农产品分析 -2-3.ppt

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1、农产品分析-2-3 Still waters run deep.流静水深流静水深,人静心深人静心深 Where there is life,there is hope。有生命必有希望。有生命必有希望v 淀粉的测定淀粉的测定 淀粉是由葡萄糖聚合成的高分子化合物。淀粉是由葡萄糖聚合成的高分子化合物。淀粉是由葡萄糖聚合成的高分子化合物。淀粉是由葡萄糖聚合成的高分子化合物。淀粉淀粉淀粉淀粉在酶或酸的作用下又水解成葡萄糖，这是淀粉经酶在酶或酸的作用下又水解成葡萄糖，这是淀粉经酶在酶或酸的作用下又水解成葡萄糖，这是淀粉经酶在酶或酸的作用下又水解成葡萄糖，这是淀粉经酶或酸水解后测定还原糖计算淀粉含量的理论基

2、础。或酸水解后测定还原糖计算淀粉含量的理论基础。或酸水解后测定还原糖计算淀粉含量的理论基础。或酸水解后测定还原糖计算淀粉含量的理论基础。另外淀粉经分散和酸解后具有一定的另外淀粉经分散和酸解后具有一定的另外淀粉经分散和酸解后具有一定的另外淀粉经分散和酸解后具有一定的旋光性，则是旋光性，则是旋光性，则是旋光性，则是旋光法测定淀粉含量的基础。旋光法测定淀粉含量的基础。旋光法测定淀粉含量的基础。旋光法测定淀粉含量的基础。本节除介绍经典的酶水解、酸水解而后测还原本节除介绍经典的酶水解、酸水解而后测还原本节除介绍经典的酶水解、酸水解而后测还原本节除介绍经典的酶水解、酸水解而后测还原糖的方法外，还推荐谷物种

3、子粗淀粉测定的国家标糖的方法外，还推荐谷物种子粗淀粉测定的国家标糖的方法外，还推荐谷物种子粗淀粉测定的国家标糖的方法外，还推荐谷物种子粗淀粉测定的国家标准法准法准法准法旋光法。旋光法。旋光法。旋光法。(一一一一)酸水解法酸水解法1 1原理原理 样品经除去脂肪及可溶性糖类后，用稀酸样品经除去脂肪及可溶性糖类后，用稀酸样品经除去脂肪及可溶性糖类后，用稀酸样品经除去脂肪及可溶性糖类后，用稀酸(1(1(1(1HCl)HCl)HCl)HCl)水解淀粉成葡萄糖，按还原糖测定方法测定还原糖含水解淀粉成葡萄糖，按还原糖测定方法测定还原糖含水解淀粉成葡萄糖，按还原糖测定方法测定还原糖含水解淀粉成葡萄糖，按还原糖

4、测定方法测定还原糖含量，再折算为淀粉含量。量，再折算为淀粉含量。量，再折算为淀粉含量。量，再折算为淀粉含量。该法适用于该法适用于该法适用于该法适用于淀粉含量较高的谷类、薯类，原料测淀粉含量较高的谷类、薯类，原料测淀粉含量较高的谷类、薯类，原料测淀粉含量较高的谷类、薯类，原料测定结果为粗淀粉含量，而其他能被水解为还原糖的多定结果为粗淀粉含量，而其他能被水解为还原糖的多定结果为粗淀粉含量，而其他能被水解为还原糖的多定结果为粗淀粉含量，而其他能被水解为还原糖的多糖含量较少的样品。糖含量较少的样品。糖含量较少的样品。糖含量较少的样品。因为酸水解法不仅是淀粉水解，因为酸水解法不仅是淀粉水解，因为酸水解法

5、不仅是淀粉水解，因为酸水解法不仅是淀粉水解，其他多糖如半纤维素和多缩戊糖等也会被水解为具有其他多糖如半纤维素和多缩戊糖等也会被水解为具有其他多糖如半纤维素和多缩戊糖等也会被水解为具有其他多糖如半纤维素和多缩戊糖等也会被水解为具有还原性的木糖、阿拉伯糖等，使得测定结果偏高。还原性的木糖、阿拉伯糖等，使得测定结果偏高。还原性的木糖、阿拉伯糖等，使得测定结果偏高。还原性的木糖、阿拉伯糖等，使得测定结果偏高。因此，对于淀粉含量较低而半纤维素、多缩戊糖因此，对于淀粉含量较低而半纤维素、多缩戊糖因此，对于淀粉含量较低而半纤维素、多缩戊糖因此，对于淀粉含量较低而半纤维素、多缩戊糖和果胶含量较高的样品不适宜用

6、该法。和果胶含量较高的样品不适宜用该法。和果胶含量较高的样品不适宜用该法。和果胶含量较高的样品不适宜用该法。优点：优点：该法操作简单（沸水浴中水解时间约该法操作简单（沸水浴中水解时间约该法操作简单（沸水浴中水解时间约该法操作简单（沸水浴中水解时间约3-43-43-43-4小时小时小时小时可完成）、应用广泛，普遍采用。可完成）、应用广泛，普遍采用。可完成）、应用广泛，普遍采用。可完成）、应用广泛，普遍采用。缺点：缺点：在酸水解淀粉的同时，谷物中的半纤维素和多在酸水解淀粉的同时，谷物中的半纤维素和多在酸水解淀粉的同时，谷物中的半纤维素和多在酸水解淀粉的同时，谷物中的半纤维素和多缩戊糖也随之水解，这

7、样使测定结果产生缩戊糖也随之水解，这样使测定结果产生缩戊糖也随之水解，这样使测定结果产生缩戊糖也随之水解，这样使测定结果产生正误差正误差正误差正误差；选；选；选；选择性和准确性择性和准确性择性和准确性择性和准确性不如酶法不如酶法不如酶法不如酶法。2 2操作步骤操作步骤:称干燥样称干燥样称干燥样称干燥样2-32-32-32-3克克克克 乙醚乙醚乙醚乙醚洗涤洗涤洗涤洗涤4-54-54-54-5次次次次.每次每次每次每次10101010毫升毫升毫升毫升 用用用用10%10%10%10%的乙醇的乙醇的乙醇的乙醇150150150150毫升分次洗涤，以除去糊精等毫升分次洗涤，以除去糊精等毫升分次洗涤，以

8、除去糊精等毫升分次洗涤，以除去糊精等 将残留将残留将残留将残留液用液用液用液用200200200200毫升水流入三角瓶毫升水流入三角瓶毫升水流入三角瓶毫升水流入三角瓶加加加加稀盐酸稀盐酸稀盐酸稀盐酸(1(1(1(1)150150150150毫升毫升毫升毫升至沸水浴溶解至沸水浴溶解至沸水浴溶解至沸水浴溶解3-4h3-4h3-4h3-4h，取出试样少许，取出试样少许，取出试样少许，取出试样少许，检查检查检查检查是否水解完是否水解完是否水解完是否水解完毕（用滴管吸取少量带固体颗粒的溶液，放在白瓷点毕（用滴管吸取少量带固体颗粒的溶液，放在白瓷点毕（用滴管吸取少量带固体颗粒的溶液，放在白瓷点毕（用滴管吸

9、取少量带固体颗粒的溶液，放在白瓷点滴板上，加一滴滴板上，加一滴滴板上，加一滴滴板上，加一滴I I I I2 2 2 2-KI-KI-KI-KI溶液，若不显兰色，溶液，若不显兰色，溶液，若不显兰色，溶液，若不显兰色，红色或紫色红色或紫色红色或紫色红色或紫色说明淀粉已水解完全。否则应继续水解再检查，直至说明淀粉已水解完全。否则应继续水解再检查，直至说明淀粉已水解完全。否则应继续水解再检查，直至说明淀粉已水解完全。否则应继续水解再检查，直至水解完全）水解完全）水解完全）水解完全）冷却冷却冷却冷却用用用用10%NaOH10%NaOH10%NaOH10%NaOH中和中和中和中和逐滴加入逐滴加入逐滴加入逐

10、滴加入中性醋中性醋中性醋中性醋酸铅酸铅酸铅酸铅，以沉淀蛋白质、有机酸、单宁、果胶及其他胶，以沉淀蛋白质、有机酸、单宁、果胶及其他胶，以沉淀蛋白质、有机酸、单宁、果胶及其他胶，以沉淀蛋白质、有机酸、单宁、果胶及其他胶体，必须加热至无沉淀为止。体，必须加热至无沉淀为止。体，必须加热至无沉淀为止。体，必须加热至无沉淀为止。将溶液过滤，收集到将溶液过滤，收集到将溶液过滤，收集到将溶液过滤，收集到250250250250毫升容量瓶中毫升容量瓶中毫升容量瓶中毫升容量瓶中加入加入加入加入饱饱饱饱和硫酸钠，和硫酸钠，和硫酸钠，和硫酸钠，除去剩余的铅（不产生白色沉淀）除去剩余的铅（不产生白色沉淀）除去剩余的铅（

11、不产生白色沉淀）除去剩余的铅（不产生白色沉淀）稀释稀释稀释稀释至刻度至刻度至刻度至刻度过滤过滤过滤过滤取滤液按还原糖测定法测定葡萄取滤液按还原糖测定法测定葡萄取滤液按还原糖测定法测定葡萄取滤液按还原糖测定法测定葡萄糖含量。糖含量。糖含量。糖含量。蔬菜、水果等样品：蔬菜、水果等样品：蔬菜、水果等样品：蔬菜、水果等样品：按按按按11111111加水加水加水加水在组织捣碎机中在组织捣碎机中在组织捣碎机中在组织捣碎机中捣成匀浆捣成匀浆捣成匀浆捣成匀浆(蔬菜、水果需先洗净、晾干，取可食部分蔬菜、水果需先洗净、晾干，取可食部分蔬菜、水果需先洗净、晾干，取可食部分蔬菜、水果需先洗净、晾干，取可食部分)。称取

12、称取称取称取5 5 5 510g10g10g10g匀浆匀浆匀浆匀浆(液体样品可直接量取液体样品可直接量取液体样品可直接量取液体样品可直接量取)，于，于，于，于250ml250ml250ml250ml锥锥锥锥形瓶中，其他同上。形瓶中，其他同上。形瓶中，其他同上。形瓶中，其他同上。3 3注意事项：注意事项：(1)(1)当当当当脂肪含量低时，可省去乙醚洗涤和脱脂步骤脂肪含量低时，可省去乙醚洗涤和脱脂步骤脂肪含量低时，可省去乙醚洗涤和脱脂步骤脂肪含量低时，可省去乙醚洗涤和脱脂步骤。乙醚也可用石油醚代替。若样品为液体，则采用分乙醚也可用石油醚代替。若样品为液体，则采用分乙醚也可用石油醚代替。若样品为液体

13、，则采用分乙醚也可用石油醚代替。若样品为液体，则采用分液漏斗振荡后，静置分层，去除乙醚层。液漏斗振荡后，静置分层，去除乙醚层。液漏斗振荡后，静置分层，去除乙醚层。液漏斗振荡后，静置分层，去除乙醚层。(2)(2)如果要求测定结果不包括糊精，则用如果要求测定结果不包括糊精，则用如果要求测定结果不包括糊精，则用如果要求测定结果不包括糊精，则用10101010乙醇洗乙醇洗乙醇洗乙醇洗涤涤涤涤 除去可溶性糖类除去可溶性糖类除去可溶性糖类除去可溶性糖类(包括糊精包括糊精包括糊精包括糊精)等物质等物质等物质等物质 。(3)(3)根据淀粉的水解反应根据淀粉的水解反应:把葡萄糖含量折算为淀粉含量的换算系数把葡萄

14、糖含量折算为淀粉含量的换算系数为为:162/180162/1800.90.9（4 4 4 4）1 1 1 1HClHClHClHCl，沸水浴中水解，不仅水解淀粉，部分半，沸水浴中水解，不仅水解淀粉，部分半，沸水浴中水解，不仅水解淀粉，部分半，沸水浴中水解，不仅水解淀粉，部分半纤维素和果胶质可部分水解，引起正误差。纤维素和果胶质可部分水解，引起正误差。纤维素和果胶质可部分水解，引起正误差。纤维素和果胶质可部分水解，引起正误差。对于淀粉含对于淀粉含对于淀粉含对于淀粉含量少而半纤维素含量较多的样品影响更大。如草本植物量少而半纤维素含量较多的样品影响更大。如草本植物量少而半纤维素含量较多的样品影响更大

15、。如草本植物量少而半纤维素含量较多的样品影响更大。如草本植物（牧草等）的茎、叶中有较多的半纤维素。种子中虽然（牧草等）的茎、叶中有较多的半纤维素。种子中虽然（牧草等）的茎、叶中有较多的半纤维素。种子中虽然（牧草等）的茎、叶中有较多的半纤维素。种子中虽然淀粉含量高，但也有些五碳聚糖可被酸水解，所以若须淀粉含量高，但也有些五碳聚糖可被酸水解，所以若须淀粉含量高，但也有些五碳聚糖可被酸水解，所以若须淀粉含量高，但也有些五碳聚糖可被酸水解，所以若须取得精确结果，最好采用酶水解法。取得精确结果，最好采用酶水解法。取得精确结果，最好采用酶水解法。取得精确结果，最好采用酶水解法。（5 5 5 5）制备过程中

16、防止酸度的改变。制备过程中防止酸度的改变。制备过程中防止酸度的改变。制备过程中防止酸度的改变。（6 6 6 6）其他操作同还原糖。其他操作同还原糖。其他操作同还原糖。其他操作同还原糖。（二）酶水解法（二）酶水解法1 1原理原理 样品经除去脂肪和可溶性糖类后，在淀粉酶的作样品经除去脂肪和可溶性糖类后，在淀粉酶的作样品经除去脂肪和可溶性糖类后，在淀粉酶的作样品经除去脂肪和可溶性糖类后，在淀粉酶的作用下，使淀粉水解为低分子糊精和麦芽糖，再用盐酸用下，使淀粉水解为低分子糊精和麦芽糖，再用盐酸用下，使淀粉水解为低分子糊精和麦芽糖，再用盐酸用下，使淀粉水解为低分子糊精和麦芽糖，再用盐酸进一步水解为葡萄糖，

17、然后按还原糖测定法测定其含进一步水解为葡萄糖，然后按还原糖测定法测定其含进一步水解为葡萄糖，然后按还原糖测定法测定其含进一步水解为葡萄糖，然后按还原糖测定法测定其含量，并折算成淀粉含量。量，并折算成淀粉含量。量，并折算成淀粉含量。量，并折算成淀粉含量。由于淀粉酶的水解具有专一性，它只水解淀粉而由于淀粉酶的水解具有专一性，它只水解淀粉而由于淀粉酶的水解具有专一性，它只水解淀粉而由于淀粉酶的水解具有专一性，它只水解淀粉而不会水解其他多糖，所以不会水解其他多糖，所以不会水解其他多糖，所以不会水解其他多糖，所以该法不受半纤维素、多缩戊该法不受半纤维素、多缩戊该法不受半纤维素、多缩戊该法不受半纤维素、多

18、缩戊糖、果胶等多糖的干扰糖、果胶等多糖的干扰糖、果胶等多糖的干扰糖、果胶等多糖的干扰，分析结果准确可靠。，分析结果准确可靠。，分析结果准确可靠。，分析结果准确可靠。2.2.步骤步骤 （1 1 1 1）样品处理：样品处理：称取称取称取称取2 2 2 25g5g5g5g样品样品样品样品(含淀粉含淀粉含淀粉含淀粉0.5g0.5g0.5g0.5g左右左右左右左右)，置于铺有折叠滤纸的漏斗内，先用，置于铺有折叠滤纸的漏斗内，先用，置于铺有折叠滤纸的漏斗内，先用，置于铺有折叠滤纸的漏斗内，先用50ml50ml50ml50ml乙乙乙乙醚分醚分醚分醚分5 5 5 5次洗涤以除去脂肪。再用约次洗涤以除去脂肪。再

19、用约次洗涤以除去脂肪。再用约次洗涤以除去脂肪。再用约100mL 85100mL 85100mL 85100mL 85的乙的乙的乙的乙醇分次洗去可溶性糖类。用醇分次洗去可溶性糖类。用醇分次洗去可溶性糖类。用醇分次洗去可溶性糖类。用50mL50mL50mL50mL水将残渣移至水将残渣移至水将残渣移至水将残渣移至250mL250mL250mL250mL烧杯中。烧杯中。烧杯中。烧杯中。(2)(2)酶水解：酶水解：将烧杯置沸水浴上加热将烧杯置沸水浴上加热将烧杯置沸水浴上加热将烧杯置沸水浴上加热15min15min15min15min，使，使，使，使淀粉糊化淀粉糊化淀粉糊化淀粉糊化，冷却至，冷却至，冷却至

20、，冷却至60606060以下，加入以下，加入以下，加入以下，加入20m10.520m10.520m10.520m10.5淀粉酶淀粉酶淀粉酶淀粉酶溶液，在溶液，在溶液，在溶液，在5555555560606060保温保温保温保温1h1h1h1h，并不时搅拌。取，并不时搅拌。取，并不时搅拌。取，并不时搅拌。取1 1 1 1滴此液滴此液滴此液滴此液于白色点滴板上，加于白色点滴板上，加于白色点滴板上，加于白色点滴板上，加l l l l滴碘液应不呈蓝色，若呈蓝色，滴碘液应不呈蓝色，若呈蓝色，滴碘液应不呈蓝色，若呈蓝色，滴碘液应不呈蓝色，若呈蓝色，再加热糊化，冷却至再加热糊化，冷却至再加热糊化，冷却至再加热

21、糊化，冷却至60606060以下，再加以下，再加以下，再加以下，再加20ml 0.520ml 0.520ml 0.520ml 0.5淀粉淀粉淀粉淀粉酶溶液，继续保温，酶溶液，继续保温，酶溶液，继续保温，酶溶液，继续保温，直至酶解液加碘液后不呈蓝色为直至酶解液加碘液后不呈蓝色为直至酶解液加碘液后不呈蓝色为直至酶解液加碘液后不呈蓝色为止止止止。加热至沸使。加热至沸使。加热至沸使。加热至沸使酶失活酶失活酶失活酶失活，冷却后移入，冷却后移入，冷却后移入，冷却后移入250ml250ml250ml250ml容量瓶中，容量瓶中，容量瓶中，容量瓶中，加水定容。混匀后过滤，弃去加水定容。混匀后过滤，弃去加水定容

22、。混匀后过滤，弃去加水定容。混匀后过滤，弃去初滤液初滤液初滤液初滤液，收集滤液备用。，收集滤液备用。，收集滤液备用。，收集滤液备用。(3)(3)酸水解：酸水解：取取取取50mL50mL50mL50mL上述滤液于上述滤液于上述滤液于上述滤液于250mL250mL250mL250mL锥形瓶锥形瓶锥形瓶锥形瓶中，加中，加中，加中，加5ml6mol5ml6mol5ml6mol5ml6molL L L L盐酸溶液盐酸溶液盐酸溶液盐酸溶液，装上回流装置，在沸，装上回流装置，在沸，装上回流装置，在沸，装上回流装置，在沸水浴中回流水浴中回流水浴中回流水浴中回流1h1h1h1h，冷却后加，冷却后加，冷却后加，冷

23、却后加2 2 2 2滴甲基红指示剂（滴甲基红指示剂（滴甲基红指示剂（滴甲基红指示剂（pH4.4pH4.4pH4.4pH4.4红红红红-6.2-6.2-6.2-6.2黄），用黄），用黄），用黄），用20202020氢氧化钠溶液氢氧化钠溶液氢氧化钠溶液氢氧化钠溶液中和中和中和中和至红色刚好至红色刚好至红色刚好至红色刚好消失。把溶液移入消失。把溶液移入消失。把溶液移入消失。把溶液移入l00mLl00mLl00mLl00mL容量瓶中，洗涤锥形瓶，洗容量瓶中，洗涤锥形瓶，洗容量瓶中，洗涤锥形瓶，洗容量瓶中，洗涤锥形瓶，洗液并入液并入液并入液并入100mL100mL100mL100mL容量瓶中，加水定容，

24、摇匀，供测定用。容量瓶中，加水定容，摇匀，供测定用。容量瓶中，加水定容，摇匀，供测定用。容量瓶中，加水定容，摇匀，供测定用。(4)(4)测定：测定：按还原糖测定法的高锰酸钾法按还原糖测定法的高锰酸钾法或直接滴定法进行。或直接滴定法进行。同时取同时取50ml 50ml 水及与样品处理时相同量的水及与样品处理时相同量的淀粉酶溶液，按同一方法做试剂淀粉酶溶液，按同一方法做试剂空白试验空白试验。3.3.注意事项注意事项：（1 1 1 1）需时较长，特别是淀粉含量高的样品。）需时较长，特别是淀粉含量高的样品。）需时较长，特别是淀粉含量高的样品。）需时较长，特别是淀粉含量高的样品。（2 2 2 2）温度高

25、于）温度高于）温度高于）温度高于55555555，若到，若到，若到，若到70-7570-7570-7570-75，酶活性大大降低，酶活性大大降低，酶活性大大降低，酶活性大大降低，或是完全失去作用，因此保温温度必须严格控制。或是完全失去作用，因此保温温度必须严格控制。或是完全失去作用，因此保温温度必须严格控制。或是完全失去作用，因此保温温度必须严格控制。（3 3 3 3）保温时间依样品种类而异，有的样品如马铃薯）保温时间依样品种类而异，有的样品如马铃薯）保温时间依样品种类而异，有的样品如马铃薯）保温时间依样品种类而异，有的样品如马铃薯淀粉的酶水解可延至淀粉的酶水解可延至淀粉的酶水解可延至淀粉的酶

26、水解可延至5 5 5 5昼夜。昼夜。昼夜。昼夜。（4 4 4 4）若用氰化盐碘量法测还原糖，含量）若用氰化盐碘量法测还原糖，含量）若用氰化盐碘量法测还原糖，含量）若用氰化盐碘量法测还原糖，含量0.05-3mg/ml0.05-3mg/ml0.05-3mg/ml0.05-3mg/ml为宜。可为宜。可为宜。可为宜。可按照样品含量调节称样量及分取倍数。按照样品含量调节称样量及分取倍数。按照样品含量调节称样量及分取倍数。按照样品含量调节称样量及分取倍数。（三）（三）CaClCaCl2 2-HOAc-HOAc浸提浸提旋光法旋光法1.1.原理：原理：淀粉是多糖聚合物，可用淀粉是多糖聚合物，可用淀粉是多糖聚合

27、物，可用淀粉是多糖聚合物，可用CaClCaClCaClCaCl2 2 2 2-HOAc(=1.3-HOAc(=1.3-HOAc(=1.3-HOAc(=1.3，pH2.3)pH2.3)pH2.3)pH2.3)为分散和液化剂，在为分散和液化剂，在为分散和液化剂，在为分散和液化剂，在一定的酸度和加热条件一定的酸度和加热条件一定的酸度和加热条件一定的酸度和加热条件下，下，下，下，使淀粉溶解和部分酸解，生成一定的水解产物，具有使淀粉溶解和部分酸解，生成一定的水解产物，具有使淀粉溶解和部分酸解，生成一定的水解产物，具有使淀粉溶解和部分酸解，生成一定的水解产物，具有一定的旋光性，可用一定的旋光性，可用一定的

28、旋光性，可用一定的旋光性，可用旋光计旋光计旋光计旋光计测定。测定。测定。测定。用此法时，各种淀粉的水解产物的比旋指定为用此法时，各种淀粉的水解产物的比旋指定为用此法时，各种淀粉的水解产物的比旋指定为用此法时，各种淀粉的水解产物的比旋指定为203203203203。全国谷物淀粉分析方法标准化研究协作组认为，本法全国谷物淀粉分析方法标准化研究协作组认为，本法全国谷物淀粉分析方法标准化研究协作组认为，本法全国谷物淀粉分析方法标准化研究协作组认为，本法结果的结果的结果的结果的重复性好，操作也简便、快速。重复性好，操作也简便、快速。重复性好，操作也简便、快速。重复性好，操作也简便、快速。数显自动旋光仪数

29、显自动旋光仪 WZZ-2A WZZ-2A 2.2.2.2.操作步骤操作步骤操作步骤操作步骤（1 1 1 1）样品处理：）样品处理：）样品处理：）样品处理：称取过称取过称取过称取过60606060目筛的样品目筛的样品目筛的样品目筛的样品2.500g2.500g2.500g2.500g置于置于置于置于250ml250ml250ml250ml三角瓶中，加入三角瓶中，加入三角瓶中，加入三角瓶中，加入10mlCaCl10mlCaCl10mlCaCl10mlCaCl2 2 2 2-HOAcHOAcHOAcHOAc溶液，摇匀，加几粒玻璃珠使其充分分散。临加溶液，摇匀，加几粒玻璃珠使其充分分散。临加溶液，摇匀

30、，加几粒玻璃珠使其充分分散。临加溶液，摇匀，加几粒玻璃珠使其充分分散。临加热前再加热前再加热前再加热前再加50mlCaCl50mlCaCl50mlCaCl50mlCaCl2 2 2 2-HOAc-HOAc-HOAc-HOAc溶液，摇匀，加盖小漏斗，立即置于溶液，摇匀，加盖小漏斗，立即置于溶液，摇匀，加盖小漏斗，立即置于溶液，摇匀，加盖小漏斗，立即置于118l118l118l118l恒温甘油浴中，使之在恒温甘油浴中，使之在恒温甘油浴中，使之在恒温甘油浴中，使之在5min5min5min5min内达到恒温，再继续加热内达到恒温，再继续加热内达到恒温，再继续加热内达到恒温，再继续加热25min25m

31、in25min25min，时间到后立即取出置冷水中迅速冷却。用约，时间到后立即取出置冷水中迅速冷却。用约，时间到后立即取出置冷水中迅速冷却。用约，时间到后立即取出置冷水中迅速冷却。用约30ml30ml30ml30ml蒸馏水将蒸馏水将蒸馏水将蒸馏水将三角瓶中的分散液定量地转入三角瓶中的分散液定量地转入三角瓶中的分散液定量地转入三角瓶中的分散液定量地转入100ml100ml100ml100ml容量瓶中，加容量瓶中，加容量瓶中，加容量瓶中，加1m1301m1301m1301m130硫酸锌硫酸锌硫酸锌硫酸锌溶液摇匀，以沉淀蛋白质，再加入溶液摇匀，以沉淀蛋白质，再加入溶液摇匀，以沉淀蛋白质，再加入溶液摇

32、匀，以沉淀蛋白质，再加入1ml151ml151ml151ml15亚铁氰化钾溶液，摇匀，亚铁氰化钾溶液，摇匀，亚铁氰化钾溶液，摇匀，亚铁氰化钾溶液，摇匀，以消除剩余硫酸锌的干扰（以消除剩余硫酸锌的干扰（以消除剩余硫酸锌的干扰（以消除剩余硫酸锌的干扰（2Zn2Zn2Zn2Zn2 2 2 2 K K K K4 4 4 4Fe(CN)Fe(CN)Fe(CN)Fe(CN)6 6 6 6ZnZnZnZn2 2 2 2Fe(CN)Fe(CN)Fe(CN)Fe(CN)6 6 6 6 4K4K4K4K 亚铁氰化锌沉淀）。亚铁氰化锌沉淀）。亚铁氰化锌沉淀）。亚铁氰化锌沉淀）。若有气泡，可加几滴无水乙醇消除。用蒸馏

33、水定若有气泡，可加几滴无水乙醇消除。用蒸馏水定若有气泡，可加几滴无水乙醇消除。用蒸馏水定若有气泡，可加几滴无水乙醇消除。用蒸馏水定容，用中速滤纸过滤，弃去初滤液容，用中速滤纸过滤，弃去初滤液容，用中速滤纸过滤，弃去初滤液容，用中速滤纸过滤，弃去初滤液10-15ml10-15ml10-15ml10-15ml，收集其，收集其，收集其，收集其余澄清液待测。余澄清液待测。余澄清液待测。余澄清液待测。3.3.注意事项：注意事项：(1)(1)(1)(1)该法选用氯化钙溶液作为淀粉提取剂，是因为钙该法选用氯化钙溶液作为淀粉提取剂，是因为钙该法选用氯化钙溶液作为淀粉提取剂，是因为钙该法选用氯化钙溶液作为淀粉提

34、取剂，是因为钙与淀粉上的前羟基生成络合物，使它对水具有较高的与淀粉上的前羟基生成络合物，使它对水具有较高的与淀粉上的前羟基生成络合物，使它对水具有较高的与淀粉上的前羟基生成络合物，使它对水具有较高的亲和力，从而在水中易溶解。亲和力，从而在水中易溶解。亲和力，从而在水中易溶解。亲和力，从而在水中易溶解。(2)(2)(2)(2)水解产物的种类和比例决定了其旋光性能，故须水解产物的种类和比例决定了其旋光性能，故须水解产物的种类和比例决定了其旋光性能，故须水解产物的种类和比例决定了其旋光性能，故须严格控制条件操作。严格控制条件操作。严格控制条件操作。严格控制条件操作。(3)(3)(3)(3)样品中含有

35、水溶性糖类，须先用样品中含有水溶性糖类，须先用样品中含有水溶性糖类，须先用样品中含有水溶性糖类，须先用80808080乙醇洗糖。乙醇洗糖。乙醇洗糖。乙醇洗糖。但绝大多数谷物种子中水溶性糖含量甚微，一般可忽但绝大多数谷物种子中水溶性糖含量甚微，一般可忽但绝大多数谷物种子中水溶性糖含量甚微，一般可忽但绝大多数谷物种子中水溶性糖含量甚微，一般可忽视不计，不必进行脱糖手续。视不计，不必进行脱糖手续。视不计，不必进行脱糖手续。视不计，不必进行脱糖手续。（4 4 4 4）使样品溶解、水解是本法关键，故加热过程中使样品溶解、水解是本法关键，故加热过程中使样品溶解、水解是本法关键，故加热过程中使样品溶解、水解

36、是本法关键，故加热过程中不要搅拌，也不能使样品粘在瓶壁上。不要搅拌，也不能使样品粘在瓶壁上。不要搅拌，也不能使样品粘在瓶壁上。不要搅拌，也不能使样品粘在瓶壁上。浸提加热过程应始终注意保持样品的均匀分散，浸提加热过程应始终注意保持样品的均匀分散，浸提加热过程应始终注意保持样品的均匀分散，浸提加热过程应始终注意保持样品的均匀分散，避免结块，粘底或附着于瓶壁上，以免使结果偏低。避免结块，粘底或附着于瓶壁上，以免使结果偏低。避免结块，粘底或附着于瓶壁上，以免使结果偏低。避免结块，粘底或附着于瓶壁上，以免使结果偏低。试验证明，试验证明，试验证明，试验证明，在加热初期搅拌，淀粉易结块。但在在加热初期搅拌，

37、淀粉易结块。但在在加热初期搅拌，淀粉易结块。但在在加热初期搅拌，淀粉易结块。但在放入甘油浴前必须轻轻摇动，使样品均匀分散和在放入甘油浴前必须轻轻摇动，使样品均匀分散和在放入甘油浴前必须轻轻摇动，使样品均匀分散和在放入甘油浴前必须轻轻摇动，使样品均匀分散和在CaClCaClCaClCaCl2 2 2 2-HOAc-HOAc-HOAc-HOAc介质中，勿使样品粘在瓶底，必要时可介质中，勿使样品粘在瓶底，必要时可介质中，勿使样品粘在瓶底，必要时可介质中，勿使样品粘在瓶底，必要时可用铲形玻棒将其搅开，加热后使其自然水解，测定结用铲形玻棒将其搅开，加热后使其自然水解，测定结用铲形玻棒将其搅开，加热后使其

38、自然水解，测定结用铲形玻棒将其搅开，加热后使其自然水解，测定结果的重复性较好。果的重复性较好。果的重复性较好。果的重复性较好。(5)(5)(5)(5)加入加入加入加入CaClCaClCaClCaCl2 2 2 2-HOAc-HOAc-HOAc-HOAc溶液到沸腾的时间应控制在溶液到沸腾的时间应控制在溶液到沸腾的时间应控制在溶液到沸腾的时间应控制在5min5min5min5min左右。左右。左右。左右。(6)(6)(6)(6)CaCl CaCl CaCl CaCl2 2 2 2-HOAc-HOAc-HOAc-HOAc溶液应在放入甘油浴加热前约溶液应在放入甘油浴加热前约溶液应在放入甘油浴加热前约溶

39、液应在放入甘油浴加热前约5min5min5min5min时，时，时，时，才加入，以防样品粘附在瓶底，影响分散效果。才加入，以防样品粘附在瓶底，影响分散效果。才加入，以防样品粘附在瓶底，影响分散效果。才加入，以防样品粘附在瓶底，影响分散效果。（7 7 7 7）C C C CaClaClaClaCl2 2 2 2-HOAc-HOAc-HOAc-HOAc溶液的比重及溶液的比重及溶液的比重及溶液的比重及pHpHpHpH值均需准确调整值均需准确调整值均需准确调整值均需准确调整（pH2.3pH2.3pH2.3pH2.3，用酸度计调试），比重过大或过小均不利于，用酸度计调试），比重过大或过小均不利于，用酸度

40、计调试），比重过大或过小均不利于，用酸度计调试），比重过大或过小均不利于样品的均匀分散，而样品的均匀分散，而样品的均匀分散，而样品的均匀分散，而pHpHpHpH过高（过高（过高（过高（pH2.5pH2.5pH2.5pH2.5）则易使分散液）则易使分散液）则易使分散液）则易使分散液粘稠，难于过滤，粘稠，难于过滤，粘稠，难于过滤，粘稠，难于过滤，pHpHpHpH过低（过低（过低（过低（pH2.3pH2.3pH2.3pH1%,1%,1%,1%,应先脱脂。应先脱脂。应先脱脂。应先脱脂。（3 3 3 3）如果要求不太精密，回流冷凝步骤改在电炉上加如果要求不太精密，回流冷凝步骤改在电炉上加如果要求不太精密

41、，回流冷凝步骤改在电炉上加如果要求不太精密，回流冷凝步骤改在电炉上加热。热。热。热。（4 4 4 4）样品细度样品细度样品细度样品细度(1mm)(1mm)(1mm)(1mm)（否则会影响消化以致使测定（否则会影响消化以致使测定（否则会影响消化以致使测定（否则会影响消化以致使测定结果偏高），加热至沸的方式及沸腾时的工作状况时结果偏高），加热至沸的方式及沸腾时的工作状况时结果偏高），加热至沸的方式及沸腾时的工作状况时结果偏高），加热至沸的方式及沸腾时的工作状况时决定分析结果的主要因素。严格遵守实验条件，特别决定分析结果的主要因素。严格遵守实验条件，特别决定分析结果的主要因素。严格遵守实验条件，特别

42、决定分析结果的主要因素。严格遵守实验条件，特别要要要要掌握样品加酸处理和加碱处理的回流时间，沸腾状掌握样品加酸处理和加碱处理的回流时间，沸腾状掌握样品加酸处理和加碱处理的回流时间，沸腾状掌握样品加酸处理和加碱处理的回流时间，沸腾状态不能过于猛烈，态不能过于猛烈，态不能过于猛烈，态不能过于猛烈，样品不能脱离液体。样品不能脱离液体。样品不能脱离液体。样品不能脱离液体。（5 5 5 5）所用酸、碱、蒸馏水必须为热的，才能有好的所用酸、碱、蒸馏水必须为热的，才能有好的所用酸、碱、蒸馏水必须为热的，才能有好的所用酸、碱、蒸馏水必须为热的，才能有好的水解和洗涤效果。每次洗涤必须洗净，才不致影响水解和洗涤效

43、果。每次洗涤必须洗净，才不致影响水解和洗涤效果。每次洗涤必须洗净，才不致影响水解和洗涤效果。每次洗涤必须洗净，才不致影响后面的结果。后面的结果。后面的结果。后面的结果。（6 6 6 6）所用酸、碱的浓度须准确配制并标定，并保证所用酸、碱的浓度须准确配制并标定，并保证所用酸、碱的浓度须准确配制并标定，并保证所用酸、碱的浓度须准确配制并标定，并保证在这个过程中浓度变化很小或不变化。在这个过程中浓度变化很小或不变化。在这个过程中浓度变化很小或不变化。在这个过程中浓度变化很小或不变化。（7 7 7 7）一些一些一些一些propropropro含量高的样品，如棉籽粕等，不能用麻含量高的样品，如棉籽粕等，

44、不能用麻含量高的样品，如棉籽粕等，不能用麻含量高的样品，如棉籽粕等，不能用麻布作过滤介质，不能保证留下全部的细小颗粒。布作过滤介质，不能保证留下全部的细小颗粒。布作过滤介质，不能保证留下全部的细小颗粒。布作过滤介质，不能保证留下全部的细小颗粒。（8 8 8 8）准备古氏坩埚时，系将石棉放入水内，使成稀薄准备古氏坩埚时，系将石棉放入水内，使成稀薄准备古氏坩埚时，系将石棉放入水内，使成稀薄准备古氏坩埚时，系将石棉放入水内，使成稀薄的悬浮液，混匀后将约的悬浮液，混匀后将约的悬浮液，混匀后将约的悬浮液，混匀后将约30ml30ml30ml30ml倒入坩埚内，使其中的水倒入坩埚内，使其中的水倒入坩埚内，使

45、其中的水倒入坩埚内，使其中的水自动漏出，再用抽滤瓶抽干，将坩埚取下，用眼向有自动漏出，再用抽滤瓶抽干，将坩埚取下，用眼向有自动漏出，再用抽滤瓶抽干，将坩埚取下，用眼向有自动漏出，再用抽滤瓶抽干，将坩埚取下，用眼向有光处查看，如该坩埚内所铺的石棉无小孔，即可使用，光处查看，如该坩埚内所铺的石棉无小孔，即可使用，光处查看，如该坩埚内所铺的石棉无小孔，即可使用，光处查看，如该坩埚内所铺的石棉无小孔，即可使用，但也不可太厚，以免不易过滤。但也不可太厚，以免不易过滤。但也不可太厚，以免不易过滤。但也不可太厚，以免不易过滤。（9 9 9 9）双试验结果允许差不超过平均值的双试验结果允许差不超过平均值的双试

46、验结果允许差不超过平均值的双试验结果允许差不超过平均值的1 1 1 1，取平均值，取平均值，取平均值，取平均值作为测定结果。测定结果取小数点后第一位。作为测定结果。测定结果取小数点后第一位。作为测定结果。测定结果取小数点后第一位。作为测定结果。测定结果取小数点后第一位。（10101010）本法是国家标准分析方法。本法是国家标准分析方法。本法是国家标准分析方法。本法是国家标准分析方法。（二）酸性洗涤剂法（二）酸性洗涤剂法(ADF)(ADF)洗涤剂法是洗涤剂法是洗涤剂法是洗涤剂法是60606060年代初从事饲料营养价值研究的科学年代初从事饲料营养价值研究的科学年代初从事饲料营养价值研究的科学年代初

47、从事饲料营养价值研究的科学家范苏士特首先提出的，所测定结果根据研用洗涤剂的家范苏士特首先提出的，所测定结果根据研用洗涤剂的家范苏士特首先提出的，所测定结果根据研用洗涤剂的家范苏士特首先提出的，所测定结果根据研用洗涤剂的不同称为不同称为不同称为不同称为“中性洗涤纤维中性洗涤纤维中性洗涤纤维中性洗涤纤维”和和和和“酸性洗涤纤维，认为用酸性洗涤纤维，认为用酸性洗涤纤维，认为用酸性洗涤纤维，认为用洗涤纤维指标代替粗纤维指标更适用于评定饲料品质洗涤纤维指标代替粗纤维指标更适用于评定饲料品质洗涤纤维指标代替粗纤维指标更适用于评定饲料品质洗涤纤维指标代替粗纤维指标更适用于评定饲料品质。从事食品科学研究的科学

48、家也认为从事食品科学研究的科学家也认为从事食品科学研究的科学家也认为从事食品科学研究的科学家也认为洗涤纤维更接近于食洗涤纤维更接近于食洗涤纤维更接近于食洗涤纤维更接近于食品中品中品中品中“膳食纤维膳食纤维膳食纤维膳食纤维”的实际含量。洗涤剂法操作较简便、的实际含量。洗涤剂法操作较简便、的实际含量。洗涤剂法操作较简便、的实际含量。洗涤剂法操作较简便、方法可行、误差小方法可行、误差小方法可行、误差小方法可行、误差小。本节介绍酸性洗涤剂法。本节介绍酸性洗涤剂法。本节介绍酸性洗涤剂法。本节介绍酸性洗涤剂法。1.1.方法原理：方法原理：利用季铵盐，例如利用季铵盐，例如利用季铵盐，例如利用季铵盐，例如十六

49、烷基三甲基溴化铵十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)CTAB)CTAB)CTAB)等表面活性剂，在硫酸溶液中加热煮沸，植等表面活性剂，在硫酸溶液中加热煮沸，植等表面活性剂，在硫酸溶液中加热煮沸，植等表面活性剂，在硫酸溶液中加热煮沸，植物样品中的蛋白质、多糖、核酸等成分则可物样品中的蛋白质、多糖、核酸等成分则可物样品中的蛋白质、多糖、核酸等成分则可物样品中的蛋白质、多糖、核酸等成分则可水解、水解、湿润、乳化、分散，湿润、乳化、分散，而纤维素和木质素则很少变化。而纤维素和木质素则很少变化。而纤维素和木质素则很少变化。而纤维素和木质素则很少变化。然后再过滤然后再过滤然后再过滤然后再过滤、洗涤、烘干、洗涤

50、、烘干，残渣即为酸性洗涤纤维。，残渣即为酸性洗涤纤维。，残渣即为酸性洗涤纤维。，残渣即为酸性洗涤纤维。本法适用于谷物、饲料、牧草、果蔬等植物茎本法适用于谷物、饲料、牧草、果蔬等植物茎本法适用于谷物、饲料、牧草、果蔬等植物茎本法适用于谷物、饲料、牧草、果蔬等植物茎秆、叶、果实以及测定粗脂肪后的任何样品中粗纤秆、叶、果实以及测定粗脂肪后的任何样品中粗纤秆、叶、果实以及测定粗脂肪后的任何样品中粗纤秆、叶、果实以及测定粗脂肪后的任何样品中粗纤维的测定。维的测定。维的测定。维的测定。2.2.操作步骤：操作步骤：称取称取称取称取1-2g1-2g1-2g1-2g风干磨细过风干磨细过风干磨细过风干磨细过1mm