T∕CI 005-2022 高抗性淀粉小麦籽粒中抗性淀粉含量指标和测定方法.pdf

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1、ICS 67.060CCS B21!#$!#$%&(%()*+,-./012*+,-3456789:;Index and determination method of Resistant Starch Content in High-resistantStarch wheat variety(%(?(%(?全国团体标准信息平台!#$%&(%(1IIIJJJ前.21 范围.42 规范性引件.4GB/T 1355 粉.43 术语及定义.43.1抗性淀粉 RESISTANT STARCH.43.2抗性淀粉 HIGHLY RESISTANT STARCH WHEAT.44 测定法.54.1原理.54

2、.3仪器和设备.74.4试样制备.74.5分析步骤.74.6结果计算.9全国团体标准信息平台!#$%&(%(2KKKLLL本件按照 GB/T 1.12020标准化作导则 第 1 部分：标准化件的结构和起草规则起草。本件由中国国际科技促进会标准化作委员会提出。本件由中国国际科技促进会归。本件起草单位：东华农业科技有限公司，东国仓健物科技有限公司，东农业学，解放军总医院普通外科学部，东天泽泰种业科技有限公司，济源市农业科学院，东莱州宏源粉有限公司，泰安市园品有限公司。本件主要起草：纪春，邓志英，胥倩，于海霞，彭莉，磊、王群，刘振，王振，王延训，杨明，张丙乾，彭涛，赵善仓，由佳辉，吕全，谢秀伦。本件

3、为次发布，今后将根据抗性淀粉的社会需求及检测技术发展情况适时修订。全国团体标准信息平台!#$%&(%(3MMMLLL是世界上最主要的粮作物之，全世界半数以上以其产品和制品为主要品。其中淀粉是籽粒中最重要的贮藏物质，根据在肠的可利性，分为可消化淀粉和抗性淀粉。抗性淀粉，称抗酶解淀粉或抗消化淀粉，是在胃和肠中不能被淀粉有关酶降解为葡萄糖，利于稳定糖指数（GI），且在肠胃道和结肠中通过菌群发酵产短链脂肪酸，利于肠蠕动、防便秘和结肠癌病变的类功能淀粉，与类的健康息息相关。前对抗性淀粉含量进了研究，发现普通品种中抗性淀粉含量般为 0.3%-2.5%。薛芳等运 EMS 诱变技术，创制出抗性淀粉含量达 5.

4、41%的材料。中国农业科学院作物所夏兰琴等利基因编辑技术敲除郑 76 98和 B o b w h i t e 的T a S B E I I a基因，获得抗性淀粉含量分别达 6.6%和 8.7%的突变体。东农业学纪春团队关于抗性淀粉的研究，起始于 2005 届付蕾博的论，以后有名博和硕进了种质筛选鉴定，并通过有性杂交和诱变育种，培育出多个抗性淀粉新品系。使本件法对创制的 16 份抗性淀粉品系进定量检测，筛选出抗性淀粉含量于 5%的突变体材料 10份，其中最为 11.8%。但是，到前为，国内外今还没有关于抗性淀粉品种的抗性淀粉含量指标的定义和规范，也没有提取粉中抗性淀粉的专标准。因此，本标准将次提

5、出抗性淀粉品种的抗性淀粉含量指标和测定法，有利于培育更好的抗性淀粉新品种，对提群众活质量和健康平，确保我国营养导向型农业的健康发展具有重要的意义。综上所述，研发制定抗性淀粉籽粒中抗性淀粉含量指标和检测法对业发展是分必要的。抗性淀粉品种和有利健康的功能品具有阔的市场前景和良好的社会效益。全国团体标准信息平台!#$%&(%(4)*+,-./012*+,-3456789:;N OP本件规定了抗性淀粉和抗性淀粉的术语、定义、适范围、抗性淀粉含量指标以及检测法。本件适于种及制品中抗性淀粉含量的定量测定。企业在制定企业标准时可参照使，相关机构在选育、审定和应抗性淀粉及其制品时可参照使。(QO+MRST下列

6、件中的内容通过中的规范性引构成本件必不可少的条款。其中，注期的引件，仅该期对应的版本适于本件；凡是不注期的引件，其最新版本（包括所有的修改单）适于本件。GB/T6 6 82 分析实验室规格和试验法GB/T6 03 化学试剂 试验法中所制剂及制品的制备GB1351 GB/T 1355 粉U VWX9Y3.1 抗性淀Resistant starch称抗酶解淀粉或抗消化淀粉，是指在胃和肠中不能被淀粉有关酶降解为葡萄糖，利于降低糖指数（GI），且在肠胃道和结肠中通过菌群发酵产短链脂肪酸，利于肠蠕动、防便秘和结肠癌病变的类功能淀粉。3.2 抗性淀Highly resistant starch wheat

7、在发育过程中，籽粒中然产和积累的抗性淀粉含量占籽粒重的例6%的类品种（系）。全国团体标准信息平台!#$%&(%(5Z 89:;4.1 原理先胃蛋液消化样品，去除蛋质，然后-淀粉酶和淀粉葡萄糖苷酶（A MG）将样品中的抗性淀粉解成 D-葡萄糖，加醇终反应。离上述溶液，底部残留絮状团即为抗性淀粉。将絮状团置于冰浴中，加氢氧化钾溶液将其溶解，A MG 将抗性淀粉解成 D-葡萄糖，与葡萄糖氧化酶/过氧化物酶（GOP OD）试剂会产显反应，形成复合物，在 510 n m 下测定其吸光度值，根据吸光度值与抗性淀粉含量成正，计算出抗性淀粉含量。4.2 试剂和材料4.2.1试剂除另有规定，试剂应使分析纯试剂。

8、应符合 GB/T6 6 82规定的三级。4.2.1.1氯化钾（K C l）。4.2.1.2氢氧化钠（N a OH）。4.2.1.3氢氧化钾（K OH）。4.2.1.4合氯化钙（C a C l2 2H2O）。4.2.1.5叠氮化钠（N a N3）。警告叠氮化钠为剧毒物品，操作不当可引起爆炸。4.2.1.6磷酸氢钾（K H2P O4）。4.2.1.7浓盐酸（H C l）。4.2.1.8来酸（C4H4O4）。4.2.1.9苯甲酸（C7H6O2）。4.2.1.104-氨基安替林（C11H13N3O）。4.2.1.11对羟基苯甲酸（C7H6O3）。4.2.1.12醇（C H3C H2OH）。4.2.1.

9、13冰酸（C H3C OOH）。4.2.1.14-淀粉酶（B i o t o p p e d 最适温度 50-70，最适 p H 5.5-7.5，活性于 6 000U/mg）。4.2.1.15葡萄糖氧化酶。4.2.1.16过氧化物酶。4.2.1.17胃蛋酶（B i o t o p p e d1:3000）。4.2.1.18D-葡萄糖标准品（C6H12O6。纯度：99.5%）。全国团体标准信息平台!#$%&(%(64.2.1.19淀粉葡萄糖苷酶原液 A MG（3300U/mL）：直接购买使。该溶液在 4可保存 5年。4.2.2 溶液配制4.2.2.14M 氢氧化钠溶液 c（N a OH）=4.0

10、 mo l/L ：称取 16 0.0 g 氢氧化钠加适量溶解定容 1000mL。4.2.2.22M 氢氧化钠溶液 c（N a OH）=2.0 mo l/L ：称取 80.0 g 氢氧化钠加适量溶解后定容 1000mL。4.2.2.3氢氧化钾溶液 c（K OH）=2.0 mo l/L ：称取 112.2 g 氢氧化钾加适量溶解后定容 1000mL。该溶液在室温下可保存 12个。4.2.2.4盐酸溶液 c（H C l）=0.1 mo l/L ：量取 8.4 mL 浓盐酸（4.2.1.7），加适量并稀释 1000mL。4.2.2.5盐酸溶液 c（H C l）=2.0 mo l/L ：量取 180.0

11、 mL 浓盐酸（4.2.1.7），加适量并稀释 1000mL。4.2.2.6氯化钾溶液 c（K C l）=0.1 mo l/L ：称取 7.35 g 氯化钾，溶于适量中并定容 1000mL。4.2.2.7氯化钾盐酸缓液（K C l H C l0.1mo l/L，p H1.5）：向氯化钾溶液（4.2.2.6）中加盐酸溶液调节 p H 为 1.5。4.2.2.8苯甲酸溶液 c（C6H5C OOH）=0.2%：称取 0.2g 苯甲酸溶于适量并定容 100mL。4.2.2.9来酸钠缓冲液 c（C3H3O3C OON a）=100 mmo l/L，p H6.0：称取 23.2 g来酸溶于 16 00mL

12、 中，4M 氢氧化钠溶液（4.2.2.1）调 p H 为 6.0，然后加 0.6g 合氯化钙和 0.4g 叠氮化钠，最后定容 2000mL。该溶液在 4可保存 12个。4.2.2.10酸钠缓冲液 c（C H3C OON a）=1.2mo l/L，p H3.8：量取 70mL 冰酸 800mL 中，4M 氢氧化钠溶液（4.2.2.1）调 p H 为 3.8，最后定容 1000mL。该溶液在室温下可保存 12个。4.2.2.11酸钠缓冲液 c（C H3C OON a）=100 mmo l/L，p H4.5：量取 5.8mL 冰酸 900mL 中，4M 氢氧化钠溶液（4.2.2.1）调 p H 为

13、4.5，最后定容 1000mL。该溶液可在 4保存 2个。4.2.2.12醇溶液 c（C H3C H2OH）=50%，体积分数：500mL 醇加定容 1000mL。该溶液在室温下可保存 12个。4.2.2.13胃蛋酶液（10%W/V）：称取 10.0g 胃蛋酶溶于盐酸溶液（4.2.2.4）中并定容 100mL。4.2.2.14淀粉葡萄糖苷酶使液（300 U/mL）：吸取 2.0 mLA MG（4.2.1.19）来酸钠缓冲全国团体标准信息平台!#$%&(%(7液（4.2.2.9）稀释 22mL，分装于聚丙烯塑料管，放于-20保存。4.2.2.15-淀粉酶悬浮液 10 mg（30 U/mL）+A

14、MG（3 U/mL）：称取 1.0 g-淀粉酶溶于 100mL 来酸钠缓冲液（4.2.2.9）中，搅拌 5mi n。加 1.0mL 淀粉葡萄糖苷酶使液（4.2.2.14），混匀后，在离 1500g 离 10mi n，取上清液。该溶液现配现。4.2.2.16GOP OD 氨基安替林储备液：称取 136.0 g 磷酸氢钾，42.0 g 氢氧化钠和 30.0 g对羟基苯甲酸 900mL 中溶解，盐酸溶液（4.2.2.5）或 2M 氢氧化钠溶液（4.2.2.2）调节该溶液的 p H 7.4，定容 1000mL，加 1.0g 叠氮化钠，溶解混匀。该溶液于 4可保存 3年。4.2.2.17GOP OD 氨

15、基安替林缓冲液：吸取 50.00mLGOP OD 氨基安替林储备液（4.2.2.16）定容 1000mL。4.2.2.18GOP OD 氨基安替林混合液 葡萄糖氧化酶（12000 U/L）+过氧化物酶（6 50U/L）+4-氨基安替林 0.4 mmo l/L ：称取 300 mg 葡萄糖氧化酶、4 mg 过氧化物酶和 80mg4-氨基安替林混合，溶于 1000mLGOP OD 氨基安替林缓冲液（4.2.2.17）中。此溶液需避光保存，-20可保存 1年。4.2.2.19D-葡萄糖标准储备液（1.0g/L）：称取 1.00gD-葡萄糖（99.5%，结晶）900mL 苯甲酸溶液（4.2.2.8），

16、定容 1000mL。室温下密封保存时间可保 5年。4.2.3材料籽粒。4.3器和设备4.3.1分析天平（0.0001g）。4.3.2离机（3000g）。4.3.3p H 计。4.3.4旋实验磨。4.3.5浴锅。4.3.6涡旋混匀器。4.3.7磁搅拌器。4.3.8磁搅拌棒（5mm15mm）。4.3.9计时器。4.3.10具有螺旋盖塑料离试管（15mL）。4.3.11容量瓶（100mL，200mL，500mL，1L，2L）。4.3.12温度计（370.1）；（50+0.1）。4.3.13具螺旋盖塑料离试管（16mm125mm）。全国团体标准信息平台!#$%&(%(84.3.14玻璃试管（16mm1

17、00mm）。4.3.15塑料盒。4.3.16移液器（200 L，1000 L）。4.3.17分光光度计（能够设定 510n m，10mm 路径度）。4.4 试样制备籽粒约 50.0g，旋磨磨碎，然后过 80筛，混匀后保存于瓶中，密封备。如制备粉按 GB/T1355标准制备。4.5 分析步骤4.5.1试液制备制备 2 份平试液。准确称取样 100mg(5mg)样品于带螺旋帽试管中，轻轻拍打试管使样品集中在底部。(1)加 200 L 蒸馏于各试管中，在电热恒温槽 100条件下煮 20mi n，然后保温 10mi n。(2)加氯化钾盐酸缓冲液（4.2.2.7）2mL，模仿咀嚼玻璃棒将之捣碎。(3)加

18、胃蛋酶液（4.2.2.13）100 L，37 条件下消化 1h，除去蛋质。(4)加来酸钠缓冲液（4.2.2.9）4.0 mL，-淀粉酶悬浮液（4.2.2.15）4.0 mL，再 4M 氢氧化钠溶液（4.2.2.1）约 100 L 将 p H 调 6.9。(5)旋紧试管盖，置于涡旋振荡器混匀，卧式放浴摇床(与运动向平)，于 6 5准确振荡 5h。取出试管，擦去外表分。(6)开启试管盖，加 4.0mL 醇，涡旋，1500g 离 10mi n(不加盖)。(7)倾出上清液，加 2.0mL 醇溶液，重悬浮。涡旋振荡，再加 6.0mL 醇溶液，混合后，1500g 离 10mi n。弃去上清液重复上述重悬浮

19、和离步骤。(8)弃去上清液，翻转试管，滤纸吸除多余的液体。(9)将试管置于冰中，在各试管中放磁搅拌棒并加 2.0mL 氢氧化钾溶液（4.2.2.3），搅拌 20mi n 后，边搅拌边向各试管中顺序加 8.0mL 的酸钠缓冲液（4.2.2.10）和 0.1mL A MG（4.2.1.19），混匀。(10)取出试管，于 50浴 30mi n，期间 2 次取出试管涡旋振荡，浴完成后直接离(抗性淀粉含量 10%的样品)。但对于抗性淀粉含量10%的样品，将试管的样品全部转移 100 mL 容量瓶，定容备(当洗瓶洗涤试管中的溶液时外磁铁保持试管中的磁棒)。4.5.2D-葡萄糖标准溶液全国团体标准信息平台!

20、#$%&(%(9将 0.1mL D-葡萄糖标准储备液（4.2.2.19）和 3.0mL 的 GOP OD 氨基安替林混合液（4.2.2.18）（也可加商葡萄糖检测试剂盒（GOD-P A P 法）中的 GOD-P A P 试剂）混合。4.5.3 空溶液制备玻璃试管中加 0.1mL 的酸钠缓冲液（4.2.2.11）和 3.0mL 的 GOP OD 氨基安替林混合液（4.2.2.18）（也可加商葡萄糖检测试剂盒（GOD-P A P 法）中的 GOD-P A P 试剂）混合。4.5.4 试液的测定将样品待测液（4.5.1）1500g 离 10mi n，吸取上清液 0.10mL 置于玻璃试管，加 3.0

21、mL GOP OD 氨基安替林混合液（4.2.2.18）（也可加商葡萄糖检测试剂盒（GOD-P A P法）中的 GOD-P A P 试剂），与 D-葡萄糖标准液（4.5.2）和空试剂（4.5.3）起放 50 浴 20 mi n 后取出，以空溶液（4.5.3）调零点，在 510 n m 处测定样品待测液（4.5.1）和 D-葡萄糖标准液（4.5.2）的吸光度值。4.6结果计4.6.1试样中抗性淀粉含量以质量分数（g/100g，以重计），计算按式（1）、式（2）进计算。抗性淀粉（g/100g 样品）（含量10%）.（1）抗性淀粉（g/100g 样品）（含量 10%）.（2）式中：A相对于空试剂的吸

22、光度值；F从吸光度值到微克的转换 在 GOP OD 反应中 100 gD-葡萄糖的吸光度值是确定的，F=100（D 葡萄糖的微克数）/100g D-葡萄糖在 GOP OD 反应中的吸光度.单位为微克（g）；m分析样本的重=称取样品重量（100-含量）/100，单位为毫克（mg）；10.3含量 10%样品的最终体积，单位为毫升（mL）；16 2/180 从测定获得的游离 D-葡萄糖转换到淀粉中存在的结品-D-葡萄糖的因，计算结果保留三位有效数字。4.6.2 精密度全国团体标准信息平台!#$%&(%(10当样品抗性淀粉含量 2g/100g 时，在重复性条件下获得的两次独测定结果的绝对差值不于这两个测定值算术平均值的 10%。当样品抗性淀粉含量2 g/100 g 时，在重复性条件下获得的两次独测试结果的绝对差值不于这两个测定值算术平均值的 5%。全国团体标准信息平台