一种新的膀胱癌原位移植瘤动物模型的建立复习进程.ppt

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1、一种新的膀胱癌原位移植瘤动物模型的建立一、研究目的和意义一、研究目的和意义v膀胱癌是泌尿系统最常见的恶性肿瘤之一，术后高复发率膀胱癌是泌尿系统最常见的恶性肿瘤之一，术后高复发率是临床治疗失败的主要原因。是临床治疗失败的主要原因。v根据膀胱癌易复发的特点，行术后药物膀胱灌注可以达到根据膀胱癌易复发的特点，行术后药物膀胱灌注可以达到清除残余瘤体，预防复发的目的。清除残余瘤体，预防复发的目的。原位膀胱癌动物模型的制备方法原位膀胱癌动物模型的制备方法（1）杨慎敏等采取）杨慎敏等采取腹正中切口，暴露膀胱，腹正中切口，暴露膀胱，自尿自尿道插入道插入动脉穿刺套管针套管，插入针芯，动脉穿刺套管针套管，插入针芯

2、，在直视在直视下用下用小镊子提起膀胱小镊子提起膀胱并轻轻移动，使并轻轻移动，使针芯划伤膀针芯划伤膀胱胱左侧壁左侧壁23 次，退出针芯，注入肿瘤细胞。次，退出针芯，注入肿瘤细胞。v缺点：需要进行手术，缺点：需要进行手术，操作复杂操作复杂，对动物，对动物损伤严损伤严重重。（2）Bisson J F等等将自制的摩擦装置通过套管经将自制的摩擦装置通过套管经尿道置入膀胱尿道置入膀胱，感觉针头抵达膀胱壁后用针芯旋，感觉针头抵达膀胱壁后用针芯旋转损伤膀胱粘膜，然后注入肿瘤细胞转损伤膀胱粘膜，然后注入肿瘤细胞。v缺点：缺点：未对针芯旋转的程度给予限制，造成的膀未对针芯旋转的程度给予限制，造成的膀胱粘膜损伤无可

3、控性。胱粘膜损伤无可控性。v我们采用偏角针膀胱粘膜损伤方法，成功建立了我们采用偏角针膀胱粘膜损伤方法，成功建立了膀胱膀胱癌癌原位移植瘤动物模型，为膀胱癌防治研究原位移植瘤动物模型，为膀胱癌防治研究提供了一种有实用价值的膀胱癌动物模型的制备提供了一种有实用价值的膀胱癌动物模型的制备方法。方法。v应用该造模方法成功验证了我们研制的一种膀胱应用该造模方法成功验证了我们研制的一种膀胱灌注液（苏复宁洗液）预防膀胱癌术后复发的作灌注液（苏复宁洗液）预防膀胱癌术后复发的作用效果。用效果。材料与方法材料与方法1.偏角针的制备偏角针的制备 24#静脉留置针，取出针芯，在距针尖静脉留置针，取出针芯，在距针尖15m

4、m处将针芯处将针芯折约折约5-7度的偏角，旋转针芯时针尖处可形成度的偏角，旋转针芯时针尖处可形成 =2.613.66 mm的圆。的圆。偏角针偏角针正常针芯正常针芯套管套管24#静脉留置针静脉留置针2.细胞株及实验动物的选择细胞株及实验动物的选择v小鼠膀胱癌细胞株小鼠膀胱癌细胞株BTT，由山西医科大学第一临床医院泌，由山西医科大学第一临床医院泌尿外科杨晓峰教授惠赠。尿外科杨晓峰教授惠赠。vT739近交系小鼠，雌性，近交系小鼠，雌性，46周龄，周龄，SPF级，购自北京级，购自北京华阜康生物科技股份有限公司，许可证号：华阜康生物科技股份有限公司，许可证号：SCXK(京京)2009-0004。v人膀胱

5、癌细胞株人膀胱癌细胞株T24，购自中科院上海生命科学研究院。，购自中科院上海生命科学研究院。vBALB/c-nu-nu裸鼠，雌性，裸鼠，雌性，46周龄，周龄，SPF级，购级，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，许可证号：自北京维通利华实验动物技术有限公司，许可证号：SCXK(京京)2009-0017。3.肿瘤细胞原位接种方法肿瘤细胞原位接种方法 实验动物实验动物下腹部常规消毒下腹部常规消毒经尿道口缓慢经尿道口缓慢插入膀胱腔内插入膀胱腔内一手固定套管，另一手固定套管，另一手转动针芯一手转动针芯5周周偏角针缓慢插偏角针缓慢插入套管中入套管中麻醉麻醉戊巴比妥钠戊巴比妥钠60mg/kg24#静脉留置

6、静脉留置针套管外涂以针套管外涂以液体石蜡液体石蜡抽出尿液抽出尿液拔出针芯拔出针芯注入肿瘤细胞悬液注入肿瘤细胞悬液0.1ml（含有（含有1107个细胞）个细胞）待动物自然苏醒待动物自然苏醒拔出套管拔出套管实验组实验组对照组对照组图图1 膀胱粘膜未损伤与损伤后的小鼠膀胱（充盈）膀胱粘膜未损伤与损伤后的小鼠膀胱（充盈）（左：膀胱粘膜未损伤；（左：膀胱粘膜未损伤；右：膀胱粘膜损伤）右：膀胱粘膜损伤）4.观察方法观察方法 接接种种后后动动物物常常规规饲饲养养，观观察察动动物物的的活活动动、体体重重变变化化，记记录录动动物物生生存存时时间间，动动物物自自然然死死亡亡后后解解剖剖，观观察察两两种种方方法法造

7、造模模后后膀膀胱胱腔腔内内有有无无肿肿瘤瘤形形成成、肿肿瘤瘤转转移移及及血血尿尿形形成成，剖剖取取膀膀胱胱，并并对对膀膀胱胱及及有有肿肿瘤瘤转转移移的的脏脏器器以以10%甲甲醛醛溶溶液液固固定定后后作作病病理理检查。检查。表表1 偏角针损伤与不损伤膀胱粘膜的膀胱原位移植瘤成瘤率比较偏角针损伤与不损伤膀胱粘膜的膀胱原位移植瘤成瘤率比较组别组别动物数量动物数量（只）（只）细胞接种量细胞接种量成瘤数量成瘤数量（只）（只）成瘤率成瘤率(%)T739 未损伤组未损伤组10110600T739 损伤组损伤组60110660100Balb/C-nu-nu 未损伤组未损伤组10110600Balb/C-nu-

8、nu 损伤组损伤组60110660100结果结果1.肿瘤形成情况肿瘤形成情况图图2 膀胱早期与晚期肿瘤膀胱早期与晚期肿瘤(左：早期膀胱肿瘤；右：晚期膀胱肿瘤左：早期膀胱肿瘤；右：晚期膀胱肿瘤)早期肿瘤较为表浅，晚期肿瘤充满整个膀胱。早期肿瘤较为表浅，晚期肿瘤充满整个膀胱。图图3 原位膀胱癌肝转移与肾转移原位膀胱癌肝转移与肾转移(左：肝脏转移；右：肾脏转移左：肝脏转移；右：肾脏转移)2.肿瘤转移情况肿瘤转移情况T739小鼠接种后有小鼠接种后有23%的动物肉眼可见肝脏、肾脏、肠系膜、腹膜等处的动物肉眼可见肝脏、肾脏、肠系膜、腹膜等处有转移，转移灶可为多处或单处有转移，转移灶可为多处或单处，同时伴有

9、血性腹水，腹腔内有粘连现同时伴有血性腹水，腹腔内有粘连现象。象。BALB/c-nu-nu裸鼠只有一只可见肾脏转移裸鼠只有一只可见肾脏转移。图图4 T739 小鼠小鼠 与与 Balb/C-nu-nu裸鼠生存时间图裸鼠生存时间图(左：左：T739 小鼠；右：小鼠；右：Balb/C-nu-nu裸鼠裸鼠)3.动物生存时间动物生存时间表表3 膀胱原位移植瘤模型动物平均生存时间膀胱原位移植瘤模型动物平均生存时间组别组别 动物数量动物数量（只）（只）平均生存时间平均生存时间（d）T739未损伤组未损伤组1040T739 损伤组损伤组6026.699.24*Balb/C-nu-nu 未损伤组未损伤组1060B

10、alb/C-nu-nu 损伤组损伤组6034.599.80*图图5 膀胱肿瘤及肝肾转移病理学形态膀胱肿瘤及肝肾转移病理学形态 A 正常膀胱正常膀胱(100)C 晚期原位膀胱肿瘤晚期原位膀胱肿瘤(100)B 早期原位膀胱肿瘤早期原位膀胱肿瘤(100)D 肾脏转移肾脏转移(200)4.病理学检查结果病理学检查结果讨论讨论v偏角针旋转可以在膀胱粘膜上形成一个均衡的损伤。偏角针旋转可以在膀胱粘膜上形成一个均衡的损伤。v接接种种早早期期即即可可有有大大量量的的肿肿瘤瘤细细胞胞定定植植，在在较较短短时时间间内内就就可可形成肿瘤并发生脏器转移。形成肿瘤并发生脏器转移。v制制备备偏偏角角针针所所采采用用的的24#静静脉脉留留置置针针为为标标准准的的医医用用器器械械，易于获得且标准统一易于获得且标准统一v偏偏角角针针的的制制备备方方法法简简单单，实实验验操操作作简简单单，对对膀膀胱胱粘粘膜膜的的损损伤程度容易控制伤程度容易控制v用用该该方方法法建建立立膀膀胱胱癌癌原原位位移移植植瘤瘤模模型型具具有有接接种种成成瘤瘤率率高高、对动物损伤小等优点。对动物损伤小等优点。结结 论论 采采用用偏偏角角针针旋旋转转法法损损伤伤膀膀胱胱粘粘膜膜可可以以建建立立一一种种简简便便、可可靠靠、稳稳定定的的膀膀胱胱癌癌原原位位移移植植瘤瘤动动物物模模型。型。欢欢 迎迎 各各 位位 专专 家家批批 评评 指指 正！正！