生本基础生物化学.doc
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1、基础生物化学实验大纲课程编码:课程性质:必修课教学对象: 生物科学专业学时学分: 36学时2学分编写单位: 生物科学与化学系编 写 人:陈仕学 梁琍审 定 人:高健强编写时间: 2012 年8 月一、课程说明1.课程基本情况课程名称:基础生物化学实验英文名称:Biochemistry Experiment课程编号:开课专业:09生物科学开课学期:第四学期是否独立开设实验:否课程学分/周学时:(实验学时: 36 实验个数:14 实验学分: )课程类型:专业基础课实验2课程性质(本课程在该专业的地位作用)专业必修3本课程的教学目的和任务通过实验教学使学生巩固理论教学的基本原理,基本概念,真正掌握生
2、物化学的基本实验技能和操作方法,同时在实验教学过程中,培养学生独立工作和研究、创新的能力,训练学生分析问题、解决问题的能力,训练科学思维,培养学生科学工作作风,并为后续专业课的学习打好基础。4本课程与相关课程的关系、教材体系特点及具体要求生物化学是在分子水平上研究生命活动规律的科学,这些规律来自严格的实验研究,生物化学实验是生物专业的一门专业基础实验课,是学生学习生物化学的重要组成部分。生物化学实验教学要求:1).遵守实验室规则,爱护实验仪器设备。2).实验前要充分预习实验指导,做好实验记录,认真完成实验报告。3).实验操作要细心谨慎,严格遵守操作规则,注意安全。4).实验完毕,注意关闭灯、电
3、、火、窗5).实验报告的格式形式应统一。封面应包括:课程名称、实验序号、名称、专业、班级、姓名、同组实验者、实验时间。6).编写实验报告要规范,应包括:实验名称、目的、内容、原理、设备及仪表(名称、 规格、型号)、实验装置或连接示意图、实验步骤、实验记录、数据处理(或原理论证、或实验现象描述、或结构说明等)及结果讨论。7).实验报告应附有实验原始记录。8).指导教师对每个学生的实验报告认真批改、评分、签字。5实验项目、内容及学时分配序号实验项目名称内容提要实验类型学时分配每组人数备注实验一糖类的性质实验(一) 糖类的颜色反应了解糖类某些颜色反应的原理。学习应用糖的颜色反应鉴别糖类的方法。基础型
4、21必做实验二糖类的性质实验(二) 糖类的还原作用学习几种常用的鉴定糖类还原性的方法及其原理基础型21必做实验三总糖的测定( 3 , 5 一二硝基水杨酸比色法)1.掌握还原糖定量测定的基本原理,练习比色定糖法的基本操作。2.学习分光光度计的原理和操作方法。设计型22必做实验四 脂肪的提取和定量测定掌握索氏抽提法测定粗脂肪含量的原理和操作方法。设计型22必做实验五脂肪碘值的测定学习测定脂肪碘值的原理和方法应用型22选做实验六总氮量的测定凯氏定氮法学习凯氏定氮法的原理和操作技术应用型23选做实验七氨基酸的分离鉴定纸层析法通过氨基酸的分离,学习纸层析法的基本原理及操作方法应用型31必做实验八蛋白质的
5、性质实验(一) 蛋白质及氨基酸的呈色反应了解构成蛋白质的基本结构单位及主要连接方式。了解蛋白质和某些氨基酸的层色反应原理。学习几种常用的鉴定蛋白质和氨基酸的方法。基础型21必做实验九蛋白质的性质实验(二) 蛋白质的等电点测定和沉淀了解蛋白质的两性解离性质。学习测定蛋白质等电点的一种方法。加深对蛋白质胶体溶液稳定因素的认识。了解沉淀蛋白质的几种方法及其实用意义。了解蛋白质变性与沉淀的关系。了解蛋白质沉淀反应及变性的实践意义,掌握临床常规定性检验尿蛋白的方法。基础型21必做实验十酪蛋白的制备学习从牛乳中制备酪蛋白的原理和方法应用型22必做实验十一甲醛滴定法测定氨基酸初步掌握甲醛滴定法测定氨基酸含量
6、的原理和操作要点应用型22必做实验十二酵母核糖核酸的分离及组分鉴定了解核酸的组分,并掌握鉴定核酸组分的方法综合型32必做实验十三酶的特性加深对酶的性质的认识基础型21必做实验十四吸附层析法分离叶子色素了解吸附层析的原理,掌握利用不同吸附剂吸附不同色素综合型32必做实验十五茅草根中还原性糖核淀粉的设计性实验掌握设计性实验的一般步骤设计型32必做生物化学实验教学共36学时,每学期实验项目的开出根据实验课时、实验条件等做合理调整。二、教材及主要参考书实验教材:基础生物化学实验 (第二版)魏群 主要参考书:1、基础生物化学实验 (第二版) 王秀奇 秦淑媛 高天慧 颜卉君 编 高等教育出版社2生物化学
7、高教出版社 沈 同3生物化学教程 四川大学出版社 张洪渊 主编4生物化学实验 南京大学生物化学系 袁玉荪 朱婉华 陈钧辉 编5.生物化学实验方法和技术高等教育出版社 张龙翔 张庭芳 李令媛 编6生物化学实验方法和技术 科学出版社 陈毓荃 编三、实验内容:实验一 糖类的性质实验(一) -糖类的颜色反应(2学时)一、实验的目的和要求了解糖类某些颜色反应的原理。学习应用糖的颜色反应鉴别糖类的方法。二、实验内容1、-萘酚反应(Molisch反应)糖在浓无机酸(硫酸、盐酸)作用下,脱水生成糠醛及糠醛衍生物,后者能与-萘酚生成紫红色物质。因为糠醛及糠醛衍生物对此反应均呈阳性,故此反应不是糖类的特异反应。2
8、、间苯二酚反应(Seliwanoff反应)在酸作用下,酮糖脱水生成羟甲基糠醛,后者再与间苯二酚作用生成红色物质。此反应是酮糖的特异反应。醛糖在同样条件下呈色反应缓慢,只有在糖浓度较高或煮沸时间较长时,才呈微弱的阳性反应。在实验条件下蔗糖有可能水解而呈阳性反应。三、实验仪器设备、实验材料及药品1器材(1)试管及试管架 (2)滴管 (3)水浴锅2试剂(1)莫氏( Molisch)试剂(2)1葡萄糖溶液(3)1果糖溶液 100mL(4)1蔗糖溶液(5)1淀粉溶液 100mL(6)0.1糠醛溶液(7)浓硫酸 500mL(8)塞氏(Seliwanoff)试剂四、实验及实践要求1、严格按实验操作步骤进行操
9、作,使用浓硫酸时要小心。2、一人一组,完成P98的思考题并提交实验报告。实验二 糖类的性质实验(二)- 糖类的还原作用(2学时)一、教学目的学习几种常用的鉴定糖类还原性的方法及其原理。二、实验内容1、斐林氏反应2、本尼迪特氏反应三、实验仪器设备、实验材料及药品1器材(1)试管及试管架 (2)滴管 (3)水浴锅 (4)试管夹(5)电炉2试剂(1)斐林试剂(2)1葡萄糖溶液(3)1果糖溶液(4)1蔗糖溶液(5)1淀粉溶液 100mL(6)0.1麦芽糖溶液(7)本尼迪特试剂四、实验及实践要求1、严格按实验操作步骤进行操作。2、一人一组,完成思考题并提交实验报告。实验三 糖和总糖含量的测定 -3 ,
10、5 一二硝基水杨酸比色法(2学时)一、教学目的1.掌握还原糖定量测定的基本原理,练习比色定糖法的基本操作。2.学习分光光度计的原理和操作方法。二、实验内容植物体内的还原糖,主要是葡萄糖、果糖和麦芽糖。它们在植物体内的分布,不仅反映植物体内碳水化合物的运转情况,而且也是呼吸作用的基质。还原糖还能形成其他物质如有机酸等。此外,水果蔬菜中糖量的多少,也是坚定其品质的重要指标。还原糖在有机体的代谢中起着重要的作用,其他碳水化合物,如淀粉蔗糖等,经水解也生成还原糖。各种单糖和麦芽糖是还原糖,蔗糖和淀粉是非还原糖。利用溶解度不同,可以植物样品中的单糖、双糖和多糖分别提取出来,再用酸水解法使没有还原性的双糖
11、和多糖彻底水解成有还原性的单糖。在碱性条件下,还原糖与 3 , 5 一二硝基水杨酸共热, 3 , 5 一二硝基水杨酸被还原为 3- 氨基 -5- 硝基水杨酸(棕红色物质),还原糖则被氧化成糖酸及其他产物。一定范围内,还原糖的量与棕红色物质颜色深浅的程度成一定的比例关系, 540nm 波长下测定棕红色物质的消光值,查对标准曲线并计算,便可分别求出样品中还原糖和总糖的含量。 三、实验仪器设备、实验材料及药品1 .仪器 (1)刻度试管: 25 ml X 11 (2)离心管或玻璃漏斗 X2 (3)烧杯: 1OOml X 1 (4)三角瓶: 100m1 X 1 (5)容量瓶: 100ml X 3 (6)
12、刻度吸管: 1 ml X 1 , 2m1 X 4, 10ml X 1 (7)恒温水浴 (8)沸水浴 (9)离心机(过滤法不用此设备) (10)电子顶载天平 (11)分光光度计 2 .试剂 (1)1 mg/ ml 葡萄糖标准液:准确称取 100mg 分析纯葡萄糖(预先在 8 0 烘至恒重),置于小烧杯中,用少量蒸馏水溶解后,定量转移到 100ml 的容量瓶中,以馏水定容至刻度,摇匀,冰箱中保存备用。 (2)3 , 5- 二硝基水杨酸试剂:将 6.3g 3, 5- 硝基水杨酸和 262ml 2mol/NaOH 溶液,加到 500ml 含有 185g 酒石酸钾钠的热水溶液中,再加 5g 结晶酚和 5
13、g 亚硫酸钠,搅拌溶解。冷却后加蒸馏水定容至 1000ml ,贮于棕色瓶中备用。 (3)碘 - 碘化钾溶液:称取 5g 碘和 10g 碘化钾,溶于 100 ml 蒸馏水中。 (4)酚酞指示剂:称取 0.1g 酚酞,溶于 250ml 70 乙醇中。 (5) 6mol L HCl 。 (6) 6mol/L NaOH 。 3 .材料 食用面粉。 四、实验及实践要求1. 取样时量必须精确。2 每组2人,严格按实验操作步骤进行操作。3.提交实验报告。实验四 脂肪的提取和定量测定(2学时)一、实验的目的和要求掌握索氏抽提法测定粗脂肪含量的原理和操作方法。二、实验内容脂肪广泛存在于许多植物的种子和果实中,测
14、定脂肪的含量,可以作为鉴别其品质优劣的一个指标。脂肪含量的测定有很多方法,如抽提法、酸水解法、比重法、折射法、电测和核磁共振法等。目前国内外普遍采用抽提法,其中索氏抽提法(Soxhlet extractor method)是公认的经典方法,也是我国粮油分折首选的标准方法。本实验采用索氏抽提法中的残余法,即用低沸点有机溶剂(乙醚或石油醚)回流抽提,除去样品中的粗脂肪,以样品与残渣重量之差,计算粗脂肪含量。由于有机溶剂的抽提物中除脂肪外,还或多或少含有游离脂肪酸、甾醇、磷脂、蜡及色素等类脂物质,因而抽提法测定的结果只能是粗脂肪。三、实验仪器设备、实验材料及药品(一) 实验材料 油料作物种子(二)仪
15、器1.索氏脂肪抽提器 2.不锈钢镊子(长20cm) 3.培养皿4.分析天平(感量0.001g) 5.称量瓶 6.恒温水浴 7.烘箱 (三) 试剂无水乙醚或低沸点石油醚(A.R.)实验五 脂肪碘值的测定(2学时)一、实验的目的和要求学习测定脂肪碘值的原理和方法。二、实验内容不饱和脂肪酸碳链上含有不饱和键,可与卤素(Cl2,Br2,I2)进行加成反应。不饱和键数目越多,加成的卤素量也越多,通常以“碘值”表示。在一定条件下,每100g脂肪所吸收碘的克数称为该脂肪的“碘值”。碘值越高,表明不饱和脂肪酸的含量越高,它是鉴定和鉴别油脂的一个重要常数。 碘与脂肪的加成反应很慢,而氯及溴与脂肪的加成反应快,但
16、常有取代和氧化等副反应。本实验使用IBr进行碘值的测定,这种试剂稳定,测定的结果接近理论值。溴化碘(IBr)的一部分与油脂的不饱和脂肪酸起加成作用,剩余部分与碘化钾作用放出碘,放出的碘用硫代硫酸钠滴定。三、实验仪器设备、实验材料及药品(一)试剂1. 溴化碘溶液2. 0.1mol/L标准硫代硫酸钠溶液3. 纯四氯化碳4. 1淀粉溶液(溶于饱和氯化钠溶液中)5. 10碘化钾溶液6. 花生油或猪油(二)器材1. 碘瓶(或带玻璃塞的锥形瓶)2. 棕色、无色滴定管各1支3. 吸量管4. 量筒5. 分析天平四、实验及实践要求1. 每组2人,严格按实验操作步骤进行操作,称量材料必须准确。2. 完成思考题并提
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- 基础 生物化学
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