2022年经典实验室常用缓冲液配置方案.docx
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1、精选学习资料 - - - - - - - - - 试验室常用缓冲液配置方案11 M Tris-HCl pH7.4, 7.6, 8.0 组份浓度: 1 M Tris-HCl 配制量: 1 L 配制方法:1. 称量 121.1 g Tris 置于 1 L 烧杯中;2. 加入约 800 ml 的去离子水,充分搅拌溶解;3. 按下表量加入浓盐酸调剂所需要的 pH 值;PH 浓 HCl 值7.4 约 70ml 7.6 约 60ml 8.0 约 42ml 4. 将溶液定容至 1 L;5. 高温高压灭菌后,室温储存;留意:应使溶液冷却至室温后再调定pH 值,由于 Tris 溶液的 pH 值随温度的变化差异很
2、大,温度每上升 1,溶液的 pH 值大约降低 0.03个单位;210 TE BufferpH7.4, 7.6, 8.0 组份浓度: 100 mM Tris-HCl, 10 mM EDTA 配制量: 1 L 配制方法:1. 量取以下溶液,置于 1 L 烧杯中;1M Tris HCl Buffer 100ml PH7.4,7.6, 8.0500mM EDTAPH8.0 20ml 2. 向烧杯中加入约 800 ml 的去离子水,匀称混合;3. 将溶液定容至 1 L 后,高温高压灭菌;4. 室温储存;31.5 M Tris-HCl pH8.8 组份浓度: 1.5 M Tris-HCl 配制量: 1 L
3、 配制方法:1. 称量 181.7 g Tris 置于 1 L 烧杯中;2. 加入约 800 ml 的去离子水,充分搅拌溶解;3. 用浓盐酸调剂 pH 值至 8.8;4. 将溶液定容至 1 L;5. 高温高压灭菌后,室温储存;名师归纳总结 - - - - - - -第 1 页,共 12 页精选学习资料 - - - - - - - - - 留意:应使溶液冷却至室温后再调定pH 值,由于 Tris 溶液的 pH 值随温度的变化差异很大,温度每上升 1,溶液的 pH 值大约降低 0.03个单位;43 M 醋酸钠 pH5.2 组份浓度: 3M 醋酸钠 配制量: 100ml 配制方法:1.称量 40.8
4、g NaAc 3H2O 置于 100-200ml 烧杯中,加入月 2.加入冰醋酸调剂 pH 值至 5.2 3.加去离子水将溶液定容至 100ml 4高温高压灭菌后,室温储存;5PBS Buffer 40ml 的去离子水搅拌溶解组份浓度: 137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 10 mM Na2HPO4, 2 mM KH2PO4 配制量: 1 L 配制方法:1. 称量以下试剂,置于 1 L 烧杯中;NaC 8g l KCl 0.2g Na2 1.42g HPO4KH 2 0.27g PO42. 向烧杯中加入约 800 ml 的去离子水,充分搅拌溶解;3. 滴加浓盐酸将pH 值调剂至
5、7.4,然后加入去离子水将溶液定容至1 L;4. 高温高压灭菌后,室温储存;留意:上述 PBS Buffer 中无二价阳离子,如需要,可在配方中补充 1 mM CaCl2 和0.5 mM MgCl2 ;610 M 醋酸铵 组份浓度: 10 M 醋酸铵 配制量: 100 ml 配制方法:1. 称量 77.1 g 醋酸铵置于 100200 ml 烧杯中,加入约 2. 加去离子水将溶液定容至 100 ml ;3. 使用 0.22 mm 滤膜过滤除菌;4. 密封瓶口于室温储存;留意:醋酸铵受热易分解,所以不能高温高压灭菌;7苯酚 /氯仿 /异戊醇 25 : 24 : 1 配制方法:30 ml 的去离子
6、水搅拌溶解;1. 说明: 从核酸样品中除去蛋白质经经常使用苯酚 /氯仿 /异戊醇 25 : 24 : 1;氯仿可使蛋白质变性并有助于 液相与有机相的别离,而异戊醇就有助于排除抽提过程中显现的气泡;2. 配制方法:将Tris-HCl 平稳苯酚与等体积的氯仿/异戊醇 24 : 1混合匀称后,移入棕色玻璃瓶中4保存;名师归纳总结 - - - - - - -第 2 页,共 12 页精选学习资料 - - - - - - - - - 810 W/V SDS 组份浓度: 10 W/VSDS 配制量: 100ml 配制方法:1.称量 10g 高纯度的 SDS 置于 100-200ml 烧杯中,加入约 80ml
7、 的去离子水, 68加入溶解 2.滴加浓盐酸调剂 pH 值至 7.2 3.将溶液定容至 100ml 后,室温储存;92 N NaOH 组份浓度: 2 N NaOH 配制量: 100 ml 配制方法:1. 量取 80 ml 去离子水置于 100200 ml 塑料烧杯中 NaOH 溶解过程中大量放热,有可能使玻璃烧杯炸裂 ;2. 称取 8 g NaOH 当心地逐步加入到烧杯中,边加边搅拌;3. 待 NaOH 完全溶解后,用去离子水将溶液体积定容至 100 ml ;4. 将溶液转移至塑料容器中后,室温储存;10 2.5 N HCl 组份浓度: 2.5 N HCl 配制量: 100 ml 配制方法:1
8、. 在78.4 ml 的去离子水中加入 2. 室温储存;115 M NaCl 组份浓度: 5 M NaCl 配制量: 1 L 配制方法:21.6 ml 的浓盐酸 11.6 N,匀称混合;1. 称取 292.2 g NaCl 置于 1 L 烧杯中,加入约 800 ml 的去离子水后搅拌溶解;2. 加去离子水将溶液定容至 1 L 后,适量分成小份;3. 高温高压灭菌后,4储存;1120 W/V Glucose 组份浓度: 20 W/V Glucose 配制量: 100 ml 配制方法:1. 称取 20 g Glucose 置于 100200 ml 烧杯中,加入约2. 加去离子水将溶液定容至 100
9、 ml ;3. 高温高压灭菌后,4储存;12 SolutionI 质粒提取用 80 ml 的去离子水后,搅拌溶解;组份浓度: 25 mM Tris-HCl pH8.0, 10 mM EDTA, 50 mM Glucose 配制量: 1 L 配制方法:1. 量取以下溶液,置于 1 L 烧杯中;1M 25ml Tris-HCl PH8.0名师归纳总结 0.5M EDTA20ml 第 3 页,共 12 页- - - - - - -精选学习资料 - - - - - - - - - PH8.02045ml Glucose 1.11MdH 2O 910ml 2. 高温高压灭菌后,4储存;3. 使用前每 5
10、0 ml 的 Solution I 中加入 2 ml 的 RNase A20 mg/ml ;13 SolutionII 质粒提取用 组份浓度: 200mM NaOH ,1 W/VSDS 配制量: 500ml 配制方法:1.量取以下溶液,置于 500ml 烧杯中 10 SDS 50ml 2N NaOH 50ml 2.加灭菌水定容至 500ml,充分混匀 3.室温储存,此溶液储存时间最好不要超过一个月 留意: SDS 易产愤怒泡,不要猛烈搅拌14 SolutionIII 质粒提取用 组份浓度: 3 M KOAc, 5 M CH3COOH 配制量: 500 ml 配制方法:1. 称量以下试剂,置于
11、500 ml 烧杯中;KOAc 147g CH3COOH 57.5ml 2. 加入 300 ml 去离子水后搅拌溶解;3. 加去离子水将溶液定容至 500 ml ;4. 高温高压灭菌后,4储存;15 0.5 M EDTApH8.0 组份浓度: 0.5 M EDTA 配制量: 1 L 配制方法:称取 186.1 g Na2EDTA 2H2O ,置于 1 L 烧杯中;2. 加入约 800 ml 的去离子水,充分搅拌;3. 用 NaOH 调剂 pH 值至 8.0约 20 g NaOH ;留意: pH 值至 8.0时, EDTA 才能完全溶解;4. 加去离子水将溶液定容至 1 L;5. 适量分成小份后
12、,高温高压灭菌;6. 室温储存;16 1 M DTT 组份浓度: 1 M DTT 名师归纳总结 - - - - - - -第 4 页,共 12 页精选学习资料 - - - - - - - - - 配制量: 20 ml 配制方法:1. 称取 3.09 g DTT ,加入到 50 ml 塑料离心管内;2. 加20 ml 的0.01 M NaOAc pH5.2 ,溶解后使用 0.22 mm 滤器过滤除菌;3. 适量分成小份后,-20储存;17 10 mM ATP组份浓度: 10 mM A TP 配制量: 20 ml 配制方法:1. 称取 121 mg Na2ATP3H2O,加入到 50 ml 塑料离
13、心管内;2. 加20 ml 的25 mM Tris-HCl pH8.0 ,搅拌溶解;3. 适量分成小份后,-20储存;一 .常用贮液与溶液1mol/L 亚精胺 Spermidine: 溶解 2.55g 亚精胺于足量的水中,使终体积为 10ml;分装成小份贮存于-20;1mol/L 精胺 Spermine:溶解 3.48g 精胺于足量的水中,使终体积为 10ml;分装成小份贮存于-20;10mol/L 乙酸胺 ammonium acetate:将 77.1g 乙酸胺溶解于水中,加水定容至 过滤除菌;1L 后,用 0.22um 孔径的滤膜10mg/ml 牛血清蛋白 BSA:加 100mg 的牛血清
14、蛋白组分V 或分子生物学试剂级,无DNA 酶于 9.5ml水中为削减变性,须将蛋白加入水中,而不是将水加入蛋白,盖好盖后,轻轻摇动,直至牛血清蛋白完全溶解为止;不要涡旋混合;加水定容到 10ml,然后分装成小份贮存于-20;1mol/L 二硫苏糖醇 DTT :在二硫苏糖醇 5g 的原装瓶中加 32.4ml 水,分成小份贮存于-20;或转移 100mg的二硫苏糖醇至微量离心管,加 0.65ml 的水配制成 1mol/L 二硫苏糖醇溶液;8mol/L 乙酸钾 potassium acetate:溶解 78.5g 乙酸钾于足量的水中,加水定容到 100ml;1mol/L 氯化钾 KCl :溶解 7.
15、46g 氯化钾于足量的水中,加水定容到 100ml ;3mol/L 乙酸钠 sodium acetate:溶解 40.8g 的三水乙酸钠于约 90ml 水中,用冰乙酸调溶液的 pH 至5.2,再加水定容到 100ml;0.5mol/L EDTA: 配制等摩尔的 Na2EDTA 和 NaOH 溶液 0.5mol/L ,混合后形成 EDTA 的三钠盐;或称取 186.1g的 Na2EDTA 2H2O 和 20g 的 NaOH,并溶于水中,定容至 1L;1mol/L HEPES :将 23.8gHEPES 溶于约 90ml 的水中,用 NaOH 调 pH 6.8-8.2,然后用水定容至 100ml;
16、1mol/L HCl :加 8.6ml 的浓盐酸至 91.4ml 的水中;25mg/ml IPGT :溶解 250mg 的 IPGT异丙基硫代 -D- 半乳糖苷于 10ml 水中,分成小份贮存于-20;1mol/LMgCl2: 溶解 20.3g MgCl2 6H2O 于足量的水中,定容到 100ml;100mmol/L PMSF:溶解 174mg 的 PMSF苯甲基磺酰氟于足量的异丙醇中,定容到 10ml;分成小份并用铝箔将装液管包裹或贮存于 -20;20mg/ml 蛋白酶 Kproteinase K :将200mg 的蛋白酶 L 加入到 9.5ml 水中, 轻轻摇动, 直至蛋白酶 K 完全溶
17、解;不要涡旋混合;加水定容到 10ml,然后分装成小份贮存于-20;10mg/mlRnase无 DNase DNasefree RNase:溶解 10mg 的胰蛋白 RNA 酶于 1ml 的 10mmol/L 的乙酸钠水溶液中pH 5.0;溶解后于水浴中煮沸 贮存;配制过程中要戴手套15min,使 DNA 酶失活;用 1mol/L 的 Tris HCl 调 pH 至 7.5,于 -20名师归纳总结 5mol/L 氯化钠 NaCl:溶解 29.2g 氯化钠于足量的水中,定容至100ml;,氢氧化钠完全溶第 5 页,共 12 页10N 氢氧化钠 NaOH:溶解 400g 氢氧化钠颗粒于约0.9L
18、水的烧杯中磁力搅拌器搅拌- - - - - - -精选学习资料 - - - - - - - - - 解后用水定容至 1L;10SDS十二烷基硫酸钠 :称取 100gSDS 渐渐转移到约含 全溶解;用水定容至 1L;0.9L 的水的烧杯中,用磁力搅拌器搅拌直至完2mol/L 山梨糖醇 Sorbitol :溶解 36.4g 山梨糖醇于足量水中使终体积为 100ml;100三氯乙酸 TCA :在装有 500gTCA 的试剂瓶中加入 100ml 水,用磁力搅拌器搅拌直至完全溶解;稀释液应在临用前配制2.5 Xgal5-溴-4- 氯-3- 吲哚 -半乳糖苷:溶解 25mg 的 X gal 于1ml 的二
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- 2022 经典 实验室 常用 缓冲液 配置 方案
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