生殖器疱疹和尖锐湿疣的检测技术优秀PPT.pptx
《生殖器疱疹和尖锐湿疣的检测技术优秀PPT.pptx》由会员分享,可在线阅读,更多相关《生殖器疱疹和尖锐湿疣的检测技术优秀PPT.pptx(52页珍藏版)》请在淘文阁 - 分享文档赚钱的网站上搜索。
1、一、生殖器疱疹一、生殖器疱疹朱参胜朱参胜 主任技师主任技师陕西省皮肤性病防治所陕西省皮肤性病防治所陕西省性病中心试验室陕西省性病中心试验室2022/11/4单纯疱疹病毒(HSV)引起单纯疱疹病毒(HSV),大小:150-200nm;DNA病毒;20面核衣壳;胞膜;衣壳蛋白感染生殖器、肛门复发,无彻底治愈的方法具有嗜感觉神经节,形成潜藏感染状态检测方法:细胞培育、核酸检测、干脆免疫荧光、型特异性血清型抗体检测法2022/11/42022/11/4胞膜糖蛋白:胞膜糖蛋白:HSV有10-11种特异性糖蛋白抗原是细胞和体液免疫的主要靶标也是预防和治疗HSV感染的亚单位疫苗或DNA疫苗的候选基因gB,g
2、C,gD,gE,gF,gG,gH,gI,gJ,gL,gM其中gG是型特异性糖蛋白,具有型特异性抗原确定簇,诱导产生特异性抗体HSV抗原型:HSV1和HSV22022/11/42022/11/42022/11/4HSV-2HSV-2引起的生殖器和口腔疱疹引起的生殖器和口腔疱疹2013.8陕西省皮肤性病防治所 朱参胜2022/11/42022/11/4HSV-1和HSV-2同源性高达50感染方式与临床表现不同 HSV-1:主要上半身皮肤和粘膜(口唇、咽、眼等)疱疹,严峻者疱疹性脑炎,STI达10-40%;HSV-2:主要生殖器感染(80),偶可发生口腔及其四周感染。HSV-1复发少,HSV-2复发
3、高HSVHSV感染的临床表现感染的临床表现一、疱疹:一、疱疹:10-20%10-20%1.1.初发疱疹:初发疱疹:原发原发 :无病史且:无病史且HSV1/2HSV1/2抗体阴性抗体阴性 非原发非原发 :一种抗体阳性,而引起疱疹病:一种抗体阳性,而引起疱疹病毒型抗体阴性。毒型抗体阴性。原发与非原发临床不能区分,必需试验原发与非原发临床不能区分,必需试验室鉴别。室鉴别。第一次症状(复发):血清学阳性但以第一次症状(复发):血清学阳性但以前未出现疱疹前未出现疱疹 2.2.复发疱疹:有典型病史,复发疱疹:有典型病史,HSV2HSV2较较1 1复发复发率高,男比女高率高,男比女高二、潜藏感染:二、潜藏感
4、染:80-9080-90HSVHSV感染感染2013.8HSV传播途经来自无症状的排毒者(最常见)70HSV2感染来自性伴无症状排毒期。通常有症状期性活动较少。多数病例否认与感染者接触的病史。与传染性溃疡接触(排毒达高峰,传染性最强)母婴传播:分3个阶段子宫内:经胎盘或宫颈上行感染,导致胎儿早产、流产、畸形、死亡。围产期:占85,经产道40-60机会被感染诞生后:接触外部HSV传染源,如母亲口腔感染等。2013.8HSV感染后潜藏活动导致长期持续感染新生儿疱疹发病率和死亡率严峻HIV感染协同因素80-90HSV感染为潜藏感染2013.8基本原理:基本原理:HSVHSV在细胞内寄生在细胞内寄生体
5、外细胞培育体外细胞培育特征细胞变更视察。特征细胞变更视察。标本采集:标本采集:疱液:抽取或棉签吸取后洗脱。疱液:抽取或棉签吸取后洗脱。溃疡组织液:干拭子去除污物,棉签吸取后洗脱。溃疡组织液:干拭子去除污物,棉签吸取后洗脱。子宫颈分泌物:拭去黏液后,用另一棉拭子插入子宫颈,捻转取样。子宫颈分泌物:拭去黏液后,用另一棉拭子插入子宫颈,捻转取样。仪器设备:仪器设备:CO2CO2培育箱,细胞(培育箱,细胞(HelaHela细胞),细胞),RPMI1640RPMI1640,小牛血清等。,小牛血清等。(一)细胞培育法(一)细胞培育法2013.8陕西省皮肤性病防治所 朱参胜操作步骤:操作步骤:单层细胞制备:
6、单层细胞制备:2424孔板培育,长成单层细胞备用(常用细孔板培育,长成单层细胞备用(常用细胞株为胞株为Vero,Hela,BHK)Vero,Hela,BHK)标本接种:接种标本接种:接种0.2ml0.2ml,培育,培育3737日日CPE(cytopathic effect)CPE(cytopathic effect)视察:接种后,每日视察视察:接种后,每日视察病毒传代:至少病毒传代:至少50%50%以上细胞出现以上细胞出现CPECPE后,收集培育物,再后,收集培育物,再次接种至簇新细胞中。次接种至簇新细胞中。鉴定和分型:鉴定和分型:50%50%以上细胞出现以上细胞出现CPECPE后,收集感染细
7、胞和培后,收集感染细胞和培育物,离心后,沉淀用免疫荧光或酶免试验鉴定。育物,离心后,沉淀用免疫荧光或酶免试验鉴定。2013.8陕西省皮肤性病防治所 朱参胜结果判读:结果判读:视察视察CPE:CPE:连续连续7 7日视察,细胞一般在日视察,细胞一般在2424日出现病变,变圆,肿胀和气日出现病变,变圆,肿胀和气球样变,可见融合细胞和多核巨细胞,初步判定球样变,可见融合细胞和多核巨细胞,初步判定HSVHSV阳性。阳性。用免疫荧光法对用免疫荧光法对HSVHSV进一步鉴定和分型。进一步鉴定和分型。结果报告:结果报告:出现出现CPE:“CPE:“单纯疱疹病毒分别可疑单纯疱疹病毒分别可疑”鉴定后:鉴定后:“
8、单纯疱疹病毒单纯疱疹病毒I I型(型(IIII型)生长型)生长”临床意义:临床意义:细胞培育法是细胞培育法是“金标准金标准”用免疫荧光法对用免疫荧光法对HSVHSV进一步鉴定和分型进一步鉴定和分型2013.8陕西省皮肤性病防治所 朱参胜留意事项留意事项:选择敏感细胞系,且细胞应为活力强的幼龄细胞选择敏感细胞系,且细胞应为活力强的幼龄细胞取材时不用消毒剂和润滑剂取材时不用消毒剂和润滑剂尽量取水泡液或脓疱液进行接种培育尽量取水泡液或脓疱液进行接种培育取材后尽快接种,取材后尽快接种,24h24h不能接种,存放于不能接种,存放于-70-70其他疱疹病毒如水痘,带状疱疹病毒感染也可以引起类似的其他疱疹病
9、毒如水痘,带状疱疹病毒感染也可以引起类似的CPECPE,因,因此须要进一步鉴定此须要进一步鉴定2013.8陕西省皮肤性病防治所 朱参胜HeLa细胞株是由正常子宫颈细胞被一种人类乳突状瘤病毒(Human Papillomavirus 18 或HPV18)转型成癌细胞的,而且和正常子宫颈细胞有很多不同。2013.8陕西省皮肤性病防治所 朱参胜Hela Hela 细胞感染细胞感染HSV-2:A HSV-2:A 正常细胞;正常细胞;B:HSV-2B:HSV-2感染细胞。感染细胞。2013.8陕西省皮肤性病防治所 朱参胜(二)干脆免疫荧光抗原检测(二)干脆免疫荧光抗原检测基本原理:基本原理:HSVHSV
10、抗体抗体(标记标记FITC)FITC)标本标本HSVHSV荧光显微镜视察荧光显微镜视察标本采集:标本采集:细胞培育标本:收集细胞培育阳性标本,可作细胞爬片。细胞培育标本:收集细胞培育阳性标本,可作细胞爬片。病损标本:收集病损部位基底部细胞病损标本:收集病损部位基底部细胞仪器设备:荧光显微镜;仪器设备:荧光显微镜;HSV(I/II)mAb;PBSHSV(I/II)mAb;PBS溶液溶液操作步骤:操作步骤:固定:冷丙酮(固定:冷丙酮(-20-20)或甲醇固定标本)或甲醇固定标本10min10min洗涤:洗涤:PBSPBS洗洗3 3次,或自然干燥次,或自然干燥染色:双份标本中滴加染色:双份标本中滴加
11、HSV-1HSV-1和和HSV-2HSV-2荧光抗体工作液,荧光抗体工作液,3737湿盒湿盒30min30min洗涤:洗涤:PBS,PBS,双蒸水双蒸水封片镜检:封片镜检:90%90%甘油甘油+10%PBS+10%PBS2013.8陕西省皮肤性病防治所 朱参胜结果判读:结果判读:阳性、阴性比照结果正常阳性、阴性比照结果正常阳性标本为亮绿色荧光阳性标本为亮绿色荧光结果报告:结果报告:阳性:见到上述荧光阳性:见到上述荧光阴性:未见到上述荧光阴性:未见到上述荧光临床意义:临床意义:一般用于一般用于HSVHSV分别培育阳性标本的鉴定和分型分别培育阳性标本的鉴定和分型留意事项留意事项:每批试验均设置比照
12、每批试验均设置比照高质量荧光显微镜和技术娴熟操作人员高质量荧光显微镜和技术娴熟操作人员取材是应避开出血,以免影响结果推断取材是应避开出血,以免影响结果推断干脆皮损标本:简洁脱片干脆皮损标本:简洁脱片2013.8陕西省皮肤性病防治所 朱参胜HCE inoculated with a high viral load clinical specimen positive for HSV-1.Notethepresenceofmanyinfectedcellsshowingapplegreenfluorescence.Indirectimmunofluorescenceassay,125.Athman
13、athanet al.BMC Ophthalmology20022:32013.8陕西省皮肤性病防治所 朱参胜(三)抗原(三)抗原ELISAELISA法法基本原理:基本原理:抗抗HSVHSV单克隆抗体包被单克隆抗体包被标本标本HSVHSV抗原抗原酶标记抗体,底物显色。酶标记抗体,底物显色。标本采集:标本采集:同细胞培育法同细胞培育法操作步骤:操作步骤:加样:比照和样品,孵育加样:比照和样品,孵育加酶结合物:洗板后,加入酶结合物,孵育加酶结合物:洗板后,加入酶结合物,孵育显色:显色:终止:终止:2013.8陕西省皮肤性病防治所 朱参胜结果判读:结果判读:阳性、阴性比照在规定范围阳性、阴性比照在规
14、定范围依据要求计算设定阈值依据要求计算设定阈值结果报告:结果报告:阳性阳性阴性阴性临床意义:临床意义:临床上常用的检测抗原的方法临床上常用的检测抗原的方法留意事项留意事项:接受部位正确,尽可能多采样接受部位正确,尽可能多采样不同批号试剂禁止混用不同批号试剂禁止混用2013.8陕西省皮肤性病防治所 朱参胜(四)抗体检测(四)抗体检测ELISA:检测原理:将型特异性HSV抗原gG包被在酶标板微孔中俘获血清中的HSV抗体,形成抗原抗体复合物再与辣根过氧化物酶标记的抗人抗体结合,加入酶底物显色酶标仪比色定量血清中HSV抗体含量。器材:酶标仪,洗板机、恒温水浴箱、型特异HSV-ELISA试剂盒。检测流程
15、:试剂准备(平衡,混匀,稀释,阴性,阳性比照设置;加入标本;温育;洗版;加酶标记物;洗板;显色;终止;读板。结果判读及报告:阳性、阴性比照应在要求范围;临界值确定。阳性、阴性判定。CIA:(省略)2022/11/4HSVHSV型特异性抗体检测的临床意义型特异性抗体检测的临床意义HSV感染诊断:首次感染93IgM阳性,复发感染13以下,IgGHSV分型诊断:HSV1和HSV2感染的严峻程度和预后存在差异,为预后供应参考依据。原发与复发疱疹类型的鉴别检出隐性感染:80-90%无症状感染,削减性与母婴传播2022/11/4感染者性伴的HSV感染状况的推断:80%以上的患者渴望了解自身和伴侣的HSV感
- 配套讲稿:
如PPT文件的首页显示word图标,表示该PPT已包含配套word讲稿。双击word图标可打开word文档。
- 特殊限制:
部分文档作品中含有的国旗、国徽等图片,仅作为作品整体效果示例展示,禁止商用。设计者仅对作品中独创性部分享有著作权。
- 关 键 词:
- 生殖器疱疹 尖锐湿疣 检测 技术 优秀 PPT
限制150内