生物化学-第8章-酶学通论.ppt

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1、生物化学-第8章-酶学通论 Still waters run deep.流静水深流静水深,人静心深人静心深 Where there is life,there is hope。有生命必有希望。有生命必有希望TheapplicationofenzymehasamuchlongerhistorythanthatofenzymaticresearchSeeatp319第一节第一节酶学概论酶学概论一、一、酶的概念及其作用特点酶的概念及其作用特点酶是一类具有高效率、高度专一性、活性可调节的生物催化剂。生物催化剂：酶(enzyme)核酶(ribozyme)脱氧核酶(deoxyribozyme)1、酶与非生

2、物催化剂相比的几点共性：酶与非生物催化剂相比的几点共性：催化效率高，用量少（细胞中含量低）。加快反应速度但不改变化学反应平衡点。降低反应活化能。反应前后自身结构不变。活化能在一定温度下1摩尔底物全部进入活化状态所需的自由能，单位为kj/mol。催化剂改变了化学反应的途径，使反应通过一条活化能比原途径低的途径进行。催化剂的效应只反映在动力学上（反应速度），不影响反应的热力学（化学平衡）。非酶催化反应非酶催化反应过渡态过渡态酶催化反应酶催化反应底物底物产物产物3、酶催化反应的特点酶催化反应的特点（1）、）、催化效率更高催化效率更高酶催化反应速度是相应的无催化反应的108-1020倍，并且高出非酶催

3、化反应速度至少几个数量级。转换数（TN)或催化常数（Kcat)表示酶的最大最大催化效率Kcat是一定条件下（SKm）每秒钟每个酶分子转换底物的分子数（数值上Kcat=K3）P322表8-2一些酶的最大转换数（2）.专一性高专一性高酶对反应的底物和产物都有极高的专一性，几乎没有副反应发生。（3）、易失活）、易失活反应条件温和反应条件温和常温、常压，中性pH环境。（4）、）、活性可调节活性可调节别构调节、酶的共价修饰、酶的合成、活化与降解等。二、二、酶的化学本质及其组成酶的化学本质及其组成（一）（一）酶的化学本质酶的化学本质绝大多数酶是蛋白质绝大多数酶是蛋白质证据（1）酸水解的产物是氨基酸，能被蛋

4、白酶水解失活；（2）具有蛋白质的一切共性，凡是能使蛋白质变性的因素都能使酶变性；（具有蛋白质的颜色反应）少数酶是少数酶是RNA（核酶）（核酶）ribozyme核酶核酶（具有催化功能的（具有催化功能的RNA）（1）80年代初，ThomasCech和SidneyAltman四膜虫L19RNA具有生物催化功能，催化rRNA前体的剪接（2）1983年Atman和PaceE.ColiRNaseP中的RNA具有加工tRNA前体的催化功能（二）（二）酶的化学组成酶的化学组成单纯酶类(simpleenzyme)：仅由蛋白质组成脲酶、溶菌酶、淀粉酶、脂肪酶、核糖核酸酶等缀合酶类（conjugatedenzyme

5、):全酶（holoenzyme)=脱辅基酶（apoenzye)+辅因子(cofactor)：超氧化物歧化酶Cu2+、Zn2+）、乳酸脱氢酶（NAD+）酶的辅助因子主要有金属离子和有机化合物酶的辅助因子主要有金属离子和有机化合物金属离子：Fe2+、Fe3+、Zn2+、Cu+、Cu2+、Mn2+、Mn3+、Mg2+、K+、Na+、Mo6+、Co2+等。有机化合物：NAD，NADP，FAD，生物素，卟啉等辅酶(coenzyme)：与酶蛋白结合较松，可透析除去。辅基(prostheticgroup)：与酶蛋白结合较紧。P324表8-4金属离子作为一些酶的辅助因子P325表8-5基团转移反应中的辅酶和辅

6、基。酶酶蛋蛋白白决决定定酶酶专专一一性性，辅辅助助因因子子决决定定酶酶促促反反应应的的类类型型和反应的性质。和反应的性质。NAD+构成专一性强的乳酸脱氢酶、醇脱氢酶、苹果酸脱氢酶、异柠檬酸脱氢酶。（三三）、单单体体酶酶、寡寡聚聚酶酶、多多酶酶复复合合体体、多多酶酶融合体融合体1、单体酶单体酶由一条或多条共价相连的肽链组成的酶分子牛胰RNase124a.a单链鸡卵清溶菌酶129a.a单链胰凝乳蛋白酶三条肽链2、寡聚酶寡聚酶含相同亚基的寡聚酶：苹果脱胱氢酶（鼠肝），2个相同的亚基含不同亚基的寡聚酶：琥珀酸脱氢酶（牛心），2个亚基寡聚酶中亚基的聚合，有的与酶的专一性有关，有的与酶活性中心形成有关，有

7、的与酶的调节性能有关。大多数寡聚酶是胞内酶，而胞外酶一般是单体酶。3、多酶复合体多酶复合体由两个或两个以上的酶，靠非共价键结合而成，其中每一个酶催化一个反应，所有反应依次进行，构成一个代谢途径或代谢途径的一部分。大肠杆菌丙酮酸脱氢酶复合体由三种酶组成：丙酮酸脱氢酶（E1）以二聚体存在29600二氢硫辛酸转乙酰基酶（E2）70000二氢硫辛酸脱氢酶（E3）以二聚体存在25600012个E1二聚体249600024个E2单体24700006个E3二聚体1256000总分子量：560万4、多酶融合体（多功能酶）多酶融合体（多功能酶）一条多肽链上含有两种或两种以上催化活性的酶，往往是基因融合的产物。例

8、如：天冬氨酸激酶I-高丝氨酸脱氢酶I融合体（双功能酶）该酶是四聚体4，每条肽链含两个活性区域：N-端区域是Asp激酶，C端区域是高Ser脱氢酶三、三、酶的分类及命酶的分类及命名名（一）、（一）、习惯命名习惯命名1.依据底物来命名（绝大多数酶）：蛋白酶、淀粉酶2.依据催化反应的性质命名：水解酶、转氨酶3结合上述两个原则命名：琥珀酸脱氢酶。4.有时加上酶的来源胃蛋白酶、牛胰凝乳蛋白酶（二）、（二）、国际系统命名国际系统命名基本原则：明确标明酶的底物及催化反应的性质（底物为水时可略去不写）。P327表8-8酶国际系统命名法举例（三）（三）国际系统分类法及编号（国际系统分类法及编号（EC编号）编号）（

9、1）按反应性质分六大类，用1、2、3、4、5、6表示。（2）根据底物中被作用的基团或键的特点，将每一大类分为若干个亚类，编号用1、2、3。（3）每个亚类又可分为若干个亚一亚类，用编号1、2、3表示。每一个酶的编号由4个数字组成，中间以“”隔开。第一个数字表示大类，第二个数字表示亚类，第三个表示亚-亚类，第四个数字表示在亚-亚中的编号。乙醇脱氢酶EC1.1.1.1，乳酸脱氢酶EC1.1.1.27，苹果酸脱氢酶EC1.1.1.37第一个数字表示大类：氧化还原第二个数字表示反应基团：醇基第三个数字表示电子受体：NAD+或NADP+第四个数字表示此酶底物：乙醇，乳酸，苹果酸。P327表8-9酶的国际系

10、统分类氧、转、水、裂、异、合氧化还原酶类氧化还原酶类转移酶类转移酶类水解酶类水解酶类裂合酶类裂合酶类异构酶类异构酶类连接酶类（也叫：合成酶）连接酶类（也叫：合成酶）1、氧化还原酶类氧化还原酶类一类催化氧化还原反应的酶，可分为氧化酶和脱氢酶一类催化氧化还原反应的酶，可分为氧化酶和脱氢酶（1）氧化酶类催化底物脱氢，并氧化生成H2O2或H2OA2H+O2=A+H2O2（2）脱氢酶类催化直接从底物上脱氢的反应A2H+B=A+B2H这类酶需要辅酶（NAD）或辅酶（NADP）作为氢供体或氢受体起传递氢的作用。乳酸：NAD+氧化还原酶（EC1.1.1.27），习惯名：乳酸脱氢酶以NAD为辅酶将乳酸氧化成丙酮

11、酸（四）六大酶类的特征和举例2、转转移移酶酶类类催化化合物某些基团的转移，即将一种分子上的某一基团转移到另一种分子上的反应AX+B=A+BXAla：酮戊二酸氨基移换酶（EC2.6.1.2），习惯名：谷丙转氨酶3、水解酶类水解酶类催化水解反应，多为细胞外酶，包括淀粉酶、核酸酶、蛋白酶、脂酶。AB+HOHAOH+BH亮氨酸氨基肽水解酶（EC3.4.1.1），习惯名：Ile氨肽酶。4、裂合酶类（裂解酶）裂合酶类（裂解酶）催化从底物上移去一个基团而形成双键的反应或其逆反应ABA+B二磷酸酮糖裂合酶（EC4.1.2.7），习惯名：醛缩酶5、异构酶（异构酶（EC5.3.1.9）催化同分异构体相互转化，即分

12、子内部基团的重新排列AB6-磷酸Glc异构酶6、合成酶（连接酶）合成酶（连接酶）催化一切必须与ATP分解相偶联、并由两种物质合成一种物质的反应。A+B+ATPAB+ADP+Pi或A+B+ATPAB+AMP+PPiUTP：氨连接酶（CTP合成酶）L-酪氨酸：tRNA连接酶（酪氨酰tRNA合成酶）T4DNA连接酶国际分类的盲区：忽略了酶的物种差异和组织差异SOD：EC1.15.1.1，只有一个名称和编号2O2-+2H+H2O2+O2三类不同的SOD：CuZn-SOD真核生物细胞质中Mn-SOD真核生物线粒体中Fe-SOD同是CuZn-SOD，来自牛红细胞与猪红细胞的，其一级结构也有很大不同。在讨论

13、一个具体的酶时，应对它的来源与名称一并加以说明。四、酶的专一性四、酶的专一性放在酶的作用机理中讲五、酶的活力测定与分离纯化1、酶活力与酶促反应速度酶活力与酶促反应速度酶活力：在一定条件下，酶催化某一反应的反应速度（一般测初速度）。酶促反应速度：单位时间、单位体积中底物的减少量或产物的增加量。单位：浓度/单位时间研究酶促反应速度，以酶促反应的初速度为准(底物消耗5%）。2、酶的活力单位（酶的活力单位（U）国际单位（IU单位）：在最适反应条件下，每分钟催化1mol底物转化为产物所需的酶量，称一个国际单位（IU），1IU=1mol/min国际单位（Katal,Kat单位）：在在最适反应条件下，每秒钟

14、催化1mol底物转化为产物所需的酶量，称Kat单位1Kat=60106IU最适条件：最适温度（25或37）,最适pH、最适缓冲液离子强度、最适底物浓度。底物浓度（1）通常很大，使酶饱和（2）底物消耗5%sucroseV零级反应enzymeV一级反应3、酶的比活力酶的比活力Specificactivity每毫克酶蛋白所具有的酶活力。单位：U/mg蛋白质。酶的比活力是分析酶的含量与纯度的重要指标。4、酶活力的测定方法、酶活力的测定方法P336分光光度法荧光法同位素法电化学法（二）酶的分离和纯化大多数酶是蛋白质，因此酶的分离提纯方法，也就是常用来分离提纯蛋白质的方法。酶的提纯把酶制剂从很大体积浓缩到

15、比较小的体积把酶制剂中大量的杂质蛋白和其他大分子物质分离出去判断分离提纯方法的优劣，两个指标来衡量总活力的回收表示提纯过程中酶的损失情况比活力提高的倍数表示提纯方法的有效程度酶分离和纯化中应注意的几点：（1）选材酶含量丰富的新鲜生物材料获得材料后立即开始，否则应低温保存（2）破碎（3）抽提低温下，以水或低盐缓冲液，抽提（4）分离及纯化操作条件要温和，05下进行一个酶的分离纯化分为4步。步骤1234总活力（U）6432总蛋白质（mg）201052比活力（U/mg）6/204/103/52/2酶的提纯过程中，总蛋白减少，总活力减少，比活力增高。酶的纯化倍数：酶的回收率：100%核酶抗体酶酶工程诱导酶同工酶后边讲