第三章液相色谱解析优秀PPT.ppt

《第三章液相色谱解析优秀PPT.ppt》由会员分享，可在线阅读，更多相关《第三章液相色谱解析优秀PPT.ppt（39页珍藏版）》请在淘文阁 - 分享文档赚钱的网站上搜索。

1、3.1 3.1 概述概述3.2 3.2 仪器结构及分别原理仪器结构及分别原理3.3 3.3 高效液相色谱分类及原理高效液相色谱分类及原理3.4 3.4 色谱分别条件的选择与优化色谱分别条件的选择与优化3.5 3.5 高效液相色谱方法的建立和应用高效液相色谱方法的建立和应用第三章第三章 高效液相色谱法高效液相色谱法2022/11/52022/11/51 1 流流流流淌淌淌淌相相相相是是是是液液液液体体体体的的的的色色色色谱谱谱谱法法法法称称称称为为为为液液液液相相相相色色色色谱谱谱谱法法法法。液液液液相相相相色色色色谱谱谱谱可可可可分分分分为为为为平平平平板板板板色色色色谱谱谱谱和和和和柱柱柱柱

2、色色色色谱谱谱谱，在在在在液液液液相相相相柱柱柱柱色色色色谱谱谱谱中中中中，接接接接受受受受颗颗颗颗粒粒粒粒特特特特别别别别细细细细的的的的高高高高效效效效固固固固定定定定相相相相，并并并并接接接接受受受受高高高高压压压压泵泵泵泵输送流淌相，全部工作通过仪器来完成输送流淌相，全部工作通过仪器来完成输送流淌相，全部工作通过仪器来完成输送流淌相，全部工作通过仪器来完成,这种色谱法称为高效液相色谱法这种色谱法称为高效液相色谱法这种色谱法称为高效液相色谱法这种色谱法称为高效液相色谱法.1 1、高效液相色谱（、高效液相色谱（、高效液相色谱（、高效液相色谱（HPLCHPLC）和气相色谱）和气相色谱）和气相

3、色谱）和气相色谱GCGC的比较的比较的比较的比较 HPLCGC1、几乎可以分析各种化合物、几乎可以分析各种化合物只能分析只能分析挥发挥发性物性物质质，约约20%的化合物的化合物2、可用于、可用于热热不不稳稳定物定物质质的分析的分析不能用于不能用于热热不不稳稳定物定物质质的分析的分析3、柱效不会很高、柱效不会很高可得到很高的柱效可得到很高的柱效4、流、流动动相有毒，相有毒，费费用用较较高高流流动动相相为为气体，无毒、易气体，无毒、易处处理理5、仪仪器制造器制造难难度度较较大大仪仪器制造器制造难难度度较较小小3.1 概述概述2022/11/52022/11/52 2 3.2 仪器结构仪器结构1.1

4、.结构流程结构流程2022/11/52022/11/53 32.主要部件主要部件(1)高压输液泵高压输液泵 要求：要求：能在高压下连续工作能在高压下连续工作 (5000psi)较宽的可程序限制的流速范围较宽的可程序限制的流速范围 耐化学腐蚀耐化学腐蚀 无脉动输出无脉动输出 输出流量稳定、重复性好输出流量稳定、重复性好 易安装维护易安装维护2022/11/52022/11/54 4(2)进样装置进样装置流路中为高压力工作状态，流路中为高压力工作状态，通常运用耐高压的六通阀进样装置，通常运用耐高压的六通阀进样装置，其结构如图所示：其结构如图所示：2022/11/52022/11/55 5(3)高效

5、分别柱高效分别柱柱体为直型不锈钢管，内径柱体为直型不锈钢管，内径柱体为直型不锈钢管，内径柱体为直型不锈钢管，内径1 16 6 mmmm，柱长柱长柱长柱长5 540 40 cmcm。发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效，现在已经有超发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效，现在已经有超发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效，现在已经有超发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效，现在已经有超高速高效液相色谱。高速高效液相色谱。高速高效液相色谱。高速高效液相色谱。2022/11/52022/11/56 6(4)液相色谱检测器液相色谱检测器按检测对象分类按检测对象分类按检测对象分类按检测对象分类 溶质型

6、检测器：对组分的物理或物理化学特性有响溶质型检测器：对组分的物理或物理化学特性有响溶质型检测器：对组分的物理或物理化学特性有响溶质型检测器：对组分的物理或物理化学特性有响应：紫外、荧光、电化学应：紫外、荧光、电化学应：紫外、荧光、电化学应：紫外、荧光、电化学 总体检测器：对试样或洗脱液总的物理或物理化学总体检测器：对试样或洗脱液总的物理或物理化学总体检测器：对试样或洗脱液总的物理或物理化学总体检测器：对试样或洗脱液总的物理或物理化学特性有响应：示差折光、介电常数、激光散射检测器特性有响应：示差折光、介电常数、激光散射检测器特性有响应：示差折光、介电常数、激光散射检测器特性有响应：示差折光、介电

7、常数、激光散射检测器2022/11/52022/11/57 7 a.紫外检测器紫外检测器 应用最广，对大部分有机化合物有响应。应用最广，对大部分有机化合物有响应。特点：特点：1、灵敏度高；、灵敏度高；2、线形范围高；、线形范围高；3、流流通通池池可可做做的的很很小小（1mm 10mm，容容积积 8L）；）；4、对对流流淌淌相相的的流流速速和和温温度度变变更更不不敏敏感感，可可用于梯度洗脱；用于梯度洗脱；5、波长可选，易于操作；、波长可选，易于操作；2022/11/52022/11/58 8b.b.光电二极管阵列检测器光电二极管阵列检测器 紫外检测器的重要进展；紫外检测器的重要进展；紫外检测器的

8、重要进展；紫外检测器的重要进展；光光光光电电电电二二二二极极极极管管管管阵阵阵阵列列列列检检检检测测测测器器器器：10241024个个二二极极管管阵阵列列，各各检检测测特特定波长，计算机快速处理，三维立体谱图，如图所示。定波长，计算机快速处理，三维立体谱图，如图所示。2022/11/52022/11/59 9光电二极管阵列检测器光电二极管阵列检测器2022/11/52022/11/51010c.示差折光检测器示差折光检测器 除紫外检测器之外应用最多的检测器；除紫外检测器之外应用最多的检测器；除紫外检测器之外应用最多的检测器；除紫外检测器之外应用最多的检测器；连连连连续续续续检检检检测测测测参参

9、参参比比比比池池池池和和和和样样样样品品品品池池池池中中中中流流流流淌淌淌淌相相相相之之之之间间间间的的的的折折折折光光光光指指指指数数数数差差差差值值值值。差值与浓度呈正比；差值与浓度呈正比；差值与浓度呈正比；差值与浓度呈正比；通用型检测器通用型检测器通用型检测器通用型检测器(每种物质具有不同的折光指数每种物质具有不同的折光指数每种物质具有不同的折光指数每种物质具有不同的折光指数)；灵敏度低、对温度敏感、不能用于梯度洗脱；灵敏度低、对温度敏感、不能用于梯度洗脱；灵敏度低、对温度敏感、不能用于梯度洗脱；灵敏度低、对温度敏感、不能用于梯度洗脱；2022/11/52022/11/51111d.荧光

10、检测器荧光检测器 高灵敏度、高选择性；高灵敏度、高选择性；高灵敏度、高选择性；高灵敏度、高选择性；对对对对多多多多环环环环芳芳芳芳烃烃烃烃，维维维维生生生生素素素素B B、黄黄黄黄曲曲曲曲霉霉霉霉素素素素、卟卟卟卟啉啉啉啉类类类类化化化化合合合合物物物物、农农农农药药药药、氨氨氨氨基基基基酸酸酸酸、甾甾甾甾类类类类化化化化合合合合物物物物等有响应；等有响应；等有响应；等有响应；2022/11/52022/11/51212e.电化学检测器电化学检测器特点：特点：1.灵敏度高，可测至灵敏度高，可测至10-15 molL-1；2.选择性好，只响应电活性物质；选择性好，只响应电活性物质；3.线性范围宽

11、，可达线性范围宽，可达4 5个数量级。个数量级。HPLC-ECD法是目前多组分困难样品分法是目前多组分困难样品分析中的一个重要手段析中的一个重要手段,尤其在分析低浓度尤其在分析低浓度生物样品中具有不行替代的优势，渐渐生物样品中具有不行替代的优势，渐渐受到生命科学和分析科学工作者的关注受到生命科学和分析科学工作者的关注2022/11/52022/11/51313f.质谱仪质谱仪特点：特点：1.1.灵敏度高，可获得待测化合物的结构信息灵敏度高，可获得待测化合物的结构信息灵敏度高，可获得待测化合物的结构信息灵敏度高，可获得待测化合物的结构信息2022/11/52022/11/51414(5)附属部件

12、附属部件 脱气装置，自动进样装置，脱气装置，自动进样装置，梯度洗脱装置，柱温箱，衍生系统，梯度洗脱装置，柱温箱，衍生系统，馏分收集装置以及数据处理等装置馏分收集装置以及数据处理等装置如运用得当，会大大提高仪器的功如运用得当，会大大提高仪器的功能和提高工作效率能和提高工作效率2022/11/52022/11/51515 高效液相色谱法的类型按组分在两相间分别机理的不同主要分为：液固吸附色谱法、液液安排色谱法（正相与反相）、离子交换色谱法及分子排阻色谱法。其中：以反相的化学键合相色谱应用最为广泛3.3 高效液相色谱分类及原理高效液相色谱分类及原理1616 液固吸附色谱法液固吸附色谱法固定相固定相为

13、固体固体硅胶硅胶silica 和和 alumina（氧化（氧化铝）是最常用的固定相是最常用的固定相 通通过一系列的吸附一系列的吸附/脱附步脱附步骤形成分形成分别 样品分子品分子对固定相的吸附程度不同而形成分固定相的吸附程度不同而形成分别 固定相固定相流淌相流淌相1717 液液安排色液液安排色谱法法固定液易流失固定液易流失固定液易流失固定液易流失 化学键合固定相化学键合固定相化学键合固定相化学键合固定相aqaqorgorgi ii iK Ki i固定相固定相流淌相流淌相涂布式固定相缺点：固定液易流失，重现性差，且不适合涂布式固定相缺点：固定液易流失，重现性差，且不适合涂布式固定相缺点：固定液易流

14、失，重现性差，且不适合涂布式固定相缺点：固定液易流失，重现性差，且不适合梯度洗脱和接受高速流淌相梯度洗脱和接受高速流淌相梯度洗脱和接受高速流淌相梯度洗脱和接受高速流淌相1818 接受化学键合相的液相色谱称为化学键合相色谱法，简称键合相色接受化学键合相的液相色谱称为化学键合相色谱法，简称键合相色接受化学键合相的液相色谱称为化学键合相色谱法，简称键合相色接受化学键合相的液相色谱称为化学键合相色谱法，简称键合相色谱。用来制备键合固定相的载体，几乎都用硅胶。利用硅胶表面的硅醇谱。用来制备键合固定相的载体，几乎都用硅胶。利用硅胶表面的硅醇谱。用来制备键合固定相的载体，几乎都用硅胶。利用硅胶表面的硅醇谱。

15、用来制备键合固定相的载体，几乎都用硅胶。利用硅胶表面的硅醇基（基（基（基（Si-OH)Si-OH)与有机分子成键，利用化学反应将有机分子键合到载体表与有机分子成键，利用化学反应将有机分子键合到载体表与有机分子成键，利用化学反应将有机分子键合到载体表与有机分子成键，利用化学反应将有机分子键合到载体表面上，形成均一的、坚固的单分子薄层而构成各种性能的固定相。接受面上，形成均一的、坚固的单分子薄层而构成各种性能的固定相。接受面上，形成均一的、坚固的单分子薄层而构成各种性能的固定相。接受面上，形成均一的、坚固的单分子薄层而构成各种性能的固定相。接受的键合反应有酯化键合的键合反应有酯化键合的键合反应有酯

16、化键合的键合反应有酯化键合(SiOR(SiOR型型型型)、硅烷化键合、硅烷化键合、硅烷化键合、硅烷化键合(Si-O-Si-R(Si-O-Si-R型型型型)和和和和硅氮键合硅氮键合硅氮键合硅氮键合(Si-N(Si-N型型型型)等。以硅烷化键合反应最为常用等。以硅烷化键合反应最为常用等。以硅烷化键合反应最为常用等。以硅烷化键合反应最为常用.1919化学化学键合相具有以下特点：合相具有以下特点：1）固定相不易流失，柱的）固定相不易流失，柱的稳定性和寿命定性和寿命较高。高。2）能耐受各种溶）能耐受各种溶剂，可用于梯度洗脱。，可用于梯度洗脱。3）表面）表面较为均一，没有液坑，均一，没有液坑，传质快，柱效

17、高。快，柱效高。4）能）能键合不同基合不同基团以以变更其更其选择性，例如性，例如键合合氰基、氨基、氨基等极性基基等极性基团用于正相色用于正相色谱法，法，链合离子交合离子交换基基团用用于离子色于离子色谱法，法，键合合C2，C4，C6，C8，C16，C18，C22烷基和苯基等非极性基基和苯基等非极性基团用于反相色用于反相色谱法法等。因此，它是等。因此，它是HPLC较为志向的固定相。志向的固定相。2020 离子交离子交换色色谱法法固定相表面带与被分析物相反电荷 一般运用弱离子交换树脂 依据电荷相互作用力的强弱产生分别 固定相固定相流淌相流淌相2121分子排阻色分子排阻色谱法法依照分子大小分别 固定相

18、材质具有不同大小孔径 大分子因其经过的路径短，所以先流出 主要应用于聚合物、蛋白质等分子量范围的测定 22223.4 色谱分别条件的选择与优色谱分别条件的选择与优化化分分分分别别别别条条条条件件件件的的的的选选选选择择择择：样样样样品品品品、固固固固定定定定相相相相、流流流流淌淌淌淌相相相相、洗洗洗洗脱脱脱脱方方方方式式式式一、分别类型选择一、分别类型选择一、分别类型选择一、分别类型选择2022/11/52022/11/52323 1.1.流淌相的基本要求流淌相的基本要求 （1 1）与与色色谱谱柱柱不不发发生生不不行行逆逆化化学学变变更更，即保留柱效或柱子的保留性质长期不变；即保留柱效或柱子的

19、保留性质长期不变；（2 2）能溶解被分别的样品；）能溶解被分别的样品；（3 3）与所用的检测器匹配；）与所用的检测器匹配；（4 4）黏度尽可能小，以获得高的柱效；）黏度尽可能小，以获得高的柱效；（5 5）价格便宜、毒性小、易于纯化；）价格便宜、毒性小、易于纯化；二、流淌相的选择二、流淌相的选择2022/11/52022/11/524242.流淌相选择的基本原则原则：与固定相极性越接近的流淌相，其洗脱实力越强。例：接受正相液-液安排分别时：首先选择中等极性溶剂，若组分的保留时间太短，降低溶剂极性，反之增加。也可在低极性溶剂中，渐渐增加其中的极性溶剂，使保留时间缩短。常用溶剂的极性依次：水(最大)

20、甲酰胺乙腈甲醇乙醇丙醇丙酮二氧六环四氢呋喃甲乙酮正丁醇乙酸乙酯乙醚异丙醚二氯甲烷氯仿溴乙烷苯四氯化碳二硫化碳环己烷己烷煤油(最小)2022/11/52022/11/525253.3.流淌相处理流淌相处理 （1 1）用）用）用）用0.45m0.45m的微孔滤膜过滤，以防不溶物的微孔滤膜过滤，以防不溶物的微孔滤膜过滤，以防不溶物的微孔滤膜过滤，以防不溶物磨损高压泵和堵塞流路、色谱柱等；磨损高压泵和堵塞流路、色谱柱等；磨损高压泵和堵塞流路、色谱柱等；磨损高压泵和堵塞流路、色谱柱等；（2 2）对流淌相进行脱气处理，否则，溶于流）对流淌相进行脱气处理，否则，溶于流）对流淌相进行脱气处理，否则，溶于流）对

21、流淌相进行脱气处理，否则，溶于流淌相中的气体形成气泡会影响泵、检测器的运淌相中的气体形成气泡会影响泵、检测器的运淌相中的气体形成气泡会影响泵、检测器的运淌相中的气体形成气泡会影响泵、检测器的运用；用；用；用；2022/11/52022/11/52626 洗脱方式：等度洗脱和梯度洗脱洗脱方式：等度洗脱和梯度洗脱洗脱方式：等度洗脱和梯度洗脱洗脱方式：等度洗脱和梯度洗脱 等度洗脱：流淌相组成不随分析时间变更，始终等度洗脱：流淌相组成不随分析时间变更，始终等度洗脱：流淌相组成不随分析时间变更，始终等度洗脱：流淌相组成不随分析时间变更，始终是均一的流淌相洗脱，适合于较简洁样品分析是均一的流淌相洗脱，适合

22、于较简洁样品分析是均一的流淌相洗脱，适合于较简洁样品分析是均一的流淌相洗脱，适合于较简洁样品分析梯度洗脱：洗脱方式可以是线性的或非线性的，也梯度洗脱：洗脱方式可以是线性的或非线性的，也梯度洗脱：洗脱方式可以是线性的或非线性的，也梯度洗脱：洗脱方式可以是线性的或非线性的，也可以是二元的或多元的，接受二元或多元组合溶剂可以是二元的或多元的，接受二元或多元组合溶剂可以是二元的或多元的，接受二元或多元组合溶剂可以是二元的或多元的，接受二元或多元组合溶剂作为流淌相可以敏捷调整流淌相的极性或增加选择作为流淌相可以敏捷调整流淌相的极性或增加选择作为流淌相可以敏捷调整流淌相的极性或增加选择作为流淌相可以敏捷调

23、整流淌相的极性或增加选择性，以改进分别或调整出峰时间性，以改进分别或调整出峰时间性，以改进分别或调整出峰时间性，以改进分别或调整出峰时间三、三、三、三、洗脱方式的选择洗脱方式的选择洗脱方式的选择洗脱方式的选择2022/11/52022/11/527273.5 色谱的应用色谱的应用1.1.药学：药物质量限制、药材最佳采收期、炮制工艺确定、药学：药物质量限制、药材最佳采收期、炮制工艺确定、药学：药物质量限制、药材最佳采收期、炮制工艺确定、药学：药物质量限制、药材最佳采收期、炮制工艺确定、2.2.新药研发；新药研发；新药研发；新药研发；3.3.2.2.环境检测：大气、土壤、水体等中污染物的定性定量分

24、环境检测：大气、土壤、水体等中污染物的定性定量分环境检测：大气、土壤、水体等中污染物的定性定量分环境检测：大气、土壤、水体等中污染物的定性定量分析；析；析；析；4.4.3.3.食品分析：农残分析、兽残分析、养分成分定性定量分食品分析：农残分析、兽残分析、养分成分定性定量分食品分析：农残分析、兽残分析、养分成分定性定量分食品分析：农残分析、兽残分析、养分成分定性定量分析；析；析；析；5.5.4.4.化工：工艺探讨、反应进度确定、产品质量限制；化工：工艺探讨、反应进度确定、产品质量限制；化工：工艺探讨、反应进度确定、产品质量限制；化工：工艺探讨、反应进度确定、产品质量限制；6.6.5.5.临床、药

25、物代谢：药物体内代谢探讨、临床病例探讨。临床、药物代谢：药物体内代谢探讨、临床病例探讨。临床、药物代谢：药物体内代谢探讨、临床病例探讨。临床、药物代谢：药物体内代谢探讨、临床病例探讨。标准号标准号标准名称标准名称GB/T18294.4-2007火灾技术鉴定方法第4部分:高效液相色谱法GB/T18397-2001复合预混合饲料中泛酸的测定高效液相色谱法GB/T18872-2002饲料中维生素K3的测定高效液相色谱法GB/T18932.18-2003蜂蜜中羟甲基糠醛含量的测定方法液相色谱-紫外检测法GB/T18932.25-2005蜂蜜中青霉素G、青霉素V、乙氧萘青霉素、苯唑青霉素、邻氧青霉素、双

26、氧青霉素残留量的测定方法液相色谱-串联质谱法GB/T18932.26-2005蜂蜜中甲硝哒唑、洛硝哒唑、二甲硝咪唑残留量的测定方法液相色谱法GB/T18932.3-2002蜂蜜中链霉素残留量的测定方法液相色谱法GB/T18932.4-2002蜂蜜中土霉素、四环素、金霉素、强力霉素残留量的测定方法液相色谱法GB/T18932.5-2002蜂蜜中磺胺醋酰、磺胺吡啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺甲氧哒嗪、磺胺对甲氧嘧啶、磺胺氯哒嗪、磺胺甲基异噁唑、磺胺二甲氧嘧啶残留量的测定方法液相色谱法GB/T18932.7-2002蜂蜜中苯酚残留量的测定方法液相色谱法GB/T19182-2003咖啡咖啡因含量的测定高效液相

27、色谱法GB/T19267.11-2003刑事技术微量物证的理化检验第11部分:高效液相色谱法GB/T19371.2-2003饲料中液态蛋氨酸羟基类似物的测定高效液相色谱法GB/T19423-2003饲料中尼卡巴嗪的测定高效液相色谱法标准号标准号标准名称标准名称GB/T19427-2003蜂胶中芦丁、杨梅酮、槲皮素、莰菲醇、芹菜素、松属素、苛因、高良姜素含量的测定方法液相色谱-串联质谱检测法和液相色谱-紫外检测法GB/T19542-2004饲料中磺胺二甲基嘧啶和磺胺间甲氧嘧啶的测定高效液相色谱法GB/T19681-2005食品中苏丹红染料的检测方法高效液相色谱法GB/T19684-2005饲料中

28、金霉素的测定高效液相色谱法GB/T20189-2006饲料中莱克多巴胺的测定高效液相色谱法GB/T20362-2006鸡蛋中氯羟吡啶残留量的检测方法高效液相色谱法GB/T20365-2006硫酸软骨素和盐酸氨基葡萄糖含量的测定液相色谱法GB/T20379-2006淀粉衍生物葡萄糖浆、果糖浆和氢化葡萄糖浆成分的测定高效液相色谱法GB/T20741-2006畜禽肉中地塞米松残留量的测定液相色谱-串联质谱法GB/T20742-2006牛甲状腺和牛肉中硫脲嘧啶、甲基硫脲嘧啶、正丙基硫脲嘧啶、它巴唑、巯基苯并咪唑残留量的测定液相色谱-串联质谱法GB/T20743-2006猪肉、猪肝和猪肾中杆菌肽残留量的

29、测定液相色谱-串联质谱法GB/T20744-2006蜂蜜中甲硝唑、洛硝哒唑、二甲硝咪唑残留量的测定液相色谱-串联质谱法1 1）HPLC-DADHPLC-DAD方法的建立方法的建立方法的建立方法的建立 1 1、丹参养分器官中丹参酮、丹参养分器官中丹参酮、丹参养分器官中丹参酮、丹参养分器官中丹参酮I I和丹参酮和丹参酮和丹参酮和丹参酮IIAIIA的测定的测定的测定的测定HPLC-DADHPLC-DAD提取条件提取条件提取条件提取条件洗脱条件洗脱条件洗脱条件洗脱条件检测条件检测条件检测条件检测条件方法学考察方法学考察方法学考察方法学考察1 1）HPLC-DADHPLC-DAD方法的建立方法的建立方法

30、的建立方法的建立 1 1、丹参养分器官中丹参酮、丹参养分器官中丹参酮、丹参养分器官中丹参酮、丹参养分器官中丹参酮I I和丹参酮和丹参酮和丹参酮和丹参酮IIAIIA的测定的测定的测定的测定HPLC-DADHPLC-DAD提取条件提取条件提取条件提取条件洗脱条件洗脱条件洗脱条件洗脱条件检测条件检测条件检测条件检测条件方法学考察方法学考察方法学考察方法学考察提取条件的选择：分别考察了回流提取法和提取条件的选择：分别考察了回流提取法和提取条件的选择：分别考察了回流提取法和提取条件的选择：分别考察了回流提取法和超声提取法，结果显示：回流提取法和超声提超声提取法，结果显示：回流提取法和超声提超声提取法，结

31、果显示：回流提取法和超声提超声提取法，结果显示：回流提取法和超声提取法均可达到同样的提取效率，但超声提取法取法均可达到同样的提取效率，但超声提取法取法均可达到同样的提取效率，但超声提取法取法均可达到同样的提取效率，但超声提取法提取时间明显缩短，提取操作简洁便利，故本提取时间明显缩短，提取操作简洁便利，故本提取时间明显缩短，提取操作简洁便利，故本提取时间明显缩短，提取操作简洁便利，故本试验接受超声提取法。然后，分别考察了不同试验接受超声提取法。然后，分别考察了不同试验接受超声提取法。然后，分别考察了不同试验接受超声提取法。然后，分别考察了不同比例的二氯甲烷比例的二氯甲烷比例的二氯甲烷比例的二氯甲

32、烷-甲醇溶剂及不同提取时间甲醇溶剂及不同提取时间甲醇溶剂及不同提取时间甲醇溶剂及不同提取时间2 2种成分的提取率。试验结果显示：接受二氯甲种成分的提取率。试验结果显示：接受二氯甲种成分的提取率。试验结果显示：接受二氯甲种成分的提取率。试验结果显示：接受二氯甲烷烷烷烷-甲醇甲醇甲醇甲醇(1(1 9)9)作提取溶剂效果最好，超声提作提取溶剂效果最好，超声提作提取溶剂效果最好，超声提作提取溶剂效果最好，超声提取取取取0.5 h0.5 h，丹参酮，丹参酮，丹参酮，丹参酮I I和丹参酮和丹参酮和丹参酮和丹参酮IIAIIA的提取率均达到的提取率均达到的提取率均达到的提取率均达到最大最大最大最大 提取条件：

33、二氯甲烷甲醇（提取条件：二氯甲烷甲醇（提取条件：二氯甲烷甲醇（提取条件：二氯甲烷甲醇（v/v=1/9v/v=1/9）混合）混合）混合）混合溶剂超声提取溶剂超声提取溶剂超声提取溶剂超声提取0.5 h0.5 h色色色色谱谱谱谱洗洗洗洗脱脱脱脱条条条条件件件件:美美美美国国国国Zorbax Zorbax SB SB-C18C18（150 150 mm mm 4.6 4.6 mm,mm,5.0 5.0 mm）色色色色谱谱谱谱柱柱柱柱；流流流流淌淌淌淌相相相相：甲甲甲甲醇醇醇醇 水水水水，梯梯梯梯度度度度洗洗洗洗脱脱脱脱，其其其其时时时时间间间间程程程程序序序序为为为为01013 01013 minmi

34、n，甲甲甲甲醇醇醇醇体体体体积积积积分分分分数数数数相相相相应应应应为为为为72%87%72%72%87%72%，流流流流速速速速：1.0 mLmin-11.0 mLmin-1甲醇甲醇甲醇甲醇/水水水水色谱柱色谱柱色谱柱色谱柱流速流速流速流速等度洗脱等度洗脱等度洗脱等度洗脱柱温柱温柱温柱温梯度洗脱梯度洗脱梯度洗脱梯度洗脱洗脱条件洗脱条件洗脱条件洗脱条件色谱洗脱条件的优化色谱洗脱条件的优化色谱洗脱条件的优化色谱洗脱条件的优化2022/11/52022/11/53434检测条件的选择检测条件的选择用用用用DADDAD对丹参酮对丹参酮对丹参酮对丹参酮I I和丹参酮和丹参酮和丹参酮和丹参酮IIAIIA

35、进行进行进行进行190 400 nm190 400 nm全波长扫描，结果丹参酮全波长扫描，结果丹参酮全波长扫描，结果丹参酮全波长扫描，结果丹参酮I I和丹参酮和丹参酮和丹参酮和丹参酮IIAIIA的最大吸取的最大吸取的最大吸取的最大吸取波长分别为波长分别为波长分别为波长分别为246246和和和和270 nm270 nm 故本试验接受双波长检测，在故本试验接受双波长检测，在故本试验接受双波长检测，在故本试验接受双波长检测，在246 nm246 nm检测丹参酮检测丹参酮检测丹参酮检测丹参酮I I，在，在，在，在270 nm270 nm检测丹参酮检测丹参酮检测丹参酮检测丹参酮IIAIIA。2022/1

36、1/52022/11/53535色谱条件：色谱条件：色色谱谱柱柱：Zorbax SB-C18（150 mm 4.6 mm,5.0 m）流淌相：甲醇流淌相：甲醇-0.4%磷酸磷酸洗洗脱脱条条件件：梯梯度度洗洗脱脱，其其时时间间程程序序为为：01013 min，甲醇体积分数相应为甲醇体积分数相应为72%87%72%流速：流速：1.0 mLmin-1 柱温：柱温：30检检测测条条件件：二二极极管管阵阵列列检检测测器器：检检测测波波长长分分别为别为 246，270 nm2022/11/52022/11/53636化合物化合物丹参丹参酮酮I丹参丹参酮酮IIA线线性关系性关系Y=74.61C 118.86(r=0.9994)Y=55.58C 94.75(r=0.9996)精密度精密度1.7%1.9%稳稳定性定性2.1%2.1%重复性重复性2.3%2.5%加加样样回收率回收率99.4%(RSD=2.3%)100.1%(RSD=2.5%)方法学考察方法学考察方法学考察方法学考察2）样品的测定样品的测定2022/11/52022/11/53939