最新实验——重组DNA转化宿主细胞PPT课件.ppt

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1、实验实验重组重组DNADNA转化宿主细转化宿主细胞胞实验原理实验原理l l转化是将异源转化是将异源转化是将异源转化是将异源 DNA DNA 分子引入另一细胞品系，使受体细分子引入另一细胞品系，使受体细分子引入另一细胞品系，使受体细分子引入另一细胞品系，使受体细胞获得新的遗传性状的一种手段。胞获得新的遗传性状的一种手段。胞获得新的遗传性状的一种手段。胞获得新的遗传性状的一种手段。l l受体细胞在完成转化的过程中必须处于感受态。受体细胞在完成转化的过程中必须处于感受态。受体细胞在完成转化的过程中必须处于感受态。受体细胞在完成转化的过程中必须处于感受态。l l大肠杆菌感受态细胞有多种制备方法。目前，

2、最常用大肠杆菌感受态细胞有多种制备方法。目前，最常用大肠杆菌感受态细胞有多种制备方法。目前，最常用大肠杆菌感受态细胞有多种制备方法。目前，最常用的方法是的方法是的方法是的方法是CaClCaCl2 2处理法。处理法。处理法。处理法。l l感受态细胞经过转化后，就成为转化细胞，也可以被感受态细胞经过转化后，就成为转化细胞，也可以被感受态细胞经过转化后，就成为转化细胞，也可以被感受态细胞经过转化后，就成为转化细胞，也可以被称为转化子。也就是带有异源称为转化子。也就是带有异源称为转化子。也就是带有异源称为转化子。也就是带有异源 DNA DNA 分子的受体细胞。分子的受体细胞。分子的受体细胞。分子的受体

3、细胞。操作步骤操作步骤l l平板的准备：平板的准备：平板的准备：平板的准备：熔化熔化熔化熔化LBLB固体培养基，每固体培养基，每固体培养基，每固体培养基，每100 mL100 mL中添加中添加中添加中添加100 mg/mL AMP 100100 mg/mL AMP 100 L L、48 mg/mL IPTG 10048 mg/mL IPTG 100 L L、20 mg/mL X-gal 20020 mg/mL X-gal 200 L L。铺制平板三块。铺制平板三块。铺制平板三块。铺制平板三块。注意事项注意事项l注意无菌操作，避免染菌。注意无菌操作，避免染菌。注意无菌操作，避免染菌。注意无菌操作

4、，避免染菌。l注意用火安全。注意用火安全。注意用火安全。注意用火安全。lAmpAmp溶液解冻后会有沉淀，稍稍加热使沉淀溶溶液解冻后会有沉淀，稍稍加热使沉淀溶溶液解冻后会有沉淀，稍稍加热使沉淀溶溶液解冻后会有沉淀，稍稍加热使沉淀溶化才可使用。化才可使用。化才可使用。化才可使用。l严格控制热激活温度和时间。严格控制热激活温度和时间。严格控制热激活温度和时间。严格控制热激活温度和时间。思考题思考题l l转化后，如果平板培养时间延长，会在阳性菌落附近出转化后，如果平板培养时间延长，会在阳性菌落附近出转化后，如果平板培养时间延长，会在阳性菌落附近出转化后，如果平板培养时间延长，会在阳性菌落附近出现许多小的现许多小的现许多小的现许多小的“卫星菌落卫星菌落卫星菌落卫星菌落”，为什么？，为什么？，为什么？，为什么？下次实验下次实验l转化子的转化子的转化子的转化子的PCRPCR法鉴定法鉴定法鉴定法鉴定结束语结束语谢谢大家聆听！谢谢大家聆听！13