T∕NAIA 0117-2022 玉米及其产品中11种真菌毒素的测定 液相色谱-质谱联用法.pdf

《T∕NAIA 0117-2022 玉米及其产品中11种真菌毒素的测定 液相色谱-质谱联用法.pdf》由会员分享，可在线阅读，更多相关《T∕NAIA 0117-2022 玉米及其产品中11种真菌毒素的测定 液相色谱-质谱联用法.pdf（11页珍藏版）》请在淘文阁 - 分享文档赚钱的网站上搜索。

1、 ICS 65.020.99CCS B 20 团 体 标 准团 体 标 准 T/N A I A 0 2 6 2 0 2 1T/NAIA 0117-2022玉米及其产品中 11 种真菌毒素的测定 液相色谱-质谱联用法玉米及其产品中 11 种真菌毒素的测定 液相色谱-质谱联用法Determination of 11 mycotoxins in maize and its productsLiquid chromatography-tandem mass spectrometry method2022-04-27 发布2022-05-01 实施 宁夏化学分析测试协会 宁夏化学分析测试协会 发 布发

2、布发布TB全国团体标准信息平台全国团体标准信息平台前 言 本文件按照 GB/T 1.1-2020 标准化工作导则 第 1 部分：标准化文件的结构和起草规则的规定起草。本文件由宁夏化学分析测试协会提出并归口。本文件起草单位：宁夏农产品质量标准与检测技术研究所、宁夏农林科学院农作物研究所、宁夏农林科学院农业生物技术研究中心、山东省临沂市莒南县检验检测中心。本文件主要起草人：赵子丹、李彩虹、王永宏、葛谦、石磊、张维军、牛艳、吴燕、张艳、赵健、赵如浪、何进尚、孙鹏飞。本文件为首次发布。全国团体标准信息平台 全国团体标准信息平台玉米及其产品中 11 种真菌毒素的测定 液相色谱-质谱联用法 1 范围 本文

3、件规定了玉米及其产品中伏马毒素 B1(FB1)、伏马毒素 B2(FB2)、伏马毒素 B3(FB3)，脱氧雪腐镰刀菌烯醇（DON）、3-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇(3-ADON)、15-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇(15-ADON)、玉米赤霉烯酮(ZEN)、赭曲霉毒素 A(OTA)、T-2 毒素(T-2)、黄曲霉毒素 B1(AFB1)、黄曲霉毒素 B2(AFB2)共 11 种真菌毒素测定的液相色谱-质谱/质谱分析方法。本文件适用于玉米及其产品中伏马毒素 B1、伏马毒素 B2、伏马毒素 B3，脱氧雪腐镰刀菌烯醇、3-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇、15-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素 A、T-2

4、毒素、黄曲霉毒素 B1、黄曲霉毒素 B2 共 11 种真菌毒素的测定。2 规范性引用文件 下列文件中的内容通过文中的规范性引用而构成本文件必不可少的条款。其中，注日期的引用文件，仅该日期对应的版本适用本文件；不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。GB/T 6682 分析实验室用水规格和试验方法 3 术语和定义 本文件无术语和定义。4 原理 试样用乙腈溶液提取，提取液经混合净化材料分散净化，取适量上清液经氮气吹干后乙腈溶液定容，液相色谱-质谱联用仪检测，外标法定量。5 试剂与材料 除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水符合GB/T 6682中规定的一级水。5.1 乙

5、腈（CH3CN）：色谱纯。5.2 甲醇（CH4O）：色谱纯。5.3 甲酸（CH2O2）：色谱纯。5.4 乙酸铵（CH3COONH4）：色谱纯。5.5 氯化钠（NaCL）：分析纯。5.6 硫酸镁（MgSO4）：分析纯。5.7 柠檬酸钠（C6H5Na3O7）：分析纯。全国团体标准信息平台5.8 混合净化材料：氯化钠 1.5g，硫酸镁 3.5g，柠檬酸钠 1.0g。5.9 乙腈溶液（80+20，体积比）：量取 20 mL 水加入 80 mL 乙腈中，混匀。5.10 乙腈溶液（50+50，体积比）：量取 50 mL 水加入 50 mL 乙腈中，混匀。5.11 乙酸铵-甲酸水溶液（2 mmol/L）：称

6、取 0.1542 g 乙酸铵，用 0.1%甲酸水溶液溶解并稀释至 1000 mL，摇匀。5.12 0.1%甲酸甲醇溶液（体积分数）。5.13 毒素标准品：伏马毒素 B1（CAS 号 116355-83-0，纯度98%）、伏马毒素 B2（CAS号 116355-84-1，纯度97.9%）、伏马毒素 B3（CAS 号 136379-59-4，纯度98.5%）、脱氧雪腐镰刀菌烯醇（CAS 号 51481-10-8，纯度99.38%）、3-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇（CAS 号 50722-38-8，纯度99.0%）、15-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇（CAS 号 88337-96-6，纯度99.8%）、玉米赤

7、霉烯酮（CAS 号 17924-92-4，纯度99.7%）、赭曲霉毒素 A（CAS号 303-47-9，纯度99.0%）、T-2 毒素（CAS 号 21259-20-1，纯度96.55%）、黄曲霉毒素 B1（CAS 号 1162-65-8，纯度99.0%）、黄曲霉毒素 B2（CAS 号 7220-81-7，纯度99.0%）。5.14 标准溶液配制：根据需要分别吸取适量 11 种真菌毒素标准溶液，用乙腈稀释成 10 mg/L混合标准溶液，-18 下保存。6 仪器与设备 6.1 高效液相色谱-质谱/质谱仪：配有电喷雾离子源（ESI）。6.2 分析天平：感量 0.01 g 和 0.0001 g。6.

8、3 高速万能粉碎机：10000 r/min。6.4 振荡器。6.5 离心机：4000 r/min。6.6 涡旋混合器。6.7 氮吹仪。6.8 离心管：50 mL，塑料。6.9 滤膜：0.22 m，有机相。7 分析步骤 7.1 试样的制备 试样于-18 冷冻冰箱中保存。试验时将试样取出，经高速万能粉碎机粉碎，置于样品袋中，-18 冷冻备用。7.2 试样提取与净化 称取试样 2.00 g（精确至 0.01 g）于 50 mL 离心管，加入 20.00 mL 提取液（5.9），振荡提取 40 min，加入混合净化材料（5.8），振摇约 1 min，于 4000 r/min 离心 5 min，吸取全国

9、团体标准信息平台2.00 mL 上清液于 15 mL 离心管中，经氮气吹干后，用 1.00mL 定容液（5.10）溶解，涡旋 30 s，过 0.22 m 滤膜后，上机测定。7.3 测定 7.3.1 液相色谱参考条件 a）色谱柱：T3柱，2.1 mm（内径）100 mm，粒径 1.8 m，或相当者。b）流动相：A 相为乙酸铵-甲酸水溶液（5.11），B 相为甲酸甲醇溶液（5.12），流动相梯度条件见表 1；c）流速：0.4 mL/min；d）柱温：40；e）进样量：2 L。表 1 流动相及其梯度条件（VA+VB）时间 min VA%VB%0 90 10 1.0 85 15 2.0 80 20 6

10、.0 40 60 10.0 17 83 11.0 90 10 13.0 90 10 7.3.2 质谱参考条件 a）离子源：电喷雾离子源。b）扫描方式：正离子扫描和负离子扫描。c）离子源喷雾电压：正离子模式 5500 V、负离子模式 4500 V。d）离子源温度：550。e）雾化气、气帘气、碰撞气、辅助加热气均为高纯氮气，使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求。f）检测方式：多反应监测，参数详见表 2、表 3。表 2 ESI+监测模式分析参数 名称 保留时间 min 定性离子对 m/z 定量离子对 m/z 碰撞能量 V 伏马毒素 FB1 8.73 722.4/334.4 722.4/3

11、52.4 722.4/334.4 54 50 全国团体标准信息平台伏马毒素 FB2 10.03 706.4/336.51 706.4/318.61 706.4/336.51 50 54 伏马毒素 FB3 9.46 706.4/336.50 706.4/318.60 706.4/336.50 50 50 脱氧雪腐镰刀菌烯醇 4.26 297.1/249.1 297.1/203.2 297.1/249.1 16 21 3-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇 6.42 339.2/203.2 339.2/231.1 339.2/203.2 21 18 15-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇 6.41 339.3/321.

12、2 339.3/137.1 339.3/321.2 12 19 黄曲霉毒素 B1 7.74 313.1/285.1 313.1/241.1 313.1/285.1 33 50 黄曲霉毒素 B2 7.50 315.1/287.1 315.1/259.1 315.1/287.1 35 40 T-2 毒素 9.39 484.2/305.1 484.2/245.1 484.2/305.1 19 19 表 3 ESI-监测模式分析参数 名称 保留时间 min 定性离子对 m/z 定量离子对 m/z 碰撞能量 V 玉米赤霉烯酮 10.02 317.1/175.0 317.1/273.0 317.1/175

13、.0-32-27 赭曲霉毒素 A 10.06 402.2/358.2 402.2/211.0 402.2/358.2-28-38 7.3.3 色谱测定与确证 根据试样中被测物的含量情况，选取响应值适宜的标准工作液进行色谱分析。标准工作液和试样中被测物的响应值均应在仪器线性响应范围内。在上述仪器条件下，伏马毒素 B1、伏马毒素 B2、伏马毒素 B3，脱氧雪腐镰刀菌烯醇、3-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇、15-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素 A、T-2 毒素、黄曲霉毒素 B1、黄曲霉毒素 B2 的保留时间分别约为 8.73、10.03、9.46、4.26、6.42、6.41、10.02

14、、10.06、9.39、7.74、7.50 min，多反应离子监测色谱图参见附录 A。按照上述条件进行试样测定，若试样的色谱峰保留时间与标准品一致，且与浓度相当标准工作溶液的相对丰度一致，相对丰度允许偏差不超过表 4 规定的范围，则可判断样品中存在对应的被测物。表 4 定性确证相对离子丰度的最大允许偏差 相对离子丰度 50%20%至 50%10%至 20%10%允许的相对偏差 20%25%30%50%7.4 空白试验 除不称取试样外，均按上述操作步骤同时进行。全国团体标准信息平台8 结果计算和表达 用色谱数据处理或按式（1）计算试样中被测物的含量，计算结果需将空白值扣除。（1）式中：X 试样中

15、被测物残留量的数值，单位为毫克每千克（mg/kg）；A 试样溶液中被测物的质量色谱图峰面积；V1 提取液体积的数值，单位为毫升（mL）；V2 分取溶液体积的数值，单位为毫升（mL）；V3 定容溶液体积的数值，单位为毫升（mL）；CS 标准工作液中被测物的质量浓度的数值，单位为毫克每升（mg/L）；AS 标准工作液中被测物的质量色谱图峰面积；m 试样质量的数值，单位为克（g）。注：测定结果用平行测定的算术平均值表示，保留三位有效数字。9 精密度 在重复性条件下，获得的两次独立测试结果的绝对差值不大于这两个测定值算术平均值的 15%。10 定量限和回收率 10.1 定量限 本方法的定量限伏马毒素

16、FB1、伏马毒素 FB2、伏马毒素 FB3、玉米赤霉烯酮、赭曲霉毒素 A、T-2 毒素、黄曲霉毒素 B1、黄曲霉毒素 B2 为 0.001 mg/kg，脱氧雪腐镰刀菌烯醇、3-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇、15-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇为 0.005 mg/kg。10.2 回收率 本方法的添加浓度和回收率范围见附录 B。10001000231VmAVVCAXSS全国团体标准信息平台附录 A（资料性）11种真菌毒素多反应监测（MRM）质量色谱图 11种真菌毒素多反应监测（MRM）质量色谱图见图A.1。图A.1 11种真菌毒素多反应监测（MRM）质量色谱图 全国团体标准信息平台附录 B（资料性）11种真菌

17、毒素在基质中的添加浓度及回收率范围 11种真菌毒素在基质中的添加浓度及回收率范围，见表B.1。表B.1 11种真菌毒素在基质中的添加浓度及回收率范围 名称 添加浓度 mg/kg 回收率范围%RSD%0.005 7188 8.6 0.2 96105 3.3 脱氧雪腐镰刀菌烯醇 0.5 99102 1.5 0.005 87104 7.3 0.2 100104 1.7 3-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇 0.5 99104 2.1 0.005 91100 4.6 0.2 96102 2.3 15-乙酰脱氧雪腐镰刀菌烯醇 0.5 101106 2.0 0.001 7083 6.9 0.05 86109 9.2

18、 玉米赤霉烯酮 0.2 8690 2.0 0.001 79102 12.2 0.01 7089 8.4 黄曲霉毒素 B1 0.025 7073 2.0 0.001 7179 4.5 0.005 7176 2.8 黄曲霉毒素 B2 0.025 7074 2.8 0.001 7097 13.4 0.2 7393 11.8 伏马毒素 B1 0.5 7779 1.1 0.001 7082 6.5 0.2 7484 5.6 伏马毒素 B2 0.5 7881 1.4 0.001 7084 8.7 0.2 8091 6.1 伏马毒素 B3 0.5 8788 0.8 0.001 89106 6.7 0.01 100108 3.5 T-2 毒素 0.2 99104 2.2 0.001 93106 5.4 0.01 98107 3.4 赭曲霉毒素 A 0.2 99106 3.1 全国团体标准信息平台