实验四X染色质标本制备与观察.ppt

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1、实验四 X染色质标本制备与观察 Still waters run deep.流静水深流静水深,人静心深人静心深 Where there is life,there is hope。有生命必有希望。有生命必有希望实验原理实验原理一个个体不论其细胞中有几条一个个体不论其细胞中有几条X染色体，均只染色体，均只有一条具有转录活性，其余的有一条具有转录活性，其余的X染色体均失活染色体均失活形成异固缩的形成异固缩的X染色质。正常女性间期细胞核染色质。正常女性间期细胞核中中X染色质阳性率一般约为染色质阳性率一般约为10一一30，有的，有的可高达可高达50以上。其出现率的高低与个体不同以上。其出现率的高低与个

2、体不同生理状态、染色方法、染色技术以及生理状态、染色方法、染色技术以及X染色体染色体在细胞核中的位置不同有关。在男性间期细胞在细胞核中的位置不同有关。在男性间期细胞核中则平均低于核中则平均低于1。一般检查。一般检查X染色质确定性染色质确定性别时，观察别时，观察200个细胞，个细胞，X染色质出现染色质出现5以上以上者为女性。现在，者为女性。现在，X染色质检查已广泛应用于染色质检查已广泛应用于临床，作为性别测定和性染色体数目异常的一临床，作为性别测定和性染色体数目异常的一种辅助诊断方法。种辅助诊断方法。实验用品实验用品(1)器材：显微镜、载玻片、牙签。器材：显微镜、载玻片、牙签。(2)试剂试剂：G

3、iemsa染液、染液、0.2甲苯胺蓝甲苯胺蓝染液染液、5mol/LHCl溶液溶液、95乙醇、乙醇、pH6.8PBS(3)材料：人口腔黏膜上皮细胞。材料：人口腔黏膜上皮细胞。方法与步骤方法与步骤（一）（一）Giemsa染色法染色法(1)取材制片：先让受检者用水漱口数次，然后用牙签取材制片：先让受检者用水漱口数次，然后用牙签钝头部刮取口腔下唇内侧面，弃去第一次刮到的细胞，钝头部刮取口腔下唇内侧面，弃去第一次刮到的细胞，在同一部位连刮几次，将刮取物均匀涂在干净的载玻在同一部位连刮几次，将刮取物均匀涂在干净的载玻片上晾干。片上晾干。(2)固定：将带有标本的载玻片置入装有新配置的甲醇固定：将带有标本的载

4、玻片置入装有新配置的甲醇-冰醋酸固定液（冰醋酸固定液（3：1）的染色缸中固定）的染色缸中固定10min后取出，后取出，空气干燥。空气干燥。(3)水解：玻片标本置于水解：玻片标本置于5mol/LHCl中，室温水解中，室温水解20min。用新鲜蒸馏水冲洗四次，充分洗去残留的。用新鲜蒸馏水冲洗四次，充分洗去残留的HCl。(4)染色：置染色：置Giemsa染液中染色染液中染色10min，蒸馏水冲洗后，蒸馏水冲洗后晾干，酒精灯上过火脱水，以二甲苯透明，树胶封片。晾干，酒精灯上过火脱水，以二甲苯透明，树胶封片。（二）甲苯胺蓝染色法(1)取材制片：先让受检者用水漱口数次，然后用牙签钝头部刮取口腔下唇内侧面，

5、弃去第一次刮到的细胞，在同一部位连刮几次，将刮取物均匀涂在干净的载玻片上晾干。(2)固定：用95%乙醇固定30分钟。(3)水解：玻片标本置于5mol/L HCl中，室温水解20 min。用新鲜蒸馏水冲洗四次，充分洗去残留的HCl。(4)染色：0.2甲苯胺蓝染液染色510min。(5)镜检：自来水漂洗，空气干燥后油镜下观察。观察与结果观察与结果 高倍镜下可见许多染成蓝色的细胞核，细胞质不着色或不明显。选择核较大，染色清晰，轮廓完整，核质呈均匀细网状的细胞进行观察。找到核膜内侧缘有蓝色浓染小体的细胞核后，换油镜进一步观察。油镜下X染色质为蓝色平凸形、三角形、扁平形的浓染小体。注意事项注意事项(1)取材前要漱口，以免口腔中的杂质影响观察效果。(2)HCl水解要充分，使X染色质易于显现。(3)临床检查时要选择形态好的细胞观察，计算100个细胞中X染色质出现的频率。作业作业书写实验报告，绘制X染色质图。思考题思考题 1间期核内出现X染色质有何生理意义?2X染色质检测有何临床用途?