2022年实验十二-菠菜色素的提取和分析 .docx

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1、精品_精品资料_菠菜色素的提取和别离一、试验目的1、通过绿色植物色素的提取,学习自然物质的提取方法.2、通过薄层色谱分析,把握有机物色谱分析的原理和方法.二、试验原理1 菠菜色素的提取绿色植物如菠菜叶中含有叶绿素绿 、胡萝卜素橙和叶黄素黄等多种自然色素.叶绿 素 存在 两 种 结构 相像 的 形式 即 叶 绿素 aC55H72O5 N4Mg 和 叶 绿 素 bC55H70O6N4Mg,其差异仅是叶绿素 a 中一个甲基被甲酰基所取代从而形成了叶绿 素 b.它们都是吡咯衍生物与金属镁的络合物,是植物进行光合作用所必需的催化剂.植物中叶绿素 a 的含量通常是 b 的 3 倍.尽管叶绿素分子中含有一些

2、极性基团,但大的烃基结构使它易溶于醚、石油醚等一些非极性的溶剂.胡萝卜素 C40H56是具有长链结构的共轭多烯.它有三种异构体,即- 胡萝卜素、 - 胡萝卜素和 - 胡萝卜素,其中 - 胡萝卜素含量最多,也最重要.在生物体内, - 胡萝卜素受酶催化氧化形成维生素A.目前 - 胡萝卜素已可进行工业生产,可作为维生素 A 使用,也可作为食品工业中的色素.叶黄素 C40H56O2是胡萝卜素的羟基衍生物,它在绿叶中的含量通常是胡萝卜素的两倍.与胡萝卜素相比,叶黄素较易溶于醇而在石油醚中溶解度较小.CH 2可编辑资料 - - - 欢迎下载精品_精品资料_H3CCHRNNMgCH2 CH3可编辑资料 -

3、- - 欢迎下载精品_精品资料_NNH3CCH 3叶绿素 aR = CH 3叶绿素 bR = CHO 可编辑资料 - - - 欢迎下载精品_精品资料_可编辑资料 - - - 欢迎下载精品_精品资料_CH 2CH 2OOO CO 2CH 3CH 3CH 3CH 3CH 3CH 3可编辑资料 - - - 欢迎下载精品_精品资料_H3 CCH 3CH 3CH3H 3CR可编辑资料 - - - 欢迎下载精品_精品资料_可编辑资料 - - - 欢迎下载精品_精品资料_RCH 3CH3CH 3H3CCH 3可编辑资料 - - - 欢迎下载精品_精品资料_- 胡萝卜素 R = H 叶黄素 R = OH可编辑

4、资料 - - - 欢迎下载精品_精品资料_2 薄层色谱原理H 3CCH 3CH 3CH 3维生素 ACH 3CH 2OH可编辑资料 - - - 欢迎下载精品_精品资料_常用 TLC表示,又称薄层层析, 属于固液吸附色谱. 样品在薄层板上的吸附剂固定相和溶剂移动相之间进行别离.由于各种化合物的吸附才能各不 相同,在绽开剂上移时,它们进行不同程度的解吸,从而到达别离的目的.3 薄层色谱的用途：1化合物的定性检验.通过与已知标准物比照的方法进行未知物的鉴定在条件完全一样的情形, 纯碎的化合物在薄层色谱中出现肯定的移动距离, 称比移值 Rf 值,所以利用薄层色谱法可以鉴定化合物的纯度或确定两种性质相像

5、的化合物是否为同一物质. 但影响比移值的因素许多, 如薄层的厚度, 吸附剂颗粒的大小,酸碱性,活性等级,外界温度和绽开剂纯度、组成、挥发性等.所以,要获得重现的比移值就比较困难.为此,在测定某一试样时,最好用已知样品进行对比.可编辑资料 - - - 欢迎下载精品_精品资料_溶质最高浓度中心至原Rf点中心的距离可编辑资料 - - - 欢迎下载精品_精品资料_溶剂前沿至原点中心的距离2、快速别离少量物质.几到几十微克,甚至 g3、跟踪反应进程.在进行化学反应时,常利用薄层色谱观看原料斑点的逐步消逝,来判定反应是否完成.4、化合物纯度的检验只显现一个斑点,且无拖尾现象,为纯物质.此法特殊适用于挥发性

6、较小或在较高温度易发生变化而不能用气相色谱分析的物质.可编辑资料 - - - 欢迎下载精品_精品资料_4 薄层色谱的操作步骤1、吸附剂的挑选薄层色谱的吸附剂最常用的是氧化铝和硅胶.1、硅胶：“硅胶 H”不含粘合剂. “硅胶 G”含煅石膏粘合剂.其颗粒大小一般为 260 目以上.颗粒太大, 绽开剂移动速度快, 别离成效不好.反之,颗粒太小,溶剂移动太慢,斑点不集中,成效也不抱负.化合物的吸附才能与它们的极性成正比,具有较大极性的化合物吸附较强, 因而 Rf 值较小.酸和碱 醇、胺、硫醇 酯、醛、酮 芳香族化合物 卤代物、醚 烯 饱和烃本试验挑选的吸附剂为薄层色谱用硅胶G.2、薄层板的制备湿板的制

7、备薄层板制备的好坏直接影响色谱的结果. 薄层应尽量匀称且厚度要固定. 否就,在绽开时前沿不齐,色谱结果也不易重复.在烧杯中放入2g 硅胶 G,加入56ml0.5%的羧甲基纤维素钠水溶液,调成糊状.将配制好的浆料倾注到清洁干燥的载玻片上, 拿在手中轻轻的左右摇动, 使其外表匀称平滑, 在室温下晾干后进行活化.本试验用此法制备薄层板4 片.3、薄层板的活化将涂布好的薄层板置于室温凉干后, 放在烘箱内加热活化, 活化条件依据需要而定.硅胶板一般在烘箱中慢慢升温, 维护 105 110活化 30min.氧化铝板在 200烘 4h 可得到活性为级的薄板, 在 150 160烘 4h 可得活性为 级的薄板

8、.活化后的薄层板放在干燥器内储存待用.4、点样先用铅笔在距薄层板一端 1cm 处轻轻划一横线作为起始线,然后用毛细管吸取样品,在起始线上当心点样,斑点直径一般不超过2mm.假设因样品溶液太稀,可重复点样, 但应待前次点样的溶剂挥发后方可重新点样, 以防样点过大, 造成拖尾、扩散等现象,而影响别离成效.假设在同一板上点几个样,样点间距可编辑资料 - - - 欢迎下载精品_精品资料_离应为 1.点样要轻,不行刺破薄层.5、绽开薄层色谱的绽开, 需要在密闭容器中进行. 为使溶剂蒸气快速到达平稳, 可在绽开槽内衬一滤纸.在层析缸中加入配好的绽开溶剂,使其高度不超过1cm.将点好的薄层板当心放入层析缸中

9、,点样一端朝下,浸入绽开剂中.盖好瓶盖,观看绽开剂前沿上升到肯定高度时取出, 尽快在板上标上绽开剂前沿位置. 晾干, 观看斑点位置,运算 Rf 值.6、显色被别离物质假如是有色组分,绽开后薄层色谱板上即出现出有色斑点.假如化合物本身无色, 就可用碘蒸气熏的方法显色. 仍可使用腐蚀性的显色剂如浓硫酸、浓盐酸和浓磷酸等.对于含有荧光剂的薄层板在紫外光下观看, 绽开后的有机化合物在亮的荧光背景上呈暗色斑点.本试验样品本身具有颜色,不必在荧光灯下观看.三、主要试剂和仪器1 试剂：硅胶 G, 95% 乙醇 ,石油醚6090,丙酮 ,无水 MgSO4,菠菜2 仪器：层析板 25mm75mm, 125ml广

10、口瓶,研钵,分液漏斗四、试验步骤1 菠菜色素的提取称取 5g 无水的新奇菠菜叶,用研钵研碎,加入15 ml 石油醚- 乙醇溶剂 3 ： 2 研磨至桨,抽滤,滤液放至分液漏斗中,加入5ml 饱和 NaCl 水溶液,分层,可编辑资料 - - - 欢迎下载精品_精品资料_上层再用饱和 NaCl 水溶液洗涤,有机层用无水 MgSO4干燥,滤去 MgSO4后, 滤液放入小烧杯中,水浴蒸去溶剂掌握温度 60 -70 ,浓缩至 2.5ml 左右为止.2 薄层层析取活化后的层析板,点样,当心放入盛有绽开剂 7：3 石油醚- 丙酮的广口瓶内,样点不能浸到绽开剂中,盖好瓶盖,待绽开剂上升至规定高度时,取出层析板,在空气中晾干,运算三种色素叶绿素、叶黄素和胡萝卜素的 Rf 值.注：叶绿素会显现两点叶绿素 a,叶绿素 b.叶黄素易溶于醇而在石油醚中溶解度小, 从嫩绿叶中得到提取液, 叶黄素会显很少.五、留意事项留意薄层色谱、柱层析试验操作要点的把握和应用六、摸索题1、如何利用 Rf 值来鉴定化合物？2、薄层色谱法点样应留意些什么？3、常用的薄层色谱的显色剂是什么？可编辑资料 - - - 欢迎下载