓶中，加HCl5ml和21ml蒸馏水，再加碘化钾5ml，酸性氯化亚锡5滴，在室温放置10分钟后，加锌粒1.5g，迅速装妥测定管，保持反应温度在2540之间。1小时后，取出溴化汞试纸，即得。测定步骤：称取胶样1.5克，加淀粉0.7

24、5g与氢氧化钙1.5g，加少量水搅拌均匀干燥后，先用小火灼烧使炭化，再在550高温炉中灼烧成灰白色，冷却，加盐酸10ml和20ml蒸馏水溶解。取上述试液20ml，置于砷测定器A瓶中，加水8ml（另取一砷测定器做空白），加碘化钾试液5ml与酸性氯化亚锡试液5滴，在室温中放置10分钟后，加锌粒1.5g，迅速装妥测定管，保持反应温度在2540之间，1小时后取出溴化汞试纸，将生成的砷班与用标准砷溶液0.8ml制成的标准砷班比较，如颜色不深于标准砷班，即为胶样中的含砷量未超过0.8mg/kg。细菌总数1.目的：确定细菌总数的存在。2.样品准备：以无菌操作称取胶样25克于灭菌的锥形瓶中，加灭菌水225mL

25、。室温膨胀2小时，置4555水浴中溶解。3.步骤：用无菌吸管转移1ml混合均匀的明胶溶液于灭菌器的培养皿内，即刻在每个培养皿内加1520ml营养琼脂培养基（这培养基预熔化并冷却至45）。于37恒温箱中培养48小时。取出培养皿计算每个培养皿的菌落数。4.营养琼脂配制：称取34克营养琼脂加1000ml蒸馏水，12120分钟灭菌。大肠杆菌1、测定步骤（25g中）：称取样25克,接种于225mlBL（胆盐乳糖）增菌液内，室温膨胀12小时，置于4555的水浴中溶解后，置37恒温箱内培养48小时进行增菌。按16.1.1.1步骤检测。如果有产气、产酸现象，则按16.1.2步骤进行检验。将上述增菌液接种于EM

26、B（伊红美蓝）或Mac（麦康凯）琼脂平板上，置37恒温箱内培养24小时，检查有无疑似大肠杆菌菌落。结果表示：大肠杆菌在EMB平板上的典型菌落呈紫黑色、圆形、边缘整齐，表面光滑湿润，常有金属光泽。大肠杆菌在Mac平板上的典型菌落呈鲜艳的桃红、粉红色。如果明胶检验出类似以上现象，则判断成品检出大肠杆菌。2、测定步骤（10g中）称取样10克,接种于90mlBL（胆盐乳糖）增菌液内，室温膨胀12小时，置于4555的水浴中溶解后，置37恒温箱内培养48小时。按下面步骤检测。将上述增菌液接种于EMB（伊红美蓝）或Mac（麦康凯）琼脂平板上，置37恒温箱内培养24小时，检查有无疑似大肠杆菌菌落。结果表示：大

27、肠杆菌在EMB平板上的典型菌落呈紫黑色、圆形、边缘整齐，表面光滑湿润，常有金属光泽。大肠杆菌在Mac平板上的典型菌落呈鲜艳的桃红、粉红色。如果明胶检验出类似以上现象，该明胶检出大肠杆菌。3、培养基配制：按培养基说明书配制。沙门氏菌目的：确定沙门氏菌的存在。测定步骤：称取25克胶样接种于225ml营养肉汤增菌液内，室温膨胀12小时后，置4555水浴中溶解，置于37恒温培养箱内培养24小时。用无菌吸管吸取1ml上述培养液，加入试管内，试管内盛有10ml四硫磺酸钠煌绿增菌液（TTB）和0.1mlI2。置37恒温培养箱培养24小时。用接种环沾取上述增菌液于DHL琼脂平板上划线，置于361恒温培养箱培养24小时。取出培养皿观察菌落特征。如菌落特征呈粉红色，该明胶检出沙门氏菌。培养基配制：按培养基说明书配制。霉菌和酵母菌样品准备 称取25克明胶样品于已灭菌的250mL的三角烧瓶中，加225mL生理盐水；在室温膨胀12小时后，置于4555水浴中溶解。测定步骤 用无菌吸管转移1ml混合均匀的明胶溶液于已灭菌的培养皿内，迅速在每个培养 皿内加虎红琼脂15mL混匀（这培养基预熔化并冷却至45）；置培养皿于2628恒温培养箱内培养72小时；取出培养皿观察培养皿霉菌的生长情况。培养基配制：按培养基说明书配制。