【精品】专题2细胞工程02精品ppt课件.ppt
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1、专题2细胞工程022022/11/12【可编辑】一、动物细胞培养一、动物细胞培养 动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的动物细胞培养就是从动物机体中取出相关的_,将它分散成,将它分散成_,然后放在适宜的,然后放在适宜的_中,让这些细胞中,让这些细胞_和和_ _。组织组织单个细胞单个细胞培养基培养基生长生长 增殖增殖 1.原理:原理:细胞的增殖细胞的增殖1为什么细胞培养要分散成单个细胞培养?怎样分散?为什么细胞培养要分散成单个细胞培养?怎样分散?2用胰蛋白酶分散细胞,说明细胞间的物质主要用胰蛋白酶分散细胞,说明细胞间的物质主要3 成分是什么?用胃蛋白酶行吗?成分是什么?用胃蛋白酶行吗?3 什么是
2、细胞贴壁和细胞接触抑制?什么是细胞贴壁和细胞接触抑制?4什么是原代培养和传代培养?传代培养的细胞什么是原代培养和传代培养?传代培养的细胞5 具有具有 什么特点?什么特点?2.过程细胞株:细胞株:原代细胞一般传至原代细胞一般传至10代左右细胞代左右细胞生长停滞,大部分细胞衰老死亡,少数细胞存生长停滞,大部分细胞衰老死亡,少数细胞存活到活到4050代,这种传代细胞为细胞株。代,这种传代细胞为细胞株。细胞系:细胞系:细胞株传代至细胞株传代至50代后又出现细胞代后又出现细胞生长停滞状态,生长停滞状态,只有部分细胞由于遗传物质的只有部分细胞由于遗传物质的改变改变,使其在培养条件下可以无限制传代,这,使其
3、在培养条件下可以无限制传代,这种传代细胞为细胞系。种传代细胞为细胞系。细胞株和细胞系的区别细胞株和细胞系的区别:细胞系的遗传物细胞系的遗传物质改变质改变,具有癌细胞的特点,失去接触抑制,具有癌细胞的特点,失去接触抑制,容易传代培养。容易传代培养。3.动物细胞培养的条件动物细胞培养的条件1 1、无菌、无毒的环境、无菌、无毒的环境 (添加一定量的抗生素,定期更换培养液)(添加一定量的抗生素,定期更换培养液)2 2、营养、营养(葡萄糖、氨基酸、无机盐、促生长因子、微量元素、葡萄糖、氨基酸、无机盐、促生长因子、微量元素、动动物血清和血浆等物血清和血浆等:补充合成培养基中缺乏的物质补充合成培养基中缺乏的
4、物质3 3、温度和、温度和PHPH 36.5+36.5+(-)0.50.5度度,7.2-7.4,7.2-7.44 4、气体环境:、气体环境:O O2 2和和COCO2 2(95%95%空气和空气和5%CO5%CO2 2 )4.动物细胞培养技术的应用动物细胞培养技术的应用生产生物制品,如病毒疫苗、生产生物制品,如病毒疫苗、干扰素、单干扰素、单克隆抗体克隆抗体作为基因工程中的作为基因工程中的受体细胞受体细胞培养的动物细胞可以用于检测培养的动物细胞可以用于检测有毒物质有毒物质,判断某种物质的毒性判断某种物质的毒性用于筛选用于筛选抗癌药物抗癌药物,为治疗和预防,为治疗和预防癌症癌症及及其他疾病提供理论
5、依据其他疾病提供理论依据细胞的全能性细胞的全能性细胞细胞植物体植物体培养结果培养结果获得细胞获得细胞或或细胞产物细胞产物微型繁殖、作物微型繁殖、作物脱毒等脱毒等培养目的培养目的动物血清动物血清植物激素植物激素培养基特有成分培养基特有成分液体培养基液体培养基固体培养基固体培养基培养基性质培养基性质细胞增殖细胞增殖原理原理动物细胞培养动物细胞培养植物组织培养植物组织培养比较项目比较项目植物细胞培养和动物细胞培养的比较植物细胞培养和动物细胞培养的比较 将动物的一个细胞的将动物的一个细胞的_,移入一个已,移入一个已经去掉经去掉_的的_细胞中,使其细胞中,使其_并并发育成一个新的发育成一个新的_,这个新
6、的胚胎最终,这个新的胚胎最终发育为动物个体。发育为动物个体。2.分类:分类:可分为可分为_核移植和核移植和_核核移植两类,前者的难度明显低于后者。用移植两类,前者的难度明显低于后者。用核移植的方法得到的动物称为核移植的方法得到的动物称为_。细胞核细胞核细胞核细胞核卵母卵母重组重组胚胎胚胎胚胎细胞胚胎细胞体细胞体细胞克隆动物克隆动物1.原理:动物细胞核具有全能性原理:动物细胞核具有全能性二、动物体细胞核移植技术和克隆动物二、动物体细胞核移植技术和克隆动物激活方法:激活方法:激活目的:激活目的:促融方法:促融方法:电刺激电刺激体细胞核移植体细胞核移植涉及的技术:动物细胞培养、动物细胞融合、涉及的技
7、术:动物细胞培养、动物细胞融合、胚胎移植胚胎移植受体:普通奶牛受体:普通奶牛1.体积大,易操体积大,易操作,作,营养营养物质丰物质丰富富2.含有促使细含有促使细胞核表达全能性胞核表达全能性的物质的物质动物细胞培养动物细胞培养胚胎移植胚胎移植供体:优良性状牛供体:优良性状牛动物细胞融合动物细胞融合二、动物体细胞核移植技术和克隆动物二、动物体细胞核移植技术和克隆动物4.应用:应用:存在问题:存在问题:1、加速家畜的遗传改良,促进优良畜群繁育、加速家畜的遗传改良,促进优良畜群繁育2、保护濒危物种、保护濒危物种3、生产珍贵的医用蛋白、生产珍贵的医用蛋白4、克隆器官作为器官移植的供体、克隆器官作为器官移
8、植的供体1、成活率低、成活率低2、克隆动物的健康问题、克隆动物的健康问题3、克隆动物食品的安全性问题、克隆动物食品的安全性问题3.核移植流程核移植流程作为异种移植的作为异种移植的供体供体“鼠背人耳鼠背人耳”用于组织器官的用于组织器官的移植移植2.2.22.2.2动物细胞融合与动物细胞融合与单克隆抗体单克隆抗体一、动物细胞融合一、动物细胞融合1.原理:原理:2.诱导融合的方法诱导融合的方法3.动物细胞融合的意义动物细胞融合的意义 打破生殖隔离,使远缘杂交成为可能。打破生殖隔离,使远缘杂交成为可能。植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较植物体细胞杂交和动物细胞融合的比较比较项目比较项目植物体细胞杂交植
9、物体细胞杂交动物细胞融合动物细胞融合细胞融合原理细胞融合原理细胞膜的流动性、细胞膜的流动性、细胞膜的流动性细胞膜的流动性细胞融合的方法细胞融合的方法 去除细胞壁去除细胞壁后诱导后诱导原生质体融合原生质体融合使细胞分散后诱使细胞分散后诱导细胞融合导细胞融合诱导方法诱导方法物理(离心、振荡、物理(离心、振荡、电刺激)电刺激)化学(聚乙二醇)化学(聚乙二醇)物理、化学方法物理、化学方法(同左)(同左)灭活的病毒灭活的病毒用途用途获得杂种植株获得杂种植株制备单克隆抗体制备单克隆抗体1 1、抗体的化学本质?、抗体的化学本质?、抗体的化学本质?、抗体的化学本质?作用特点?作用特点?作用特点?作用特点?2
10、2、抗体由什么细胞产生?分布在哪里、抗体由什么细胞产生?分布在哪里、抗体由什么细胞产生?分布在哪里、抗体由什么细胞产生?分布在哪里?3.3.如何获取某种特定抗体?如何获取某种特定抗体?如何获取某种特定抗体?如何获取某种特定抗体?4.B淋巴细胞有什么特点?淋巴细胞有什么特点?5.5.什么样的细胞能够在体外无限增殖什么样的细胞能够在体外无限增殖什么样的细胞能够在体外无限增殖什么样的细胞能够在体外无限增殖呢?呢?呢?呢?6.把把B淋巴细胞和骨髓瘤细胞放在一淋巴细胞和骨髓瘤细胞放在一起,会有几种融合方式?起,会有几种融合方式?7.杂交瘤细胞有什么特点杂交瘤细胞有什么特点二二二二.动物细胞融合的成功应用
11、动物细胞融合的成功应用动物细胞融合的成功应用动物细胞融合的成功应用 单克隆抗体的制备单克隆抗体的制备单克隆抗体的制备单克隆抗体的制备单克隆抗体单克隆抗体 由单个杂交瘤细胞经过无性繁殖由单个杂交瘤细胞经过无性繁殖(克隆),形成基因型相同的细胞群,(克隆),形成基因型相同的细胞群,这一细胞群所产生的化学性质单一、特这一细胞群所产生的化学性质单一、特异性强的抗体称为单克隆抗体。异性强的抗体称为单克隆抗体。特点:特点:特异性强、灵敏度高特异性强、灵敏度高 思考:思考:1、本过程利用了哪些原理?、本过程利用了哪些原理?免疫原理,细胞融合原理和动物细胞培养原理免疫原理,细胞融合原理和动物细胞培养原理2、为
12、什么选用小鼠骨髓瘤细胞与、为什么选用小鼠骨髓瘤细胞与B细胞融合?细胞融合?这样融合成的杂交瘤细胞,继承了双亲细胞的遗传这样融合成的杂交瘤细胞,继承了双亲细胞的遗传物质,不仅具有物质,不仅具有B细胞分泌抗体的能力,而且还有细胞分泌抗体的能力,而且还有无限增殖的本领,因而可以获得大量单克隆抗体无限增殖的本领,因而可以获得大量单克隆抗体单克隆抗体的应用单克隆抗体的应用与常规抗体相比,单克隆抗体产量高,特异与常规抗体相比,单克隆抗体产量高,特异性强,灵敏度高,优越性十分明显性强,灵敏度高,优越性十分明显。应用主要有:应用主要有:1、临床诊断、临床诊断2、作为载体,运载抗癌药物,形成、作为载体,运载抗癌
13、药物,形成“生物导弹生物导弹”治疗肿瘤治疗肿瘤22免疫的免疫的B B淋巴细胞淋巴细胞注射特定注射特定抗原蛋白抗原蛋白骨髓瘤细胞骨髓瘤细胞培养骨髓瘤细胞培养骨髓瘤细胞融合融合多种多种杂交细胞杂交细胞专一抗体检验阳性专一抗体检验阳性单克隆抗体单克隆抗体注射到小鼠体内注射到小鼠体内体外培养体外培养专一抗体检验阳性专一抗体检验阳性将不同杂交细胞将不同杂交细胞分开分开,克隆专一,克隆专一抗抗体,检验阳性细胞体,检验阳性细胞选择性培养基选择性培养基1.单克隆抗体制备过程单克隆抗体制备过程多种多种(一选)(一选)杂交瘤细胞杂交瘤细胞(二选)(二选)能产生所需抗体的能产生所需抗体的杂交瘤细胞杂交瘤细胞(3 3
14、)整个制备过程为何要经过两次筛选)整个制备过程为何要经过两次筛选?第一次筛选得到杂交瘤细胞(多种),第一次筛选得到杂交瘤细胞(多种),第二次需先在多孔培养板上,在每孔只有一个杂交瘤第二次需先在多孔培养板上,在每孔只有一个杂交瘤细胞的情况下开始培养,然后再筛选出细胞的情况下开始培养,然后再筛选出能产生特异性能产生特异性抗体的细胞群。抗体的细胞群。由于该细胞群是单个杂交瘤细胞克隆得来的,所由于该细胞群是单个杂交瘤细胞克隆得来的,所以产生的抗体必然是化学性质单一的,特异性强的单以产生的抗体必然是化学性质单一的,特异性强的单克隆抗体。克隆抗体。3、关于单克隆抗体,下列叙述不正确的是、关于单克隆抗体,下
15、列叙述不正确的是()A、可以制成诊断盒用于疾病的诊断、可以制成诊断盒用于疾病的诊断 B、可以与药物结合,用于病变细胞的定向治疗、可以与药物结合,用于病变细胞的定向治疗 C、可以利用基因工程技术生产、可以利用基因工程技术生产 D、可以在生物体内生产,不能体外生产、可以在生物体内生产,不能体外生产4、“生物导弹生物导弹”是指是指()A、单克隆抗体、单克隆抗体 B、带有特定药物的单克隆抗体、带有特定药物的单克隆抗体 C、杂交细胞、杂交细胞 D、B淋巴细胞淋巴细胞DB5、动物细胞融合和植物原生质体融合比较,在、动物细胞融合和植物原生质体融合比较,在 动物细胞融合中有特殊性的是动物细胞融合中有特殊性的是
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