2022年基因工程原理练习题及其答案.docx
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1、精选学习资料 - - - - - - - - - 学习必备 欢迎下载基因工程复习题题型:名词说明(10 个) 30 分;填空(每空 1 分) 20 分;挑选题(每题 1 分)10 分;简答题 (4 个) 20 分;论述题(2 个) 20 分;第一章 绪论1. 名词说明:基因工程:依据预先设计好的蓝图,利用现代分子生物学技术,特殊是酶学技术,对遗传物质 DNA直接进行体外重组操作与改造,将一种生物 (供体) 的基因转移到另外一种生物(受体)中去,从而实现受体生物的定向改造与改良;遗传工程广义: 指以转变生物有机体性状为目标,采纳类似工程技术手段而进行的对遗 传物质的操作, 以改良品质或制造新品种
2、;包括细胞工程、染色体工程、细胞器工程和基因 工程等不同的技术层次;狭义:基因工程;克隆:无性 繁衍 系或纯系; 指由同个祖先经过无性繁衍方式得到的一群由遗传上同一 的 DNA分子、细胞或个体组成的特殊生命群体;. 2什么是基因克隆及基本要点 3. 举例说明基因工程进展过程中的三个重大大事;A 限制性内切酶和DNA连接酶的发觉(标志着DNA重组时代的开头) ;B 载体的使用; C 1970 年,逆转录酶及抗性标记的发觉;4. 基因工程讨论的主要内容是什么?基础讨论:基因工程克隆载体的讨论 基因工程受体系统的讨论 目的基因的讨论 基因工程工具酶的讨论 基因工程新技术的讨论 应用讨论:基因工程药物
3、讨论 转基因动植物的讨论 在食品、化学、能源和环境爱护等方面的应用讨论 其次章 基因克隆的工具酶 1. 名词说明:限制性核酸内切酶:一类能识别双链DNA中特殊核苷酸序列,并使每条链的一个磷酸二酯键断开的内脱氧核糖核酸酶;回文结构:双链 DNA中的一段倒置重复序列,当该序列的双链被打开后,可形成发夹结 构;同尾酶:来源不同、识别序列不同,但产生相同粘性末端的酶;同裂酶:不同来源的限制酶可切割同一靶序列和具有相同的识别序列 黏性末端: DNA末端一条链突出的几个核苷酸能与另一个具有突出单链的 DNA末端通过互补 配对粘合,这样的 DNA末端,称为粘性末端;平末端: DNA片段的末端是平齐的;名师归
4、纳总结 限制性核酸内切酶的酶活性单位(U):在酶的最适反应条件下,在50 l 容积中, 60 分钟第 1 页,共 27 页内完全切割1 g DNA所需的酶量为1 个酶活性单位(unit 或 U)限制性核酸内切酶的星活性:指限制性内切酶在非标准条件下,对与识别序列相像的其它序列也进行切割反应,导致显现非特异性的DNA片段的现象;- - - - - - -精选学习资料 - - - - - - - - - 连杆( linker):化学合成的学习必备欢迎下载8 12 个核苷酸组成的寡核苷酸片段;以中线为轴两边对称,其上有一种或几种限制性核酸内切酶的识别序列,酶切后可产生肯定的粘性末端,便于与具有相同粘
5、性末端的另一DNA片段连接;连接头 (adaptor ):化学合成的寡核苷酸,含有一种以上的限制性核酸内切酶识别序列;其一端或两端具有一种或两种内切酶切割产生的黏性末端;底物位点优势效应:酶对同一个DNA底物上的不同酶切位点的切割速率不同;激酶:对核酸末端羟基进行磷酸化的酶;2. 说明限制性内切核酸酶的命名原就要点;用属名第一个字母和种名的头两个字母组成的3 个字母斜体的略语表示寄主菌的物种名以及菌株(型)的代号命名;该菌株(种)中发觉的不同的酶依据次序以罗马字母编号 I, II, III 等;如: Escherichia coli 用 Eco 表示;第四个字母代表菌株或株型、变种名,如酶存在
6、于质粒上,就需大写字母表示非染色体遗传因子;例:Hind III 从流感嗜血菌株(Haemophilus Influenzue)d 株中分别的第三个酶;EcoR I 表示基因位于 Escherichia coli 中的抗药性 R 质粒上;前三个字母用斜体,其他用正体表示;假如酶存在于一种特殊菌株中,三个字母后加上菌株名称符号 , 名称最终部分往往包含罗马数字 , . 表示在该特殊菌株中发觉这种酶的先后次序;3. 引起限制性核酸内切酶星活性的可能因素有哪些?如使用 buffer 不当 , 会有 star activity,而 star activity 是指限制酶对所作用的 DNA及序列失去专一
7、性 , 当酶辨认切割位置的才能降低,导致相像的序列或是错误的辨认序列长度也会作用, 而产生错误的结果;所以当 DNA同时以两种限制酶处理时,挑选可使两种酶之活性反应均可达 75 以上的 restriction buffer,如找不到适当的 buffer 就先加低盐的buffer 使其中一酶作用后,在加入高盐 buffer 使另一酶作用,如无法以盐的高低分别加入不同的 buffer ,就先加入一种 buffer 作用后,加 3M NaOAc/95 alcohol 沉淀 DNA,再加另一种 buffer 作用;4. DNA 片段之间的连接方式有哪些?具黏性末端的 DNA片段之间的连接、具平末端 D
8、NA片段之间的连接、DNA片段末端修饰后进行连接、 DNA片段加连杆( linker)后的连接;5. 什么是 Klenow 酶.有哪些活性 .在基因工程中有什么作用 . Klenow DNA 聚合酶是 E.coli DNA polymerase 经蛋白酶(枯草杆菌蛋白酶)裂解而从全酶中除去 5-3 外切活性的肽段后的大片段肽段,而聚合活性和 3-5 外切活性不受影响;也称为 Klenow 片段( Klenow fragment ),或 E.coli DNA 聚合酶 大片段; 5 3聚合酶3 5 外切酶无小亚基活性6. DNA聚合酶、 RNA聚合酶、反转录酶、末端转移酶、多核苷酸激酶和碱性磷酸酯
9、酶有哪些主要特性?它们在基因工程中的主要用途分别是什么?第三章 基因工程的载体1. 名词说明:载体 : 指能够运载外源 DNA片段(目的基因) 进入受体细胞, 具有自我复制才能,使外源 DNA片段在受体细胞中得到扩增和表达,不被受体细胞的酶系统所破坏的一类 DNA分子;克隆载体: 用于在受体细胞中进行目的基因扩增的载体;一般具有较低的分子量、较高的拷贝数和放松型复制子;主要由细菌质粒或与其它质粒、噬菌体及真核生物病毒的 DNA重组构建;名师归纳总结 - - - - - - -第 2 页,共 27 页精选学习资料 - - - - - - - - - 学习必备欢迎下载可将重组体DNA导入适合的受体
10、细胞,表达载体:使目的基因在宿主细胞中得以表达的载体;使所载的目的基因能够复制、转录和翻译;穿梭载体 : 称双功能载体 bifunctional vector;能在两种不同的生物体内复制的载体;质粒 : 指独立存在于宿主细胞染色体外、能够自我复制的 DNA分子;放松型质粒 : 拷贝数多于 10 个的质粒;严谨型质粒 ; 拷贝数为 1 至几个的质粒;接合质粒; 指质粒所携带的基因的功能是使细胞彼此有效地接触,以便将质粒 DNA从供体细胞转移至受体细胞;如:质粒上的tra 基因使宿主细胞(大肠杆菌)产生菌毛,合成细胞表面物质,促使宿主细胞与受体细胞接合;质粒的不亲和性;显性质粒 ; 隐性质粒;质粒
11、的迁移作用;多拷贝质粒;整合质粒;穿梭质粒;表达质粒;探针质粒;pUCl8 质粒; pBR322质粒;溶菌生长 ; 溶源生长;原噬菌体;烈性噬菌体;溶原化;柯斯载体或粘粒cosmid ;cos 位点;人工染色体2. 作为工程载体必备哪些基本条件?3. 试述质粒载体、噬菌体载体、柯斯载体、M13 单链丝状噬菌体载体和酵母人工染色体载体各自的组成特点及其在基因工程中的应用;4简述质粒的生物学特性有哪些?5构建人工质粒的目的?6抱负质粒载体应具备的条件及构建需遵循的原就是什么?7 -DNA作为载体的优点是什么?8. 为什么野生型的噬菌体 DNA不宜作为基因工程载体.该如何改造?第四章目的基因的制备
12、1. 名词说明:目的基因;基因文库 cDNA 文库;2. 常规分别目的基因的方法有哪些?其原理分别是什么?3克隆目的基因的方法有哪些. 构建基因组文库的原理,涉及哪些基本过程.它同4什么是基因组文库genomic library.遗传学上的基因库、cDNA文库有什么不同. 第五章目的基因的导入和重组子的挑选1. 名词说明:受体细胞;感受态细胞;转化;转导;转染;体外装配;转换子;重组子;转 化率;负挑选;正挑选;a互补挑选 2. 试述几种常用的转化方法;3. 试述依据载体的挑选标记进行重组子挑选的方法和原理;4. 试述依据插入序列的表型特点进行重组子挑选的方法和原理;5.DNA 片断之间的连接
13、方式有哪些?各种连接方式的优缺点及 题?6受体细胞挑选的原就?第六章 外源基因的表达DNA重组中需要留意什么问1. 名词说明:融合蛋白;分泌蛋白;包涵体;外源基因表达体系 2. 大肠杆菌表达载体构成的重要元件有哪些?3. 试比较大肠杆菌、酵母、植物和动物细胞基因表达载体各自组成的特点;4. 真核基因在大肠杆菌中表达存在的问题和高效表达的计策是什么?5. 基因表达产物的检测方法有哪些?名师归纳总结 - - - - - - -第 3 页,共 27 页精选学习资料 - - - - - - - - - 第七章基因操作的基本技术学习必备欢迎下载1名词说明: 分子杂交; 探针;PCR; 引物;随机引物;切
14、口位移; 热启动;缺口翻译; Northern 印迹; Southern 印迹 2DNA制备的基本步骤有哪些?3碱裂解法和 CTAB法的原理;4凝胶电泳有哪几类?影响琼脂糖凝胶电泳的参数有哪些?5PCR的基本原理是什么?PCR反应体系的组成成份是什么?6试述 PCR反应的程序及参数;7PCR反应引物设计需遵循的原就有哪些?8试述核酸分子杂交的类型和基本步骤;9. 探针标记的方法有哪些?10说明 Southern 杂交的原理和方法;11.Northern 印迹与 Southern 印迹有什么不同 . 第八章 植物基因工程及应用1植物遗传转化方法主要有?2基因枪转化的优点?3自然的 Ti 质粒能作
15、为表达载体使用吗?为什么?4抱负杀虫剂应具备什么特性?第九章 动物基因工程及应用 1. 名词说明:转基因生物;共抑制效应;多效性胚胎干细胞 2转基因共机制效应的特点?3导致转基因失活的缘由可能有哪些?4试述动物基因工程的载体有?5如何挑选转基因多效性干细胞?第十章 医学基因工程及应用 1. 名词说明 : 胰岛素 ; 基因诊断 ; 基因治疗 ; 2. 基因鉴定的作用?3. 如何进行基因治疗?基因工程原理练习题及其答案 一、填空题 1基因工程是 _岁月进展起来的遗传学的一个分支学科;2基因工程的两个基本特点是: 1_,2_ ;3基因克隆中三个基本要点是:_; _和_;4 通过比较用不同组合的限制性
16、内切核酸酶处理某一特定基因区域所得到的不同大小的片段,可以构建显示该区域各限制性内切核酸酶切点相互位置的_;5 限制性内切核酸酶是按属名和种名相结合的原就命名的,第一个大写字母取自 _,其次、三两个字母取自 _,第四个字母就用 _表示;6部分酶切可实行的措施有:1_2_ 3_ 等;7第一个分别的限制性内切核酸酶是_;而第一个用于构建重组体的限制性内切名师归纳总结 - - - - - - -第 4 页,共 27 页精选学习资料 - - - - - - - - - 学习必备 欢迎下载核酸酶是 _;8限制性内切核酸酶BsuRI 和 Hae的来源不同,但识别的序列都是_,它们属于_;9DNA聚合酶 I
17、 的 Klenow 大片段是用 _切割 DNA聚合酶 I 得到的分子量为 76kDa的大片段,具有两种酶活性: 1_; 2_ 的活性;10为了防止 DNA的自身环化,可用 _去双链 DNA_;11 EGTA是_离子螯合剂;12测序酶是修饰了的T7 DNA聚合酶,它只有_酶的活性,而没有_酶的活性;13切口移位 nick translation法标记DNA的基本原理在于利用_的 _和_的作用;14欲将某一具有突出单链末端的双链 _或 _;DNA 分子转变成平末端的双链形式,通常可采纳15反转录酶除了催化DNA的合成外,仍具有_的作用,可以将DNA- RNA杂种双链中的 _ 水解掉;16基因工程中
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