二十六章急胃肠炎病毒.ppt

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1、二十六章急胃肠炎病毒 Still waters run deep.流静水深流静水深,人静心深人静心深 Where there is life,there is hope。有生命必有希望。有生命必有希望抵抗力抵抗力RVRV抵抗力较强，在粪便中能存活数天抵抗力较强，在粪便中能存活数天到数周，耐乙醚、耐酸碱，在到数周，耐乙醚、耐酸碱，在pH3.5pH3.51010仍可保持其感染性。仍可保持其感染性。5630min5630min可被可被灭活。也可被消毒剂灭活，如酚、甲灭活。也可被消毒剂灭活，如酚、甲醛、氯和异丙内醇等。醛、氯和异丙内醇等。微生物检验微生物检验1.1.发发病病早早期期采采集集腹腹泻泻粪粪

2、便便，加加9 9倍倍量量PBSPBS制制成成1010悬液，悬液，3000r3000rminmin离心离心10min10min，取上清冻存。，取上清冻存。2.2.标本直接电镜和免疫电镜检查标本直接电镜和免疫电镜检查 取便抽出取便抽出 液超速离心，取沉渣经醋酸钠染色电镜观液超速离心，取沉渣经醋酸钠染色电镜观 察，或进行免疫电镜观察，由于病毒颗粒察，或进行免疫电镜观察，由于病毒颗粒 聚集而易被检出。电镜下常见病毒颗粒，聚集而易被检出。电镜下常见病毒颗粒，60-80nm 60-80nm大小，有双层壳，核心呈放射状，大小，有双层壳，核心呈放射状，类似车轮排列，此为完整病毒颗粒，空心类似车轮排列，此为完整

3、病毒颗粒，空心 的是不完整病毒颗粒。的是不完整病毒颗粒。3.3.抗原检测抗原检测常用常用ELISAELISA双抗夹心法，用组和亚组特异性双抗夹心法，用组和亚组特异性McAbMcAb配合使用，可检出配合使用，可检出A A组轮状病毒、并判组轮状病毒、并判定亚组和血清型。约有定亚组和血清型。约有5 5假阳性，系粪便假阳性，系粪便中类风湿因子所致，此假阳性可用阻断试验中类风湿因子所致，此假阳性可用阻断试验加以克服。以组特异性抗体附着乳胶颗粒，加以克服。以组特异性抗体附着乳胶颗粒，加粪便抽出液进行凝集反应。具较好的特异加粪便抽出液进行凝集反应。具较好的特异性，但不及性，但不及ELlSAELlSA法敏感法

4、敏感 。3.病毒病毒RNARNA的的PAGEPAGE分析分析从从1010粪便悬液中粗提病毒粪便悬液中粗提病毒RNARNA，经，经PAGEPAGE电泳，泳动后经硝酸银染色进行分析，根电泳，泳动后经硝酸银染色进行分析，根据据A A、B B、C C三组三组RV 11RV 11个基因片段电泳位个基因片段电泳位置的特殊分布图形进行判断。第一组包括置的特殊分布图形进行判断。第一组包括1-41-4片段，第二组为片段，第二组为5-65-6片段，第三组为片段，第三组为7-97-9片段，第四组为片段，第四组为10101111片段。根据片段。根据A A组组RVRV的的第第1010、1111片断在片断在PAGEPAG

5、E上的迁移率不同分为上的迁移率不同分为两型，即长型和短型。两型，即长型和短型。4 4检测核酸检测核酸核酸杂交，用地高辛等标记组特异性探核酸杂交，用地高辛等标记组特异性探 针针(VP6(VP6基因基因)或型特异性探针或型特异性探针(VP4(VP4或或 VP7 VP7基因型特异性序列基因型特异性序列)检测轮状病毒检测轮状病毒RNARNA；PCRPCR技术既可用于诊断，又可用于分型。技术既可用于诊断，又可用于分型。由于扩增由于扩增RVRV的的RNARNA基因片段，首先需将特基因片段，首先需将特 异片段逆转录成异片段逆转录成cDNAcDNA，但粪便中存在抑，但粪便中存在抑 制逆转录物质，使该法灵敏度受

6、到一制逆转录物质，使该法灵敏度受到一 定影响。定影响。5.病毒分离培养病毒分离培养 用用原原代代猴猴肾肾细细胞胞和和传传代代非非洲洲绿绿猴猴肾肾(MAl04)(MAl04)，分分离离病病毒毒的的粪粪便便标标本本，胰胰酶酶预预处处理理(10g(10gml),ml),并并在在培培养养液液中中也也加加入入胰胰酶酶(0.5(0.51.0g1.0gml)ml)，有有利利于于病病毒毒的的生生长长。3737旋旋转转培培养养。经过几代培养后可出现经过几代培养后可出现CPECPE。第二节第二节 其他胃肠炎病毒其他胃肠炎病毒、肠道腺病毒、肠道腺病毒 人腺病毒人腺病毒D D组组3939型，型，F F组组4040、4

7、141三型能三型能引起胃肠炎，称肠道腺病毒。住院病引起胃肠炎，称肠道腺病毒。住院病人约占人约占1515，婴儿病毒性腹泻中仅次，婴儿病毒性腹泻中仅次于轮状病毒，占第二位。于轮状病毒，占第二位。EAdVEAdV为无包膜为无包膜DNADNA病毒，其形态结构、病毒，其形态结构、基因组成、复制特点、致病性与免疫基因组成、复制特点、致病性与免疫性等与腺病毒，经粪性等与腺病毒，经粪-口传播，主要口传播，主要发生在夏季，但四季均可发病。发生在夏季，但四季均可发病。微生物检测难于生长在组织培养中，难于生长在组织培养中，4040型和型和4141型人对型人对胚肾细胞系胚肾细胞系293293细胞敏感，用电镜观察和细胞

8、敏感，用电镜观察和EIAEIA法检测，也可用法检测，也可用PCRPCR法检测，根据六邻法检测，根据六邻体基因内高度保守序列设计引物，扩增产体基因内高度保守序列设计引物，扩增产物经物经PAGEPAGE电泳染色或核酸探针杂交检测病电泳染色或核酸探针杂交检测病毒特异毒特异DNADNA片段。片段。二、杯状病毒 人类杯状病毒是通过粪人类杯状病毒是通过粪-口途径传播，由口途径传播，由污染的水源、食品传播。感染引起小肠绒污染的水源、食品传播。感染引起小肠绒毛轻度萎缩和粘膜上皮破坏。突然发病发毛轻度萎缩和粘膜上皮破坏。突然发病发热、恶心呕吐、腹痛腹泻，预后良好。约热、恶心呕吐、腹痛腹泻，预后良好。约半数病人粪

9、便中可检测出病毒。半数病人粪便中可检测出病毒。NorwalkNorwalk病病毒是世界上引起非细菌性胃肠炎暴发流行毒是世界上引起非细菌性胃肠炎暴发流行最重要的病原体，流行于冬季，可累及任最重要的病原体，流行于冬季，可累及任何年龄组，成人抗体阳性率可达何年龄组，成人抗体阳性率可达55559090。人肠道杯状病毒为球形，人肠道杯状病毒为球形，Norwalk Norwalk样病毒样病毒表面凹痕参差不齐，为单链表面凹痕参差不齐，为单链RNARNA，立体对称，立体对称，无包膜。只有一种衣壳蛋白，尚不能在细胞无包膜。只有一种衣壳蛋白，尚不能在细胞培养中复制，也无敏感动物模型。实验室诊培养中复制，也无敏感动

10、物模型。实验室诊断主要通过电镜和免疫电镜技术检测病人粪断主要通过电镜和免疫电镜技术检测病人粪便中的病毒颗粒，但检测敏感度较低，仅便中的病毒颗粒，但检测敏感度较低，仅30305050病人粪便中可能检出病毒。近年病人粪便中可能检出病毒。近年来应用基因重组的来应用基因重组的NorwalkNorwalk病毒衣壳抗原建病毒衣壳抗原建立的立的ELISAELISA法，可检测病人抗体。法，可检测病人抗体。三、星状病毒1.1.星状病毒包括人、哺乳动物和鸟星状病毒。星状病毒包括人、哺乳动物和鸟星状病毒。2.2.可引起胃肠炎，发病率只占病毒性腹泻可引起胃肠炎，发病率只占病毒性腹泻 的的2 28 8。通过粪。通过粪-

11、口途径传播，易感者口途径传播，易感者 是是5 5岁以下婴幼儿，为幼儿园和儿科病房岁以下婴幼儿，为幼儿园和儿科病房 等医院内感染的主要病原体。等医院内感染的主要病原体。3.3.发病突起，发热恶心腹泻发病突起，发热恶心腹泻,持续持续2 23 3 天，但免疫功能低下的感染者病程延长。天，但免疫功能低下的感染者病程延长。5 5岁以下儿童的抗体阳性率在岁以下儿童的抗体阳性率在7070以上。以上。抗体具保护作用。抗体具保护作用。病毒大小类似于小病毒大小类似于小RNARNA病毒，呈球形，病毒，呈球形，直径直径282830nm30nm，电镜下可见病毒颗粒，电镜下可见病毒颗粒表面有表面有5 56 6个角，呈有鉴

12、别意义的个角，呈有鉴别意义的星状外形。单正链星状外形。单正链RNARNA，临床上至少，临床上至少具有具有7 7种血清型。病毒难于在体外培种血清型。病毒难于在体外培养，在有胰酶条件下，某些培养细胞养，在有胰酶条件下，某些培养细胞(如大肠癌细胞如大肠癌细胞)可用于分离星状病可用于分离星状病毒，并产生毒，并产生CPECPE。微生物微生物检测检测在胃肠炎急性期，星状病毒可在粪便中在胃肠炎急性期，星状病毒可在粪便中大量出现，可用免疫电镜直接检测腹泻大量出现，可用免疫电镜直接检测腹泻病人标本，尚可分血清型，也可用中和病人标本，尚可分血清型，也可用中和试验进行鉴定。用大肠癌细胞分离病毒，试验进行鉴定。用大肠癌细胞分离病毒，标本应经胰酶处理，而且培养液中也要标本应经胰酶处理，而且培养液中也要加适量胰酶。观察加适量胰酶。观察CPECPE，用免疫电镜与，用免疫电镜与中和试验进行鉴定与分型。中和试验进行鉴定与分型。