临床微生物检验2.doc
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1、临床微生物测验细菌收拾球菌菌群形状结构培育特点菌落特点生化反响直截了当反省与不离培育判定药敏试验致病要素致病范例其余葡萄球菌属G+球菌,呈单个、成双、短链液体培育基或脓汁中或成簇陈列呈葡萄串样,无鞭毛跟芽孢,某些菌株能形成荚膜兼性厌氧菌,对养分请求不高,最适温度3537,最适pH7.47.6,抵御力强,耐枯燥普通培育基:23不通明的圆形凹陷菌落,发生金黄色、白色、柠檬色等色素金葡菌血琼脂平板上菌落四周有通明溶血环溶血能在含10%15%NaCl琼脂中成长年夜便发生菌群掉调,可用甘露醇平板上为黄色菌落触酶试验+发酵甘露醇氧化酶试验显微镜反省、抗原检测、核酸检测凝结酶试验:玻片法联合型凝结酶,试管法
2、排泄型凝结酶,不论玻片法为阴性或阳性均需做试管法金葡菌、两头型+,路登葡萄球菌玻片法+、试管法惯例:-内酰胺类抗菌药可引诱-内酰胺酶的检测:当葡萄球菌对青霉素表示为敏感时纸片法或MIC进展,阳性者讲演细菌对不耐酶青霉素耐药酶类:凝结酶联合凝结酶、游离凝结酶、耐热核酸酶、通明质酸酶、磷脂酶毒素:葡萄球菌溶素、肠毒素、毒性休克综合征毒素、杀白细胞毒素、表皮剥脱毒素化脓性疾病毒生性疾病病院沾染 罕见G+球菌属间的鉴不试验:触酶试验七叶苷试验6.5%Nacl成长试验 MRS甲氧西林耐药的葡萄球菌MRSA甲氧西林耐药的金黄色葡萄球菌MRSCN甲氧西林耐药的凝结酶阴性葡萄球菌MRSE甲氧西林耐药的表皮葡萄
3、球菌链球菌属G+球菌,球形或卵圆形,呈链状陈列。肺炎链球菌呈矛尖状,宽端相对尖端向外,成双陈列,无芽孢,无能源,有荚膜跟黏液层兼性厌氧菌,肺炎链球菌跟草绿色链球菌某些种需要CO2增进其成长。养分请求高,须参加血液、血清。最适温度3537,pH7.47.6血平板上形成灰白色,通明或半通明,表面润滑的小菌落差别菌种的菌落可分不形成、三种溶血景象A群:菌落小、针尖巨细、溶血圈年夜,溶血;B群:通明溶血,溶血圈较小,菌落较年夜肺炎链球菌因荚膜多糖是菌落呈黏液状,核心凹陷的脐窝状菌落液体培育基:絮状跟颗粒积淀触酶试验显微镜反省、抗原检测咽拭标本的A群跟女性生殖道标本的B群、荚膜肿胀试验肺炎链球菌、凝集试
4、验、ELISA试验开端判定:G+球菌,链状或短链状陈列,触酶试验阴性,6.5%NaCl不成长,可断定为链球菌属溶血性链球菌判定:Lancefield群特异性抗原判定、PYR试验、杆菌肽敏感试验A群对0.04U杆菌肽简直全体敏感,A群挑选试验、VP试验溶血的巨细两种差别菌落、CAMP试验无乳链球菌的开端判定非溶血性链球菌判定草绿色链球菌的判定菌体细胞壁身分侵袭性酶外毒素:链球菌溶素、致热外毒素是人类猩红热的要紧致病物资侵袭性疾病毒生性疾病反常反响性疾病分类:溶血性链球菌A、C、G群:A群链球菌也称化脓性链球菌或溶血性链球菌,是人类链球菌中致病力最强的细菌B群溶血性链球菌溶血性链球菌甲型溶血性不溶
5、血D群链球菌非溶血性链球菌判定:菌种Optochin敏感试验胆汁溶菌试验七叶苷试验肺炎S+草绿色R牛R+肠球菌属G+球菌,呈单个,成对或短链状陈列,呈球杆状;液体培育基呈卵圆形、链状陈列。无芽孢跟荚膜,个不菌种有稀少鞭毛兼性厌氧,最适成长温度35,少数菌株在10跟45均能成长。养分请求不高。耐高盐、高碱、高胆汁。肠球菌能剖析七叶苷发生玄色菌落触酶试验、胆汁七叶苷跟PYR+、6.5%NaCl肉汤中能成长菌种判定有赖于糖代谢试验,依照甘露醇、山梨糖跟精氨酸的代谢分5群1敏感后果,且感化于细胞壁的药物也敏感,两者联合可出现协同感化。2耐药后果,那么与感化于细胞壁的药物无协同感化。头孢菌素、氨基糖苷类
6、、克林霉素跟复方新诺明体外可表现敏感,但临床医治有效。需进展-内酰胺酶测定。关于严峻沾染,需进展氨基糖苷类高水平耐药试验HLAR表面黏附素炎症调理因子毒素泌尿系沾染心内膜炎腹膜炎牙髓疾病奈瑟菌属G-双球菌,菌体直径0.61.5m,形似双肾或咖啡豆样,凹面相对,成双陈列,无能源,无芽孢,有写菌种形成荚膜最适成长温度3537,低于30不成长需氧成长,初不离需要5%7%CO2跟高湿度安慰成长需增加羊血、兔血或血清,对脂肪酸敏感,需加可溶性淀粉血琼脂或巧克力琼脂平板上呈润滑、潮湿或半通明、直径12的不溶血、圆形、灰蓝色菌落液体培育基中呈轻度或中度浑浊成长,无菌膜氧化酶+触酶+硝酸盐复原-多糖剖析-DN
7、A酶-革兰染色显微镜反省,抗原检测跟核酸检测。开端判定:直径12、灰褐色、润滑、半通明、稍扁的菌落,G-双球菌,氧化酶跟触酶试验+终极判定:葡萄糖跟麦芽糖发酵试验+,其余糖类发酵可断定为脑膜炎;葡萄糖发酵试验+,其余糖类可断定为淋病脑膜炎奈瑟菌:荚膜、菌毛、内毒素淋病奈瑟菌:菌毛、脂多糖、IgA1卵白酶、外膜卵白P脑膜炎奈瑟菌:盛行性脑脊髓膜炎淋病奈瑟菌:性传达疾病1、人是脑膜炎奈瑟菌的独一宿主。2、讲演时的本卷须知过错的判定后果可带来社会跟法医学费事。涂片反省讲演需注明细菌在细胞内或细胞外,并讲演细菌数目。五管糖试验葡萄麦芽乳糖蔗糖果糖脑+淋+卡他莫拉菌G-双球菌,直径0.51.5m血琼脂跟
8、巧克力琼脂平板上成长精良,3524h孵育后菌落直径13,灰白色、润滑氧化酶、触酶、硝酸盐复原、DNA酶+不发酵糖类产酸三丁酸甘油酯水解丁酸酯酶试验+可与奈瑟菌属鉴不。可发生引诱型-内酰胺酶临床微生物测验细菌收拾肠杆菌科菌群形状结构培育特点菌落特点生化反响直截了当反省与不离培育判定致病要素致病范例其余概述G-直杆菌或球杆菌,无芽孢,多有鞭毛,能活动,致病性菌株多有菌毛兼性厌氧,养分请求不高。普通培育基跟麦康凯培育基上成长精良。抵御力:1不耐热跟枯燥;耐高温。2对普通化学消毒剂敏感。3耐胆盐,并在必定水平上可抵御染料的抑菌感化,此特点已被用于制造肠道选择培育基。发酵葡萄糖产酸或产气触酶+氧化酶硝酸
9、盐复原试验+显微镜反省肠表面本:普通采纳血琼脂或巧克力琼脂粪便标本:针对沙门菌跟志贺菌选择SS培育基革兰阴性杆菌葡萄糖发酵(O/F或H-L)+-非发酵菌氧化酶试验-+肠杆菌科弧菌科肠道外沾染:除志贺菌较少惹起肠道外沾染,肠杆菌科很多细菌可惹起肠道外各零碎沾染。鼠疫耶尔森菌惹起烈性沾抱病鼠疫。肠道沾染:要紧惹起种种急、慢性腹泻、食品中毒、肠热症等。抗原身分:包含菌体抗原O、鞭毛抗原H跟表面抗原。菌体抗原O:是细菌细胞壁身分,化学身分是脂多糖,脂多糖分子是一个以核心多糖为核心的三层结构,内侧的脂类A为内毒素的毒性身分,外侧的特异多糖决议O抗原的特异性。鞭毛抗原H:是不耐热的卵白质,存在特异性。表面
10、抗原:是包饶在菌体抗原外侧的不耐热的多糖抗原,在差别的菌属中有差别的称号。O抗原跟H抗原是肠杆菌科细菌分群跟分型的依照。表面抗原存在时可阻断菌体抗原与响应抗体发生反响,但加热处理可消弭这种阻断感化。埃希菌属G-直短杆菌,单个或成对存在,少数有周鞭毛有菌毛,某些菌株特不是惹起肠道外沾染的菌株有微荚膜养分请求不高,兼性厌氧抗原结构:要紧有O抗原、H抗原跟K抗原O抗原:多糖磷脂复合物LPS,耐热,加热100不克不及灭活,现在已有171种,是血清学分型的根底H抗原:不耐热的卵白质。曾经明白有56种,均为单相菌株。K抗原:多糖荚膜抗原,对热波动,能禁止O凝集,曾经明白有100种。年夜肠埃细菌的血清型不按
11、O:K:H的次序,以数字表示普通养分琼脂:形成较年夜的圆形、润滑、潮湿、灰白色的菌落血平板:可发生溶血肠道选择培育基:可发酵乳糖,形成有色菌落,黏液型菌落能剖析多种糖产酸产气。IMViC:+-KIA:AA+-MIU:+-EMB:扁平,粉白色有金属光芒MAC:粉白色或白色SS:红-粉白色或地方为粉白色、四周无色XLD:不通明黄色1、ETEC:生化反响+血清分型+肠毒素检测最牢靠2、EIEC:赖氨酸、能源、乳糖、葡萄糖产气均-与志贺菌的生化反响鉴不试验有醋酸钠、葡萄糖胺应用跟黏液酸盐产酸、年夜肠埃希菌三者均+判定内容有生化反响、血清学试验国产血清OK1、OK2、毒力测定(豚鼠眼角膜)。3、EPEC
12、:生化反响+血清凝集国产血清有OK1、OK2、OK3+细胞粘附试验4、EHEC:最主要的血清型O157:H7,判定:生化反响+血清凝集,可意外定Vero也可确诊5、EAEC:无抗血清,可用凝块聚拢试验判定。将细菌接种于M-H肉汤,35培育,越日不雅看后果,表面形成凝块者为阳性,平均浑浊无凝块者为阴性。侵袭力:与菌毛跟K抗原有关。内毒素肠毒素:耐热肠毒素LT跟耐热肠毒素ST。两种毒素均可惹起肠液少量排泄而致腹泻。肠道外沾染致腹泻年夜肠埃希菌肠毒素型年夜肠埃希菌ETEC:惹起儿童腹泻跟游览者腹泻。出现恶心、腹痛、低热以及急性发生的相似于轻型霍乱的少量水样便。是由肠毒素ST、LT惹起。肠致病型年夜肠
13、埃希菌EPEC:要紧惹起婴幼儿肠道沾染,招致发烧、吐逆、少量水样便,便中含粘液但无血液。肠侵袭型年夜肠埃希菌EIEC:该菌惹起的病症相似于志贺菌惹起腹泻,如发烧、腹痛、水泻或典范的菌痢病症出现脓血粘液便。肠出血型年夜肠埃希菌STEC、VTEC或EHEC肠凝集型年夜肠埃希菌EAEC沙门菌属G-修长杆菌,多存在周鞭毛,能活动,偶然会出现无鞭毛的渐变型。无芽孢,无荚膜。兼性厌氧,最适成长温度3537,最适成长pH6.87.8,养分请求不高抵御力:不强不耐热:601小时或651520分钟。:水中跟粪便中可存活较长时刻。对胆盐跟煌绿等染料有必定抵御力。普通养分琼脂:圆形、润滑、潮湿、半通明、边沿划一,偶
14、然出现毛糙型肠道选择培育基:菌落小至中等,通明或半通明,不发酵乳糖,有些能发生硫化氢,在SS琼脂上形成核心玄色的菌落乳糖-,三糖铁琼脂中产碱/产酸或产碱/产酸产气,H2S+枸橼酸盐-/+,脲酶、吲哚、能源、VP-,鸟氨酸+显微镜反省+抗原反省不离培育:血液跟骨髓粪便或肛拭菌量少的标本:离心后取沉渣接种,增菌液、BAP、选择培育基。食品等固体物资磨碎后用盐水10倍稀释,再接种,增菌液跟不离培育基。普通先用生化反响挑选,契合沙门菌属特点,再做血清学凝集试验。血清学判定步调为:AF多价血清分群O血清群的因子血清定群H因子血清定型,最初综合O、H、Vi因子血清的后果得出血清型。本卷须知:与多价血清不凝
15、,能够存在Vi抗原,用心理盐水制成浓菌悬液滚水浴1530分钟。仅出现单相H抗原,需引诱出另一相后再进展判定。侵袭力:存在Vi抗原的沙门菌有侵袭力。内毒素:沙门菌有较强的内毒素,可惹起发烧、白细胞增加、中毒性休克。肠毒素伤寒跟副伤寒:表示为血流沾染非伤寒型沙门菌沾染:肠道沾染、肠道外沾染凡临床不离菌乳糖、吲哚、脲酶+均不思索为沙门菌。1、血清学诊断胖达氏反响:用曾经明白的伤寒沙门菌的O、H抗原、副伤寒沙门菌A、B、C表示的H抗原,检测患者的血清中的响应抗体及其效价。用于辅佐诊断伤寒、副伤寒甲、乙、丙。此办法与不离培育同时进展或培育掉败时试验。办法:试管法跟年夜孔反响板后果及说明:临床参考值:O1
16、:80;A、B、C1:80;H1:160O、H抗体降低的意思:1)菌体O抗体IgM:出现早,继续约半年,衰退后不易受非特异性安慰而重现2)H抗体IgG:出现较晚,继续时刻长达数年,衰退后易受非特异性病原安慰而长久地重现3)少数病例全部病程中胖达试验一直在畸形范畴内,缘故能够有:晚期运用抗菌药免疫功用低下4)防备接种的妨碍:H抗体增高且保持时刻长,O抗体增高不分明,且效价敏捷下落5)回想反响2、抗原结构:要紧有三种,即菌体O抗原、鞭毛H抗原跟表面Vi等抗原。O抗原菌体抗原:多糖-类脂-卵白质复合物,耐热如O2群A等。O抗原与响应抗血清IgM发生颗粒状凝集反响。H抗原鞭毛抗原:不波动的卵白质抗原,
17、加热607015分钟或用乙醇处理可被毁坏。H抗原有两相:特异相、非特异相。H抗原是定型血清型的依照,它与响应抗血清IgG发生絮状反响。表面抗原:已被证明的有:Vi抗原、M抗原、5抗原三种,均为不波动的表面抗原。3.变异性:S-R变异、H-O变异、位相变异、V-W变异临床微生物测验细菌收拾肠杆菌科菌群形状结构培育特点菌落特点生化反响直截了当反省与不离培育判定致病要素致病范例其余志贺菌属G-直杆菌,短小杆菌,有菌毛,无鞭毛、芽胞跟荚膜兼性厌氧,最适成长温度37,最适pH7.27.4,对养分请求不高,能在普通培育基上成长对理化要素的抵御力较肠杆菌科别的细菌为低在肠道鉴不培育基上形成乳糖不发酵、中等巨
18、细、无色半通明的菌落,宋内志贺菌常形成毛糙型菌落EMB:无色或不通明的琥珀色,MAC:无色不通明,SS:不通明或通明,XLD:白色三糖铁琼脂中产酸/产气,枸橼酸盐、脲酶、能源、VP试验-不离培育用肠道培育基MAC唆使剂为中性红、选择培育基SS、木糖-赖氨酸-去氧胆酸盐XLD唆使剂为酚红培育基片面的生化反响+血清学判定痢疾志贺菌甘露醇-,宋内志贺菌-半乳糖苷酶跟鸟氨酸脱羧酶+志贺菌属4种多价血清定型群多价。A群:痢疾志贺菌,本群甘露醇阴性,有10个血清型,各型间无独特抗原关联,且各型均有K抗原。B群:福氏志贺菌,有6个血清型跟X、Y两个变种。每个菌型均有两种抗原即型抗原跟群抗原,2a跟6型有K抗
19、原,而别的型不含K抗原C群:鲍特志贺菌,有15个血清型,均有型抗原、K抗原。D群:宋内氏志贺菌,本群ONPG跟鸟氨酸阳性,仅有一个血清型。侵袭力内毒素:脓血便、腹痛、里急后重等外毒素Vero毒素:细胞毒性、肠毒生性、神经毒或致逝世毒性志贺菌属要紧惹起细菌性痢疾菌痢,沾染源是病人跟带菌者,经粪-口授达。分群:A群痢疾志贺菌、B群福氏志贺菌、C群鲍氏志贺菌、D群宋内氏志贺菌。鉴不试验与EIEC的鉴不:一样点:LYS-、能源-、乳糖-差别点:EIEC:醋酸钠、葡萄糖铵、粘质酸盐+志贺菌:醋酸钠、葡萄糖铵、粘质酸盐-与类志贺邻单胞菌的鉴不:志贺菌:能源、氧化酶-与沙门菌的鉴不:志贺菌:H2S、能源-,
20、血清学凝集与沙门菌凝集,与志贺菌不凝集抗原身分:志贺菌属只要O、K抗原,无H抗原。宋内志贺菌易发生S-R变异,由润滑型变为毛糙型。耶尔森菌属鼠疫耶尔森菌G-直杆菌或球杆菌,两头钝圆,南北极浓染,有荚膜,无芽孢,无鞭毛。在陈腐培育物、陈腐性病灶中,菌体多形状,呈球形、棒形或哑铃状。兼性厌氧,耐高温,在443均能成长,2528最适成长,最适pH6.97.2,在普通培育基上能够成长,但发育迟缓普通养分琼脂:可成长,但成长迟缓,经24h孵育形成针尖巨细的菌落,比肠杆菌科别的细菌菌落小的多血平板:48h后形成柔嫩、稀薄的毛糙菌落。液体培育基:开场浑浊,24h后呈积淀成长48h后形成钟乳石景象,有必定鉴不
21、意思。在25及37能源-,IMVC:-+-;赖氨酸跟鸟氨酸脱羧酶、苯丙氨酸脱氨酶、脲酶、硫化氢均为-,对年夜少数糖不剖析,剖析葡萄糖产酸不产气首次不离时典范的形状、菌落特色跟生化特点内毒素跟鼠毒素甲类沾抱病鼠疫小肠结肠炎耶尔森菌:G-球杆菌,偶有南北极浓染,无芽胞跟荚膜兼性厌氧,耐高温,最适成长温度2028。35无能源,22-25有能源,养分请求不高,普通琼脂上成长精良BAP可出现溶血肠道选择培育基:无色、半通明、扁平较小菌落。不波动乳糖-、葡萄糖+、蔗糖+皆不产气。H2S-、脲酶+V-P试验2225+,3537-,鸟氨酸脱羧酶+能源、VP试验2225+,3537-;嗜冷性,脲酶+,硫化氢-,
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