高效液相色谱法检测酱油中的苯甲酸钠.doc

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1、高效液相色谱法检测酱油中的苯甲酸钠1原理 酱油样品经酸化后，用乙醚提取苯甲酸，定容过滤后进高效液相色谱仪，经反相色谱分离后，根据保留时间定性和峰面积定量。2试剂2.1 甲醇:分析纯，经滤膜（HF 0.5m）过滤；2.2 无水乙醚：分析纯；2.3 无水乙醇：分析纯；2.4 6N盐酸：取3638%的盐酸500ml，定容至1000ml；2.5 4%氯化钠溶液：称取40.0g氯化钠,定容至1000ml；2.6 0.02M乙酸铵溶液：1.54g乙酸铵定容至1000ml,溶解后经滤膜(HA 0.45m)过滤；2.7 苯甲酸标准储备液：称取苯甲酸0.1000g加2%碳酸氢钠溶液1ml,搅拌溶解,加水定容到1

2、00ml，苯甲酸浓度为1mg/ml；2.8 苯甲酸标准使用液：取苯甲酸标准储备液10ml，放入100ml容量瓶中，定容至刻度，苯甲酸浓度为0.1mg/ml。3高效液相色谱条件3.1 Spectra-Physics 高效液相色谱仪；3.2 色谱柱：Spherisorb ODS1 4.6mm200mm；3.3 检测器：紫外检测器，波长230nm，灵敏度0.2 AUFS；3.4 流动相：甲醇:0.02M乙酸铵（5：95）；3.5 流速：1ml/min；3.6 进样量：10ml；3.7 允许差：相对误差10%。4操作方法：4.1样品预处理： 称取均匀的酱油样品5.0g放入125ml的分液漏斗中，加 入

3、6N盐酸1ml酸化，用1510ml无水乙醚萃取两次，合并乙醚放入125ml分液漏斗中，用4%的氯化钠溶液约10ml分别洗涤两次，将洗涤后的乙醚移入80ml蒸发皿中，温水浴挥干，分别用10ml无水乙醇洗涤蒸发皿两次，放入100ml容量瓶中，再用蒸馏水洗涤蒸发皿两次，并入上容量瓶中，用蒸馏水定容至刻度，用0.45m（HA）滤膜过滤，供高效液相色谱测定用。4.2测定操作： 开机预热30min并对流动相进行脱气操作，待流动相流速恒定及检测器稳定后，用25ml微量进样器吸取供试液进样，绘图积分，得供试样品的吸收峰面积，并进样测定苯甲酸标准吸收峰的面积，根据计算公式算出样品中苯甲酸的含量。4.3计算公式：

4、 Ai Co 1 Ci = n Ao m 式中Ci样品中苯甲酸的含量; Ai测定样品的吸收峰面积; Co配制的标准苯甲酸溶液的浓度; Ao标准苯甲酸溶液的吸收峰面积; n 测定样品的稀释倍数; m测定样品的质量。5. 实验数据：5.1实验操作过程的重现性测试： 取均匀的金标生抽王样品，分装成五份，每份5.0g，按上述的样品预处理方法分别进行萃取操作（每次萃取操作尽可能完全一致），得五个待测样品，分别进样检测，用外标峰法确定苯甲酸的含量。五次萃取操作数据比较如下表：表1实验操作重现性数据表样品编号12345苯甲酸标准(0.1mg/ml)样品质量(g)5.005.005.005.005.00吸 收

5、A1129.2110.5111.098.3117.3490.7峰 面A2101.4112.191.1117.0积(104)115.3111.3101.198.3117.2样品中苯甲酸含量（g/kg）0.4700.4540.4120.4010.478样品中苯甲酸平均含量(g/kg)0.443相对误差(%)6.12.4-7.0-9.56.1结论：从表中可知，连续五次同样的萃取操作所得的结果都较为接近，相对误差在允许范围10%以内，完全符合标准要求，因此，从实验操作过程的重现性来分析，用该操作方法测定苯甲酸的含量是稳定可行且符合标准要求的。5.2高效液相色谱仪进样的重复性(稳定性)测试：取0.1mg

6、/ml苯甲酸标准使用液，用25ml微量进样器进高效液相色谱仪,绘图积分,测出苯甲酸的吸收峰面积,以同样的操作手法连续进样6次,将各次的吸收峰面积数据比较如下表：表2高效液相色谱仪稳定性测试数据表：进 样 编 号123456吸 收 峰面 积(104)452.0424.5452.4465.8450.6431.9平均吸收峰面 积 (104)446.2相对误差(%)1.3-4.91.44.41.0-3.2结论： 由上表数据可知，连续6次进样所得的实验结果都十分接近，相对误差在允许范围10%以内，因此，从仪器稳定性方面考虑，本实验所用的高效液相色谱仪作为测定苯甲酸含量是符合标准要求的。5.3 苯甲酸浓度

7、吸收峰面积的线性关系实验： 分别配制0.1mg/ml、0.05mg/ml、0.01mg/ml、0.001mg/ml的苯甲酸溶液，分别进高效液相色谱仪测定吸收峰的面积，得数据如下表：表3苯甲酸浓度吸收峰面积关系表：苯甲酸的浓度(mg/ml)0.0010.010.050.1吸 收 峰面积(104)119.862.8294.3537.7220.069.0293.6541.0319.266.3286.0560.1吸收峰平均面 积 (104)19.766.1291.3546.3 A(104) 600 - 500 - 400 - 300 - 200 - 100 - C(mg/ml) 0 0.01 0.02

8、 0.03 0.04 0.05 0.06 0.07 0.08 0.09 0.10 苯甲酸浓度C吸收峰面积A关系曲线结论：由上面所作的“苯甲酸浓度吸收峰面积关系曲线”可以看出，在苯甲酸浓度比较接近的范围内，样品的吸收峰面积与苯甲酸浓度成正比的线性关系。5.4 乙醚萃取苯甲酸的回收率测试：样品A（不加标准样）：取金标生抽王样品5.00g，按照上述的样品预处 理方法得样品A（不加标准样）。样品B（加标准样） ：取金标生抽王样品5.00g，加入0.0100g苯甲酸，溶解后按样品预处理方法得样品B(加标准样)。做两组相同的样品A和样品B，分别测定回收率，数据如下表：表4乙醚萃取苯甲酸的回收率数据表：样品

9、A1B1A2B2金标生抽样品质量(g)5.005.005.005.00加入苯甲酸的质量(g)0.01000.0100 吸 收 峰面积(104)1144.3605.8118.0614.32123.5609.0117.0575.13149.6609.4117.3579.1平均吸收峰面积(104)139.1608.1117.5589.5苯甲酸标准吸收峰面积(104)490.7490.7回收率（）95.696.25.5自来水空白萃取实验及最低检测量的测试：取5.00g自来水作为空白样品，按样品的预处理方法进行萃取操作，测定其色谱吸收峰面积；取5.00g苯甲酸溶液(1mg/1000ml)，按样品的预处理方法进行操作，测定其色谱吸收峰面积，所得的实验数据如下表：表5自来水空白及最低检测量测试数据表：样品自来水空白1mg/1000ml苯甲酸溶液吸 收峰 面积(104)1未检出1.692未检出1.54结论：由实验结果可知，自来水中未检测出苯甲酸，因此它对本实验没有影响；而含量为1mg/kg的苯甲酸经萃取可在仪器中检测出，因此本实验操作及仪器的最低检测下限为0.001g/kg.