色谱柱的故障诊断与维护2.ppt

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1、色谱柱的故障诊断与维色谱柱的故障诊断与维护护2Authoring Division Name File NameSecurity Notice(if required)HLC与与GC 色谱柱问题用户调查色谱柱问题用户调查 色谱柱问题色谱柱问题百分率百分率Back Pressure,Plugged Frits24%Poor Reproducibility16Sample Recovery14Loss of Resolution13Instability11Voids8.1Leaks,Fittings4.8pH Range2.0Low Plate Count2.0Column Overload2.

2、0Cost1.7Miscellaneous15介绍提纲介绍提纲I.常见问题，现象及排除方案-基线漂移/噪音-峰型-压力变化-保留漂移II.日常维护/良好的实践-在线装置-样品制备-操作的限制III.再生/维修已损坏的色谱柱 -物理方法 -化学方法I.常见问题常见问题 基线噪音基线噪音可能的原因：流动池脏流动池脏检检测测器器灯灯有有问问题题如果是周期性的，则起源于泵的脉冲如果是周期性的，则起源于泵的脉冲温温度度对对检检测测器器的的影影响响气气泡泡经经过过检检测测器器Time(min.)基线漂移基线漂移 梯度洗脱梯度洗脱 温度不稳定温度不稳定(示差检测器）示差检测器）流动相中有污染物流动相中有污染

3、物 柱中的流动相没有平衡柱中的流动相没有平衡 体系中有污染物流出体系中有污染物流出可能的原因：可能的原因：鬼鬼 峰峰 鬼峰鬼峰即使不样也会出现的峰即使不样也会出现的峰20%-100%MeOH没有进样没有进样601530150371517问题问题1-流动相脏流动相脏问题问题2-样品过量样品过量(也可能是回收率太差也可能是回收率太差)峰峰 型型双双 峰峰柱柱 塌塌 陷陷正正 常常 峰峰 双双 峰峰柱中有死体积柱中有死体积 过滤片部分堵塞过滤片部分堵塞只有一个双峰只有一个双峰组分的共洗脱组分的共洗脱可能原因：样品与溶剂不匹配样品与溶剂不匹配峰峰 型型所有的峰都展宽柱效降低柱效降低柱死体积柱死体积大进

4、样量大进样量/质量质量高捻度流动相高捻度流动相部分峰展宽前次进样后流出的组分前次进样后流出的组分大分子量样品大分子量样品蛋白或聚合物蛋白或聚合物峰展宽样品与流动相不匹配样品与流动相不匹配峰峰 型型拖尾峰对称性 1.2NormalTailingNormalTailing原因：部分峰拖尾二次保留效应二次保留效应残留硅醇基的反应残留硅醇基的反应小峰紧跟在大峰的后面流出小峰紧跟在大峰的后面流出柱头有污染柱头有污染金属金属所有峰拖尾额外的柱效应额外的柱效应柱损坏柱损坏不适当的样品量不适当的样品量/溶剂溶剂峰峰 型型NormalFronting前伸峰不对称性 强有机溶剂)通常最有效l低 pH 流动相,如

5、0.1%TFA or 0.01M H3PO4,也是有效的l升高温度（60-80）色谱柱修复和再生色谱柱修复和再生-化学变化化学变化-Il6M盐酸胍、异硫氰酸胍、尿素等溶液可用于清除蛋白质的沉积lXDB,有机聚合物等填料可使用高pH 水溶液/有机溶液，如：0.01M NaOH 50%异丙醇/水溶液，硅胶基质应尽量减少接触时间(15-30 min).色谱柱的修复和再生色谱柱的修复和再生-化学变化化学变化-IIExample:4.6 mm ID x 15 cm Zorbax 300SB-C18Flow rate:1 mL/min;Temp:80A:0.1%TFA in water B:0.1%TFA

6、 in acetonitrile100%A for 30 min.;0-100%B over 30 min.;Hold 100%B for 30 min.,Return to 100%A in 5 min.Repeat 3 times.总总 结结 如果使用时加以注意，大部分的液相色谱柱的问题是可以预防的如果使用时加以注意，大部分的液相色谱柱的问题是可以预防的-流动相必须是互溶的，无颗粒流动相必须是互溶的，无颗粒-使用保护柱和在线过滤器，并定期更换使用保护柱和在线过滤器，并定期更换-使用恰当的样品制备方法使用恰当的样品制备方法-使用恰当的色谱柱清洗程序使用恰当的色谱柱清洗程序-不同类型的色谱柱，请选择不同的操作条件不同类型的色谱柱，请选择不同的操作条件 (如：如：SB:pH 1-6,XDB:pH 3-11)-保存柱反压及重要的色谱参数的记录保存柱反压及重要的色谱参数的记录(如：如：R,N,As,k)-色谱柱需保存在有机溶剂中色谱柱需保存在有机溶剂中(乙腈乙腈)