2022年生物技术制药重点总结+个人总结.docx

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1、精选学习资料 - - - - - - - - - 第一章 绪论1. 生物技术的概念,基因工程、细胞工程、发酵与酶工程、蛋白质及抗体工程及生物转化的概念； P1 生物技术 biotechnology又称生物工程 bioengineering,指人们以现代生命科学为基础,结合先进的工程技术手段和其他基础学科的科学原理,依据预先的设计改造生物体或加工生物原料,为人类生产出所需产品或达到某种目的的技术；基因工程 genetic engineering也称遗传工程,是现在生物技术的核心和主导；主要原理是应用人工方法将生物的遗传物质,通常是DNA 分别出来,在体外进行切割、拼接和重组,然后将重组了的 DN

2、A 导入某种宿主细胞或个体,从而转变它们的遗传品性； 有时仍使新的遗传信息在新的宿主细胞或个体中大量表达,以获得基因产物（多肽或蛋白质） ；（DNA 重组技术,分子杂交技术,基因操作）细胞工程 cell engineering指以细胞为基本单位, 在体外条件下进行培育、 繁衍,或人为地使细胞某些生物学特性按人们的意愿发生转变,从而达到改良生物品种和制造新品种,加速繁育动植物个体,或获得某种有用的物质的过程；发酵工程 fermentation engineering 是通过现代技术手段,利用微生物的特别功 能生产有用的物质,或直接将微生物应用于工业生产的一种技术体系；酶工程 enzyme eng

3、ineering 是利用酶或细胞所具有的特异催化功能,或对酶进 行修饰改造,并借助生物反应器和工艺过程来生产人类所需产品的一项技术；抗体工程 antibody engineering是利用细胞生物学或分子生物学手段在体外进行 遗传学操作,转变抗体的遗传特性和生物学特性,以获得具有适合人们需要的、有特定生物学特性和功能的新抗体,或建立能稳固获得高质量和产量抗体的技 术；生物转化 biotransformation也称 生物催化 biocatalysis是利用酶或有机体（细胞、细胞器）作为催化剂实现化学转化的过程,行结构性修饰所发生的化学反应；是生物体系的酶制剂对外源性底物进2. 生物技术药物 b

4、iotechnological drug 是指采纳 DNA 重组技术或其他生物技 术生产的用于预防、 治疗和诊断疾病的药物, 主要是重组蛋白或核酸类药物；生物技术药物的特性 ：（1）理化性质特性：相对分子质量大,结构复杂,稳固性差；（2）药理学作用特性：活性与作用机制明确,作用针对性强,毒性低,体内半 衰期短,有种属特异性,可产生免疫原性；（3）生产制备特性：药物分子在原料中含量低,原料液中常存在降解目标产物 的杂质,制备工艺条件温顺,分别纯化困难,产品易受有害物质污染；（4）质量掌握特性： a 质量掌握内容的特别性（质量标准：基本要求、制造、检定等；化学药物的质量标准：性状、鉴别、检查、含量

5、测定等）,b 制造项下 的特别规定, c 检定项下的特别规定；3. 生物技术制药 biotechnological pharmaceutics是指利用基因工程、酶工程、发酵工程、细胞工程、蛋白质工程等生物技术,来讨论、开发和生产用于预 防、治疗和诊断疾病的药物；其次章 基因工程制药4. 外源基因在原核生物中表达的重要调控元件 P17 A 启动子 promotor 是 DNA 链上能与 RNA 聚合酶结合并起始 mRNA 合成的一段 序列,其功能是起始目标基因 mRNA 的合成,是打算外源基因在原核生物中表 达效率的关键因素；名师归纳总结 - - - - - - -第 1 页,共 9 页精选学习

6、资料 - - - - - - - - - B 核糖体结合位点 ：SD 序列；C 终止子 ：终止子序列 terminator sequence是基因3-末端能被 RNA 聚合酶识别并停止转录功能的特定 DNA 序列；5. 外源基因在大肠杆菌中的表达方式：P18 a 胞内表达：非融合蛋白的胞内表达和融合蛋白的胞内表达,b 分泌表达：分泌至周质和分泌至胞外；6. 大肠杆菌中外源基因表达效率的影响因素 P18-P19 A 外源基因密码子, B、mRNA 结构, C 表达载体, D、外源蛋白稳固性7. 酵母表达系统的优点：高表达量,高稳固性,翻译后修饰功能,分泌表达；8. 外源蛋白在酵母表达系统中的影响

7、因素 P20 a 外源基因结构, b 表达形式及信号肽的选择,c 启动子, d 转化子的拷贝数,e 甲醇诱导浓度、时间、温度,f 外源蛋白的降解；P30 9. 基因工程药物的质量掌握与小分子药物质量掌握相比,不同的方面A 鉴别方法不同：基因工程药物的Mr 远大于小分子化学药物；B 鉴定方法不同：基因工程药物结构复杂（空间结构）,需要多种检测方法；C 杂质来源不同：基因工程药物杂质来源于宿主蛋白残留和宿主基因残留；小 分子药物杂志来源于合成过程中原料残留、合成副产物和纯化中溶剂残留；D 药物定量方面,基因工程药物定量方法一般采纳生化反应的方式；10. 基因工程药物质量掌握的项目：a 蛋白含量测定

8、、 b 蛋白纯度分析、 c 蛋白性 质测定、 d 生物学效价测定、 e 杂质分析等；1蛋白质含量测定方法：a.紫外吸取法 ：280nm 处吸取峰,优点：快速、对蛋白质无破坏性；缺点：不是 严格定量,核酸可引起强干扰；b .BCA 法：二辛可宁酸 bicinchoninic acid,在 562nm 处有最大吸取；c .Lowry 法：福林 -酚试剂,灵敏,精确度高,操作步骤多,影响因素多；d.考马斯亮兰法 ：595nm处有最大吸取；灵敏,操作简洁,抗干扰才能弱；e. SDS-PAGE 扫描分析法 ；2蛋白质纯度检测的方法： a 电泳法, b 质谱法, c 层析法, d 末端氨基酸残基分 析法；

9、 SDS-聚丙烯酰胺凝胶法（电泳法）是目前最常用的鉴定蛋白质纯度的方 法；第三章 动物细胞工程制药 动物细胞工程 animal cell engineering是指依据细胞生物学及工程学原理,定向 转变动物细胞内的遗传物质从而获得新型生物或特种细胞产品的一门学科；11体外培育动物细胞的类型 贴壁细胞；P47：贴壁依靠性细胞、非贴壁依靠性细胞、兼性12动物细胞培育的条件 P48：培育温度 25-28 度；PH 值 7.2-7.4,低于 6.8 或高于 7.6 对细胞生长不利；通氧量：CO2 培育箱；防止污染：显著污染的标志 PH值快速转变、 细胞外形模糊、 显现漂浮的细胞集落, 加入抗生素； 基

10、本养分物质；渗透压；动物细胞培育特性 ：（1）细胞比微生物细胞和植物细胞大,抗机械强度低,对剪切力敏锐, 适应环境才能差,（2）倍增时间长, 生长缓慢,（3）对培育基要求高,易受污染,加入抗生素；（4）贴壁生长,有接触抑制现象； （5）产物分泌于细胞外；13培育方式：细胞的原代培育、传代培育、细胞克隆培育 原代培育：组织块培育法和单层细胞培育法P50 组织块培育法 tissue culture 是将动物组织切成直径12mm3 小块进行培育的方名师归纳总结 - - - - - - -第 2 页,共 9 页精选学习资料 - - - - - - - - - 法；单层细胞培育法monolayer ce

11、ll culture 是将动物组织块中粘连在一起的细胞用酶法或物理分散法分散成单个细胞,制成细胞悬液,经计数、稀释后,接种于无 菌培育液中, 37C、5%CO2 空气下进行原代培育,细胞即开头生长并逐步形成 单层；细胞克隆培育法 clonal culture 即单细胞分别培育,是将动物组织分散后,将一 个细胞从群体细胞中分别出来,由单个细胞培育成纯系细胞集群；饲养细胞： 小 鼠胸腺细胞、腹腔细胞；14动物细胞培育常用的其他溶液P55：平稳盐溶液、培育基PH 调整液、细胞消化液（胰蛋白酶溶液、 EDTA 液）、抗生素溶液（青霉素、链霉素、卡那霉素、制霉菌素）；15动物细胞的大规模培育方法P59：

12、A 悬浮培育法 Maitlands culture,B 微载体培育法, C 多孔载体培育法, D 微囊化培育法, E 中空纤维培育法 hollow filer cell culture是模拟细胞在体内生长的三围状态,把细胞接种在中空纤维的外腔,利用中空纤维模拟人工毛细血管供应养分可以使细胞高密度的生长；16动物细胞生物反应器的类型P61：a 搅拌式生物反应器、 b 气升式生物反应器、 c 中控纤维式生物反应器、 d 透析袋式或膜式生物反应器、床式生物反应器、 f 一次性摇袋式细胞培育生物反应器；e 固定床或流化17动物细胞生物反应器的主要操作模式P65：a 分批式操作、 b 补料 -分批操作、

13、c 半连续式操作、 d 灌流式操作、 e 连续式操作；18转基因动物制作方法 P67：a 基因显微注射法、 b 反转录病毒感染法、 c 胚胎 干细胞法、 d 精子载体导入法、 e 基因打靶法、 f 酵母人工染色体法；转基因动物 transgenic animal：采纳基因工程技术把外源目的基因导入动物生殖 细胞、胚胎干细胞和早期胚胎, 并在受体动物的染色体上稳固整合,再经过发育途径把外源目的基因稳固地传给子代,物；通过这项技术所获得的动物即使转基因动19细胞核移植技术 nuclear transplantation 是指一个动物的细胞核移植至去核的卵细胞中,产生与供细胞核动物的遗传成分一样的动

14、物的技术；P73 第四章 抗体工程制药20抗体工程制药 antibody engineering pharmaceutics 是指利用基因工程、细胞工程和转基因动物及转基因植物技术生产抗体药物的过程；P78 单克隆抗体 monoclonal antibody, mAb 简称单抗, 是由一个 B 细胞和一个骨髓瘤细胞融合而成的杂交瘤细胞合成及分泌的抗单一抗原表位的特异性抗体；21单克隆抗体及其制备原理（主要是懂得）P79 22抗体的结构 P81：4 条多肽链（ 2 条相同的重链和 硫键连接而成,为“Y” 字形结构；2 条相同的轻链）通过二23杂交瘤细胞的选择 P90：HAT 选择性培育基；24噬

15、菌体抗菌库技术的选择方法 P105：（ 1）固相或液相 纯化抗原的选择 ：a将纯化抗原包被在固相介质上（酶标板、免疫试管、亲和层析柱）,然后加入待选择的噬菌体,洗去非亲和性或低亲和性的噬菌体,回收高亲和性的噬菌体；b将抗原与生物素集团相连, 再将其结合在包被有链亲和素的磁珠上对噬菌体进行选择；（2）全细胞选择,（3）用切片组织进行选择名师归纳总结 第五章疫苗及其制备技术第 3 页,共 9 页- - - - - - -精选学习资料 - - - - - - - - - 本章内容主要以老师的课件为主 疫苗 vaccine 是由病原微生物本身制备而成的抗病制剂,广义的疫苗包括细菌、病毒和立克次体等病原

16、微生物制成的疫苗,注射或黏膜途径接种后使机体产生抗体或致敏淋巴细胞,达到特异性免疫的成效,使机体获得爱护或毁灭该致病原；25毒株须具备的条件：（1）持有特定的抗原性；（2）有典型的外形和感染特定组织的特性,并能保持其生物学特性；（3）易在特定组织中大量繁衍；（4）不产生神经毒素或能引起机体损害的其它毒素；（5）如制备活疫苗,繁衍过程中无复原原致病性的现象；（6）未被其它病毒污染；强毒种的选育：（1、强毒种来源：典型传染病分别培育 ;保藏中心供应；（2、强毒种分别： A、纯粹试验（分别培育、鉴定） ；B、致病力（动物、鸡胚、细胞试验） ；C、抗原性（免疫及反应抗原试验） ；D、稳固性（传代不变异

17、） ；达到：毒力强,纯粹,抗原好,稳固的菌种,最终冻干保藏；这就是强毒菌种的标准；（3.复壮：弱毒菌种在敏锐动物或细胞上多次传代,达到毒力增强的目的 弱毒种的选育：（1、来源：自然界选择和人工诱变；（2、弱毒选择途径：初选的依据：生物性状转变；26活疫苗（ live vaccine）：选用无毒或弱毒但免疫原性高的菌种,经培育、繁 殖后制成的；死疫苗（killed vaccine）：包括灭活疫苗 （由完整的病毒或细菌经灭活剂灭活后制 成,即要使病原体充分死亡, 丢失感染性或毒性和致病性, 又要保留其免疫原性）和 亚单位疫苗（将病原体经物理或化学方法处理,除去无效物质,提取其有效抗原部分制备的一类

18、疫苗）活疫苗与死疫苗的特点活疫苗特点：死疫苗特点：可在体内繁衍 不能在体内繁衍,性质稳固,安全性高系统免疫反应和局部免疫反应 免疫力长久,产量高,成本低有利于制备多价或多联疫苗 比较安全, 不发生全身性副反应, 无毒力有毒力增强和反祖危急 反祖现象抗原干扰现象 受外界影响小,有利于储存运输储存条件苛刻 免疫剂量大,需多次免疫,成本高多数只需免疫一次,接种剂量小；只能诱导机体产生体液免疫 通常需要用佐剂或携带系统来增强其免 疫成效27疫苗的质量检测：（1外观检查：（2pH 值检测：（3纯度：（4宿主细胞 DNA 和蛋白残留量检测：（ 5.无菌检查：（ 6热原或细菌内毒素检查：（7抗生素检测：（8

19、灭活成效的验证：（9反常毒性检查：（10稳固性试验：（11效力试验（生物效价）：（12佐剂的质量评判：（13疫苗标准品或参考品的讨论：名师归纳总结 - - - - - - -第 4 页,共 9 页精选学习资料 - - - - - - - - - 28多糖的纯化方法： A 乙醇沉淀法（最常用） ,B 分级沉淀法（用不同浓度的 有机溶剂分级沉淀分子大小不同的粘多糖）,C 季铵盐络合法, D 离子交换层析 法, E 凝胶过滤法 29粘多糖的生物学特性： 粘多糖是指含有氨基糖和糖醛酸或它的衍生物的多糖；第六章 酶工程制药30酶的催化的显著特点P150：A 催化效率高, B 具有专一性,C 催化作用在体

20、内受到调剂掌握 区分于一般催化剂的重要特点 ,D 不稳固性；31酶分别纯化的一般程序 及 酶原料选择的依据 P153 一般程序：（1,、原材料的选择和预处理：选择含目的酶丰富的原料,（2、酶的分别,（3、酶的精制,（4、酶的浓缩干燥及结晶；32传统的酶固定化方法 P155：（1、载体结合法：物理吸附法、离子结合法、共价结合法,（2、交联法 cross-linking method：是利用双功能或多功能交联试剂,在酶分子和交联试剂之间形成共价键的酶的固定化方法,常用交联剂戊二醛、己二胺等；（3、包埋法 entrapment method :是载体与酶溶液混合后, 借助引发剂进行聚合反应,通过物理

21、作用将酶固定在载体的网格中,从而实现酶固定化的方法； 有网格型和微囊型；常用载体有明胶、聚酰胺、琼脂等；固定化酶 immobilized enzyme 或固定化细胞 immobilized cell 是将具有肯定生理 功能的酶或生物细胞, 用物理或化学方法将其固定, 作为固体生物催化剂而加以利用的一种技术；33固定化酶的性质和指标以及其优缺点（1、固定化后活力的转变（增强） ,P159：（2、固定化对酶稳固性的影响：热稳固性提高,对有机试剂及酶抑制剂的稳固 性提高,对 PH、蛋白酶、贮存和操作条件的稳固性提高,（3、固定化酶的最适温度变化：提高,（4、固定化酶的最适 PH 值变化：用带负电荷载

22、体,最适 正电荷载体最适 PH 向酸性偏移；PH 向碱性偏移；用带（5、固定化酶的米氏常数 Km 变化：中性载体, Km 上升；底物与载体电荷相同, Km 增加；底物与载体电荷相反,Km 减小；高级结构变化及载体影响引起酶与底物亲和力变化, 从而 Km 变化,Km 仍受离子强度的影响, I 上升,Km 变化逐步缩小甚至消逝；（6、固定化酶的指标： A 固定化酶的活力, B 偶联率及相对活力的测定,C 固定化酶的半衰期, D 固定化酶的热稳固性34酶反应器的基本类型P162：a 搅拌罐式反应器, b 鼓泡式反应器,c 膜反应器, d 喷射式反应器, e 填充床式反应器, f 流化床式反应器35酶

23、传感器的主要类型P162：A 酶电极, B 热敏电阻酶传感器,C 离子敏场效应晶体管酶传感器,D 光纤酶传感器36酶反应器的性能评判 P166：A 固定化酶的外形, B 底物的物理性质, C 固定化酶稳固性, D 酶反应动力学特性；参数：空时、空数、转化率、生产强度；名师归纳总结 37酶反应器应用的留意事项P169：保持酶反应器的操作稳固性,保持酶反应第 5 页,共 9 页器中流体的流淌方式和状态,防止酶的变性,防止微生物的污染；38酶分子的定向进化P173：定向进化 directed evolution 和杂合进化 hybrid evolution 是非理性化设计；- - - - - - -

24、精选学习资料 - - - - - - - - - 酶分子的体外定向进化 directed molecular evolution in vitro of enzyme 是指不 需要明白酶的空间结构和催化机制,而是人为地制造特别的进化条件,模拟自然 进化机制, 在体外对酶基因进行改造, 并定向选择、 获得具有某些预期特点的进 化酶；酶分子体外定向进化的策略：随机突变、同源改组、非同源改组、结构域 改组；39突变酶的概念 P172：突变酶 mutational enzyme 是指采纳基因工程技术对自然酶基因进行剪切、修饰或突变,通过表达修改的基因获得的在酶学性质上符合需要的酶；抗体酶 abzyme

25、又称催化抗体,是一类免疫系统产生的、具有催化活性的抗体；40酶的化学修饰 chemical modification of enzyme利用化学手段将某些化学物 质或集团结合到酶分子上, 或将酶分子的某部分删除或置换,转变酶的理化性质 和生物活性,这种应用化学方法对酶分子进行改造的技术称为酶的化学修饰；方法： a 交联技术（戊二醛交联剂） 、b 定点突变和化学修饰结合技术、c 用小分 子化合物的修饰、 d 用单功能聚合物的修饰 （PEG常用化学修饰剂, 提高稳固性、降低免疫原性）、e 引入帮助因子；P177 第七章 发酵工程制药 41发酵工程的概念 fermentation engineeri

26、ng又称微生物工程,是将微生物学、生物化学和化学工程学的基本原理有机的结合,利用微生物的特定外形, 通过现 代工程技术在生物反应器中生产工业原料和工业产品并供应服务的一种技术体 系；生物技术的四大支柱： 发酵工程、基因工程、 细胞工程和酶工程；P188 42发酵的定义：发酵 fermentation 泛指利用微生物制造或生产某些产品的过程；即发酵是用生物 催化剂使培育物质转化成产品的生物化学反应；生物催化剂 biocatalyst 是细菌、放线菌、真菌或其解体产物（如酶）和动植物细胞等；P188 43发酵工程制药的基本过程：上游工程、发酵生产、下游工程；P205 44微生物发酵生产药物的分类：

27、 （1 抗生素类,（2 氨基酸类,（3 核苷酸类,（4维生素类,（5 甾体类激素,（6 多糖类,（7 治疗酶及酶抑制剂；P190 45优良菌种的选育P195 抱负的工业发酵菌种的要求：a 遗传性状稳固； b 生长速度快,不易污染； c 目标产物产量尽可能接近理论转 化率；d 目标产物最好分泌到胞外； e尽可能削减类似物的产量； f 其所利用生长 的培育基成分简洁、价格低廉；菌种选育：体会育种方法有自然选育、诱变育种、杂交育种等；定向育种方法有 掌握杂交育种、原生质体融合、基因重组等；（1 自然选育 natural screening：微生物不经人工处理可以发生自发突变,利用微生物在肯定条件下产

28、生自发突变的原理,通过分别、 选择排除衰退型菌株, 从中选出维护或高于原有生产水平菌株的过程；（2 定向培育 directive breeding 是指为了获得某些需要性状的品系,在肯定的环 境条件下长期处理某一微生物群体,同时不断移种, 从而积存和选择合适的自发突变体的育种方法；（3诱变育种 mutation breeding 是利用物理或化学诱变剂处理匀称分散的微生物 细胞群,促使其突变率大幅度提高, 然后采纳简便、 快速和高效的选择方法从中 选择出少数符合育种目的的突变株；优点：方法简洁、快速和收效显著,是目前 主要的育种方法之一,在生产中得到广泛的应用；名师归纳总结 - - - - -

29、 - -第 6 页,共 9 页精选学习资料 - - - - - - - - - （4 杂交育种 hybridization breeding 指利用真核微生物的有性生殖或准性生殖,或原核生物的接合、 转化和转导等过程, 促使两个具不同遗传性状的菌株进行遗传物质交换和基因重组, 以获得优良性能或新的品种的生产菌株；是重要的微生物育种手段,具有强的方向性或目的性；（5 原生质体融合 protoplast fusion 又称细胞融合 cell fusion,指通过人工手段,使遗传性状不同的两个细胞的原生质体发生融合,并产生重组子的过程； 是工业微生物育种的重要手段, 可使一些未发觉有转化、 转导和接

30、合现象的原核生物之 间及微生物种、属、科间甚至更远缘的微生物细胞间进行融合,获得新物种；菌种保藏：选典型菌种的优良纯种,最好保藏休眠体（分生孢子、芽孢）；制造 条件使之成休眠状态；多种不同的手段保藏同一菌种；保藏方法：a.斜面低温保藏法： 4 度冰箱, 16 个月,适用各类菌种,简便、存活率高,保 藏期短、代传次数多、易变异和污染；b.石蜡油封存法： 低温 4C/室温、阻氧、灭菌,1-2 年中期保藏, 适用各大类菌种,不适于分解烃类菌种；c.砂土管保藏法： 4C/室温,灭菌干燥真空密封,隔氧、无养分,110 年,常用的长期保藏法, 适于产孢子的微生物及行成芽孢的细菌,菌；不适于对干燥敏锐的细d

31、.麸皮保藏法：曲法保藏,低温干燥,1 年以上,适于产孢子的霉菌及放线菌,工厂采纳较多；e.甘油悬液保藏法： -20 度,0.51 年；-70 度, 10 年；基因工程菌常用保藏法；f.冷冻真空干燥保藏法：冻干法,515 年,适于各类微生物,目前被广泛采纳；g.液氮超低温保藏法： -196 度,15 年以上,适用于各类微生物,是目前公认的最 有效的长期保藏技术之一；h.宿主保藏法：适于专性活细胞寄生微生物（病毒、立克次体）；46发酵设备：发酵罐的基本类型有搅拌釜反应器、鼓泡式反应器、气升式反应器；发酵帮助设备：无菌空气系统、灭菌系统、发酵车间的管道及阀门等；P200 47发酵过程中的中间分析项目

32、：P210 （1、产物产量：通过监测产物产量判定发酵结果,化学测定法；（2、PH 值：代谢产物影响培育液pH 值,通过培育基中的组分维护合适的pH值,或通过人工方法进行调剂；（3、糖：糖的消耗反应菌体代谢活力的变化；通过糖量测定,间接估量产物生 物合成效率；（4、氨基氮：通过测定游离氨基酸的数值,侧面反应微生物含氮物质的代谢,估量发酵情形；（5、菌丝外形：通过检测菌丝外形,监测微生物生长状态,准时调整发酵策略；48发酵过程的影响因素及掌握：P211 ;b（1、菌体浓度 的影响及掌握：菌体浓度是指单位体积培育液中的菌体含量；菌体浓度对发酵产物的影响：a 适当生长速率下,产物的产率和菌体浓度成正比

33、菌体浓度过高,使养分物质消耗过快,有毒物质积存,溶解氧削减,抑制产物生 成;c 菌体浓度过低,产物生成削减；菌体浓度的掌握： 通过掌握培育液中养分基质的浓度；基础培育基各成分要有适名师归纳总结 当配比；通过中间补料调整培育基成分,如当菌体浓度太低时, 可补加一部分磷第 7 页,共 9 页- - - - - - -精选学习资料 - - - - - - - - - 酸盐和碳源促进生长；（2、养分物质 对发酵的影响及掌握：a 碳源：速效碳源：快速被利用,有利于菌体生长,如葡萄糖、枸橼酸；迟效碳 源：缓慢被利用,有利于次生代谢产物的合成,如淀粉多糖、乳糖、油脂；常用含有两种碳源的培育基进行掌握；B 氮

34、源：速效氮源：快速被利用,有利于菌体生长,如玉米浆,氨基态氮的氨基酸；迟效氮源：缓慢被利用,有利于次生代谢 产物的合成,如黄豆饼粉；用含有两种氮源的培育基进行掌握；C 磷酸盐：对初 级代谢产物,磷酸盐通过促进细菌生长对产物生成进行调剂；对次级代谢产物,常采纳生长亚适量的磷酸盐,提高产物生成；D 补料的掌握：在发酵过程中,通常补加基质和前体,促进产物合成；作用：防止菌体过度衰老,使产物合成期延 长；掌握 pH 值和代谢方向；补足发酵液体积,改善通气；（3 温度的影响及掌握：发酵热 =生物热 +搅拌热 -蒸发热 -辐射热 -显热 影响： a 影响酶的反应速率； b 影响代谢调控机制； c 通过转变

35、发酵液的物理性质影响产物合成；温度的掌握：A 在发酵不同阶段,采纳不同温度:初期提高温度,促进菌体生长 ;中期降低温度, 促进产物合成 ;后期提高温度, 节约发酵时间；B 针对不同条件,采纳不同温度：通气差,培育基淡薄时,降低温度；通气好,培育基影响丰富时,上升温度；菌体生长快时,维护较短时间高温；菌体生长慢 时,维护较长时间高温；（4、PH 值的影响及掌握：对发酵的影响：影响酶的活性；影响膜通透性；影 响中间成分和代谢物的解离；转变代谢途径；碳源过多, pH ；氮源过多, pHPH 的掌握： a调剂培育基组分,增加缓冲体系；的影响及掌握：需氧发酵,溶氧最易成为限制因素b 补料； c 补加酸碱

36、；（5、溶氧；溶解氧作为发酵中氧是否足够的度量；发酵过程中,应保持在临界氧浓度以上；溶解氧的变化及缘由：A 反常下降的缘由： a 染好气性杂菌、 b 菌体代谢反常、 c 机械设备故障、 d 掌握系 统变化； B 反常上升的缘由：污染烈性噬菌体；溶氧的掌握：a 调剂搅拌转速和 通气率, b 掌握菌体浓度,使细菌比生长速率略高于临界值（菌体浓度增加,导 致耗氧量增加,氧传递速率削减） ；（6、CO2 的影响及掌握： CO2 对发酵的影响： a CO2 及 HCO3-影响细胞膜的结构：浓度过高将降低细胞膜的运输效率,抑制细胞生长；b 降低发酵液 pH 值,使溶氧下降等； CO2 的掌握： a 掌握通

37、气量、 b 掌握搅拌速度、 c 掌握补料工艺；（7 泡沫的影响及掌握：泡沫对发酵的影响：a 降低生产才能、 b 引起“ 逃液” 、c 影响细菌呼吸、 d 使发酵液菌体量削减、 e 增加染菌机会、 f 消泡剂带来提取工 艺的困难；泡沫的排除： a 机械消沫； b 消泡剂消沫（8、染菌 对发酵的影响：染菌的危害： a 影响产量和产品质量、 b 倒罐、c 停产；掌握： a 设备无渗漏、 b 管道系统无渗漏、 c 空气净化系统正常；第八章 微生物转化 P242-243 49微生物转化的概念、反应类型及应用实例 微生物转化 microbial transformation 是微生物通过酶催化将一种物质（

38、底物）转化为另一种物质（产物）的化学反应；类型：（1 氧化反应：工业上大规模生产葡萄糖酸主要采纳微生物转化；氯霉素 的微生物氧化反应；（2 仍原反应：组氨酸的微生物仍原反应； （3 水解反应：酯名师归纳总结 的水解、苷的水解、硫醚开裂等； （4 缩合反应：制备麻黄碱中间体1-苯基 -1-羟第 8 页,共 9 页- - - - - - -精选学习资料 - - - - - - - - - 基丙酮；（5 其他反应：间型霉素 B 的微生物胺化反应；这一章老师没过多的说,估量不会有问答题；第九章 蛋白质药物的化学修饰50蛋白质化学修饰的概念及内容 P279 蛋白质的化学修饰 chemical modif

39、ication of protein：凡是通过基团的引入或去 除而使蛋白质一级结构发生转变的过程；包括侧链基团转变和主链结构转变；51化学修饰剂选择的一般原就 P281 a 修饰剂毒性、抗原性、稳固性 b 修饰剂反应活性及对修饰位点的选择性 c 修饰剂与蛋白质连接键的稳固性 d 修饰剂对蛋白构象及生物活性的影响 e 是否适于建立快速、便利的分析、分别纯化方法 f 修饰剂是否价廉易得52蛋白质化学修饰的意义：（课件：重点记忆）P280 1 循环半衰期延长 2 增大分子量,防止肾小球滤过 3 免疫原性降低或消逝,毒副作用削减 4 物理、化学和生物稳固性增强 5 增加药物溶解度,延长体内水解时间 5

40、3修饰策略 P281 随机修饰（ random modification）：氨基（游离赖氨酸残基-NH2）. 定点修饰（site specific modification）:针对特定基团或专一位点进行修饰,有利于保持蛋白质药物活性,质量易控；氨基（ N-末端-NH2）、巯基（ -SH 高亲和性）、羧基（ -COOH）54、聚乙二醇化修饰：（1）PEG 优势：a 无毒性、两亲性、无抗原性、强生物相容性；b 为防止在修饰过程中发生交联和团圆,常采纳单甲氧基聚乙二醇（2）选择 PEG 需考虑因素：mPEG 衍生物作为修饰剂；a PEG的 Mr：Mr 越大,蛋白活性、免疫原性越低,稳固性越高、半衰期

41、越长；b 选择非活性部位氨基酸残基作为修饰位点：定点修饰优于随机修饰；c 水解稳固性及反应活性：pH 掌握；（3）定点修饰 -氨基修饰：A、N 末端-NH2 的定点修饰（烷基化修饰） ：-NH2 一般具有较小的pKa 值,同时醛只与伯胺偶联B 定点突变去余外的氨基后修饰：去除赖氨酸-NH2 C 爱护剂定点爱护与脱爱护修饰：9-芴甲氧羰基（ FMOC）、叔丁氧羰基（ BOC）D 氧化去氨基反应后修饰：磷酸吡哆醛 PLP、PEG-酰肼或 PEG-氧氨成腙；（4）PEG末端 -OH 是其功能基团,但反应活性较差,须经活化后方可用；活化剂：氰脲酰氯、 溴化氰、N-羟基琥珀酰亚胺、 羰基二咪唑、 苯基氯甲酸酯等；第十章 新型生物技术制药 反义核酸（ antisense nucleic acid）：能够与 DNA 或 mRNA 发生特异性结合,分别阻断核酸的转录或翻译功能,阻挡与病理过程相关的核酸或蛋白质的生物合成；这种可与 DNA 或信使 RNA 结合的互补链称作反义核酸；名师归纳总结 核酶（ rybosyme）：具有生物催化功能的RNA ；第 9 页,共 9 页- - - - - - -