仪器分析5分子发光分析法教学文案.ppt

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1、第五章第五章 分子分子(fnz)(fnz)发光分析法发光分析法分子荧光分子荧光(ynggung)、磷光分析法的、磷光分析法的基本原理基本原理荧光荧光(ynggung)分析仪器分析仪器分子荧光分子荧光(ynggung)定量分析定量分析简介化学发光（自学）简介化学发光（自学）第一页，共61页。分子分子(fnz)发光分析法发光分析法较高激发态较高激发态基基 态态吸收能量吸收能量受激受激退激退激光辐射光辐射分子在退激过程中以光辐射形式释放分子在退激过程中以光辐射形式释放(shfng)能量能量 5-1 分子发光(f un)分析法及其分类第二页，共61页。根据分子受激时所吸收能源及辐射光的机理根据分子受激

2、时所吸收能源及辐射光的机理不同分为以下几类：不同分为以下几类：光致发光：以光能来激发而发光光致发光：以光能来激发而发光 化学发光：以化学反应化学发光：以化学反应(huxu fnyng)能能激发而发光激发而发光化学发化学发 光分析法光分析法 热致发光热致发光、生物发光、电致发光、生物发光、电致发光荧光荧光(ynggung)荧荧光光(ynggung)分析法分析法磷光磷光磷光分析法磷光分析法第三页，共61页。激发光谱和荧光激发光谱和荧光(ynggung)光谱光谱荧光强度波长（nm)300400500硫酸奎宁的两个光谱Iex,maxfl,max第四页，共61页。硒硒荧光分光光度法荧光分光光度法GB17

3、378.5-1998(13.1)油类油类沉积物沉积物 荧光分光光度法荧光分光光度法GB17378.5-1998(14.1)石油烃石油烃荧光分光光度法荧光分光光度法GB17378.6-1998(14.1)第五页，共61页。5-2 荧光荧光(ynggung)和磷光光谱法和磷光光谱法一、荧光和磷光光谱一、荧光和磷光光谱(gungp)的产生的产生基态分子光照后，价电子跃迁产生荧光和磷基态分子光照后，价电子跃迁产生荧光和磷光光 基态分子基态分子 价电子跃迁到价电子跃迁到激发态激发态光照激发光照激发去激发光去激发光 *n基基 态态第六页，共61页。1.电子自旋状态电子自旋状态(zhungti)的多重性的多

4、重性分子分子(fnz)中的电子数及自旋方向中的电子数及自旋方向基态单重态 S0第一激发单重态 S1S0,S1,S2,S3分别分别(fnbi)代表基态、第一、代表基态、第一、二、二、三激发单重态三激发单重态单重态分子具有抗磁性，激发态的平均寿命约为单重态分子具有抗磁性，激发态的平均寿命约为10-8第七页，共61页。T1、T2、T3分别表示第一、二、三激发三重分别表示第一、二、三激发三重态态由基态由基态(j ti)单重态单重态激发三重态，净自旋激发三重态，净自旋 0。这种跃迁为禁阻跃迁。这种跃迁为禁阻跃迁基态单重态基态单重态 S0第一激发三重态第一激发三重态 T1自旋平行自旋平行三重态分子三重态分

5、子(fnz)具有顺磁性，激发态的平均具有顺磁性，激发态的平均寿命约为寿命约为10-4 1S第八页，共61页。2.无辐射去激无辐射去激 外部转移外部转移激发态分子激发态分子(fnz)与溶剂分子与溶剂分子(fnz)或溶质分子或溶质分子(fnz)的相互作用产生能的相互作用产生能量转移，荧光或磷光减弱或消失量转移，荧光或磷光减弱或消失振动驰豫振动驰豫(VR)同一电子能级中，从较高振动能同一电子能级中，从较高振动能级到较低振动能级的过程级到较低振动能级的过程内部转换内部转换(IC)相同的多重态之间的转换相同的多重态之间的转换 S-S系间窜跃系间窜跃(ISC)不同的多重态之间的转换不同的多重态之间的转换S

6、-T 发生系间窜跃电子需转向，发生系间窜跃电子需转向，S1T1间进行，比间进行，比内部转换困难内部转换困难 第九页，共61页。T1S0ISCVRVRIC吸光吸光 吸光吸光S0S1S2VR：振动驰豫：振动驰豫IC：内部：内部(nib)转换转换ISC：系间窜跃：系间窜跃第十页，共61页。3.辐射辐射(fsh)去激去激荧光和磷光产生荧光和磷光产生S1或或T1 S0 这种过程这种过程(guchng)叫辐射去激叫辐射去激 发光(f un)(1)荧光荧光：n n从从S1的最低振动能级回到的最低振动能级回到S0各振动能级所产生各振动能级所产生的光辐射叫荧光的光辐射叫荧光第十一页，共61页。特点：特点：产生速

7、度快，产生速度快，10-910-6s；依赖于外部依赖于外部(wib)光源光源 荧荧 激激第十二页，共61页。T1S0ISCVRVRIC吸光吸光 吸光吸光 荧光荧光图图5-1 分子荧光光谱产生分子荧光光谱产生(chnshng)过程示意图过程示意图S0S1S2VR：振动：振动(zhndng)驰豫驰豫IC：内部转换：内部转换ISC：系间窜跃：系间窜跃第十三页，共61页。（2）磷光）磷光(ln un)S1 T1 S0 磷光磷光特点：特点：发光发光(f un)速度慢，约为速度慢，约为 10-4 10s，光照停止后，磷光仍可持续一段时间光照停止后，磷光仍可持续一段时间体系体系(tx)间间窜跃窜跃(isc)

8、发光发光发光发光第十四页，共61页。磷光的波长更长磷光的波长更长 磷磷 荧荧 激激 *易产生易产生(chnshng)荧光荧光 n *易产生易产生(chnshng)磷光磷光第十五页，共61页。T1S0ISCVRVRIC吸光吸光 吸光吸光 荧光荧光 磷光磷光图图5-1 分子分子(fnz)荧光、磷光光谱产生过程示意图荧光、磷光光谱产生过程示意图S0S1S2VR：振动：振动(zhndng)驰豫驰豫IC：内部转换：内部转换ISC：系间窜跃：系间窜跃VR第十六页，共61页。二、荧光、磷光(ln un)与分子结构的关系（一）荧光效率（一）荧光效率 荧光强度荧光强度(qingd)常用荧光量子常用荧光量子效率效

9、率f 来描述来描述 荧光量子效率荧光量子效率 f=发荧光的分子数发荧光的分子数激发态分子总数激发态分子总数第十七页，共61页。f 是一个物质荧光特性的重要参数是一个物质荧光特性的重要参数(cnsh)，反映了荧光物质发射荧光的，反映了荧光物质发射荧光的能力，能力，f 越大，荧光越强，在越大，荧光越强，在01之间。之间。分析上有应用价值的荧光化合物的荧光分析上有应用价值的荧光化合物的荧光效率大于效率大于0.1。第十八页，共61页。（二）荧光磷光与有机化合物结构的关（二）荧光磷光与有机化合物结构的关系系至今对激发态分子的性质了解不深，无至今对激发态分子的性质了解不深，无法定量地描述荧光与分子结构之间

10、的法定量地描述荧光与分子结构之间的关系关系物质只有吸收了紫外可见光，产生物质只有吸收了紫外可见光，产生(chnshng)*、n *跃迁，跃迁，产生产生(chnshng)荧光荧光第十九页，共61页。*与与n *跃迁跃迁(yuqin)相比，摩尔相比，摩尔吸收系数大吸收系数大102103，寿命短，寿命短 *跃迁跃迁(yuqin)常产生较强的荧光，常产生较强的荧光，n *跃迁跃迁(yuqin)产生的荧光弱，但可产生的荧光弱，但可产生系间窜跃，产生更强的磷光产生系间窜跃，产生更强的磷光第二十页，共61页。1.共轭体系共轭体系有较强的荧光有较强的荧光(ynggung)具有共轭体系的芳环或杂环化合物具有共轭

11、体系的芳环或杂环化合物,电子共轭程度越大，越易产生荧光电子共轭程度越大，越易产生荧光(ynggung);环越多，共轭程度越大环越多，共轭程度越大,产生荧光产生荧光(ynggung)波长越长，发射波长越长，发射的荧光的荧光(ynggung)强度越强强度越强第二十一页，共61页。f f ex ex/nm/nm emem/nm/nm 0.11 205 278 0.29 286 3100.46 365 400苯苯萘萘蒽蒽 350菲菲线状环结构比非线状结线状环结构比非线状结构的荧光波长长构的荧光波长长第二十二页，共61页。多环芳烃是重要的环境多环芳烃是重要的环境(hunjng)污染污染物，可用荧光法测定

12、物，可用荧光法测定 3,4-苯并芘是强致癌物苯并芘是强致癌物 ex=386 nm=386 nm em=430 nm=430 nm第二十三页，共61页。2.刚性平面刚性平面(pngmin)结构结构较稳定的平面较稳定的平面(pngmin)结构结构具有具有(jyu)强荧光的分子多数有刚性平面强荧光的分子多数有刚性平面结构结构荧光素：氧桥把两荧光素：氧桥把两个环固定在一个平个环固定在一个平面面(pngmin)上，上，具有平面具有平面(pngmin)结构，结构，强荧光物质强荧光物质酚酞：无氧桥把两酚酞：无氧桥把两个环固定，不能很个环固定，不能很好的共平面，为非好的共平面，为非荧光物质荧光物质第二十四页，

13、共61页。例例 1，2-二苯乙烯反式：平面(pngmin)构型 强荧光体顺式：非平面(pngmin)构型 非荧光体第二十五页，共61页。（三）取代（三）取代(qdi)基的类型基的类型（1 1）增强荧光的取代基）增强荧光的取代基 -OH-OH、-OR-OR、-NH2-NH2、-NHR-NHR、-NR2-NR2等给电子基等给电子基团团由于由于(yuy)(yuy)基团的基团的 n n 电子（孤对电子）电子（孤对电子）的电子云与苯环上的的电子云与苯环上的 轨道平行，共享轨道平行，共享了共轭了共轭 电子，扩大了共轭体系，使荧电子，扩大了共轭体系，使荧光波长长移，荧光强度增强光波长长移，荧光强度增强第二十

14、六页，共61页。（2 2）减弱荧光的取代基）减弱荧光的取代基 -COOH -COOH、-NO2 -NO2、-COOR-COOR、-NO-NO、-SH-SH 吸电子基团吸电子基团,使荧光波长短移，荧光强度使荧光波长短移，荧光强度减弱减弱芳环上被芳环上被F F、ClCl、BrBr、I I 取代后，使系间窜跃取代后，使系间窜跃加强，磷光加强，磷光(ln un)(ln un)增强，荧光减弱。增强，荧光减弱。磷光磷光(ln un)(ln un)相应增强，这种效应为重相应增强，这种效应为重原子效应。原子效应。（3 3）影响不明显的取代基）影响不明显的取代基 -NH3+-NH3+、-R-R、-SO3H-SO

15、3H等等第二十七页，共61页。三、环境对荧光、磷光三、环境对荧光、磷光(ln un)的影的影响响 1.溶剂的影响溶剂的影响 不同的溶剂中可能表现出不同的荧光性质不同的溶剂中可能表现出不同的荧光性质 溶剂的极性增强，荧光波长红移，强度增大溶剂的极性增强，荧光波长红移，强度增大 2.温度的影响温度的影响低温下测定，提高灵敏度低温下测定，提高灵敏度 因为辐射跃迁的速率基本因为辐射跃迁的速率基本(jbn)不随温度变不随温度变;非辐射非辐射跃迁随温度升高显著增大。跃迁随温度升高显著增大。荧光效率会随溶液温度升高下降，强度减弱。荧光效率会随溶液温度升高下降，强度减弱。温度对磷光影响更大温度对磷光影响更大第

16、二十八页，共61页。3.pH的影响的影响(yngxing)大多数含有酸性或碱性基团的芳香族化合物大多数含有酸性或碱性基团的芳香族化合物的荧光性质受溶液的荧光性质受溶液pH的影响的影响(yngxing)很很大大共轭酸碱对是具有不同荧光性质的两种型体，共轭酸碱对是具有不同荧光性质的两种型体，具有各自的荧光效率和荧光波长具有各自的荧光效率和荧光波长例：例：苯酚苯酚离子化后，离子化后，荧光消失荧光消失pH1有有荧光荧光pH13无荧光无荧光第二十九页，共61页。但两个苯环相连的化合物，又表现出相反但两个苯环相连的化合物，又表现出相反(xingfn)的性质，分子形式无荧光，离子化后显荧光的性质，分子形式无

17、荧光，离子化后显荧光例：例：苯酚苯酚(bn fn)有荧光有荧光(ynggung)无荧光无荧光另外，表面活性剂也会影响荧光强度和特性第三十页，共61页。荧光池I I0 0I IIf荧光强度检测器四、荧光四、荧光(ynggung)强度与荧光强度与荧光(ynggung)物质浓度的关系物质浓度的关系 强度为强度为I0的入射光，照射到浓度很稀的荧光的入射光，照射到浓度很稀的荧光物质时物质时,产生荧光，荧光强度产生荧光，荧光强度If 与入射光强度有与入射光强度有下面下面(xi mian)的关系：的关系：If=f Ia=f（I0-I）IaIa为为为为吸收的吸收的吸收的吸收的辐辐辐辐射射射射强强强强度度度度(

18、qingd)(qingd)I0I0为为为为入射光入射光入射光入射光强强强强度度度度(qingd)(qingd)I I 为为为为透射光透射光透射光透射光n n If f=f（I0-I-I010-A）=f I I0（1 1-10-A-A ）I=I=I01010-A-A第三十一页，共61页。当当A0.05时，方括号中其它各项与第一项相比时，方括号中其它各项与第一项相比(xin b)可忽略不计，上式简化可忽略不计，上式简化 If=2.3 f I0A =2.3 f I0bc将上式展开(zhn ki)第三十二页，共61页。当当A 0.05时，时，If与与 f、I0、和和c 有关有关(yugun)。对一给定

19、物质，当激发光波长。对一给定物质，当激发光波长和强度一定时，和强度一定时，f、I0、和和b为常数，合为常数，合并为并为K If=KC Ip=KC定量分析定量分析定量分析定量分析(dnglingfnx)(dnglingfnx)依据依据依据依据第三十三页，共61页。荧光强度与物质浓度呈线形关系，荧光强度与物质浓度呈线形关系，If=KC只有在浓度低时使用，荧光物质测定只有在浓度低时使用，荧光物质测定(cdng)的是微量或痕量组分，灵敏度的是微量或痕量组分，灵敏度高高浓度高时，浓度高时，If与与C不呈线形关系，不呈线形关系，有时有时C增大，增大，If反而降低。因为公式反而降低。因为公式 中后面影响；有

20、时发生荧光猝灭效应中后面影响；有时发生荧光猝灭效应第三十四页，共61页。荧光荧光(ynggung)猝灭猝灭 荧光荧光(ynggung)物质与溶物质与溶剂或其它物质之间发生化学反应，剂或其它物质之间发生化学反应，或发生碰撞后使荧光或发生碰撞后使荧光(ynggung)强强度下降度下降(荧光荧光(ynggung)效率效率f 下下降降)称为荧光称为荧光(ynggung)猝灭。猝灭。使荧光使荧光(ynggung)强度降低的物质强度降低的物质称为荧光称为荧光(ynggung)猝灭剂猝灭剂第三十五页，共61页。氧分子及产生重原子氧分子及产生重原子(yunz)效应的溴效应的溴化物、碘化物等都是常见的荧光猝灭剂

21、化物、碘化物等都是常见的荧光猝灭剂碰撞猝灭碰撞猝灭 M+激激 M*M*+Q M+Q+热热自熄灭自熄灭荧光物质发射的荧光被荧光荧光物质发射的荧光被荧光物质的基态分子所吸收，即自吸收现象物质的基态分子所吸收，即自吸收现象第三十六页，共61页。（一）荧光分析仪器（一）荧光分析仪器 主要由光源、单色器、样品主要由光源、单色器、样品(yngpn)池、检测器和显示器组成。池、检测器和显示器组成。五、荧光五、荧光(ynggung)和磷光分析仪和磷光分析仪器器第三十七页，共61页。光源(gungyun)第一(dy)单色器液池检测器第二(d r)单色器检测器放大器及记录器 ex ex em与分光光度计有两点不同

22、与分光光度计有两点不同两个单色器两个单色器检测器与激发光互成直角检测器与激发光互成直角I0I第三十八页，共61页。1、光源、光源(gungyun)激发光源一般要求比吸收测量中的光源有更大的激发光源一般要求比吸收测量中的光源有更大的发射强度；适用波长范围宽发射强度；适用波长范围宽荧光计中，常使用卤钨灯作光源荧光计中，常使用卤钨灯作光源荧光光度计中常用荧光光度计中常用(chn yn)高压汞灯和氙弧高压汞灯和氙弧灯灯应用最广泛的一种光应用最广泛的一种光源，可发射源，可发射250800nm很强的连续光源很强的连续光源利用汞蒸气放电发光的利用汞蒸气放电发光的光源；常用其发射光源；常用其发射365 nm、

23、405 nm、436 nm 三条谱线三条谱线以以365 nm 的谱线最强的谱线最强第三十九页，共61页。2、单色器、单色器荧光计用滤光片作单色器，荧光计只能用荧光计用滤光片作单色器，荧光计只能用于定量分析，不能获得光谱于定量分析，不能获得光谱大多数荧光光度计一般采用两个光栅单色大多数荧光光度计一般采用两个光栅单色器，有较高的分辨率，能扫描图谱，既可器，有较高的分辨率，能扫描图谱，既可获得激发光谱，又可获得荧光光谱获得激发光谱，又可获得荧光光谱第一单色器作用：分离出所需要的激发光，第一单色器作用：分离出所需要的激发光，选择选择(xunz)最佳激发波长最佳激发波长 ex 第二单色器作用：滤掉一些杂

24、散光和杂质第二单色器作用：滤掉一些杂散光和杂质所发射的干扰光，用来选择所发射的干扰光，用来选择(xunz)测定测定用的荧光波长用的荧光波长 em。第四十页，共61页。3、样品、样品(yngpn)池池盛放测定溶液，通常是石英材料的方形池，四面都透光，盛放测定溶液，通常是石英材料的方形池，四面都透光，只能用手拿棱或最上边只能用手拿棱或最上边4、检测器、检测器把光信号转化成电信号把光信号转化成电信号,放大放大,直接转成荧光强度直接转成荧光强度荧光的强度一般较弱，要求检测器有较高的灵敏度，荧荧光的强度一般较弱，要求检测器有较高的灵敏度，荧光光度计采用光电倍增管光光度计采用光电倍增管荧光分析荧光分析(f

25、nx)比吸收光度法具有高得多的灵敏度，比吸收光度法具有高得多的灵敏度，是因为荧光强度与激发光强度成正比，提高激发光强度是因为荧光强度与激发光强度成正比，提高激发光强度可可 大大提高荧光强度大大提高荧光强度5、读出装置、读出装置扫描激发光谱和发射光谱记录扫描激发光谱和发射光谱记录,结果打印输出结果打印输出第四十一页，共61页。（二）激发光谱和荧光、磷光(ln un)光谱激发光谱：荧光和磷光均为光致发光，合适激发光谱：荧光和磷光均为光致发光，合适(hsh)的激发光波长需根据激发光谱确定的激发光波长需根据激发光谱确定I exex固定固定 em 荧光荧光(ynggung)波长波长获得方法：固定获得方法

26、：固定 em不不不不变，改变变，改变变，改变变，改变 exex，测定它的，测定它的荧光强度，以荧光强度，以I 为纵坐为纵坐标，标，exex为横坐标得左为横坐标得左图，即荧光物质的激发图，即荧光物质的激发光谱，确定最大光谱，确定最大 exex第四十二页，共61页。I emem固定固定(gdng)ex 激发光波长激发光波长获得方法获得方法(fngf)：固定：固定 ex不变，改变不变，改变 em，以，以I 为为纵坐标，纵坐标，em为横坐标得为横坐标得左图，即荧光物质的发射左图，即荧光物质的发射光谱光谱从曲线上找出最大的从曲线上找出最大的 em发射光谱：荧光发射光谱：荧光(ynggung)、磷、磷光光

27、谱光光谱第四十三页，共61页。磷磷 荧荧 激激图吸收峰荧光峰磷光峰第四十四页，共61页。激发光谱和荧光激发光谱和荧光(ynggung)光谱光谱荧光强度波长（nm)300400500硫酸奎宁的两个光谱Iex,maxfl,max第四十五页，共61页。（三）磷光分析仪器(yq)与荧光分析仪器相似，主要差异如下：与荧光分析仪器相似，主要差异如下：1.试样室试样室试样需在液氮温度（试样需在液氮温度（77K，-196）下测定低温磷光）下测定低温磷光（将液池放在盛放液氮的杜瓦瓶内）（将液池放在盛放液氮的杜瓦瓶内）固体表面室温磷光分析需特制试样室固体表面室温磷光分析需特制试样室2.磷光镜磷光镜有些物质既可产生

28、荧光，又能产生磷光。用机械有些物质既可产生荧光，又能产生磷光。用机械(jxi)切光装置切光装置磷光镜区别荧光和磷光。利用荧磷光镜区别荧光和磷光。利用荧光寿命短，磷光寿命长消除荧光干扰。光寿命短，磷光寿命长消除荧光干扰。第四十六页，共61页。六、荧光(ynggung)、磷光分析及应用（一）定量分析方法（一）定量分析方法(fngf)定量分析依据定量分析依据 If=KC Ip=KC1.标准曲线法标准曲线法最常用的定量分析方法最常用的定量分析方法(fngf)浓度浓度 C1 C2 C3 C4 C5 Cx荧光强度荧光强度 If1 If2 If3 If4 If5 Ifx If IfxCxC第四十七页，共61

29、页。2.荧光(ynggung)猝灭法把荧光猝灭用在定量分析上，具有(jyu)较高的灵敏度和选择性荧光物质 M 与猝灭剂 Q 生成不发荧光的基态配合物MQ M+Q=MQ（非荧光物质）第四十八页，共61页。猝灭剂加入(jir)前的荧光强度猝灭剂加入(jir)后试液的荧光强度常数(chngsh)猝灭剂浓度I I前前前前/I后后后后与与与与C(Q)C(Q)有线性关系，可求猝灭剂含量有线性关系，可求猝灭剂含量经推导得出：经推导得出：第四十九页，共61页。标准标准(biozhn)曲线法曲线法I I前前前前/I/I后后后后x xCQxCQI I前前前前/I/I后后后后第五十页，共61页。3.比较法比较简单如

30、果试样数量不多，可用比较法进行测量如果试样数量不多，可用比较法进行测量配一标准溶液浓度为配一标准溶液浓度为Cs，Cs与未知液浓度与未知液浓度Cx相相近，并在相同近，并在相同(xin tn)条件下测定它们的荧条件下测定它们的荧光强度光强度 未知液未知液 If x=KCx 标准液标准液 If s=KCs 比较(bjio)第五十一页，共61页。（二）荧光(ynggung)分析法的应用荧光分析荧光分析(fnx)法具有灵敏度高、取样量少法具有灵敏度高、取样量少等优点等优点1.无机化合物的分析无机化合物的分析(fnx)与有机化合物生成发荧光的有机配合物后，与有机化合物生成发荧光的有机配合物后，进行荧光分析

31、进行荧光分析(fnx)的元素达的元素达70多种，其中多种，其中较常采用荧光法测定的元素有：较常采用荧光法测定的元素有：Be、Al、B、Ga、Se、Mg、Zn、Cd及某些稀土元素及某些稀土元素n n荧光猝灭法也是荧光分析中经常采用的方法荧光猝灭法也是荧光分析中经常采用的方法(fngf)。可采用荧光猝灭法间接测定的离子。可采用荧光猝灭法间接测定的离子有：有：F-、S2-、Co2+、Ni2+、Cu2+等等第五十二页，共61页。2.有机有机(yuj)化合物的分析化合物的分析芳香族化合物因具有共轭的不饱和体系，芳香族化合物因具有共轭的不饱和体系，多数能发荧光；可直接用荧光法测定。对多数能发荧光；可直接用

32、荧光法测定。对于于(duy)具有致癌活性的多环芳烃具有致癌活性的多环芳烃荧荧光分析法是最主要的测定方法光分析法是最主要的测定方法为提高测定的灵敏度，有时也将芳香族化为提高测定的灵敏度，有时也将芳香族化合物与适当试剂反应之后进行测定合物与适当试剂反应之后进行测定可测定结构复杂的大量有机物质，如：各可测定结构复杂的大量有机物质，如：各种维生素、叶绿素、氨基酸、蛋白质、酶种维生素、叶绿素、氨基酸、蛋白质、酶和辅酶以及各种药物、毒物和农药等和辅酶以及各种药物、毒物和农药等第五十三页，共61页。例：3，4 苯并芘3，4 苯并芘为强致癌物质苯并芘为强致癌物质n n煤炭、石油、天然气等燃料不完全燃烧以及吸烟

33、、焚煤炭、石油、天然气等燃料不完全燃烧以及吸烟、焚烧垃圾都会产生烧垃圾都会产生3，4 苯并芘，汽车尾气也是主要来源苯并芘，汽车尾气也是主要来源n n食品加工过程也会产生食品加工过程也会产生3，4 苯并芘，尤其是烟熏、苯并芘，尤其是烟熏、油炸、烘烤食品油炸、烘烤食品n n分析测定：用环己烷将分析测定：用环己烷将3，4 苯并芘从试样中提取出苯并芘从试样中提取出来，用碱将提取液的脂肪类物质皂化，然后用色谱法分来，用碱将提取液的脂肪类物质皂化，然后用色谱法分离纯化，用离纯化，用95%C2H5OH稀释稀释(xsh)，用荧光分光光，用荧光分光光度计测定相对荧光强度进行定量度计测定相对荧光强度进行定量第五十

34、四页，共61页。例：VB2又称核黄素，是一种生长又称核黄素，是一种生长促进剂，常存在于动物肝脏、促进剂，常存在于动物肝脏、肉类、蛋黄、豆类、花生、蘑肉类、蛋黄、豆类、花生、蘑菇和海藻中，菇和海藻中，VB2易溶于强酸易溶于强酸或强碱性溶液。或强碱性溶液。在低浓度情况下，在低浓度情况下，I=KC，I与与C呈线性关系，在呈线性关系，在pH67荧光荧光最强最强在在430440nm蓝光照射下，发蓝光照射下，发出出(fch)绿色荧光，绿色荧光，em=535 nm下测下测 I，用标准曲线法，用标准曲线法测定测定缺VB2会得口角炎、舌炎(sh yn)、唇炎、脂溢性皮炎维生素维生素B2第五十五页，共61页。（三

35、）磷光分析法应用(yngyng)能产生磷光能产生磷光(ln un)的物质数量很少，的物质数量很少，磷光磷光(ln un)分析不及荧光分析普遍，分析不及荧光分析普遍，但磷光但磷光(ln un)分析法已在药物分析、分析法已在药物分析、临床及环境分析领域得到一定的应用。临床及环境分析领域得到一定的应用。低温磷光低温磷光(ln un)分析已应用在萘、蒽、分析已应用在萘、蒽、菲、芘、苯并芘等多环芳烃及含菲、芘、苯并芘等多环芳烃及含O、S、N的杂环化合物分析的杂环化合物分析固体表面室温磷光固体表面室温磷光(ln un)分析法已成分析法已成为多环芳烃和杂环化合物的快速、灵敏的为多环芳烃和杂环化合物的快速、灵

36、敏的分析手段。分析手段。第五十六页，共61页。5-3化学发光分析法（自学(zxu)）第五十七页，共61页。1.分子荧光光谱中，发射光谱与激发波长的关系分子荧光光谱中，发射光谱与激发波长的关系 ，激激 发发 光光 谱谱 与与 激激 发发 光光 谱谱 的的 形形 状状_,并互为并互为_。(北师大北师大2002年年)2.物物质质分分子子在在吸吸收收(xshu)光光辐辐射射后后产产生生磷磷光光，经经历内部转换，历内部转换，和和 三个过程。三个过程。（南开大学（南开大学2002年）年）练习题练习题第五十八页，共61页。3.分子荧光与化学发光均为第一激发态的最低分子荧光与化学发光均为第一激发态的最低振动能

37、级跃迁至基态中各振动能级产生的光辐振动能级跃迁至基态中各振动能级产生的光辐射，它们的主要区别在于（射，它们的主要区别在于（）A、分子的电子层不同、分子的电子层不同 B、无辐射弛豫的途径不同、无辐射弛豫的途径不同C、产生的光辐射的能源、产生的光辐射的能源(nngyun)不同不同 D、跃迁至基态中的振动能级不同跃迁至基态中的振动能级不同（南开大学（南开大学2002年）年）第五十九页，共61页。4.下列那种化合物的荧光下列那种化合物的荧光(ynggung)量子量子产率可能最大：（产率可能最大：（）(A)(B)(C)(D)（郑州大学（郑州大学2002年）年）第六十页，共61页。5.用用能能级级图图的的形形式式表表示示分分子子荧荧光光、分分子子磷磷光光产产生的历程生的历程(lchng)。（南开大学（南开大学2003年）年）第六十一页，共61页。