氨类药物的分析.ppt

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1、第二节第二节 芳胺类药物的分析芳胺类药物的分析胺类药物的基本结构有两类：胺类药物的基本结构有两类：芳香第一胺未被取代，而在芳环对位有芳香第一胺未被取代，而在芳环对位有取代的对氨基苯甲酸酯类。如：取代的对氨基苯甲酸酯类。如：苯佐卡因苯佐卡因盐酸普鲁卡因盐酸普鲁卡因盐酸丁卡因盐酸丁卡因局部麻醉药局部麻醉药 芳香第一胺被酰化，并在芳环对位芳香第一胺被酰化，并在芳环对位有取代的芳酰胺类药物。有取代的芳酰胺类药物。解热镇痛药解热镇痛药对乙酰氨基酚对乙酰氨基酚局部麻醉药局部麻醉药盐酸布比卡因盐酸布比卡因抗麻风药抗麻风药醋氨苯砜醋氨苯砜一、典型药物的结构与性质一、典型药物的结构与性质（一）、对氨基苯甲酸酯类

2、（一）、对氨基苯甲酸酯类 芳香第一胺未被取代，而在芳环对位有取代的对氨基苯甲酸酯类。如：1、结构、结构 基本结构与典型药物基本结构与典型药物 含有对氨基苯含有对氨基苯甲酸酯的结构母体甲酸酯的结构母体 苯佐卡因苯佐卡因盐酸丁卡因盐酸丁卡因盐酸普鲁卡因胺，抗心率失常药。盐酸普鲁卡因胺，抗心率失常药。2、性质、性质（1 1）、芳香第一胺特性）、芳香第一胺特性 具有芳伯氨基或潜在的芳伯氨基，可发生具有芳伯氨基或潜在的芳伯氨基，可发生重氮化重氮化偶合反应鉴别或亚硝酸钠滴定法测定偶合反应鉴别或亚硝酸钠滴定法测定含；可与芳醛发生缩合，生成希夫碱；对日光含；可与芳醛发生缩合，生成希夫碱；对日光或空气中的氧较敏

3、感，易氧化变色。或空气中的氧较敏感，易氧化变色。2 2、易水解性：、易水解性：盐酸丁卡因分子结构中无芳香第一胺盐酸丁卡因分子结构中无芳香第一胺则无此特性。则无此特性。因分子结构中有酯键，易发生水解反应。尤因分子结构中有酯键，易发生水解反应。尤其是药物受光、热或碱性条件影响，更易促进其其是药物受光、热或碱性条件影响，更易促进其水解。水解。如：盐酸丁卡因水解产物如：盐酸丁卡因水解产物对丁氨基苯甲对丁氨基苯甲酸（酸（BABABABA）。）。3 3、弱碱性：、弱碱性：因分子结构中有芳香第一胺，同时，除苯佐因分子结构中有芳香第一胺，同时，除苯佐卡因外，其脂烃胺侧链为叔胺氮原子，故游离体卡因外，其脂烃胺侧

4、链为叔胺氮原子，故游离体具有弱碱性。具有弱碱性。碱性较弱，在水溶液中不能用酸滴定液直接碱性较弱，在水溶液中不能用酸滴定液直接滴定，可在非水溶液中滴定。滴定，可在非水溶液中滴定。叔胺氮原子还能与生物碱沉淀剂发生沉淀反叔胺氮原子还能与生物碱沉淀剂发生沉淀反应。应。（二）、芳酰胺类药物（二）、芳酰胺类药物 是芳香第一胺被酰化，并在芳环对位是芳香第一胺被酰化，并在芳环对位有取代的芳酰胺类药物。有取代的芳酰胺类药物。其共性是具有芳其共性是具有芳酰胺基，基本结构为：酰胺基，基本结构为：1 1、结构、结构非那西丁（对乙酰氨基苯乙醚）非那西丁（对乙酰氨基苯乙醚）对乙酰氨基酚（扑热息痛）对乙酰氨基酚（扑热息痛）

5、醋氨苯砜（治疗麻风病，抑制麻风杆醋氨苯砜（治疗麻风病，抑制麻风杆菌）。菌）。盐酸利多卡因盐酸利多卡因盐酸布比卡因盐酸布比卡因 2、性质、性质（1 1）水解后显芳香第一胺特性水解后显芳香第一胺特性 分子结构中具有芳伯氨基，在酸性溶液中易分子结构中具有芳伯氨基，在酸性溶液中易水解为具芳香第一胺的化合物，显水解为具芳香第一胺的化合物，显芳香第一胺特芳香第一胺特性反应性反应。对乙氨基酚的水解速度相对比较快。对乙氨基酚的水解速度相对比较快。利多卡因和布比卡因在酰氨基邻位存在两个甲基，利多卡因和布比卡因在酰氨基邻位存在两个甲基，由于空间位阻影响，较难水解，所以其盐的水溶液比较稳由于空间位阻影响，较难水解，

6、所以其盐的水溶液比较稳定。定。（2 2）水解产物易酯化）水解产物易酯化 对乙酰氨基酚和醋氨苯砜，水解后生成醋酸，对乙酰氨基酚和醋氨苯砜，水解后生成醋酸，可在硫酸介质中与乙醇反应，产生可在硫酸介质中与乙醇反应，产生醋酸乙酯的香醋酸乙酯的香味。味。（3 3）酚羟基的特性）酚羟基的特性 对乙酰氨基酚具有酚羟基，对乙酰氨基酚具有酚羟基，与三氯化铁与三氯化铁发生显色发生显色反应，可与利多卡因和醋氨苯砜区反应，可与利多卡因和醋氨苯砜区别。别。（4 4）、具脂烃胺侧链，弱碱性，可与生物碱沉淀试）、具脂烃胺侧链，弱碱性，可与生物碱沉淀试剂发生沉淀反应进行鉴别剂发生沉淀反应进行鉴别 。利多卡因和布比卡因的脂烃胺

7、侧链有叔氮原子，显碱利多卡因和布比卡因的脂烃胺侧链有叔氮原子，显碱性，可以成盐；其叔胺还可与生物碱沉淀试剂发生沉淀反性，可以成盐；其叔胺还可与生物碱沉淀试剂发生沉淀反应，如：应，如：与三硝基苯酚试液反应生成的沉淀具有一定的熔点。与三硝基苯酚试液反应生成的沉淀具有一定的熔点。对乙酰氨基酚和醋氨苯砜不具有此侧链，亦无此类反应，对乙酰氨基酚和醋氨苯砜不具有此侧链，亦无此类反应，可以区别。可以区别。（5 5）、与重金属离子发生反应）、与重金属离子发生反应二、鉴别试验二、鉴别试验 游离碱易溶于有机溶剂，其盐可溶于游离碱易溶于有机溶剂，其盐可溶于水。水。利多卡因和布比卡因酰氨基上的氮利多卡因和布比卡因酰氨

8、基上的氮可在水溶液中与铜离子或钴离子发生配可在水溶液中与铜离子或钴离子发生配位反应，生成有色的配位化合物沉淀。位反应，生成有色的配位化合物沉淀。沉淀可溶于三氯甲烷等有机溶剂后呈色。沉淀可溶于三氯甲烷等有机溶剂后呈色。（一）重氮化（一）重氮化偶合反应偶合反应 芳香第一胺类鉴别反应芳香第一胺类鉴别反应。分子结构中具。分子结构中具有芳香第一胺或潜在芳香第一胺的药物，均有芳香第一胺或潜在芳香第一胺的药物，均能发生重氮化能发生重氮化-偶合反应。偶合反应。直接：直接：盐酸普鲁卡因、对氨基盐酸普鲁卡因、对氨基水杨酸钠水杨酸钠 、苯佐卡因、盐酸普鲁卡、苯佐卡因、盐酸普鲁卡因胺等在盐酸溶液中可直接与亚硝因胺等在

9、盐酸溶液中可直接与亚硝酸钠进行重氮化反应。与碱性酸钠进行重氮化反应。与碱性-萘萘酚成偶氮染料。酚成偶氮染料。苯佐卡因和盐酸普鲁卡因苯佐卡因和盐酸普鲁卡因 ChP ChP（20152015）鉴别鉴别 （1 1）本品显芳香第一胺类的鉴别反应（附录）本品显芳香第一胺类的鉴别反应（附录）取供试品约取供试品约50mg50mg，加稀盐酸，加稀盐酸1m11m1，必要时缓缓煮沸使溶解，放冷，加必要时缓缓煮沸使溶解，放冷，加0.1mo1/L0.1mo1/L亚硝酸钠溶液数滴，滴加碱性亚硝酸钠溶液数滴，滴加碱性 间接：间接：对乙酰氨基酚、非那对乙酰氨基酚、非那西丁、醋氨苯砜、贝诺酯。间接西丁、醋氨苯砜、贝诺酯。间接

10、的意思就是需要的意思就是需要水解酰胺基。水解酰胺基。-萘酚试液数滴，视供试品不同，生成由橙黄到猩红色沉萘酚试液数滴，视供试品不同，生成由橙黄到猩红色沉淀。淀。对乙酰氨基酚对乙酰氨基酚 ChP ChP（20152015）鉴别鉴别 （2 2）、取本品约）、取本品约0.1g0.1g，加稀盐酸，加稀盐酸5m15m1，置，置水浴中加热水浴中加热4040分钟，放冷；取分钟，放冷；取0.5m10.5m1，滴加亚硝，滴加亚硝酸钠试液酸钠试液5 5滴，摇匀，用水滴，摇匀，用水3ml3ml稀释后，加碱性稀释后，加碱性-萘酚试液萘酚试液2m12m1，振摇，即显红色。，振摇，即显红色。盐酸丁卡因中不具有芳伯氨盐酸丁卡

11、因中不具有芳伯氨基，无此反应，但在酸性液中与亚基，无此反应，但在酸性液中与亚 硝酸钠生成硝酸钠生成N-N-亚硝基化合物的白色亚硝基化合物的白色沉淀。可与芳伯氨基同类区别。沉淀。可与芳伯氨基同类区别。具有潜在芳香第一胺的药物，具有潜在芳香第一胺的药物，经适当方法处理后，若能游离出第经适当方法处理后，若能游离出第一胺，也可发生重氮化一胺，也可发生重氮化-偶合反应。偶合反应。对乙酰氨基酚的鉴别反应如下：对乙酰氨基酚的鉴别反应如下：+HCl+H2OHONH2HCl +CH3COOHHONH2HCl +HNO3HON+NCl-+2H2O HON+NCl-+OH+NaOHOH N=NOH+NaCl+H2O

12、（二）、三氯化铁反应（二）、三氯化铁反应 对乙酰氨基酚的酚羟基可直接与三氯化对乙酰氨基酚的酚羟基可直接与三氯化铁试剂反应成铁试剂反应成蓝紫。蓝紫。OHNHCOCH33+FeCl3OHNHCOCH333Fe3+3HCl蓝紫色蓝紫色（三）与重金属离子反应（三）与重金属离子反应 1.1.与铜离子反应与铜离子反应 分子结构中具有芳酰胺的盐酸利多卡因，分子结构中具有芳酰胺的盐酸利多卡因，在碳酸钠试液中，与硫酸铜反应生成蓝紫色在碳酸钠试液中，与硫酸铜反应生成蓝紫色配位化合物，此有色物转溶于三氯甲烷中显配位化合物，此有色物转溶于三氯甲烷中显黄色。黄色。具有具有N-N-芳环取代的盐酸利多卡因，在碳芳环取代的盐

13、酸利多卡因，在碳酸钠溶液中与硫酸铜反应生成蓝紫色，容易酸钠溶液中与硫酸铜反应生成蓝紫色，容易转入氯仿中显黄色。盐酸普鲁卡因，盐酸丁转入氯仿中显黄色。盐酸普鲁卡因，盐酸丁卡因，苯左卡因等都不发生此反应。卡因，苯左卡因等都不发生此反应。黄色黄色蓝紫色蓝紫色硫酸铜硫酸铜盐酸利多卡因盐酸利多卡因氯仿氯仿碳酸钠+2 2、与钴离子反应、与钴离子反应 盐酸利多卡因可在酸性溶液中与氯化盐酸利多卡因可在酸性溶液中与氯化钴试液反应，生成亮绿色细小钴盐沉淀。，钴试液反应，生成亮绿色细小钴盐沉淀。，容易转入氯仿中显黄色。容易转入氯仿中显黄色。+亮绿色细小亮绿色细小盐酸利多卡因盐酸利多卡因H2CoCl3 3羟肟酸铁盐反

14、应羟肟酸铁盐反应 棕黑色）棕黑色）暗棕色暗棕色羟肟酸铁（紫红色羟肟酸铁（紫红色羟肟酸盐酸普鲁卡因胺盐酸普鲁卡因胺+DFeCl3H2O24.4.与汞离子的反应与汞离子的反应 盐酸利多卡因的水溶液加硝酸酸化后，加硝盐酸利多卡因的水溶液加硝酸酸化后，加硝酸汞试液，煮沸，显黄色。酸汞试液，煮沸，显黄色。对氨基苯甲酸酯类显红色或橙黄色，可与之区对氨基苯甲酸酯类显红色或橙黄色，可与之区别。别。（四）水解产物的反应（四）水解产物的反应 、D3HNO）（+23NOHg盐酸利多卡因盐酸利多卡因对氨基苯甲酸酯类对氨基苯甲酸酯类黄色黄色红色红色或或橙黄色橙黄色 具有酯的结构的本类药物，可在碱性条件下水具有酯的结构的

15、本类药物，可在碱性条件下水解，利用其水解产物进行鉴别。解，利用其水解产物进行鉴别。1.1.盐酸普鲁卡因盐酸普鲁卡因 ChPChP（20201515）（使湿润的红色石蕊试纸变兰色）（使湿润的红色石蕊试纸变兰色）二乙氨基乙醇二乙氨基乙醇对氨基苯甲酸钠对氨基苯甲酸钠+油状物油状物普鲁卡因普鲁卡因盐酸普鲁卡因+DNaOHD对氨基苯甲酸钠对氨基苯甲酸钠 +HCl +HCl 对氨基苯甲酸（白色）对氨基苯甲酸（白色）鉴别方法鉴别方法 取本品约取本品约0.1g0.1g，加水，加水2ml2ml溶解后，加溶解后，加1010氢氧化钠溶液氢氧化钠溶液1ml1ml，即生成白色沉淀。加热，变为油状物（水解）；继续，即生成

16、白色沉淀。加热，变为油状物（水解）；继续加热，产生的蒸气（氨基醇类挥发），能使湿润的红色石加热，产生的蒸气（氨基醇类挥发），能使湿润的红色石蕊试纸变为蓝色；热至油状物消失后，放冷，加盐酸酸化，蕊试纸变为蓝色；热至油状物消失后，放冷，加盐酸酸化，即析出白色沉淀。此沉淀能溶于过量的盐酸。即析出白色沉淀。此沉淀能溶于过量的盐酸。2.2.苯佐卡因苯佐卡因 ChPChP（20201515）鉴别方法鉴别方法 取本品约取本品约0.1g0.1g，加氢氧化钠试液，加氢氧化钠试液5m15m1，煮沸，煮沸，即有乙醇生成；加碘试液，加热，即生成黄色沉淀，即有乙醇生成；加碘试液，加热，即生成黄色沉淀，并发生碘仿的臭气。

17、并发生碘仿的臭气。苯佐卡因苯佐卡因+NaOH+NaOHD乙醇乙醇乙醇乙醇 +I+I2 2+NaOH+NaOHCHICHI3 3 ）（碘仿臭气，黄色（碘仿臭气，黄色 （五）制备衍生物测熔点（五）制备衍生物测熔点 本本类类药药物物的的衍衍生生物物，如如三三硝硝基基苯苯酚酚衍衍生生物物、硫硫氰氰酸酸盐盐衍衍生生物物，有有固固定定的的熔熔点点、可可供供鉴鉴别别。ChP ChP 20052005对对盐盐酸酸利利多卡因、盐酸部比卡因、盐酸丁卡因采用此法鉴别。多卡因、盐酸部比卡因、盐酸丁卡因采用此法鉴别。1.1.三硝基苯酚衍生物三硝基苯酚衍生物 （1 1）盐酸布比卡因的鉴别）盐酸布比卡因的鉴别 取取供供试试

18、品品0.15g0.15g，加加水水10ml10ml溶溶解解后后，加加三三硝硝基基苯苯酚酚试液试液15ml15ml，有三硝基苯酚布比卡因的黄色沉淀，有三硝基苯酚布比卡因的黄色沉淀析析出出，滤滤过过，沉沉淀淀用用少少量量水水洗洗涤涤后后，再再以以少少量量甲甲醇醇和和乙乙醚醚冲洗，在冲洗，在105105干燥后，干燥后，依法测定熔点，其熔点约为依法测定熔点，其熔点约为194194。盐盐酸酸利利多多卡卡因因与与三三硝硝基基苯苯酚酚生生成成三三硝硝基基苯苯酚酚利利多多卡卡因因衍衍生物，其熔点约为生物，其熔点约为228228232232，熔融时同时分解。，熔融时同时分解。（2 2）盐酸利多卡因的鉴别）盐酸利

19、多卡因的鉴别2.2.硫氰酸盐衍生物硫氰酸盐衍生物 盐盐酸酸丁丁卡卡因因的的鉴鉴别别：取取本本品品约约0.1g0.1g，加加5%5%醋醋酸酸钠钠溶溶液液10ml10ml溶溶解解后后，加加25%25%硫硫氰氰酸酸铵铵溶溶液液1ml1ml，即即析析出出白白色色结结晶晶；滤滤过过，结结晶晶用用水水洗洗涤涤，在在8080干干燥燥，依依法法测测定定（附附录录CC），熔点约为熔点约为131131。（六）氯化物的鉴别反应（六）氯化物的鉴别反应 盐盐酸酸普普鲁鲁卡卡因因、盐盐酸酸丁丁卡卡因因、盐盐酸酸利利多多卡卡因因的的水溶液显氯化物的鉴别反应。水溶液显氯化物的鉴别反应。1.1.取取供供试试品品溶溶液液，加加稀

20、稀硝硝酸酸使使成成酸酸性性后后，滴滴加加AgNOAgNO3 3试试液液，即即生生成成白白色色凝凝乳乳状状沉沉淀淀；分分离离，沉沉淀淀加加氨氨试试液液即即溶溶解解，再再加加稀稀硝硝酸酸酸酸化化后后，沉沉淀淀复复生成。反应如下：生成。反应如下：ClCl-+Ag+Ag+AgClAgCl（白色）（白色）AgCl+2NHAgCl+2NH3 3H H2 2O AgO Ag（NH3NH3）2 2+Cl+Cl-+2H+2H2 2O OAgAg（NHNH3 3）2 2+Cl+Cl-+H+H+AgCl +2NH AgCl +2NH4 4+2.2.取取供供试试品品少少量量，置置试试管管中中，加加等等量量的的MnOM

21、nO2 2，混混匀匀，加加稀稀硫硫酸酸湿湿润润，缓缓缓缓加加热热，即即产产生生氯氯气气，能能使使用水湿润的用水湿润的KIKI淀粉试纸显蓝色。反应如下：淀粉试纸显蓝色。反应如下：ClCl-Cl Cl2 2MnO2ClCl2 2+2KI I+2KI I2 2+2KCl+2KCl（七）、紫外特征吸收光谱（七）、紫外特征吸收光谱 本本类类药药物物分分子子结结构构中中均均有有苯苯环环，因因此此具具有有紫紫外外吸吸收收光光谱谱特特征征。其其主主要要特特征征表表现现在在吸吸收收峰峰的的位位置和吸收强度上。置和吸收强度上。盐酸布比卡因鉴别：盐酸布比卡因鉴别：取取本本品品，精精密密称称定定，按按干干燥燥品品计计

22、算算，加加0.01mol/L0.01mol/L盐盐酸酸溶溶液液制制成成每每1ml1ml中中含含0.40mg0.40mg的的溶溶液液，照照分分光光光光度度法法（附附录录AA）测测定定，在在263nm263nm与与271nm271nm的的波波长长处处有有最最大大吸吸收收；其其吸吸收收度度分别为分别为0.530.530.580.58与与0.430.430.480.48。（八）、红外吸收光谱（八）、红外吸收光谱 盐酸布比卡因盐酸布比卡因 ChPChP（20201 15 5）鉴鉴别别 本本品品的的红红外外光光吸吸收收图图谱谱与与对对照照的的图图谱（光谱集谱（光谱集324324图）一致。图）一致。三、特殊

23、杂质检查三、特殊杂质检查（一）、对乙酰氨基酚（一）、对乙酰氨基酚 一般以硝基氯苯为原料，水解后制得对硝基酚一般以硝基氯苯为原料，水解后制得对硝基酚,还原成对氨基酚，再酰化。按药典规定，除检查还原成对氨基酚，再酰化。按药典规定，除检查酸度，氯化物，硫酸盐，重金属，水分和炽灼残渣酸度，氯化物，硫酸盐，重金属，水分和炽灼残渣外，还需进行下列检查：外，还需进行下列检查：1.乙醇溶液的澄清度与颜色乙醇溶液的澄清度与颜色 生产工艺中使用铁粉作还原剂可能带入成品中。生产工艺中使用铁粉作还原剂可能带入成品中。对氨基酚的有色氧化物在乙醇中对氨基酚的有色氧化物在乙醇中显橙红或棕色。显橙红或棕色。检查方法检查方法:

24、取本品取本品1.0g,1.0g,加乙醇加乙醇10ml10ml溶解溶解,溶液溶液应澄清应澄清,无色。无色。2.2.有关物质有关物质 合成路线多，杂质来源主要是中间体、副产物及分解合成路线多，杂质来源主要是中间体、副产物及分解产物，如对氨基酚，对氯乙酰苯胺，产物，如对氨基酚，对氯乙酰苯胺，0-0-乙酰基对乙酰氨基乙酰基对乙酰氨基酚，偶氮苯，氧化偶氮苯，苯醌和醌亚胺等，以对氯乙酰酚，偶氮苯，氧化偶氮苯，苯醌和醌亚胺等，以对氯乙酰苯胺为杂质对照品；检查方法：苯胺为杂质对照品；检查方法：TLCTLC。其他杂质采用参比杂质对照品法。其他杂质采用参比杂质对照品法。3.对氨基酚对氨基酚 乙酰化不完全或贮藏不当

25、发生水解均可引入。乙酰化不完全或贮藏不当发生水解均可引入。因毒性大又使苯品产生色泽，要严格控制限量。因毒性大又使苯品产生色泽，要严格控制限量。反应原理：反应原理：对氨基酚对氨基酚+亚硝酰铁氰化钠亚硝酰铁氰化钠OH-兰色兰色检查方法检查方法 对照法对照法 取本品取本品1.0g1.0g，加甲醇溶液（，加甲醇溶液（1212）20ml20ml溶解后，加碱溶解后，加碱性亚硝基铁氰化钠试液性亚硝基铁氰化钠试液1m11m1，摇匀，放置，摇匀，放置30min30min；如显色，；如显色，与对乙酰氨基酚对照品与对乙酰氨基酚对照品1.0g1.0g加对氨基酚加对氨基酚5050 g g用同一方法制用同一方法制成的对照

26、液比较，不得更深（成的对照液比较，不得更深（0.0050.005）。（二）、盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸（二）、盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸的检查的检查 有酯键，在注射液的制备过程中受灭菌温度，时间，溶有酯键，在注射液的制备过程中受灭菌温度，时间，溶液液pHpH值，贮藏时间，以及光线和金属离子等因素的影响，可值，贮藏时间，以及光线和金属离子等因素的影响，可水解成对氨基苯甲酸和水解成对氨基苯甲酸和2-2-二乙氨基醇。前者长期贮藏和高温二乙氨基醇。前者长期贮藏和高温加热脱羧成苯胺，苯胺可进一步转化成有色物使注射液变黄，加热脱羧成苯胺，苯胺可进一步转化成有色物使注射液变黄，疗效下降，毒性增加

27、。限量为疗效下降，毒性增加。限量为1.2%1.2%。检查方法检查方法 TLC TLC 杂质对照品法杂质对照品法 H2NOHOH2NOO-CO2O 精密量取本品，加乙醇稀释使成为每精密量取本品，加乙醇稀释使成为每1ml1ml中含盐酸普鲁中含盐酸普鲁卡因卡因 2.5mg2.5mg的溶液，作为供试品溶液。取对氨基苯甲酸对的溶液，作为供试品溶液。取对氨基苯甲酸对照品，加乙醇制成每照品，加乙醇制成每1ml1ml中含中含3030 g g的溶液，作为对照品溶的溶液，作为对照品溶液。液。取上述两种溶液各取上述两种溶液各10 10 l l，分别点于含有羧甲基纤维素，分别点于含有羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶钠为粘

28、合剂的硅胶H H薄层板上，用苯薄层板上，用苯-冰醋酸冰醋酸-丙酮丙酮-甲醇甲醇（141 1 4141 1 4）为展开剂，展开后，取出晾干，用对）为展开剂，展开后，取出晾干，用对二甲氨基苯甲醛溶液（二甲氨基苯甲醛溶液（2 2对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液100ml100ml，加冰醋酸，加冰醋酸5ml5ml制成）喷雾显色。制成）喷雾显色。供试品溶液如显与对照品溶液相应的杂质斑供试品溶液如显与对照品溶液相应的杂质斑点，其颜色与对照品溶液主斑点比较，不得更深。点，其颜色与对照品溶液主斑点比较，不得更深。检出限量检出限量0.01ug,0.01ug,苯胺苯胺五、含量测定五、含量测定 （一

29、）、亚硝酸钠滴定法（一）、亚硝酸钠滴定法 分分子子结结构构中中具具有有芳芳香香第第一一胺胺的的药药物物（如如盐盐酸酸普普鲁鲁卡卡因因、苯苯佐佐卡卡因因）以以及及水水解解后后具具有有芳芳香香第第一一胺胺的的药药物物（如如对对乙乙酰酰氨氨基基酚酚），在在酸酸性性溶溶液液中中可可与与亚亚硝硝酸钠反应，可用亚硝酸钠滴定液测定含量。酸钠反应，可用亚硝酸钠滴定液测定含量。1.1.原理原理 在酸性溶液中与亚硝酸钠成重氮盐在酸性溶液中与亚硝酸钠成重氮盐 具游离芳伯氨基的药物可用本法直接测定。具潜在芳伯具游离芳伯氨基的药物可用本法直接测定。具潜在芳伯氨基的药物，如具酰胺氨基的药物，如具酰胺基基药物（对乙酰氨基酚

30、等）经水解，药物（对乙酰氨基酚等）经水解，芳香族硝基化合物（如无味氯霉素）经还原，也可用本法测芳香族硝基化合物（如无味氯霉素）经还原，也可用本法测定。定。2.2.测定条件测定条件 因因生生成成物物也也不不够够稳稳定定，加加入入适适量量KBrKBr加加速速反反应应KBrKBr为为催催化化剂剂，芳芳伯伯胺胺的的碱碱性性越越弱弱越越有有利利于于重重氮氮化化反反应应的的进进行行。在在盐酸存在下，重氮化反应的机理为：盐酸存在下，重氮化反应的机理为：NaNONaNO2 2+HCl HNO+HCl HNO2 2+NaCl+NaClHNOHNO2 2+HCl NOCl+H+HCl NOCl+H2 2O O（1

31、 1）反应速度）反应速度在盐酸存在下，重氮化反应的机理为：在盐酸存在下，重氮化反应的机理为：第一步：第一步：N NOH慢NO+Cl-NH2 第一步反应的速度较慢，后两步反应的速度叫第一步反应的速度较慢，后两步反应的速度叫较快，整个反应取决于第一步。较快，整个反应取决于第一步。第二步：第二步：NNOH快N N OH第三步：第三步：N N+Cl-快N N OH 第一步反应的快慢与芳香第一胺的游离测定第一步反应的快慢与芳香第一胺的游离测定密切相关。密切相关。芳香第一胺的碱性较弱，则在一定强度酸性溶液中成芳香第一胺的碱性较弱，则在一定强度酸性溶液中成盐的比例较小，即游离芳香第一胺较小，则重氮化反应速盐

32、的比例较小，即游离芳香第一胺较小，则重氮化反应速度就慢。所以在测定中一般向供试品加入适量度就慢。所以在测定中一般向供试品加入适量KBrKBr，使重氮，使重氮化反应速度加快。化反应速度加快。（1）K1（2）K2 K K1 1300 K300 K2 2 加加入入KBrKBr，可可增增大大被被测测溶溶液液中中NONO+的的浓浓度度，所所以以能能加加快快重重氮化反应速度氮化反应速度（2 2）酸的种类及其浓度）酸的种类及其浓度在不同酸中重氮化反应的速度为：在不同酸中重氮化反应的速度为：HBrHBrHCl HCl H H2 2SOSO4 4 HNOHNO3 3盐酸应过量盐酸应过量 1:2.51:2.56

33、6；加入盐酸：；加入盐酸：重氮化反应速度加快；重氮化反应速度加快；重氮盐在酸性溶液中稳定；重氮盐在酸性溶液中稳定；防止生成偶氮氨基化合物，而影响测定结果防止生成偶氮氨基化合物，而影响测定结果（3 3）室温条件下滴定）室温条件下滴定 10103030 温度每升高温度每升高1010，重氮化反应速度加快，重氮化反应速度加快2.52.5倍，但重氮盐分解的速度亦相应加快倍，但重氮盐分解的速度亦相应加快2 2倍；所以反倍；所以反应在低温下进行。应在低温下进行。（4 4）滴定速度：先快后慢）滴定速度：先快后慢 滴滴定定管管尖尖端端插插入入液液面面下下2/32/3处处，滴滴定定液液一一次次大大部部分分放放下下

34、，近近终终点点时时方方改改为为慢慢速速滴滴定定。因因为为属属于于分分子子型型反反应应，速速度很慢。最后一滴要搅拌震荡度很慢。最后一滴要搅拌震荡1-5min1-5min。3.3.指示终点的方法指示终点的方法 有有电电位位法法，永永停停滴滴定定法法，外外指指示示剂剂法，和内指示剂法。法，和内指示剂法。（1 1）永停滴定法）永停滴定法 ChPChP（20152015）规规定定用用永永停停法法指指示示亚亚硝硝酸酸钠钠滴定法的终点，其装置见图滴定法的终点，其装置见图6-1。永停滴定法（附录永停滴定法（附录AA）中国药典规定，亚硝酸钠滴定用永停法指示中国药典规定，亚硝酸钠滴定用永停法指示终点。作重氮化法的

35、终点指示时，调节终点。作重氮化法的终点指示时，调节R R1 1使加于电使加于电极上的电压约为极上的电压约为50mV50mV。取供试品适量，精密称定，。取供试品适量，精密称定，置烧杯中，除另有规定外，可加水置烧杯中，除另有规定外，可加水40ml40ml与盐酸溶液与盐酸溶液（1212）15ml15ml，而后置电磁搅拌器上，搅拌使溶解，而后置电磁搅拌器上，搅拌使溶解，再加溴化钾再加溴化钾2g2g，插入铂，插入铂铂电极后，将滴定管的尖铂电极后，将滴定管的尖端插入液面下约端插入液面下约2/32/3处。处。用亚硝酸钠滴定液（用亚硝酸钠滴定液（0.1mol/L0.1mol/L或或0.05mol/L0.05m

36、ol/L）迅速滴定，随滴随搅拌，至近终点时，将滴定管的迅速滴定，随滴随搅拌，至近终点时，将滴定管的尖端提出液面，用少量水淋洗尖端，洗液并入溶液尖端提出液面，用少量水淋洗尖端，洗液并入溶液中，继续缓缓滴定，至电流计指针突然偏转，并不中，继续缓缓滴定，至电流计指针突然偏转，并不再回复，即为滴定终点。再回复，即为滴定终点。终点时，溶液中无亚硝酸，线路无终点时，溶液中无亚硝酸，线路无电流通过，有微量亚硝酸时与电极起氧化电流通过，有微量亚硝酸时与电极起氧化还原反应，有电流。电流计指针突然偏转。还原反应，有电流。电流计指针突然偏转。永不回复。永不回复。即为终点。即为终点。层层，或或制制成成KI-KI-淀淀

37、粉粉试试纸纸，当当用用细细玻玻璃璃棒棒蘸蘸取取少许被滴定液划过，立即显蓝色，即为终点。少许被滴定液划过，立即显蓝色，即为终点。4.4.测定方法测定方法 盐酸普鲁卡因盐酸普鲁卡因 ChP ChP（20152015）取本品约取本品约0.6g0.6g，精密称量为，精密称量为0.5653g0.5653g，加水，加水40ml40ml与盐酸（与盐酸（1 21 2）15ml,15ml,置电磁搅拌器上，搅拌使溶解，再加入置电磁搅拌器上，搅拌使溶解，再加入KBr2gKBr2g，采用永，采用永停滴定法滴定。滴定时，将滴定管尖端插入液面下停滴定法滴定。滴定时，将滴定管尖端插入液面下2/32/3处，用处，用 用亚硝酸

38、钠滴定液（用亚硝酸钠滴定液（0.1017mol/L0.1017mol/L）迅速滴定，边滴边搅拌，）迅速滴定，边滴边搅拌，至近终点时将滴定管尖端提出液面，用少量水淋洗，继续缓至近终点时将滴定管尖端提出液面，用少量水淋洗，继续缓缓滴定。至电流计指针突然偏移不再回复，即为滴定终点，缓滴定。至电流计指针突然偏移不再回复，即为滴定终点，消耗亚硝酸钠滴定液（消耗亚硝酸钠滴定液（0.1017mol/L0.1017mol/L）20.10ml20.10ml。每。每1ml1ml亚硝酸亚硝酸钠滴定液（钠滴定液（0.1mol/L0.1mol/L）相当于）相当于27.28mg27.28mg的的C C1313H H202

39、0N N2 2O O2 2HClHCl。中国药典中国药典20152015年版规定，按干燥品计算，含年版规定，按干燥品计算，含C C1313H H2020N N2 2O O2 2HClHCl不得少于不得少于99.0%99.0%，通过计算判断该供试品的含，通过计算判断该供试品的含量量是否符合规定。是否符合规定。解：解：盐酸普鲁卡因盐酸普鲁卡因%=V VT TF F100%100%S S20.1020.1027.2827.280.10170.10170.10.1100%100%0.56530.5653=98.65%=98.65%根据计算结果，根据计算结果，98.65%98.65%99.0%99.0%

40、，则该盐，则该盐酸普鲁卡因供试品含量不符合规定。酸普鲁卡因供试品含量不符合规定。（二）、非水溶液滴定法（二）、非水溶液滴定法 盐酸利多卡因，盐酸丁卡因侧链盐酸利多卡因，盐酸丁卡因侧链脂肪胺具有叔胺氮，盐酸布比卡因的脂肪胺具有叔胺氮，盐酸布比卡因的哌啶环也是叔胺氮，这些脂烃胺侧链哌啶环也是叔胺氮，这些脂烃胺侧链都具弱碱性，在非水溶液中用酸滴定。都具弱碱性，在非水溶液中用酸滴定。其中，非水溶液滴定法测定盐酸利其中，非水溶液滴定法测定盐酸利多卡因含量的滴定反应：多卡因含量的滴定反应：+Hg（Ac）2NHCOCH2N(C2H5)2CH3CH3HAc+HgCl2NHCOCH2N(C2H5)2CH3CH3

41、HAc+HClO4NHCOCH2N(C2H5)2CH3CH3HClO4+HAc 盐酸盐药物用高氯酸滴定时有氢卤酸生成，盐酸盐药物用高氯酸滴定时有氢卤酸生成，故在滴定前加入醋酸汞溶液，使成为难解离的氯故在滴定前加入醋酸汞溶液，使成为难解离的氯化汞，以除去氢卤酸的干扰化汞，以除去氢卤酸的干扰。在滴定盐酸丁卡因时，因其在冰醋酸中显较在滴定盐酸丁卡因时，因其在冰醋酸中显较弱碱性，因此加入适量醋酐。弱碱性，因此加入适量醋酐。因醋酐解离生成的醋酐合乙酰氧离子比醋酸因醋酐解离生成的醋酐合乙酰氧离子比醋酸合质子的酸性强，有利于增强丁卡因的碱性，使合质子的酸性强，有利于增强丁卡因的碱性，使滴定突跃敏锐。滴定突跃

42、敏锐。滴定至终点时，溶液显蓝色。但加入醋酐应滴定至终点时，溶液显蓝色。但加入醋酐应注意防止氨基被乙酰化。乙酰化物碱性很弱，以注意防止氨基被乙酰化。乙酰化物碱性很弱，以结晶紫生物指示剂时不能被滴定。结晶紫生物指示剂时不能被滴定。醋酐的量应按需要量加入。为防止乙酰化的醋酐的量应按需要量加入。为防止乙酰化的发生，加冰醋酸溶解样品后，应放冷后再加入醋发生，加冰醋酸溶解样品后，应放冷后再加入醋酐。酐。盐酸丁卡因的含量测定盐酸丁卡因的含量测定ChPChP（20152015）方法：方法：取本品约取本品约0.2g0.2g，精密称量为，精密称量为0.2051g0.2051g，加冰醋酸，加冰醋酸25ml25ml与

43、醋酐与醋酐5ml5ml溶解后，加热回流溶解后，加热回流2 2分钟，放冷，加醋酸汞试液分钟，放冷，加醋酸汞试液5ml5ml与结晶紫指示液与结晶紫指示液1 1滴，用高氯酸滴定液（滴，用高氯酸滴定液（0.09936mol/L0.09936mol/L）滴）滴定，至溶液显定，至溶液显蓝色，消耗高氯酸滴定液（蓝色，消耗高氯酸滴定液（0.09936mol/L0.09936mol/L）6.36ml6.36ml，空白试，空白试验消耗高氯酸滴定液（验消耗高氯酸滴定液（0.09936mol/L0.09936mol/L）0.05ml0.05ml。中国药典。中国药典20152015年版观点，每年版观点，每1ml1ml高

44、氯酸滴定液（高氯酸滴定液（0.1mol/L0.1mol/L）相当于）相当于30.08mgC30.08mgC1515H H2424N N2 2O O2 2HClHCl。本品按干燥品计算，含。本品按干燥品计算，含C C1515H H2424N N2 2O O2 2HClHCl不得少于不得少于99.0%99.0%。通过解释判断该供试品的含。通过解释判断该供试品的含量是否符合规定。量是否符合规定。解：解：盐酸丁卡因盐酸丁卡因%=（V-VV-V0 0）T TF F100%100%S S（6.90-0.056.90-0.05）30.0830.081010-3-30.099360.099360.10.110

45、0%100%0.20510.2051=99.82%=99.82%根据计算结果根据计算结果99.82%99.82%99.0%99.0%，则该盐，则该盐酸丁卡因供试品含量符合规定。酸丁卡因供试品含量符合规定。（三）紫外分光光度法（三）紫外分光光度法 对乙酰氨基酚在对乙酰氨基酚在0.40.4氢氧化钠溶液中，氢氧化钠溶液中，于于257nm257nm波长处有最大吸收，其紫外吸波长处有最大吸收，其紫外吸 收光谱特征，可用于其原料及其制剂的含收光谱特征，可用于其原料及其制剂的含量测定。量测定。对乙酰氨基酚对乙酰氨基酚 取取本本品品约约40mg40mg，精精密密称称定定0.0417g0.0417g，置置250

46、ml250ml量量瓶瓶中中，加加0.40.4氢氢氧氧化化钠钠溶溶液液50ml50ml溶溶解解后后，加加水水至至刻刻度度，摇摇匀匀，精精密密量量取取5m15m1，置置100ml100ml量量瓶瓶中中，加加0.40.4氢氢氧氧化化钠钠溶溶液液10m110m1，加加水水至至刻刻度度，摇摇匀匀，在在257nm257nm的的波波长长处处测测定定吸吸收收度度为为0.9520.952。按按C C8 8H H9 9NONO2 2的吸收系数（的吸收系数（）为）为715 715 计算。计算。中国药典中国药典20152015年年版版规规定定，本本品品干干燥燥品品计计算算，含含C C8 8H H9 9NONO2 2应

47、应为为98.0%98.0%102.0%102.0%。通通过过计计算算判判断断该该供供试试品品的含量是否符合规定。的含量是否符合规定。解：解：100%1100%1=1cmWEA对乙酰氨基酚对乙酰氨基酚%VD 1005100%1=1000.04177150.592250=99.28%盐酸普鲁卡因胺常用的鉴别反应有盐酸普鲁卡因胺常用的鉴别反应有 A.A.重氮化重氮化偶合反应偶合反应B.B.羟肟酸铁盐反应羟肟酸铁盐反应C.C.氧化反应氧化反应D.D.磺化反应磺化反应E.E.碘化反应碘化反应 采采用用亚亚硝硝酸酸钠钠法法测测定定含含量量的的药药物物有有 A.A.苯巴比妥苯巴比妥B.B.盐酸丁卡因盐酸丁卡

48、因C C苯佐卡因苯佐卡因D.D.醋氨苯砜醋氨苯砜E.E.盐酸去氧肾上腺素盐酸去氧肾上腺素 下下列列药药物物中中不不能能用用亚亚硝硝酸酸钠钠滴滴定定法法测定含量者测定含量者 A.A.乙酰水杨酸乙酰水杨酸B.B.对氨基水杨酸钠对氨基水杨酸钠C.C.对对乙乙酰酰氨氨基基酚酚D.D.普普鲁鲁卡卡因因E.E.苯佐卡因苯佐卡因 亚硝酸钠滴定法中，加亚硝酸钠滴定法中，加KBrKBr的作用是的作用是 A.A.添加添加BrBr B.B.生成生成NONO+BrBr C C生成生成HBrHBrD.D.生成生成BrBr2 2 E.E.抑制反应进行抑制反应进行 中中国国药药典典（20152015年年版版）所所收收载载的

49、的亚亚硝酸钠滴定法中指示终点的方法为硝酸钠滴定法中指示终点的方法为 A.A.电位法电位法 B.B.永停法永停法C.C.外指示剂法外指示剂法 D.D.内指示剂法内指示剂法E.E.自身指示剂法自身指示剂法 亚亚硝硝酸酸钠钠滴滴定定法法中中，可可用用于于指指示示终点的方法有终点的方法有 A.A.自身指示剂法自身指示剂法B.B.内指示剂法内指示剂法C.C.永停法永停法D.D.外指示剂法外指示剂法E.E.电位法电位法 ChPChP（20152015）亚亚硝硝酸酸钠钠滴滴定定法法测测定定对对氨氨基基水水杨杨酸酸钠钠的的含含量量时时，指指示示滴滴定定终终点点的的方法为方法为 A.A.自身指示终点法自身指示终

50、点法B.B.电位法指示终点电位法指示终点C.C.永永停停滴滴定定法法D.D.氧氧化化还还原原指指示示剂剂法法E.E.酸碱指示剂法酸碱指示剂法 以以下下那那种种药药物物中中应应检检查查对对氨氨基基苯甲酸苯甲酸 A.A.盐酸普鲁卡因盐酸普鲁卡因B.B.盐酸普鲁卡因胺盐酸普鲁卡因胺C.C.注射用盐酸普鲁卡因注射用盐酸普鲁卡因D.D.盐盐酸酸普普鲁鲁卡卡因因胺胺片片E.E.盐盐酸酸普普鲁鲁卡卡因因注注射液射液 盐盐酸酸普普鲁鲁卡卡因因采采用用亚亚硝硝酸酸钠钠滴滴定定法法测定含量时的反应条件是测定含量时的反应条件是 A.A.强酸强酸B.B.加入适量溴化钾加入适量溴化钾C.C.室温（室温（10103030