第八章--吸光光度法解析优秀PPT.ppt
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1、第八章第八章 吸光光度法吸光光度法Spectrophotometry2022/11/5第一节第一节 概概 述述一、吸光光度法一、吸光光度法基于物质对光的选择性吸取而建立起来的分析方法。基于物质对光的选择性吸取而建立起来的分析方法。吸光光度法的分类吸光光度法的分类(1)依据所用仪器的不同:)依据所用仪器的不同:目视比色法、光电比色法和分光光度法。目视比色法、光电比色法和分光光度法。(2)依据所吸取的波长范围不同:)依据所吸取的波长范围不同:紫外分光光度法紫外分光光度法(波长波长200400nm),可见分光光度法可见分光光度法(400750nm)红外光谱法红外光谱法(7502500nm)2022/
2、11/5吸光光度法吸光光度法特点:特点:(1)灵敏度高:)灵敏度高:10-510-6,10-710-8,10-10 molL-1(2)精确度高:)精确度高:比色分析,相对误差比色分析,相对误差510%,分光光度法,分光光度法,25%,12%;(3)应用广泛:)应用广泛:可测定绝大多数无机物和很多有机物;可测定绝大多数无机物和很多有机物;(4)操作简便仪器设备易普及。)操作简便仪器设备易普及。2022/11/5二、光的基本性质二、光的基本性质光是一种电磁波,具有波粒二像性。光是一种电磁波,具有波粒二像性。=c,E=h=hc/单色光:单色光:复合光:复合光:由单一波长的光组成的光由单一波长的光组成
3、的光由不同波长的光组成的光由不同波长的光组成的光Planck常数常数:h=6.626 10-34 J S光的波长越短(频率越高),其能量越大。光的波长越短(频率越高),其能量越大。白光白光(太阳光太阳光):由各种单色光组成的复合光由各种单色光组成的复合光2022/11/5三、物质对光的选择性吸取三、物质对光的选择性吸取1、吸取光谱的产生:、吸取光谱的产生:吸取光谱吸取光谱原子吸取光谱:原子吸取光谱:原子外层电子选择性吸原子外层电子选择性吸取某些波长电磁波取某些波长电磁波线光谱线光谱分子吸取光谱:分子吸取光谱:带光谱带光谱由价电子跃迁产由价电子跃迁产生的光谱,也称生的光谱,也称紫外紫外 可见光可
4、见光谱谱电子光谱电子光谱振动振动转转动光谱动光谱由分子振动或由分子振动或转动能级跃迁转动能级跃迁引起的,也称引起的,也称红外光谱红外光谱2022/11/5分子能量分子能量电子能电子能振动能振动能转动能转动能分子振动能级:分子振动能级:分子内部价电子运动,分子内原子振动和分子绕其重心的转动。分子内部价电子运动,分子内原子振动和分子绕其重心的转动。2022/11/5分子吸取光谱产生:分子吸取光谱产生:分子吸取外界能量(光、电、热)引起分子能级分子吸取外界能量(光、电、热)引起分子能级跃迁,从基态跃迁到激发态跃迁,从基态跃迁到激发态2022/11/5电子跃迁能级较大,电子跃迁能级较大,能量在能量在1
5、20eV,紫外,紫外可见吸取光谱在可见吸取光谱在200780nm2022/11/5物质的颜色物质的颜色:物质的颜色由透过光确定。物质的颜色由透过光确定。由于不同的物质结构不同具有不同量子化能级,产生由于不同的物质结构不同具有不同量子化能级,产生的吸取不同。其颜色和光的吸取、透过、反射有关。的吸取不同。其颜色和光的吸取、透过、反射有关。2022/11/5互补色光:互补色光:把两种适当颜色的光按确定的强度比例混合,把两种适当颜色的光按确定的强度比例混合,成为白光,称为互补色光。成为白光,称为互补色光。2022/11/5无色:无色:对光谱中各种色光透过程度相同。对光谱中各种色光透过程度相同。有色有色
6、:物质的颜色由它透过或反射的光确定。物质的颜色由它透过或反射的光确定。黑色黑色:几乎吸取全部的入射光。几乎吸取全部的入射光。白色白色:几乎全部反射入射光。几乎全部反射入射光。2022/11/5吸取曲线:吸取曲线:测量某种物质对不同波长单色光的吸测量某种物质对不同波长单色光的吸取程度取程度(即吸光度即吸光度A),以波长,以波长()为横为横坐标,吸光度坐标,吸光度(A)为纵坐标,得到的一为纵坐标,得到的一条吸取光谱曲线。条吸取光谱曲线。(1)吸取曲线用途:)吸取曲线用途:进行定性分析;进行定性分析;进行定量分析;进行定量分析;选择吸取波长;选择吸取波长;推断干扰状况。推断干扰状况。2022/11/
7、5其次节其次节 光的吸取定律光的吸取定律一、朗伯一、朗伯-比尔定律比尔定律描述物质对单色光吸取强弱与液层厚度和待测物浓度的关系描述物质对单色光吸取强弱与液层厚度和待测物浓度的关系入射光入射光 I0透射光透射光 ItT 称为透光率称为透光率 TransmittanceT 取值为取值为0.0%100.0%全部吸取全部吸取T=0.0%全部透射全部透射T=100.0%A:吸光度:吸光度b:光程的长度:光程的长度(cm):比色皿的厚度比色皿的厚度c:溶质的浓度:溶质的浓度K:比例常数,:比例常数,与与物质的性质、物质的性质、入射光波长等有关,入射光波长等有关,与浓度无关。与浓度无关。2022/11/5c
8、:mol/L摩尔吸光系数摩尔吸光系数L mol 1 cm-1Molar Absorptivityc:g/L吸光系数吸光系数AbsorptivityL g 1 cm-1与与 a 的关系的关系:2022/11/5 的含义的含义()是是吸吸光光物物质质在在确确定定波波长长和和溶溶剂剂中中的的特特征征常常数数,反反映映该该吸吸光光物物质质的的灵灵敏敏度度 值值越越大大,表表示示该该吸吸光光物物质质对对此此波波长长光光的的吸吸取取实实力力越越强强,显显色色反反应应越越灵灵敏敏,在在最最大大吸吸取波特长的摩尔吸光系数常以取波特长的摩尔吸光系数常以 max表示;表示;()依据朗伯比耳定律,()依据朗伯比耳定
9、律,A/bc 由试验结果计由试验结果计算,以总浓度代替吸光物质的浓度,算,以总浓度代替吸光物质的浓度,为表观摩尔吸取为表观摩尔吸取系数,系数,=Ma,M是摩尔质量;是摩尔质量;2022/11/5 吸光度的加和性吸光度的加和性 若溶液中含有两种或两种以上的吸光物质,且若溶液中含有两种或两种以上的吸光物质,且各物间无相互作用,则测得的吸光度为各种吸光各物间无相互作用,则测得的吸光度为各种吸光物质吸光度之和。物质吸光度之和。如溶液中含有如溶液中含有A、B两物质,对波长为两物质,对波长为的光的光均有吸取,则均有吸取,则A=AA+AB2022/11/5 例题例题铁(铁()浓度为)浓度为5.010-4 g
10、L-1 的溶液,与的溶液,与 1,10-邻二氮菲邻二氮菲反应,生成橙红色络合物。该络合物在波长反应,生成橙红色络合物。该络合物在波长508nm,比色比色皿厚度为皿厚度为2cm时,测得时,测得A=0.19。计算计算1,10-邻二氮菲铁的邻二氮菲铁的a及及 。解:解:已知已知 M(Fe)=55.852022/11/5n分光光度法定量分析常要绘制标准曲线,即固定液层的厚度及入射光的波长和强度,测定一系列不同浓度标准溶液的吸光度,以吸光度对标准溶液的浓度作图(一过原点的直线),得到标准曲线。n在相同条件下测定试样的吸光度,从工作曲线查得试样浓度,这就是工作曲线法。n但在实际工作中,特殊是浓度较大时,常
11、会出现标准曲线不为直线的现象,这称为偏离朗伯比尔定律。二二.偏离朗伯偏离朗伯-比尔定律的缘由比尔定律的缘由偏离Beer定律的主要因素表现为以下两个方面:1.光学因素;2.化学因素2022/11/5二二.偏离朗伯偏离朗伯-比尔定律的缘由比尔定律的缘由1 1、光学因素:非单色光引起的偏离非单色光引起的偏离严格地说,朗伯严格地说,朗伯-比尔定律只适用于单色光。比尔定律只适用于单色光。设入射光由设入射光由 1 和和 2 两种波长组成,溶液的两种波长组成,溶液的吸光质点对两种波长的光的吸取均遵从吸取定律吸光质点对两种波长的光的吸取均遵从吸取定律对对 1:对对 2:2022/11/5 1+2:若:若:或或
12、或或2022/11/5非单色光引起的对吸光定律的偏离非单色光引起的对吸光定律的偏离对吸取光谱而言,对吸取光谱而言,b 和和 c 固定,固定,反映了反映了 随波长变更的状况,单一波长,随波长变更的状况,单一波长,固定;固定;不同波长,不同波长,不同。因此,非单色光将导致对吸光定不同。因此,非单色光将导致对吸光定律的偏离。律的偏离。2022/11/52.化学因素:由溶液本身的化学和物理因素引起的偏离(1)由于介质不匀整性引起的偏离由于介质不匀整性引起的偏离 当被测试液是当被测试液是胶体、乳浊液或悬浮物时,将对入射光产生散射胶体、乳浊液或悬浮物时,将对入射光产生散射现象,导致吸光度增大,而引起正偏离
13、现象,导致吸光度增大,而引起正偏离(偏向吸光偏向吸光度轴度轴)。2022/11/5橙色橙色(2)由于溶液中的化学反应由于溶液中的化学反应引起的偏离引起的偏离 如吸光物质的离如吸光物质的离解、缔合、形成新化合物或解、缔合、形成新化合物或互变异构等。互变异构等。Cr2O72-+H2O=2HCrO4-=2H+2CrO42-黄色黄色2022/11/5第三节第三节 目视比色法及光度计的基本部件目视比色法及光度计的基本部件一、目视比色法一、目视比色法用眼睛比较溶液颜色深浅以测定物质含量的方法用眼睛比较溶液颜色深浅以测定物质含量的方法。测定方法:测定方法:标准系列法标准系列法。标1标2标3标4标5未知未知2
14、022/11/5标准系列标准系列未知样品未知样品2022/11/53、优点:、优点:设备简洁,操作便利,不要求严格遵守比尔定律。设备简洁,操作便利,不要求严格遵守比尔定律。4、用途、用途:用在要求不高的常规分析中用在要求不高的常规分析中。5、缺点:、缺点:精确度不高,标准系列制作麻烦,简洁受干扰。精确度不高,标准系列制作麻烦,简洁受干扰。2022/11/5二、分光光度法及光度计二、分光光度法及光度计1、分光光度法:、分光光度法:运用分光光度计进行测定的方法。运用分光光度计进行测定的方法。2、与比色法比较:、与比色法比较:(1)是用仪器代替人眼进行测量,消退了人的主观误差,)是用仪器代替人眼进行
15、测量,消退了人的主观误差,提高了精确度;提高了精确度;(2)待测溶液中有其它有色物质共存时,可以选择适当)待测溶液中有其它有色物质共存时,可以选择适当的单色光和参比溶液来消退干扰,因而提高选择性;的单色光和参比溶液来消退干扰,因而提高选择性;(3)在分析大批试样时,运用标准曲线法可以简化手续,)在分析大批试样时,运用标准曲线法可以简化手续,加快分析速度。加快分析速度。2022/11/5分光光度计分光光度计Agilent 6010紫外紫外/可见分光光度计可见分光光度计2022/11/52022/11/53、光度计组成:、光度计组成:2022/11/53、光度计组成:、光度计组成:光源光源单色器单
16、色器吸取池吸取池检测系统检测系统(1)光源:光源:要求稳定,强度高要求稳定,强度高.常用常用612V钨丝灯或卤钨灯,钨丝灯或卤钨灯,26002870K,发发320nm2500nm的连续光谱的连续光谱可见光部分用其可见光部分用其360800nm紫外光:氢灯,氘灯,紫外光:氢灯,氘灯,185 350 nm;2022/11/5(2)单色器:单色器:将光源发出的连续光谱分解为单色光的装置,将光源发出的连续光谱分解为单色光的装置,分为棱镜和光栅两种。分为棱镜和光栅两种。光栅的辨别率比棱镜大,光栅的辨别率比棱镜大,可用的波长范围也较宽。可用的波长范围也较宽。2022/11/5也称吸取池,长方体,两面透亮,
17、有玻璃和石英玻璃两种,规格有0.5,1.0,2.0,5.0cm等;(3)吸取池:比色皿:)吸取池:比色皿:玻璃能吸取UV光,仅适用于可见光区 石英不能吸取紫外光,适用于紫外和可见光区 2022/11/5(4)检测器:)检测器:检测器的作用是接受从吸取池发出的透射光并检测器的作用是接受从吸取池发出的透射光并转换成电信号进行测量。转换成电信号进行测量。分为光电池、光电管、光电倍增管和分为光电池、光电管、光电倍增管和光电二极光电二极管阵列。管阵列。2022/11/5显示装置:显示装置:检流计,数显,记录仪,检流计,数显,记录仪,CRT。2022/11/5练习题练习题1、人眼能感觉到的光称为可见光,其
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