DB62∕T 4535-2022 大球盖菇菌种生产技术规程(甘肃省).pdf

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1、ICS B 21 CCS 65.020.20 62 准甘肃省由巳ETA 万D862/T 4535-2022 大球盖菇菌种生产技术规程2022一06-30发布2022一 07-31实施甘肃省市场监督管理局发布0862/T 4535-2022 目次前言.II I 范围.1 2 规范性引用文件.1 3 术语和定义.1 4 环境要求.2 5 设备设施.2 6 母种生产.2 7 原种生产.3 8 栽培种生产.3 9 检验、入库及留样.4 附录A(资料性)原材料处理.6 I 0862/T 4535-2022 目IJ=1 本文件按照GB/T11-2020(标准化工作导则第l部分标准化文件的结构和起草规则的规

2、定起草。本文件由甘肃省农业农村厅提出、归口并监督实施。本文件主要起草单位:甘肃省科学院生物研究所、定西市农业科学研究院、甘肃省药品监督管理局、甘肃省经济作物技术推广站、卓尼县农业技术推广站、甘南州种子工作站、酒泉市农业技术推广服务中.)0 本文件主要起草人杨阿丽、冉永红、高凤、赵玉卉、周亚婷、郭瑞、谢江泼、何士剑、康当周、卢勇、王晓文、赵志强、樊友娟、马维成、王渊、马黎霞、陈小丽、叶丙鑫、何万春。本文件白甘肃省科学院生物研究所负责解释。各单位或个人在执行本文件过程中如发现需要修改和补充之处，请随时将意见和建议反馈至甘肃省科学院生物研究所编著组(地址甘肃省兰州市城关区定西南路197号，邮政编码7

3、300，E-mail.aliyang ，联系人:杨阿丽，联系方式:18993035777)，以供今后修订时参考。II 0862/T 4535-2022 大球盖菇菌种生产技术规程1 范围本文件规定了大球盖菇菌种生产的术语与定义、环境要求、设备设施、母种生产、原种生产、栽培种生产、检验、入库及留样的技术流程要点。本文件适用于大球盖菇菌种生产要求。2 规范性引用文件下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用于本文件;不注日期的引用文件，其最新版本包括所有的修改单)适用于本文件。GB 3095 环境空气质量标准GB 5749 生活饮用

4、水卫生标准GB 9688 食品包严用聚丙烯成型品卫生标准NY/T 528 食用茵茵种生产技术规程NY/T 1731 食用茵茵种良好作业规范NY/T 1742 食用茵茵种通用技术要求NY/T 5010无公害农产品种植业产地环境条件3 术语和定义下列术语和运火适用于本文件。3.1 大球盖菇Stropharia rugosoannulata 大球盖菇隶属于担子菌亚门CBasidiomyco阳叫、层菌纲(吵menomycetes)、伞菌目CAgaricales)、球盖菇科(Strophariaceae)、球盖菇属CStropharia)，其菇体朵大，酒红色，菌盖半球形，直径约6cmIOcm,3.2 菌

5、种culture 生长在适宜基质上具结实性的菌丝培养物，包括母种、原种和栽培种。3.3 母种stock cu1ture 经各种方法选育得到的具有结实性的菌丝体纯培养物及其继代培养物，以玻璃试管或培养皿为培养容器和使用单位。也称级种、试管种。3.4 原种mother spawn 自母种移植、扩大培养而成的菌丝体纯培养物。也称二级种。3 5 栽培种spawn 0862/T 4535-2022 由原种移植、扩大培养而成的菌丝体纯培养物。栽培种只能用于栽培，不可再次扩大繁殖菌种。也称三级种。4 环境要求环境符合GB3095中环境空气二类区质量要求以及NY/T528和NY/T5010中对产地环境的规定;

6、生产用水符合GB5749的规定。菌种培养环境要求温度控制范围160C300C，空气相对湿度控制范围40%70%。5 设备设施根据生产需要应配备超净工作台、恒温培养箱、拌f斗机、装袋机、高压灭菌锅等。堆料场应远离火源，并具有防雨措施，原料库要求通风良好、干燥、地面用垫仓板隔离;拌料区、装袋区、灭菌区采用半封闭式厂房，能够遮阳、避雨;冷却区、接种区、培养区采用全封闭式厂房，配置温度、光照、湿度、通风等环境条件调控设备。6 母种生产6.1 培养基6.1.1 新鲜无病去皮马铃薯200g(煮20mm取汁)、葡萄糖20g、琼脂18g20g、水1000mL6.1.2 新鲜无病去皮马铃薯200g(煮20min

7、取汁)、磷酸二氢押Ig、蛋白陈2g、硫酸读Ig、葡萄糖20g、琼脂18g20g、水10mL6.1.3 新鲜无病去皮马铃薯200g(煮、20mm取;十)、麦轩100g(煮、30mm取;十)、葡萄糖20g、琼脂18g20g、水1000mL6.2容器试管选用18mmxl80mm或20mmx200mm的规格。6.3培养基分装及灾菌分装培养基至试管1/4处，用棉塞(梳棉)或硅胶塞封闭试管口，牛皮纸包棉塞，橡皮筋扎紧，棉塞向上置于高压灭菌锅中，1210C(OIIMPa)下灭菌30mmo灭菌后温度冷却至650C卦。C时，在空气清洁的室内摆斜面，斜面长度距离试管口1/3处。待冷却凝固后，从摆好斜面的试管中抽取

8、3%-5%的试管，280C恒温培养48h后，无微生物长出为灭菌合格。6.4接种在超净工作台接种。接种前用紫外线灯照射30min，之后用75%酒精进行表面消毒(喷或擦拭)。接种过程严格执行无菌操作，接种后回占好标签，做好记录。取直径3mm5mm的菌块接种至试管的中部06.5培养接种后将试管置于恒温培养箱中，20oC250C避光培养18d30do接种后第3d、第5d和长满培养基后分别进行逐个检验，保留菌丝生长健壮、洁白、浓密，菌落边缘整齐，无分泌物的母种。2 0862/T 4535-2022 6.6贮存在OOC斗OC下贮存，贮存期不超过50do7 原种生产7.1 培养基玉米芯38%，杂木屑30%，

9、麦轩30%，生在灰2%斗牛二主水量65%;或木屑70%，款皮18%，谷壳10%，矶山石膏山，料含水量65房、材料处理参见附录A)。7.2 容器原种采用450mL750mL、耐1260C高温的无色玻璃菌种瓶或800mL、耐1260C高温的白色半透明符合GB9688规定的的塑料菌种瓶。7.3 装瓶侈采用装瓶机或人工装瓶，菌种瓶培养基中央插入直径1cm1.5cm长8cm才rnm的接种棒，每瓶装培养基400g600go7.4灾菌培养基装瓶后4h内进行灭菌，采用高压灭菌，在1210C1240C、O.IIMPaO.14MPa灭茵2.5ho7.5接种在超净工作台上接种。接种前用紫外线灯照射30min，之后用

10、75%酒精进行表面消毒(喷或擦拭)。每瓶原种接入粒径2cm3cm大小的母种12块。接种过程严格执行无菌操作，每批接种应为单品种，若中途换品种需要对超净工作台进行再次表面消毒(喷或擦拭)。7.6培养培养温度为220C260C，空气湿度在75%以下，通风避光培养35d60d。接种后第3d、第5d、第7d以及长满菌种瓶前后分别进行逐个检验，保留菌丝生长健壮、洁白、浓密负无污染的原种。7.7贮存 在OOC40C下贮存，贮存期否超过40do8 栽培种生产8.1 培养基麦轩57%，玉米芯20%，杂木屑20%，石膏1%，生石灰2%，料含水量65%;或木屑79%，款皮20%，碳酸钙1%，*斗含水量65%(原材

11、料处理参见附录A)。8.2 容器栽培种采用笔17cmx35cm耐1260C高温符合GB9688规定的聚丙烯塑料袋。8.3 装袋3 0862/T 4535-2022 采用装袋机或人工装袋，当天拌好的料当天装完，瓶内培养基要求上紧下松，料面平整。8.4灾菌培养基装袋后4h内装入高压灭菌锅，在1210C1240C、O.11MPaO.14MPa下灭茵2.5h;(无高压灭菌锅可采用常压灭菌，保证培养基不酸化的前提下使温度快速达到lOOOC，并持续灭菌12ho)0 8.5接种在超净工作台上接种。接种前用紫外线灯照射30min，之后用75%酒精进行表面消毒。每袋栽培种接入原种量不得少于15g。接种过程严格执

12、行无菌操作，每批接种应为单品种，若中途换品种需要对超净工作台进行表面擦拭消毒。8.6培养培养温度在220C260C，空气湿度在75%以下，通风避光培养35d60do接种后第3d、第5d、第7d以及长满菌种袋前分别进行逐个检验，保留菌丝生长健壮、洁白、浓密，无污染的栽培种。8.7贮存在OOC斗OC下贮存，贮存期不超过30do9 检验、入库及留样9.1 检验9.1.1 母种感官要求母种官要求见表L表l大球盖菇母种感官要求项目要求容器完整、无破损、洁净棉塞或无棉盖体干燥、整洁、松紧适度、能满足透气和过滤要求培养基灌入量试管总容积的114菌丝生长量长满斜面菌丝体特征健壮、洁臼、浓密菌丝体表面均匀、舒展

13、、平整菌丝体分泌物尤菌落边缘整齐杂茵茵落尤斜面背面夕|、观培养基不干缩，颜色均匀，无暗斑、无色素、9.1.2 原种、栽培种感官要求原种、栽培种感官要求见表204 0862/T 4535-2022 表2大球盖菇原种、栽培种感官要求项目要求容器完整、无破损、洁净棉塞或无棉盖体干燥、整洁、松紧适度、能满足透气和滤菌要求培养基上表面距瓶口的距离50mrn土5mrn菌丝生长量长满容器菌丝体特征健壮、洁臼、浓密培养基表面菌丝体生长均匀、无高温抑制线飞、培养基及菌丝体紧贴瓶壁、无干缩、3、菌丝体分泌物尤、坦袋、杂茵茵落,尤飞4、子实体原基,尤、9.2 入库检验参照NY厅1731和NY/T17420菌种检验完

14、成后应及时入恒温库i.F细记录各生产环节，温度保持在OOC40C，适当通风并对空1气进行消毒。贮存时间超过规定的母种应进行出菇检验后再进行后续生产。9.3 留样母种、原种、栽培种均应留样，每批次留样35(支、瓶、袋),OOC斗OC贮存，贮存至购买者正常生产出第潮菇。5 0862/T 4535-2022 附录A(资料性)原材料处理木屑粒径要求O.5cmO.8cm左右，建堆时要求堆高1.5m，在堆料表面多次浇水，提前三个月堆放腐熟。玉米芯粒径要求O.5cmO.8cm左右。加3%的生石灰后充分预湿。建1.5m宽，1m高的长堆。建堆后打三排直径5cm的透气洞，)同间隔1.5mo4d6d第次翻堆，以后每隔每隔3d4d翻次堆，共翻3次，最后一次翻堆后继续发酵3d生L麦丰干切成2cm长，加3%的生石灰充分预湿。建1.5m宽，1m高的长堆。建堆后打三排直径5cm的透气洞，)同间隔1.5米。建堆后4d6d翻次堆，翻堆后发酵3d咽。6