实验6 细菌的培养法.ppt

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1、实验6 细菌的培养法 Still waters run deep.流静水深流静水深,人静心深人静心深 Where there is life,there is hope。有生命必有希望。有生命必有希望目的要求目的要求n n1、学习和掌握细菌分离与培、学习和掌握细菌分离与培养的各种基本技术；养的各种基本技术；n n2、进一步熟悉和、进一步熟悉和掌握无菌操掌握无菌操作技术作技术。实验材料实验材料n n标本和菌种：大肠杆菌培养物、葡萄球标本和菌种：大肠杆菌培养物、葡萄球菌培养物、变形杆菌培养物、枯草杆菌菌培养物、变形杆菌培养物、枯草杆菌培养物；培养物；n n实验器材：接种环、接种针、酒精灯；实验器材

2、：接种环、接种针、酒精灯；n n培养基：普通琼脂平板、试管斜面、液培养基：普通琼脂平板、试管斜面、液体培养基、半固体培养基；体培养基、半固体培养基；n n常用的有接种针、接种环、接种钩、接种圈、接种铲或接种锄、常用的有接种针、接种环、接种钩、接种圈、接种铲或接种锄、常用的有接种针、接种环、接种钩、接种圈、接种铲或接种锄、常用的有接种针、接种环、接种钩、接种圈、接种铲或接种锄、玻璃涂棒等（见图玻璃涂棒等（见图玻璃涂棒等（见图玻璃涂棒等（见图6 6 6 6）。）。）。）。图6接种工具接种工具细菌接种的基本程序细菌接种的基本程序灭菌接种环灭菌接种环灭菌接种环灭菌接种环沾取标本沾取标本沾取标本沾取标本

3、接种接种接种接种灭菌接种环灭菌接种环灭菌接种环灭菌接种环杀灭接种环沾染的细菌，以免污染标本杀灭接种环沾染的细菌，以免污染标本杀灭接种环沾染的细菌，以免污染标本杀灭接种环沾染的细菌，以免污染标本杀灭接种环沾染的细菌，以免污染环境杀灭接种环沾染的细菌，以免污染环境杀灭接种环沾染的细菌，以免污染环境杀灭接种环沾染的细菌，以免污染环境（一）细菌的分离方法（一）细菌的分离方法n n培养基：固体平板培养基培养基：固体平板培养基n n分离方法：分离方法：划线分离法划线分离法n n意义：该法主要是借助划线而将混杂的意义：该法主要是借助划线而将混杂的细菌在琼脂表面分散开，使单个细菌能细菌在琼脂表面分散开，使单个

4、细菌能固定在某一点，生长繁殖后形成单个菌固定在某一点，生长繁殖后形成单个菌落，以达到分离纯种的目的。落，以达到分离纯种的目的。细菌的分离培养方法细菌的分离培养方法微生物的分离微生物的分离平板划线法平板划线法n n1.分区划线法：分区划线法：n n2.连续划线法：连续划线法：微生物的分离微生物的分离平板划线法平板划线法分区划线法分区划线法第一区划线第一区划线第一区划线第一区划线灭菌接种环灭菌接种环灭菌接种环灭菌接种环第二区划线第二区划线第二区划线第二区划线灭菌接种环灭菌接种环灭菌接种环灭菌接种环第三区划线第三区划线第三区划线第三区划线灭菌接种环灭菌接种环灭菌接种环灭菌接种环连续划线法连续划线法（

5、二）细菌的接种法（二）细菌的接种法n n当细菌分离成纯种后，常需要接种到相当细菌分离成纯种后，常需要接种到相关的培养基中，以测试其各种生物学性关的培养基中，以测试其各种生物学性状。一般可用斜面、半固体、液体培养状。一般可用斜面、半固体、液体培养基来检验细菌的培养特性，相应培养基基来检验细菌的培养特性，相应培养基的接种方法有三种。的接种方法有三种。斜面接种法斜面接种法n n培养基：培养基：培养基：培养基：斜面固斜面固斜面固斜面固体培养基；体培养基；体培养基；体培养基；n n接种方法：接种方法：接种方法：接种方法：斜面斜面斜面斜面培养基接种法；培养基接种法；培养基接种法；培养基接种法；n n用途：

6、用途：用途：用途：扩增细菌、扩增细菌、扩增细菌、扩增细菌、保存菌种；或用保存菌种；或用保存菌种；或用保存菌种；或用于观察其某些生于观察其某些生于观察其某些生于观察其某些生化特性。化特性。化特性。化特性。琼脂斜面培养基接种法琼脂斜面培养基接种法穿刺接种穿刺接种n n半固体培养基：半固体培养基：半固体培养基：半固体培养基：n n接种方法：穿刺接接种方法：穿刺接接种方法：穿刺接接种方法：穿刺接种法。用种法。用种法。用种法。用接种针接种针接种针接种针垂垂垂垂直地穿入培养基中直地穿入培养基中直地穿入培养基中直地穿入培养基中心至底部心至底部心至底部心至底部n n然后沿着然后沿着然后沿着然后沿着原接种线原接

7、种线原接种线原接种线将针拔出将针拔出将针拔出将针拔出n n用途：检验细菌的用途：检验细菌的用途：检验细菌的用途：检验细菌的运动性或观察细菌运动性或观察细菌运动性或观察细菌运动性或观察细菌的生化反应。的生化反应。的生化反应。的生化反应。液体培养基接种法液体培养基接种法n n培养基：培养基：培养基：培养基：液体培养基液体培养基液体培养基液体培养基n n接种方法：接种方法：接种方法：接种方法：液体接种液体接种液体接种液体接种法法法法n n从斜面菌种接入液体从斜面菌种接入液体从斜面菌种接入液体从斜面菌种接入液体培养液培养液培养液培养液n n从液体培养液接入液从液体培养液接入液从液体培养液接入液从液体培

8、养液接入液体培养液体培养液体培养液体培养液n n用途：用途：用途：用途：扩增细菌，用扩增细菌，用扩增细菌，用扩增细菌，用于观察细菌的生长特于观察细菌的生长特于观察细菌的生长特于观察细菌的生长特性或测定其生化特性。性或测定其生化特性。性或测定其生化特性。性或测定其生化特性。细菌培养法细菌培养法n n一般培养（需氧培养）：一般培养（需氧培养）：培养温度：培养温度：37（采用恒温培养箱）（采用恒温培养箱）培养时间：培养时间：1824hn n二氧化碳培养法：二氧化碳培养法：烛缸法、二氧化碳培烛缸法、二氧化碳培养箱养箱n n厌氧培养法：厌氧培养法：厌氧培养箱、厌氧袋、厌厌氧培养箱、厌氧袋、厌氧罐、疱肉培

9、养法、硫乙醇酸盐法等氧罐、疱肉培养法、硫乙醇酸盐法等细菌在细菌在固体固体培养基中的生长现象培养基中的生长现象n n菌落：菌落：菌落：菌落：定义：定义：定义：定义：指单个细菌在平板培养基上生长繁殖，形指单个细菌在平板培养基上生长繁殖，形指单个细菌在平板培养基上生长繁殖，形指单个细菌在平板培养基上生长繁殖，形成单一肉眼可见的细菌集团。成单一肉眼可见的细菌集团。成单一肉眼可见的细菌集团。成单一肉眼可见的细菌集团。菌落特征：菌落特征：菌落特征：菌落特征：大小、形状、边缘、颜色、表面、透大小、形状、边缘、颜色、表面、透大小、形状、边缘、颜色、表面、透大小、形状、边缘、颜色、表面、透明度、湿润度、黏度、溶

10、血性明度、湿润度、黏度、溶血性明度、湿润度、黏度、溶血性明度、湿润度、黏度、溶血性菌落类型：菌落类型：菌落类型：菌落类型：光滑型（光滑型（光滑型（光滑型（S S S S）、粗糙型（）、粗糙型（）、粗糙型（）、粗糙型（R R R R）、黏液型）、黏液型）、黏液型）、黏液型（M M M M）n n菌苔：菌苔：菌苔：菌苔：指多个菌落融合在一起形成的细菌堆积物。指多个菌落融合在一起形成的细菌堆积物。指多个菌落融合在一起形成的细菌堆积物。指多个菌落融合在一起形成的细菌堆积物。菌 落菌落与菌苔菌落与菌苔细菌在细菌在液体液体培养基中的生长现象培养基中的生长现象n n混浊：多见于兼性厌氧菌混浊：多见于兼性厌氧

11、菌n n沉淀：多见于厌氧菌沉淀：多见于厌氧菌n n菌膜：多见于专性需氧菌菌膜：多见于专性需氧菌液体培养基的细菌生长液体培养基的细菌生长细菌在细菌在半固体半固体培养基中的生长现象培养基中的生长现象n n有鞭毛细菌：有鞭毛细菌：在培养基中沿穿刺线并向在培养基中沿穿刺线并向外扩散生长，穿刺线边缘模糊。外扩散生长，穿刺线边缘模糊。n n无鞭毛细菌：无鞭毛细菌：只沿穿刺线生长，穿刺线只沿穿刺线生长，穿刺线边缘清晰。边缘清晰。无动力 有动力穿刺接种生长现象穿刺接种生长现象结果观察时间安排n液体、斜面、半固体、固体平板每人各液体、斜面、半固体、固体平板每人各一个。保证每组把每种细菌都接上。一个。保证每组把每种细菌都接上。n明天观察，记录结果；明天观察，记录结果；n完成实验报告。完成实验报告。