尿素的细菌;纤维素微生物的分离选编课件复习进程.ppt

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1、尿素的细菌;纤维素微生物的分离选编课件生生物物分分类类动物界：动物界：植物界：植物界：真菌界：真菌界：原生生物：原生生物：原核生物：原核生物：病毒病毒大型真菌、霉菌大型真菌、霉菌酵母菌酵母菌细细菌、放菌、放线线菌、菌、支支原体、原体、蓝蓝藻、藻、衣衣原体原体变形虫、草履虫变形虫、草履虫DNADNA型病毒、型病毒、RNARNA型病毒型病毒真核生物真核生物原核生物原核生物非细胞生物非细胞生物细胞细胞生物生物二、微生物培养二、微生物培养：1 1）概念：）概念：按照微生物对营养物质的不同需按照微生物对营养物质的不同需要，要，配制出供其生长繁殖的配制出供其生长繁殖的营养基质营养基质。1 1、培养基：、培

2、养基：2 2）营养成分：）营养成分：概念概念分类分类作用作用为微生物为微生物的生长和的生长和繁殖提供繁殖提供所需碳元所需碳元素的营养素的营养物质物质无机碳源：二氧化碳无机碳源：二氧化碳、碳酸氢钠；碳酸氢钠；有机碳源：葡萄糖有机碳源：葡萄糖、脂肪酸、石油等脂肪酸、石油等葡萄糖是最主要的碳葡萄糖是最主要的碳源源合成微生物合成微生物的细胞物质的细胞物质和代谢产物，和代谢产物，有些碳源是有些碳源是异养微生物异养微生物主要能源主要能源碳源碳源：概念概念分类分类作用作用为微生物为微生物的生长和的生长和繁殖提供繁殖提供所需氮元所需氮元素的营养素的营养物质物质无机氮源：无机氮源：N2、NH3铵盐、硝酸盐；铵盐

3、、硝酸盐；有机氮源：尿素、有机氮源：尿素、牛牛肉膏、蛋白胨等肉膏、蛋白胨等铵盐、硝酸盐是最主铵盐、硝酸盐是最主要的氮源。要的氮源。合成蛋白质、合成蛋白质、核酸和含氮核酸和含氮代谢产物代谢产物氮源：氮源：温度、温度、PHPH、渗透压、渗透压、O2O2及特殊营养及特殊营养物质等。物质等。1 1、科学家们用脉胞霉（一种真菌）为材料，进、科学家们用脉胞霉（一种真菌）为材料，进行科学研究，用基本培养基来培养脉胞霉。基行科学研究，用基本培养基来培养脉胞霉。基本培养基中所含的营养要素一般包括：本培养基中所含的营养要素一般包括：_2 2、酵母菌可用于食品工业的废水处理，废水中、酵母菌可用于食品工业的废水处理，

4、废水中的淀粉或废糖可与为酵母菌的生长提供的淀粉或废糖可与为酵母菌的生长提供_类营养物质。类营养物质。3 3、用乳酸菌制酸奶，加入的蔗糖是作为、用乳酸菌制酸奶，加入的蔗糖是作为_类营养物质加入到牛奶中的。类营养物质加入到牛奶中的。4 4、硝化细菌的碳源、氮源、能源依次为、硝化细菌的碳源、氮源、能源依次为_。碳源、氮源、水、无机盐碳源、氮源、水、无机盐碳源碳源碳源碳源CO2、NH3、NH3氧化释放的化学能氧化释放的化学能选择培养基选择培养基1 1）不加碳源的培养基）不加碳源的培养基 分离自养型微生物分离自养型微生物2 2）不加氮源的培养基）不加氮源的培养基 分离固氮菌分离固氮菌3 3）加入青霉素的

5、培养基）加入青霉素的培养基 分离酵母菌、霉菌等真菌分离酵母菌、霉菌等真菌4 4）加入高浓度食盐的培养基）加入高浓度食盐的培养基 分离金黄色葡萄球菌分离金黄色葡萄球菌思考：思考：自然界中微生物是混杂的生活在自然界中微生物是混杂的生活在一起的，如何分离出某种微生物（如纯一起的，如何分离出某种微生物（如纯化大肠杆菌）？化大肠杆菌）？2 2、实验操作、实验操作大肠杆菌的纯化培养大肠杆菌的纯化培养 1）制备培养基：）制备培养基：计计算算称称量量溶溶化化调调PHPH值值灭灭菌菌倒倒平平板板原则：原则：目的明确、营养协调、目的明确、营养协调、PH值适宜值适宜无菌技术无菌技术1、获取纯化培养物的关键是、获取纯

6、化培养物的关键是防止外来杂菌防止外来杂菌 的入侵。的入侵。2、无菌措施：、无菌措施：1)1)对实验操作空间、操作者衣着和手进对实验操作空间、操作者衣着和手进行清洁和行清洁和消毒消毒；对将培养用的器皿、；对将培养用的器皿、接种工具和培养基进行接种工具和培养基进行灭菌灭菌2)2)实验操作时已灭菌材料等应避免与周实验操作时已灭菌材料等应避免与周围物品接触；实验操作应在酒精灯火围物品接触；实验操作应在酒精灯火焰附近进行；接种工具等应在酒精等焰附近进行；接种工具等应在酒精等火焰上灼烧后使用火焰上灼烧后使用概念概念对象对象常用方法常用方法消消毒毒灭灭菌菌用用温和温和物理和化物理和化学方法杀死物体学方法杀死

7、物体表面或内部表面或内部部分部分有害微生物（不有害微生物（不包括芽孢和孢子）包括芽孢和孢子）用用强烈强烈物理和化物理和化学方法杀死物体学方法杀死物体表面或内部表面或内部全部全部有害微生物（包有害微生物（包括芽孢和孢子）括芽孢和孢子）空间、操作空间、操作者衣物、手者衣物、手等等器皿、培养器皿、培养基、接种工基、接种工具等具等煮沸、酒精、煮沸、酒精、氯气、紫外氯气、紫外线等线等灼烧灭菌法、灼烧灭菌法、干热灭菌法、干热灭菌法、高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌法法消毒：消毒：常用消毒方法：常用消毒方法：煮沸消毒法煮沸消毒法:100:100煮沸煮沸5-6min5-6min；巴氏消毒法巴氏消毒法:70-75:70

8、-75 下煮下煮30min30min或或 80 80 下煮下煮15min15min；化学药剂消毒法化学药剂消毒法:用用75%75%酒精等进行皮肤消酒精等进行皮肤消毒毒;氯气消毒水源；氯气消毒水源；紫外线消毒等紫外线消毒等灼烧灭菌灼烧灭菌干热灭菌：干热灭菌：160-160-170 170 下加热下加热1-1-2h2h。高压蒸高压蒸汽汽灭菌：灭菌：100kPa100kPa、121 121 下维持下维持15-30min.15-30min.2)灭菌方法：灭菌方法：倒平板：倒平板：待培养基冷却到待培养基冷却到5050O OC C左右时倒平板。左右时倒平板。平板倒置原因：防止培养基冷却产生水滴滴落培平板倒

9、置原因：防止培养基冷却产生水滴滴落培养基上，造成污染。养基上，造成污染。2）纯化大肠杆菌：）纯化大肠杆菌：微生物接种方法微生物接种方法平板划线法平板划线法稀释涂布平板法稀释涂布平板法平板划线法平板划线法：通过接种环在琼脂通过接种环在琼脂固体固体培养基表面连续划线培养基表面连续划线的操作，的操作，将聚集的将聚集的菌种逐步稀释分散菌种逐步稀释分散到培养基的表面，在到培养基的表面，在数次划线后培养，可以数次划线后培养，可以分离到由一个细分离到由一个细胞胞繁殖而来的细胞群体，即得到繁殖而来的细胞群体，即得到单一菌单一菌落落。平板划线法平板划线法稀释涂布平板法：稀释涂布平板法：将菌液进行将菌液进行一系列

10、的一系列的梯度稀释梯度稀释，然后，然后将不同稀释梯度菌液将不同稀释梯度菌液分别涂布在固体培分别涂布在固体培养基养基的表面，进行培养。在的表面，进行培养。在稀释度足够稀释度足够高的菌液高的菌液里，聚集在一起的微生物将被里，聚集在一起的微生物将被分散成单个细胞分散成单个细胞，进而，进而形成单个菌落形成单个菌落。步骤步骤1：梯度稀释操作：梯度稀释操作123456(1)(1)将分别盛有将分别盛有9mL9mL水的试管灭菌并编号。水的试管灭菌并编号。(2)(2)用移液管吸取用移液管吸取1mL1mL培养的菌液，注入第二支试管中，培养的菌液，注入第二支试管中，轻压橡皮头，吹吸三次使之充分混匀。轻压橡皮头，吹吸

11、三次使之充分混匀。(3)(3)从从10101 1倍稀释的试管中吸取倍稀释的试管中吸取1mL1mL稀释液，注入第三支试稀释液，注入第三支试管中，重复步骤管中，重复步骤2 2，直至到第六支试管。，直至到第六支试管。步骤步骤2：涂布到培养基上：涂布到培养基上10-110-410-510-6平板划线法平板划线法稀释涂布平板法稀释涂布平板法相同点：分散出相同点：分散出单细菌形成单菌落单细菌形成单菌落来分离菌种来分离菌种不同点：分别通过不同点：分别通过划线划线和和稀释稀释分散出单细菌，分散出单细菌，稀释涂稀释涂布平板法布平板法除分离菌种外除分离菌种外还可以对微生物计数还可以对微生物计数专题专题1 1 微生

12、物专题微生物专题微生物微生物概念及概念及分类分类微生物微生物培养培养微生物微生物分离和分离和计数计数微生物微生物应用应用思考思考1：如何：如何寻找某种微生物？寻找某种微生物？思考思考2：如何：如何分离某种微生物？分离某种微生物？取取土土样样制制土土壤壤悬悬液液样样品品稀稀释释涂涂布布于于固固体体培培养养基基挑挑菌菌落落保保存存选择培养选择培养筛选并增大菌种浓度筛选并增大菌种浓度稀释菌种稀释菌种1 1、活菌计数法（通过统计菌落估算活菌数）、活菌计数法（通过统计菌落估算活菌数）原理：原理：在稀释度足够高时，微生物在固体培养在稀释度足够高时，微生物在固体培养基上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而基

13、上所形成的一个菌落是由一个单细胞繁殖而成的，即一个菌落代表原先的一个单细胞。成的，即一个菌落代表原先的一个单细胞。常用方法：稀释涂布平板法。常用方法：稀释涂布平板法。每克样品中的菌落数每克样品中的菌落数(CV)M(CV)M其中，其中，C C代表某一稀释度下平板上生长的平均代表某一稀释度下平板上生长的平均菌落数，菌落数，V V代表涂布平板时所用的稀释液的体代表涂布平板时所用的稀释液的体积积(ml)(ml)，M M代表稀释倍数。代表稀释倍数。微生物计数方法微生物计数方法：注意事项注意事项统计的菌落往往比活菌的实际数目低。原因统计的菌落往往比活菌的实际数目低。原因是是_。为了保证结果准确，一般选择菌

14、落数在为了保证结果准确，一般选择菌落数在3030300300的平板上进行计数。的平板上进行计数。(细菌：稀释度细菌：稀释度10104 4-10106 6；放线菌：稀释度；放线菌：稀释度10103 3-10-105 5；霉菌：稀释度；霉菌：稀释度10102 2-10-104 4)为使结果接近真实值可将为使结果接近真实值可将同一稀释度加到三同一稀释度加到三个或三个以上的平皿中个或三个以上的平皿中，经涂布，培养计算出，经涂布，培养计算出菌落平均数。菌落平均数。当两个或多个细胞连着一起时，平板上观当两个或多个细胞连着一起时，平板上观察到的菌落只有一个。察到的菌落只有一个。2 2、显微镜直接计数法：、显

15、微镜直接计数法：利用特定利用特定细菌计数板细菌计数板或或血细胞计数板血细胞计数板，在显微，在显微镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。镜下计算一定容积里样品中微生物的数量。不能区分死菌与活菌；不能区分死菌与活菌；不适于对运动细菌的计数；不适于对运动细菌的计数；需要相对高的细菌浓度；需要相对高的细菌浓度；个体小的细菌在显微镜下难以观察个体小的细菌在显微镜下难以观察缺点缺点第第2节节 土壤中分解尿素的细菌的分离和计数土壤中分解尿素的细菌的分离和计数 土壤中分解尿素的细菌的分离与计数土壤中分解尿素的细菌的分离与计数课题背景课题背景1 1）尿素的利用）尿素的利用尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被

16、尿素是一种重要的农业氮肥。尿素不能直接被农作物吸收。土壤中的细菌将尿素分解成氨之农作物吸收。土壤中的细菌将尿素分解成氨之后才能被植物利用。后才能被植物利用。2 2）细菌利用尿素的原因）细菌利用尿素的原因土壤中的细菌分解尿素是因为它们土壤中的细菌分解尿素是因为它们能合成脲酶能合成脲酶CO(NHCO(NH2 2)脲酶脲酶+H+H2 2O O+CO+CO2 2NHNH3 33 3）常见的分解尿素的微生物）常见的分解尿素的微生物芽孢杆菌、小球菌、假单胞杆菌、克氏芽孢杆菌、小球菌、假单胞杆菌、克氏杆菌、棒状杆菌、梭状芽孢杆菌，某些杆菌、棒状杆菌、梭状芽孢杆菌，某些真菌和放线菌也能分解尿素。真菌和放线菌也

17、能分解尿素。4 4）课题目的）课题目的 从土壤中分离出能够分解尿素的细菌从土壤中分离出能够分解尿素的细菌 统计每克土壤样品中究竟含有多少统计每克土壤样品中究竟含有多少这样的细菌这样的细菌如何从土壤中分离能够分解尿素的细菌如何从土壤中分离能够分解尿素的细菌（目的菌）并对其进行计数？试通过小（目的菌）并对其进行计数？试通过小组讨论写出实验设计的基本思路。组讨论写出实验设计的基本思路。讨论：讨论：思考：如何寻找目的菌？思考：如何寻找目的菌？思考：如何寻找和分离某种微生物？思考：如何寻找和分离某种微生物？实例实例1 1：启示：启示：寻找目的菌种时要根据它对生存环境的寻找目的菌种时要根据它对生存环境的要

18、求，到相应的环境中去寻找。要求，到相应的环境中去寻找。多聚酶链式反应是一种在多聚酶链式反应是一种在体外将少量体外将少量DNADNA大量复制大量复制的技术，此项技术要求使的技术，此项技术要求使用耐高温（用耐高温（93930 0C C）的）的DNADNA聚合酶。聚合酶。如果让你寻如果让你寻找这种耐高温的酶，你会找这种耐高温的酶，你会去哪找？去哪找？启示：启示：分离菌种要人为提供有利于目的菌株生分离菌种要人为提供有利于目的菌株生长的条件长的条件(包括营养、温度、包括营养、温度、pHpH等等)，同时抑制，同时抑制或阻止其他微生物生长，即用或阻止其他微生物生长，即用选择培养基选择培养基来分来分离菌种。离

19、菌种。原因：原因：因为热泉温度因为热泉温度707080800 0C C，淘汰了绝大，淘汰了绝大多数微生物，只有耐热菌被筛选出来。多数微生物，只有耐热菌被筛选出来。思考：为什么耐热菌能从热泉中被筛选出思考：为什么耐热菌能从热泉中被筛选出来？来？分离微生物原理：选择培养基分离分离微生物原理：选择培养基分离培养基的培养基的唯一氮源为尿素唯一氮源为尿素，只有能合成脲酶，只有能合成脲酶的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。的微生物才能分解尿素，以尿素作为氮源。缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏缺乏脲酶的微生物由于不能分解尿素，缺乏氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑制，所氮源而不能生长发育繁殖，而受到抑

20、制，所以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生以用此培养基就能够选择出分解尿素的微生物。物。4)4)培养基选择分解尿素的微生物的原理培养基选择分解尿素的微生物的原理15.0g15.0g琼脂琼脂1.0g1.0g尿素尿素10.0g10.0g葡萄糖葡萄糖0.2g0.2gMgSOMgSO447H7H2 2OO2.1g2.1gNaHNaH2 2POPO4 41.4g1.4gKHKH2 2POPO4 4土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培养基：土壤中分解尿素的细菌的分离与计数所需培养基：从物理性质看此培养基属于哪类？从物理性质看此培养基属于哪类？固体培养基固体培养基在此培养基中哪些作为碳源、氮源？在此培养

21、基中哪些作为碳源、氮源？实验的具体操作实验的具体操作 .土壤取样土壤取样 从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土从肥沃、湿润的土壤中取样。先铲去表层土3cm3cm左右，再取样，将样品装入事先准备好的信左右，再取样，将样品装入事先准备好的信封中。封中。取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用取土样用的小铁铲和盛土样的的信封在使用前都要灭菌。前都要灭菌。.制备培养基：制备培养基：制备以尿素为唯一氮源的制备以尿素为唯一氮源的选择培养基选择培养基。应在火焰旁称取土壤应在火焰旁称取土壤应在火焰旁称取土壤应在火焰旁称取土壤10g10g10g10g。在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行在稀释土壤溶液

22、的过程中，每一步都要在火焰旁进行在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行在稀释土壤溶液的过程中，每一步都要在火焰旁进行分离不同的微生物采用不同的稀释度分离不同的微生物采用不同的稀释度原因：不同微生物在土壤中含量不同原因：不同微生物在土壤中含量不同目的：保证获得菌落数在目的：保证获得菌落数在3030300300之间、适于计之间、适于计数的平板数的平板 三三 样品的稀释样品的稀释.取样涂布取样涂布如果得到了如果得到了如果得到了如果得到了2 2 2 2个或个或个或个或2 2 2 2个以上菌落数目在个以上菌落数目在个以上菌落数目在个以上菌落数目在30300303003030030300的平板，的

23、平板，的平板，的平板，则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数，如则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数，如则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数，如则说明稀释操作比较成功，并能够进行菌落的计数，如果果果果同一稀释倍数的三个重复的菌落数相差较大，表明试同一稀释倍数的三个重复的菌落数相差较大，表明试同一稀释倍数的三个重复的菌落数相差较大，表明试同一稀释倍数的三个重复的菌落数相差较大，表明试验不精确验不精确验不精确验不精确，需要重新实验。，需要重新实验。，需要重新实验。，需要重新实验。实例实例1：教材：教材22页页实例实例2 2：在做分解尿素的细菌的筛选与：在做分解尿素的细菌的筛选

24、与统计菌落数目的实验时，统计菌落数目的实验时，A A同学从对应同学从对应的的10106 6倍稀释的培养基中筛选出大约倍稀释的培养基中筛选出大约150150个菌落，但是其他同学在同样的稀个菌落，但是其他同学在同样的稀释度下只选择出大约释度下只选择出大约5050个菌落。分析其个菌落。分析其原因。原因。原原因因：土土样样不不同同 培培养养基基污污染染或或操操作作失失误误(或者是混入了其他的含氮物质或者是混入了其他的含氮物质)小结：通过这个事例可以看出，实验结果要有小结：通过这个事例可以看出，实验结果要有说服力，对照的设置是必不可少的。说服力，对照的设置是必不可少的。方案一：方案一：由其他同学用与由其

25、他同学用与A同学相同土样进行同学相同土样进行实验实验 方案二：方案二：将将A同学配制的培养基在不加土样同学配制的培养基在不加土样(或或加等量无菌水加等量无菌水)的情况下进行培养，作为空白的情况下进行培养，作为空白对照，以证明培养基是否受到污染。对照，以证明培养基是否受到污染。结果预测：结果预测：如果结果与如果结果与A同学一致，则证明同学一致，则证明A无无误；如果结果不同，则证明误；如果结果不同，则证明A同学存在操作失同学存在操作失误或培养基的配制有问题。误或培养基的配制有问题。设置对照：设置对照：设置对照的主要目的设置对照的主要目的是排除实验组中非测试因是排除实验组中非测试因素对实验结果的影响

26、，提高实验结果的可信度。素对实验结果的影响，提高实验结果的可信度。纤维素分解菌的筛选（教材纤维素分解菌的筛选（教材P28P28）选择选择_的环境，采集土样制成样品。的环境，采集土样制成样品。将样品接种在以将样品接种在以_为唯一碳源的选择培为唯一碳源的选择培养基上培养，目的是增加纤维素分解菌的浓度。养基上培养，目的是增加纤维素分解菌的浓度。采用采用_法法,将样品接种到含将样品接种到含有有刚果红刚果红的固体的培养基上，挑选产生的固体的培养基上，挑选产生_的菌落来筛选纤维素分解菌。的菌落来筛选纤维素分解菌。纤维素丰富纤维素丰富纤维素纤维素稀释涂布平板稀释涂布平板透明圈透明圈2 2、分解纤维素微生物的

27、分离：、分解纤维素微生物的分离：实验操作实验操作土壤取样土壤取样梯度稀释梯度稀释将样品涂布到鉴别将样品涂布到鉴别纤维素分解菌的培纤维素分解菌的培养基上（含刚果红）养基上（含刚果红）挑选产生透挑选产生透明圈的菌落明圈的菌落选择培养选择培养(液体培养基液体培养基).微生物的培养与观察微生物的培养与观察在菌落计数时，每隔在菌落计数时，每隔24h24h统计一次菌落数目。统计一次菌落数目。选取菌落数目稳定时的记录作为结果，选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止因以防止因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。培养不同微生物往往需要不同培养温度。培养不同微生物往往需要不同培养

28、温度。细菌：细菌：30303737培养培养1 12d2d放线菌：放线菌：25252828培养培养5 57d7d霉菌：霉菌：25252828的温度下培养的温度下培养3 34d4d。微生物的培养与观察微生物的培养与观察三三.结果分析与评价结果分析与评价1.1.通过对照实验，若培养物有杂菌污染，通过对照实验，若培养物有杂菌污染，菌落数偏高；若培养物混入其他氮源，则菌落数偏高；若培养物混入其他氮源，则菌落形态多样，菌落数偏高，难以选择出菌落形态多样，菌落数偏高，难以选择出分解尿素的微生物。分解尿素的微生物。2.2.提示：选择每个平板上长有提示：选择每个平板上长有3030030300个个菌落的稀释倍计算

29、每克样品的菌数最合适。菌落的稀释倍计算每克样品的菌数最合适。同一稀释倍数的三个重复的菌落数不能相同一稀释倍数的三个重复的菌落数不能相差悬殊，如相差较大，表示实验不精确。差悬殊，如相差较大，表示实验不精确。2、微生物分离原理：、微生物分离原理：人为提供有利于人为提供有利于目的菌株目的菌株生长的条件生长的条件(包括营包括营养、温度、养、温度、pH等等)，同时抑制或阻止其他微，同时抑制或阻止其他微生物生长。生物生长。（用选择培养基）（用选择培养基）（二）纯化大肠杆菌（二）纯化大肠杆菌1 1、将准备培养的菌种放到培养基中的过程叫做、将准备培养的菌种放到培养基中的过程叫做_。2 2、微生物接种的最常用方

30、法是、微生物接种的最常用方法是_和和_3 3、能够获得单一菌落的接种方法有、能够获得单一菌落的接种方法有_和和_4 4、能够测定样品中活菌数的接种方法是、能够测定样品中活菌数的接种方法是_平板划线法平板划线法稀释涂布平板法稀释涂布平板法接种接种平板划线法平板划线法稀释涂布平板法稀释涂布平板法稀释涂布平板法稀释涂布平板法5 5、选择培养基（笔记）、选择培养基（笔记）选择培养基选择培养基筛选、分离的细胞筛选、分离的细胞加入青霉素加入青霉素酵母菌、霉菌酵母菌、霉菌等真菌等真菌加入高浓度食盐加入高浓度食盐金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌无氮培养基无氮培养基固氮菌固氮菌无碳培养基无碳培养基自养型自养型细菌细

31、菌依标记基因，加入某种等抗依标记基因，加入某种等抗生素生素导入了导入了重组重组DNADNA的受体细的受体细胞胞加入次黄嘌呤、氨基嘌呤等加入次黄嘌呤、氨基嘌呤等杂交瘤细胞杂交瘤细胞培养基成分培养基成分含量含量NH4ClNH4Cl4.6g4.6gK2HPO4K2HPO42.0g2.0gMgSO4MgSO41.6g1.6g琼脂琼脂15g15g蒸馏水蒸馏水1000ml1000ml乳糖乳糖5.0g培养基成分培养基成分含量含量K2HPO4K2HPO42.0g2.0gMgSO4MgSO41.6g1.6g琼脂琼脂15g15g蒸馏水蒸馏水1000ml1000ml乳糖乳糖5.0gNH4ClNH4Cl4.6g4.6

32、g蛋白胨蛋白胨10.0g10.0g培养基成分培养基成分含量含量K2HPO4K2HPO42.0g2.0gMgSO4MgSO41.6g1.6g琼脂琼脂15g15g蒸馏水蒸馏水1000ml1000ml乳糖乳糖5.0gNH4ClNH4Cl4.6g4.6g培养基成分培养基成分含量含量K2HPO4K2HPO42.0g2.0gMgSO4MgSO41.6g1.6g琼脂琼脂15g15g蒸馏水蒸馏水1000ml1000ml乳糖乳糖5.0gNH4ClNH4Cl4.6g4.6g蛋白胨蛋白胨10.0g10.0g培养基成分培养基成分含量含量K2HPO4K2HPO42.0g2.0gMgSO4MgSO41.6g1.6g琼脂琼

33、脂15g15g蒸馏水蒸馏水1000ml1000ml乳糖乳糖5.0gNH4ClNH4Cl4.6g4.6g微生物的分离：科赫的平板划线法微生物的分离：科赫的平板划线法自然界中的微生物都是混杂生活在一起的，给研究和自然界中的微生物都是混杂生活在一起的，给研究和应用带来了很大困难。应用带来了很大困难。1919世纪后期，德国细菌学家世纪后期，德国细菌学家科赫发明了科赫发明了固体培养基固体培养基，尤其是用琼脂做凝固剂的固，尤其是用琼脂做凝固剂的固体培养基，成功解决这一问题，科赫体培养基，成功解决这一问题，科赫将微生物样品稀将微生物样品稀释后，用针尖沾取少量稀释菌液在固体培养基上连续释后，用针尖沾取少量稀释

34、菌液在固体培养基上连续划线划线，由于微生物在固体培养基上由于微生物在固体培养基上生长部位固定生长部位固定，不，不久就会在培养基表面长出久就会在培养基表面长出多种菌落多种菌落，科赫推断相同的，科赫推断相同的菌落来自同一个种，于是挑选某一种菌落的微生物，菌落来自同一个种，于是挑选某一种菌落的微生物，经过几次相同的培养过程后，就得到了纯种。应用固经过几次相同的培养过程后，就得到了纯种。应用固体培养基，科赫分离出了炭疽芽孢杆菌、霍乱弧菌、体培养基，科赫分离出了炭疽芽孢杆菌、霍乱弧菌、结核杆菌等。结核杆菌等。19051905年科赫因结核杆菌的研究成果而年科赫因结核杆菌的研究成果而获诺贝尔生理学奖。获诺贝

35、尔生理学奖。单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见、具有一定形态结构子细胞群体，形成一个肉眼可见、具有一定形态结构子细胞群体，叫做叫做菌落菌落。菌落是鉴定菌种的重要依据。菌落是鉴定菌种的重要依据。1）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基制备牛肉膏蛋白胨固体培养基物质物质牛肉膏牛肉膏蛋白胨蛋白胨NaClNaCl琼脂琼脂水水重量重量5g5g10g10g5g5g20g20g定溶至定溶至100mL100mL 称量称量 按比例称取各种物质，注意事项：牛肉膏要按比例称取各种物质，注意事项：牛肉膏要放在称量纸上称量，牛肉膏、蛋白胨都易吸潮，放在称量纸上

36、称量，牛肉膏、蛋白胨都易吸潮，称取时动作要迅速，称后及时盖上瓶盖称取时动作要迅速，称后及时盖上瓶盖。计算计算溶化：溶化：先将牛肉膏连同称量纸一起放入烧杯，加少量先将牛肉膏连同称量纸一起放入烧杯，加少量水，加热至牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻璃棒取水，加热至牛肉膏溶化并与称量纸分离后，用玻璃棒取出称量纸。加入蛋白胨和氯化钠，用玻璃棒搅拌使之溶出称量纸。加入蛋白胨和氯化钠，用玻璃棒搅拌使之溶解，再加入琼脂，搅拌，待溶解后，加自来水定溶至解，再加入琼脂，搅拌，待溶解后，加自来水定溶至100mL100mL。灭菌：灭菌：将配制好的培养基放到锥形瓶中（瓶口加棉塞，将配制好的培养基放到锥形瓶中（瓶口加棉塞

37、，包上牛皮纸），连同培养皿（包上牛皮纸），连同培养皿（3 35 5套，用几层报纸包好）套，用几层报纸包好）一起放到高压锅内灭菌。一起放到高压锅内灭菌。2 2、制备培养基的操作排序、制备培养基的操作排序 溶化（使各种原料、琼脂等加热溶化）溶化（使各种原料、琼脂等加热溶化）灭菌灭菌 调调PHPH值值 计算（各成分用量）计算（各成分用量）称量称量 倒平板倒平板(培养基冷却至培养基冷却至50,50,倒入培养皿倒入培养皿)正确的操作顺序：正确的操作顺序：_ 为为什什么么分分离离不不同同的的微微生生物物要要采采用用不不同同的的稀稀释释度度？测测定定土土壤壤中中细细菌菌的的总总量量和和测测定定土土壤壤中中能

38、能分分解解尿尿素素的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？的细菌的数量，选用的稀释范围相同吗？原原因因：土土壤壤中中各各类类微微生生物物的的数数量量（单单位位：株株/kg/kg）是是不不同同的的。例例如如在在干干旱旱土土壤壤中中的的上上层层样样本本中中：好好氧氧及及兼兼性性厌厌氧氧细细菌菌数数约约为为2 2 185185万万，放放线线菌数约为菌数约为477477万，霉菌数约为万，霉菌数约为23.123.1万。万。结结论论：为为获获得得不不同同类类型型的的微微生生物物，就就需需要要按按不不同同的的稀稀释释度度进进行行分分离离，同同时时还还应应当当有有针针对对性性地地提提供选择培养的条件。供选择培养的

39、条件。接种环接种环接种针接种针结果：结果：培养一定时间后，该菌数量上升，再通培养一定时间后，该菌数量上升，再通过平板稀释等方法对它进行纯化培养分离。过平板稀释等方法对它进行纯化培养分离。思考：思考：1 1、所有的培养基都必须含碳源、氮源、水、所有的培养基都必须含碳源、氮源、水、无机盐吗？无机盐吗？2 2、培养基中的营养要素，除了水以外的无机、培养基中的营养要素，除了水以外的无机 物只能是无机盐？物只能是无机盐？3 3、COCO2 2既自养型生物的碳源也是能源物质？既自养型生物的碳源也是能源物质？4 4、利用动物细胞培养液培养病毒，行吗？、利用动物细胞培养液培养病毒，行吗？否；可以无碳源，也可无

40、氮源否；可以无碳源，也可无氮源否；碳源和氮源也可能是无机物否；碳源和氮源也可能是无机物否；光能或化学能否；光能或化学能病毒无细胞结构，只能寄生在活细胞中生存。病毒无细胞结构，只能寄生在活细胞中生存。所以，要利用所以，要利用活细胞活细胞培养病毒。培养病毒。一、微生物概念及种类一、微生物概念及种类 1 1、概念：是指自然界中那些形态微小、概念：是指自然界中那些形态微小、结构简单，结构简单，通常通常要用光学显微镜或电要用光学显微镜或电子显微镜才能看清楚的生物。子显微镜才能看清楚的生物。2 2、种类：无细胞结构、种类：无细胞结构病毒病毒、原核生物原核生物界界（细线支蓝衣）（细线支蓝衣）、真菌界真菌界（

41、酵母菌、（酵母菌、霉菌、蘑菇等）霉菌、蘑菇等）、原生生物界原生生物界（草履草履虫、变形虫等）虫、变形虫等）3 3、代谢特点：异常旺盛、代谢特点：异常旺盛微生微生物所物所需的需的营养营养要素要素碳源碳源氮源氮源水水无机盐无机盐无机碳源：无机碳源：CO2等等自养型自养型有机碳源：有机碳源：葡萄糖等葡萄糖等异养型异养型N2：固氮菌（根瘤菌等）：固氮菌（根瘤菌等）NH3：硝化细菌：硝化细菌其他：铵盐、硝酸盐、尿素、其他：铵盐、硝酸盐、尿素、蛋白胨蛋白胨特殊营养物质（维生素、氨基酸和碱基等）、特殊营养物质（维生素、氨基酸和碱基等）、PHPH、温度、氧气等、温度、氧气等练习：练习：（1010全国）全国）某

42、细菌固体培养基的组某细菌固体培养基的组成成分是成成分是KHKH2 2POPO4 4、NaNa2 2HPOHPO4 4、MgSOMgSO4 4、葡萄糖、尿素、琼脂和蒸馏水，其中凝固葡萄糖、尿素、琼脂和蒸馏水，其中凝固剂是剂是，碳源是，碳源是，氮源是。已知只有能合成脲酶氮源是。已知只有能合成脲酶的细菌才能在该培养基上生长，故该培养的细菌才能在该培养基上生长，故该培养基属于培养基。按照化学成分分基属于培养基。按照化学成分分类，该培养基属于培养基。从同化类，该培养基属于培养基。从同化作用类型上看，用该培养基培养的细菌属作用类型上看，用该培养基培养的细菌属于于。葡萄糖葡萄糖尿素尿素琼脂琼脂选择选择合成合

43、成异养型异养型无菌技术无菌技术1 1、获得纯净培养物的关键是？、获得纯净培养物的关键是？防止外来杂菌的入侵防止外来杂菌的入侵2 2、消毒与灭菌的区别？、消毒与灭菌的区别？消毒是杀死部分对人体有害的微生物；灭菌消毒是杀死部分对人体有害的微生物；灭菌 是杀死所有微生物。是杀死所有微生物。3 3、对培养基灭菌的方法是、对培养基灭菌的方法是_，对，对接种针灭菌的方法是接种针灭菌的方法是_，对玻璃器皿，对玻璃器皿灭菌的方法是灭菌的方法是_，对实验操作者的手用，对实验操作者的手用酒精酒精_处理，实验操作结束需不需要灭处理，实验操作结束需不需要灭菌？菌？_高压蒸汽灭菌法高压蒸汽灭菌法灼烧灭菌灼烧灭菌干热灭菌

44、干热灭菌消毒消毒需要需要2 2、实验操作、实验操作大肠杆菌的纯化培养大肠杆菌的纯化培养 1）制备培养基：）制备培养基：计计算算称称量量溶溶化化调调PHPH值值灭灭菌菌倒倒平平板板人有了知识，就会具备各种分析能力，明辨是非的能力。所以我们要勤恳读书，广泛阅读，古人说“书中自有黄金屋。”通过阅读科技书籍，我们能丰富知识，培养逻辑思维能力；通过阅读文学作品，我们能提高文学鉴赏水平，培养文学情趣；通过阅读报刊，我们能增长见识，扩大自己的知识面。有许多书籍还能培养我们的道德情操，给我们巨大的精神力量，鼓舞我们前进。此课件下载可自行编辑修改，仅供参考！此课件下载可自行编辑修改，仅供参考！感谢您的支持，我们努力做得更好！谢谢感谢您的支持，我们努力做得更好！谢谢