微生物遗传学实验.ppt

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1、微生物遗传学实验 Still waters run deep.流静水深流静水深,人静心深人静心深 Where there is life,there is hope。有生命必有希望。有生命必有希望遺傳工程遺傳工程分子生物學分子生物學生物技術生物技術生命科學生命科學微生物遺傳學微生物遺傳學微生物學微生物學生物化學生物化學實驗實驗 以以 驗實驗實實際体驗實際体驗 以以 驗證真實驗證真實教學基本設計教學基本設計製備遺傳實驗材料製備遺傳實驗材料遺傳分析遺傳分析獵取基因獵取基因基因構造與功能基因構造與功能遺傳實驗材料遺傳實驗材料質質体体：plasmid,phagemid噬菌体噬菌体：lambda,M13

2、細菌菌細菌菌体体：E.coli,BacillusTransformationConjugationTransductionTranspositionComplementationSuppression By Gene TransferRecombinationGenotype vs.PhenotypeGene StructureGene ExpressionGene Regulation遺傳分析遺傳分析1.介紹與準備介紹與準備2.噬菌體及噬菌體噬菌體及噬菌體DNA的製備的製備 (Phage and phage DNA preparation)3.質體質體DNA的製備的製備快速篩選法及小量抽取法

3、快速篩選法及小量抽取法 (Plasmid preparation-quick screening and small scale method)4.酵素反應酵素反應(Enzymatic reaction)5.轉型轉型(Transformation)6.突變突變(Mutagenesis)7.轉導轉導(Transduction)8.互補互補(Complementation)9.接合與轉座接合與轉座(Conjugative transposition)10.分子複殖分子複殖(Molecular cloning)11.聚合酵素連鎖反應聚合酵素連鎖反應(Polymerase chain reaction

4、)12.南方雜配反應南方雜配反應(Southern hybridization)實驗項目實驗項目Plasmid extraction and purificationChromosomal DNA preparationTotal RNA preparationAgarose gel electrophoresisPhage preparation by induction of lysogenConditional mutation and Nonsense suppressionPlaque forming assayDensity gradient equilibrium ultrace

5、ntrificationCompetent cell preparationPlasmid transformationIn vitro mutagenesisAlpha complementation(blue&white screening)Restriction and ligationBasic cloning techniquePCRSouthern blotting and hybridization實驗技術實驗技術儀器設備儀器設備天平天平 1 1酸鹼儀酸鹼儀 1 1水浴槽水浴槽 2 2培養箱培養箱 3 3微量離心機微量離心機 6 6微量吸管微量吸管 22 22電泳槽電泳槽 11 11攪拌器攪拌器 4 4計時器計時器 20 20紫外燈與攝影儀紫外燈與攝影儀 1 1光電比色儀光電比色儀 1 1PCR PCR 儀儀 1 1 超高速離心機超高速離心機 1 1訓練方式訓練方式小班教學小班教學：藥品充足、器材齊備：藥品充足、器材齊備親自動手親自動手：獨立操作、整合負責：獨立操作、整合負責循序漸進循序漸進：微生物學，生物化學，遺傳學：微生物學，生物化學，遺傳學預期教學成效預期教學成效l 獨立操作能力獨立操作能力l 理論與實驗印證理論與實驗印證l 技術資料與論文解讀技術資料與論文解讀Lambda phage ultracentrifuge bandingLambda plaque