2022年新版GMP培养基适用性检查验证方案.docx

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1、精选学习资料 - - - - - - - - - 培育基适用性检查验证方案版本号 :00 文件编号： VMP-VV-501-00 培 养 基 适 用 性 检 查验 证 方 案文件编号： VMP-VV-501-00 起 草 人：审 核 人：批 准 人：名师归纳总结 批准日期：年月日第 1 页,共 13 页- - - - - - -精选学习资料 - - - - - - - - - 培育基适用性检查验证方案版本号 :00 文件编号： VMP-VV-501-00 验证立项申请表申请部门质量部申请日期年月日验证对象培育基要求完成日期年月日验证缘由微生物验证验证类别微生物验证为了确认所采纳细菌、 霉菌及酵

2、母菌计数和掌握菌检查的培育基是否符合微生物限度检查法的规定要求,以保证检验结果的精确、牢靠及检验方法的完整性；申请部门负责人签名：日期：质量部看法签名：日期：验证方案编号 VMP-VV-501-00 验证报告编号 VMP-VV-501REP-00 负责人看法部门签名：日期：职务验证小组成员备注：第 1 页 共 12 页名师归纳总结 - - - - - - -第 2 页,共 13 页精选学习资料 - - - - - - - - - 培育基适用性检查验证方案版本号 :00 文件编号： VMP-VV-501-00 验证方案审批表程序审批部门负责人签名日期备注起草审核批准 负责人备注第 2 页 共 1

3、2 页名师归纳总结 - - - - - - -第 3 页,共 13 页精选学习资料 - - - - - - - - - 培育基适用性检查验证方案版本号 :00 文件编号： VMP-VV-501-00 通过验证以确认所采纳的培育基适合于细菌、霉菌及酵母菌的测定及掌握菌的检查,根 据特性制订检验方法和检验条件,按制定的方法进行试验,依据验证结果判定是否符合验证 标准；假设符合,按验证的方法和条件进行微生物限度检查；假设不符合,重新建立制订检 验方法和检验条件,再进行验证,直至验证结果符合设立的验证标准；为了确认所采纳细菌、霉菌及酵母菌计数和掌握菌检查的培育基是否符合微生物限度检 查法的规定要求,以

4、保证检验结果的精确、牢靠及检验方法的完整性；对于本次验证的执行进行了如下的风险分析：严峻程度可能性S 可检测风险优先级RPN = S P D P D R S P D 1 低1 低1 高RPN7低可以接受,无需实行措施2 中2 中2 中16RPN8中肯定程度上接受,但应按风险优先级实行措施尽可能降低3 高3 高3 低RPN16 或严高不能接受,尽快实行措施降低4 关键4 极高4 极低重程度 4 步骤 /单 元危害可能缘由 / P 现行掌握D R 需实行措施S P P 程序失败N N 验证部分项目方案培训不2 严格执行经批准3 18 确认依据批准的方案1 到位,方案的培训显现偏差或漂3 的验证报告

5、进行培训, 培训者均娴熟掌1 2 2 执行者不熟移3 培训,并考核合格握所培训内容；1 2 2 悉方案内容未 遵 循 培 养2 制定培育基适用3 18 确认培育基适用性检1 检 验 过 程 操 作不当未到达设定标 准,验证失败；基 适 用 性 检性检查检查操作查检查操作规程已制查 检 查 操 作规程,并对规程及定并批准, 确认人员已规程,未严格设立的验证方法培训； 确认操作规程适遵 循 方 案 规培训,按规程及方用性；定方法；案要求进行操作；4.1 验证人员培训：验证报告起草人有责任在方案批准后且在验证明施前对本次验证相 关人员进行培训；培训人员记录见附件 1；将全部的平皿和稀释剂都应当严格依

6、据相关的灭菌程序消毒,以确保其对试验的结果没有影 响；4.3 仪器与器具：恒温培育箱、生化培育箱、高压蒸汽灭菌器、净化工作台、无菌培育皿、第 3 页 共 12 页名师归纳总结 - - - - - - -第 4 页,共 13 页精选学习资料 - - - - - - - - - 培育基适用性检查验证方案版本号 :00 文件编号： VMP-VV-501-00 无菌移液管；全部检查在环境干净度 C级下的局部 A 级干净度的单向流空气区域内隔离系统内进行,其全过程严格遵守无菌操作,能防止微生物污染；5.2.1 验证用菌种及培育基：5.2.1.1来源：食品药品检验所内控编号菌种名称大肠埃希菌 Escher

7、ichia coli CMCCB44 102 E- 金黄色葡萄球菌 Staphylococcus aureus CMCCB26 003 S- 枯草芽孢杆菌 Bacillus subtilis CMCCB63 501 B- 白色念珠菌 Candida albicans CMCC F 98 001 C- 黑曲霉 Aspergillus nigerCMCCF 98 003 A- 注：编号由菌种首字母 - 传代代数 - 配制日期组成；5.2.2 培育基及其制备方法：取市售的脱水培育基,分别依据规定方法进行配制后灌装于洁净的三角烧瓶中,然后加塞灭菌,在试验前加温熔化备用；培育基名称培育基批号配制日期有效

8、期至养分琼脂培育基玫瑰红钠琼脂培育基养分琼脂对比培育基玫瑰红钠琼脂对比培育基5.2.3.1接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的新奇培育物至10ml 养分肉汤培养基中, 3035培育 1824 小时,取此培育液1ml,加 0.9 无菌氯化钠溶液至10ml,采用 10 倍递增稀释法,稀释至10-610-7,使菌数约为 50100cfu/ml ,做活菌计数备用；5.2.3.2接种白色念珠菌的新奇培育物至10ml 改进马丁培育基中, 2328培育 2448 小时,取此培育液 1ml,加 0.9 无菌氯化钠溶液至10ml,采纳 10 倍递增稀释法, 稀释至 10-610-7,使菌数约为 501

9、00cfu/ml ,做活菌计数备用；第 4 页 共 12 页名师归纳总结 - - - - - - -第 5 页,共 13 页精选学习资料 - - - - - - - - - 培育基适用性检查验证方案 版本号 :00 文件编号： VMP-VV-501-00 5.2.3.3 接种黑曲霉的新奇培育物至改进马丁琼脂斜面培育基上,2328培育 57 天的用35ml 含 0.05%ml/ml 聚山梨酯 80 的 0.9%无菌氯化钠溶液,将孢子洗脱；然后,吸出孢子悬液用管口带有薄的无菌棉花或纱布能过滤丝的无菌毛细吸管至无菌试管中,取 1ml加含 0.05%ml/ml 聚山梨酯 80 的 0.9%无菌氯化钠溶

10、液至10ml,采纳 10 倍递增稀释法,稀释至 10-410-6, 制成每 1ml 含孢子数 50100cfu 的孢子悬液备用；5.2.4 验证方法：5.2.4.1 试验组：取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌各 1ml,分别注入无菌平皿中,马上倾注养分琼脂培育基,每株试验菌平行制备 2 个平皿,混匀,凝固,置 3035培养 48 小时,计数、观看菌落情形；取白色念珠菌、黑曲霉各1ml,分别注入无菌平皿中,立刻倾注玫瑰红钠琼脂培育基,每株试验菌平行制备 2 个平皿,混匀,凝固,置 2328培育72 小时,计数、观看菌落情形；测定结果见附件 2；5.2.4.2 对比组：取大肠埃希菌、金黄色

11、葡萄球菌、枯草芽孢杆菌各 1ml,分别注入无菌平皿中,马上倾注养分琼脂对比培育基, 每株试验菌平行制备2 个平皿,混匀,凝固,置 3035培育 48 小时,计数、观看菌落情形；取白色念珠菌、黑曲霉各 1ml,分别注入无菌平皿中,马上倾注玫瑰红钠琼脂对比培育基,每株试验菌平行制备 2 个平皿,混匀,凝固,置 2328培育 72 小时,计数、观看菌落情形；测定结果见附件 2；5.2.4.3 菌回收率运算：试验组的菌回收率 % = 试验组平均菌落数 / 对比组平均菌落数100% 5.2.5 判定标准：菌回收率均应不低于70%,且菌落形状大小与对比培育基上的菌落一样；5.2.6 结论：对计数培育基适用

12、性检查的验证结果进行评判和总结；5.3 掌握菌培育基适用性检查：5.3.1 验证用菌种：5.3.1.1来源：食品药品检验所内控编号菌种名称大肠埃希菌 Escherichia coli CMCCB44 102 E- 金黄色葡萄球菌 Staphylococcus aureus CMCCB26 003 S- 5.3.1.3 培育基及其制备方法：取市售的脱水培育基,分别依据规定的方法进行配制后灌装于干净的三角烧瓶中,然后加塞灭菌；在试验前加温熔化备用；培育基名称培育基批号配制日期有效期至第 5 页 共 12 页名师归纳总结 - - - - - - -第 6 页,共 13 页精选学习资料 - - - -

13、 - - - - - 培育基适用性检查验证方案版本号 :00 文件编号： VMP-VV-501-00 胆盐乳糖培育基MUG培育基乳糖胆盐发酵培育基胆盐乳糖对比培育基MUG对比培育基乳糖胆盐发酵对比培养基5.3.2 菌液制备：接种大肠埃希菌、 金黄色葡萄球菌的新奇培育物至 10ml 养分肉汤培育基中,3035培育 1824 小时,取此培育液 1ml 加 0.9 无菌氯化钠溶液至 10ml,采纳 10 倍递增稀释法,稀释至 10-410-6,使细菌数约为 5001000cfu/ml ；5.3.3 验证方法：5.3.3.1促生长才能培育基：取大肠埃希菌各0.1ml ,分别涂布于胆盐乳糖培育基、MUG

14、培育基和乳糖胆盐发酵培育基及其对比培育基上,在 定结果见附件 3；3035培育 18 小时,观看菌落情形；测5.3.3.2抑制才能培育基： 取金黄色葡萄球菌各0.2ml ,分别涂布于胆盐乳糖培育基和乳糖胆盐发酵培育基及其对比培育基上,在 件 3；3035培育 18 小时,观看菌落情形；测定结果见附5.3.3.3 指示才能培育基： 取大肠埃希菌各 0.2ml ,分别涂布于乳糖胆盐发酵培育基及其对比 培育基上,在 3035培育 18 小时,观看菌落情形；测定结果见附件 3；5.3.4 判定标准：5.3.4.1 促生长才能培育基：试验培育基与对比培育基生长的菌落大小、形状特点应一样；5.3.4.2

15、抑制才能培育基：试验菌均不得生长；5.3.4.3 指示才能培育基：试验培育基与对比培育基生长的菌落大小、形状特点、指示剂反应情形等应一样；5.3.5 结论：对掌握菌培育基适用性检查的验证结果进行评判和总结；6. 变更和偏差处理：验证过程中假如显现偏差和变更,应立刻通知验小组对偏差和变更进行具体记录,分析偏差产生的根本缘由并提出解决方法；全部偏差和变更得到有效处理后,验证方可进入下一步骤；偏差处理单和变更单经过批准后其原件必需附在验证报告中；见附件 4；7. 验证结果评定及结论：质量部负责收集各项验证试验结果,起草验证报告,报验证委员会；第 6 页 共 12 页名师归纳总结 - - - - -

16、- -第 7 页,共 13 页精选学习资料 - - - - - - - - - 培育基适用性检查验证方案版本号 :00 文件编号： VMP-VV-501-00 验证委员会负责对验证结果进行综合评审,做出验证结论,发放验证证书,确认培育基适用性检查情形；见附件 5；8. 拟定再验证周期：验证小组依据验证情形,拟定再验证周期,报验证领导小组审批；会 审：第 7 页 共 12 页名师归纳总结 - - - - - - -第 8 页,共 13 页精选学习资料 - - - - - - - - - 培育基适用性检查验证方案版本号 :00 文件编号： VMP-VV-501-00 附件 1 培训人员记录表部门培

17、训人员签名日期签到日期培训师签名第 8 页 共 12 页名师归纳总结 - - - - - - -第 9 页,共 13 页精选学习资料 - - - - - - - - - 培育基适用性检查验证方案版本号 :00 文件编号： VMP-VV-501-00 附件 2 养分琼脂计数培育基结果养分琼脂养分琼脂对比回收率菌落观看情形试验菌菌落数菌落数大肠埃希1 1 回收率菌落观看情形2 2 菌平均平均金黄色葡1 1 2 2 萄球菌平均平均枯草芽孢1 1 2 2 杆菌平均平均结果玫瑰红钠琼脂玫瑰红钠琼脂对比试验菌菌落数菌落数白色念珠1 1 2 2 菌平均平均黑曲霉1 1 2 2 平均平均验证结果评定操作人 日

18、期复核人 日期第 9 页 共 12 页名师归纳总结 - - - - - - -第 10 页,共 13 页精选学习资料 - - - - - - - - - 培育基适用性检查验证方案版本号 :00 文件编号： VMP-VV-501-00 附件 3 掌握菌检查用培育基结果项目促生长才能抑制才能指示才能胆盐乳糖培育 基胆盐乳糖对比 培育基MUG培育基MUG对比培育 基乳糖胆盐发酵 培育基乳糖胆盐发酵 对比培育基验证结果评定操作人 日期复核人 日期第 10 页 共 12 页名师归纳总结 - - - - - - -第 11 页,共 13 页精选学习资料 - - - - - - - - - 培育基适用性检查

19、验证方案版本号 :00 文件编号： VMP-VV-501-00 附件 4 偏差处理与变更记录验证项目名称 验证项目编号偏差说明：可能的缘由：偏差分类： 重大 小理由：实行措施：如需要另附文件结果：如需要另附文件建议如需要另附文件接受偏差不接受偏差理由：如需要另附文件批准人：日期：第 11 页 共 12 页名师归纳总结 - - - - - - -第 12 页,共 13 页精选学习资料 - - - - - - - - - 培育基适用性检查验证方案版本号 :00 文件编号： VMP-VV-501-00 附件 5 验证证书依据药品生产质量治理标准 2022 年版要求,对 验证；经本公司有关部门进行验证审查,结果符合 验证要求,批准使用；特发此证；验证项目名称：验证方案编码：验证完成日期：有效期：1培育基适用性检查应在当前验证条件下使用,应报验证领导小组审核,必要时重新验证；使用条件发生变更,2培育基适用性检查应按批准的标准检验和验证；批准人：年月日第 12 页 共 12 页名师归纳总结 - - - - - - -第 13 页,共 13 页