2022年酶活力计算公式.docx

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1、精选学习资料 - - - - - - - - - 固态发酵漆酶活性测定：酶液制取： 5g 发酵样品以 1:20W/V 比例用蒸馏水悬浮, 200 r/min 摇 3h,之后 5000 r/min 离心 20min；上清用 0.45 m 滤纸过滤,于 -20储存滤液,取能整除的滤液体积用于漆酶活性测定； 酶活反应体系 3.0mL2.3mL 0.2mol/L醋酸- 醋酸钠缓冲液； pH=4.5 0.5mL 粗酶液稀释液； 0.2mL 1mmol/L 的 ABTS420nm处测定吸光值的变化；此试验固态发酵漆酶活性运算公式：U/gNV 总OD420103100mLV酶36000TL0.5mL5gN：

2、酶液稀释倍数 V总: 漆酶酶活测定反应体体系的终体积mLV 酶: 反应添加的酶液体积 mL OD420: t 时间内反应液在 420nm 处吸光度的增加值 36000: 420nm处 ABTS 氧化态的摩尔吸光系数 L/molcm T：反应时间 minL 为比色皿的直径 cm；100mL/0.5mL 5g：固态变成液态的稀释倍数名师归纳总结 - - - - - - -第 1 页,共 6 页精选学习资料 - - - - - - - - - 液态发酵漆酶活性测定：酶活反应体系 3.0mL2.3mL 0.2mol/L醋酸- 醋酸钠缓冲液； pH=4.5 0.5mL粗酶液稀释液； 0.2mL 1mmo

3、l/L 的 ABTSU /gNV总OD420103V 酶36000TLN：酶液稀释倍数 V总: 漆酶酶活测定反应体体系的终体积mLV 酶: 反应添加的酶液体积 mL OD420: t 时间内反应液在 420nm 处吸光度的增加值 36000: 420nm处 ABTS 氧化态的摩尔吸光系数 L/molcm T：反应时间 minL 为比色皿的直径 cm；名师归纳总结 - - - - - - -第 2 页,共 6 页精选学习资料 - - - - - - - - - 固态发酵锰过氧化物酶MnP 活性测定：酶液制取：粗酶液制备发酵过程中每隔 2 d 取 5 g 发酵物于 250 mL 三角瓶中,加入 1

4、00 mL H2O,在 200 r / min 的摇床中振荡提取 3 h,之后 5000 r/min离心 20min；用滤纸过滤后,取滤液用于测定 MnP 酶活性；在 4 mL 反应体系中含 50 mmol/L pH 4 5 的乳酸钠缓冲液 3. 4 mL,1. 6 mmol/L 的硫酸锰溶液 0. 1 mL,酶液 0. 4 mL,预热至 37 时,加 1. 6 mmol / L 的 H2O2 溶液 0. 1 mL 启动反应；在238 nm 紫外光处,测定反应4 min 内OD238 差值；在对比组中,以煮沸灭活15 min 酶液代替原酶液,以蒸馏水代替H2O2溶液,其他反应物不变； 每分钟使

5、 1 mol/L的 Mn2 +转化为 Mn3 +所需的酶量为 1 个酶活力单位 U ； 238 = 6.5mM-1-1 此试验固态发酵 MnP 活性运算公式：U/mLNVV 总OD238103100mL酶6500L0.4mL5gTN：酶液稀释倍数 V 总: 漆酶酶活测定反应体体系的终体积mLV 酶: 反应添加的酶液体积 mL OD420: t 时间内反应液在 420nm 处吸光度的增加值6500: 238nm 处 Mn2 +转化为 Mn 3 +摩尔吸光系数 L/mol cm T：反应时间 minL：比色皿的直径 cm100mL/0.4mL 5g：固态变成液态的稀释倍数名师归纳总结 - - -

6、- - - -第 3 页,共 6 页精选学习资料 - - - - - - - - - 液态发酵锰过氧化物酶MnP 活性测定：锰过氧化物酶 MnP活性测定在 4 mL 反应体系中含50 mmol/L pH 4 5 的乳酸钠缓冲液3. 4 mL,1. 6 mmol/L 的硫酸锰溶液 0. 1 mL,酶液 0. 4 mL,预热至 37 时,加 1. 6 mmol / L 的 H2O2 溶液 0. 1 mL 启动反应；在238 nm 紫外光处,测定反应4 min 内OD238 差值；在对比组中,以煮沸灭活15 min 酶液代替原酶液,以蒸馏水代替H2O2溶液,其他反应物不变； 每分钟使 1 mol/L

7、的 Mn 2 +转化为 Mn 3 +所需的酶量为 1 个酶活力单位 U ； 238 = 6.5mM-1-1 此试验固态发酵 MnP 活性运算公式：U /mLNV 酶V总6500OD 238103TLN：酶液稀释倍数 V总: 漆酶酶活测定反应体体系的终体积mLV 酶: 反应添加的酶液体积 mL OD420: t 时间内反应液在 420nm 处吸光度的增加值6500: 238nm 处 Mn2 +转化为 Mn 3 +摩尔吸光系数 L/mol cm T：反应时间 minL：比色皿的直径 cm名师归纳总结 - - - - - - -第 4 页,共 6 页精选学习资料 - - - - - - - - -

8、固态发酵木质素过氧化物酶LiP 活性测定：酶液制取： 5g 发酵样品以 1:20W/V 比例用蒸馏水悬浮, 200 r/min 摇 3h,之后 5000 r/min 离心 20min；上清用 0.45 m 滤纸过滤,于 -20储存滤液,取 能整除的滤液体积用于木质素过氧化物酶活性测定；测酶活： 3mL 反应混合液包括 3.4mL 酒石酸钠 250mM, pH 3.0,0.1mL 10mM 藜芦醇, 0.4mL 酶样品；在 30 1下温浴 5min 后,于反应加入 0.1mL 10mM H 2O2 启动酶促反应, 以煮沸灭活15 min 酶液代替原酶液, 以蒸馏水代替H2O2溶液作对比,测 OD

9、310 310= 9.3 10 3M- 1cm- 1处反应 5min 前后反应液吸光度的变化；一个酶活力单位消耗的酶量；U的定义：每 min 氧化藜芦醇生成 1 M 藜芦醛此试验固态发酵 LiP 活性运算公式：U /mLNV 总OD 3103 10100mLV 酶9300TL0.4mL5gN：酶液稀释倍数 V 总: 漆酶酶活测定反应体体系的终体积mLV 酶: 反应添加的酶液体积 mL OD420: t 时间内反应液在 420nm 处吸光度的增加值9300: 310nm 处摩尔吸光系数 L/mol cm T：反应时间 minL：比色皿的直径 cm100mL/0.4mL 5g：固态变成液态的稀释倍

10、数名师归纳总结 - - - - - - -第 5 页,共 6 页精选学习资料 - - - - - - - - - 液态发酵木质素过氧化物酶LiP 活性测定：测酶活： 3mL 反应混合液包括 3.4mL 酒石酸钠 250mM, pH 3.0,0.1mL 10mM 藜芦醇, 0.4mL 酶样品；在 30 1下温浴 5min 后,于反应加入 0.1mL 10mM H 2O2 启动酶促反应, 以煮沸灭活15 min 酶液代替原酶液, 以蒸馏水代替H2O2溶液作对比,测 OD310 310= 9.3 10 3M - 1cm- 1处反应 5min 前后反应液吸光度的变化；一个酶活力单位消耗的酶量；U的定义：每 min 氧化藜芦醇生成 1 M 藜芦醛此试验固态发酵 LiP 活性运算公式：U /mL NV 酶V总9300OD 310103TLN：酶液稀释倍数 V总: 漆酶酶活测定反应体体系的终体积mLV 酶: 反应添加的酶液体积 mL OD420: t 时间内反应液在 420nm 处吸光度的增加值 9300: 310nm 处摩尔吸光系数 L/mol cm T：反应时间 minL：比色皿的直径 cm名师归纳总结 - - - - - - -第 6 页,共 6 页