初始污染菌方法学验证方案.docx

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1、起草打印体姓名/职位签名日期一起草人签署该文件即说明本文件的所有信息是准确的,且与公司的程序文件、指导方针以 及现行的质量体系要求一致带格式的：缩进：首行缩进：0. 74厘米，行距：多倍行距1.25字行：带格式的：无，行距：多倍行距1.25字行,无工程符号或编号，与下段不同页，制表位：不在7. 97 字符带格式的：缩进：首行缩进：0.74厘米，行距：多：倍行距1.25字行带格式的：缩进：首行缩进：0. 74厘米，行距：多 倍行距1.25字行带格式的：缩进：首行缩进：0. 74厘米，行距：多 倍行距1.25字行带格式的；缩进：首行缩进：。74厘米，行距：多倍行距1.25字行评审打印体姓名/职位签

2、名日期4打印体姓名/职位签名日期负责评审该文件的技术代表或相关小组成员签署该文件,即说明同意该文件的内容及其堆 确性,且该文件符合公司程序文件、指导方针以及现行质量体系的要求带格式的：缩进：首行缩进: 倍行距1.25字行0. 74厘米，行距：多带格式的：无，行距：多倍行距1.25字行，无工程 符号或编号，与下段不同页，制表位：不在7.97字 符带格式的：缩进：首行缩进: 倍行距1.25字行0. 74厘米，行距：多带格式的：缩进：首行缩进: 倍行距1.25字行0. 74厘米，行距：多带格式的：缩进：首行缩进: 倍行距1.25字行0. 74厘米，行距：多带格式的：缩进：首行缩进：0. 74厘米，

3、倍行距1.25字行行距：多带格式的：缩进：首行缩进：0. 74厘米， 倍行距1.25字行行距：多批准打印体姓名/职位签名日期-负责批准该文件的部门经理及质量代表签署该文件,即说明同意该文件的内容及其准确性, 且该文件符合公司程序文件、指导方针以及现行质量体系的要求带格式的：缩进：首行缩进：0. 74厘米，行距：多 倍行距1.25字行带格式的：无，行距：多倍行距1.25字行，无工程 符号或编号，与下段不同页，制表位：不在7.97字 符带格式的：缩进：首行缩进：0. 74厘米，行距：多 倍行距1.25字行带格式的：缩进：首行缩进：0. 74厘米，行距：多 倍行距1.25字行变更历史版本1. 1.

4、1.4 日期1. 1，1.5变更原因1. 1. 1.6 变 更人带格式的：缩进：首行缩进：0. 74厘米，行距：多 倍行距1.25字行带格百的行距：多倍行距1.25字行带格氐的;无，行距：多倍行距1.25字行，无工程：符号或编号，与下段不同页，制表位：不在7. 97字符：带格式的：缩进：首行缩进：0.74厘米，行距：多倍行距1.25字行带格式的：缩进：首行缩进：0. 74厘米，行距：多 倍行距1.25字行带格式的：缩进：首行缩进：0. 74厘米，行距：多 倍行距1.25字行带格式的：缩进：首行缩进：0. 74厘米，行距：多 倍行距1.25字行6. 5. 1. 5阴性对照组：取无菌生理盐水20m

5、l,不加菌株，分成两份，过滤，每种培养基 制备一张滤膜。6. 5. 1.6结果判断阴性对照组应无菌生长，试验组菌落数减去供试品对照组菌落数的值与菌液对照组菌落数的比值应在0. 5、2范围内。连2透析纸的计数方法适用性试验 石46. 5.2. 1 试验组：取7份0.9ml的供试液。a）其中3份分别加入0. 1ml的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽胞杆菌，混匀， 转移到无菌平皿内，倾注约1520ml的45c的胰酪大豆陈琼脂培养，置3035, 培养时间不超过3天；b）其中2份分别加入0.1ml的白色念珠菌、黑曲霉，混匀，转移到无菌平皿内，倾注 约1520ml的45的胰酪大豆陈琼脂培养，置30、3

6、5,培养时间不超过5天；c）其中2份分别加入0.1ml白色念珠念、黑曲霉，混匀，转移到无菌平皿内，倾注约 1520ml的45的沙氏葡萄糖琼脂培养基，置2025,培养时间不超过5天。带格式的：字体：（中文）+中文正文（宋体），11磅, 菲突出显示,带格式的二字体：（中文）+中文正文（宋体），11磅, 菲突出显示6. 5. 2. 2供试品对照组：取国份0. 1ml.的制备好的供试液，分别倾注约1520。的45 的琼脂培养基，胰酪大豆陈琼脂培养基，置3035,培养时间不超过3天, 沙氏葡萄糖琼脂培养基，置2025,培养时间不超过5天带格式的：字体：（中文）+中文正文（宋体），11磅, 非突出显示带格

7、式的：tpc_content,字体：（默认）Century, （中文）+中文正文（宋体），11磅，字体颜色：黑色, （中文）中文（中国）J44菌液对照组：取7份0.9ml的无菌生理盐水。a）其中3份分别加入0. 1血的金黄色葡萄球菌球可绿假单胞菌、枯草芽胞杆菌，混匀， 转移到无菌平皿内，倾注约1520ml的45c的胰酪大豆陈琼脂培养，置3035, 培养时间不超过3天；b）其中2份分别加入0.1ml的白色念珠菌、黑曲霉，混匀，转移到无菌平皿内，倾注 约1520ml的45的胰酪大豆陈琼脂培养，置3035,培养时间不超过5天；c）其中2份分别加入0.1ml白色念珠菌、黑曲霉，混匀，转移到无菌平皿内，

8、倾注约 1520ml的45的沙氏葡萄糖琼脂培养基，置2025,培养时间不超过5天。阴性对照组：取两份0.1ml的无菌生理盐水，分别倾注约1520ml的45的 琼脂培养基，胰酪大豆陈琼脂培养基，置基35,培养时间不超过3天，沙 氏葡萄糖琼脂培养基，置2025,培养时间不超过5天6. 5. 2. 5结果判断阴性对照组应无菌生长，试验组菌落数减去供试品对照组菌落数的值与菌液对照组 菌落数的比值应在0.52范围内。为了更清晰地表达判定标准要求，计数方法适用性试验结果应满足以下条件（试险组的菌落总数-供试品对照组的菌落总数） 2.0菌液对照组的菌落总数6. 5. 4相关结果记录在附件3中。W46. 5.

9、 5为确保试验结果的重现性,上述试验平行进行三次。10mLpH7. 0无菌氯化钠-蛋白陈缓冲液中，在的旋涡混合眼心414供试溪 不管在任何阶段出现的失败现象都需要记录，并进行原因分析，制定相关措施。并在报告完成前所有失败情况都得成功解决。如果无法解决，也需要在最终报告中说明，带格式的：标题3,两端对齐，缩进：悬挂缩进：2.7 字符，左-0.01字符，首行缩进：-2.7字符，行 距：单倍行距，制表位：2. 03字符，左对齐+不在3. 43字符带格式的：行距：多倍行距1.25字行）带格式的：缩进：首行缩进：0.74厘米，行距：多 倍行距1.25字行将启动新方案中重新确认（如需要）。8.0_试验结论

10、通过用金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽泡杆菌、白色念珠菌和黑曲霉作为测试， 对中心静脉导管、导丝、洞巾、透析纸进行初始污染菌检验方法适用性试验，可以得出以下 结论： -9.0_再确认周期久JL产品的组分发生改变可能影响检验结果时；92检验条件发生改变可能影响检验结果时，重新进行方法适用性试验。10.0，附件清单;附件1：培养基的适用性检查记录附件2：重复处理菌落记录附件3：计数方法适用性检查记录带格式的：标题1,首行缩进：-3.24字符，定义网 格后不调整右缩进，行距：单倍行距j带格式的：行距：多倍行距L25字行带格式的：缩进：首行缩进：0. 74厘米，行距：多 倍行距1.25字行一带格式

11、的：缩进：首行缩进：0. 74厘米，行距：多 倍行距1.25字行带格式的：缩进：左侧：0厘米，悬挂缩进：3. 24 字符，首行缩进：-3.24字符，行距：多倍行距 1.25字行，多级符号+级别：1 +编号样式：1, 2, 3,+起始编号：1 +对齐方式：左侧+对齐位 置：0厘米+制表符后于：1.02厘米+缩进位 置：1.2厘米1带格式的：字体：（中文）宋体j带格式的：字体：（中文）宋体检验H期检验依据中国药典2020版四部胰酪大豆陈琼脂培养基批号胰酪大豆陈液体培养基批号胰酪大豆月东琼脂对照培养基批号胰酪大豆陈液体琼脂对照培养基批号培养温度/时间菌株培养基铜绿假单胞菌金黄色葡萄球菌草芽胞杆菌胰酪

12、大豆陈琼脂培养基1#2#平均胰酪大豆陈琼脂对照培养基1#2#平均计算结果胰酪大豆陈液体培养基1#2#胰酪大豆膝液体对照培养基1#2#阴性对照组无菌生长，被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值在0.52范围内，且菌落形态大小与对照培养基上的菌落一致。被检液体培养基管与对照培养基管 比拟，试验菌应生长良好。检验人复核人日期日期in. 1 ，附件L培养基的适用性检查才带格式的：字体：（默认）+中文正文（宋体）， +中文正文（宋体），（中文）中文（中国）（中文）带格式的：字体：（默认）+中文正文（宋体）， 中文正文（宋体），（中文）中文（中国）（中文）带格式的：字体：（默认）+中

13、文正文（宋体）， 中文正文（宋体），（中文）中文（中国）（中文）带格式的：标题2,缩进：右侧：0. 37厘米, 、字符左0带格式的：行距：多倍行距1.25字行）带格式的：字体：（默认）+中文正文（宋体），（中文） +中文正文（宋体），（中文）中文（中国）Document No:VPBS062005 Rev.: 01Page 1 of 2检验日期检验依据中国药典2020版四部，胰酪大豆陈琼脂培养基批号沙氏葡萄糖琼脂培养基批号胰酪大豆陈琼脂对照培养基批号沙氏葡萄糖琼脂对照培养基批号胰酪大豆月东琼脂培养基培养温度/时间沙氏葡萄糖琼脂培养基培养温度/时间菌株培养基白色念珠菌黑曲霉胰酪大兄陈 琼脂培养基

14、1#2#平均胰酪大豆陈琼脂对照培养基1#2#平均计算结果沙氏葡萄糖琼脂培养基1#2#平均沙氏葡萄糖琼脂对照培养基1#2#平均计算结果阴性对照组无菌生长，被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的比值在 0.52范围内，且菌落形态大小与对照培养基上的菌落一致。检验人复核人II期II期而寂袤格!带格式的：行距：多倍行距 上包带格式表格Page 2 of 2Document No:VPBS062005 Rev.: 01中心静脉导管口导丝口洞巾透析纸名称产品批号检验日期检验依据GB/T 19973. 1 附录 C培养温度培养时间胰酪大豆陈琼脂培养基批号样品编号处理菌落数（cfu）菌落总数

15、 （cfu）第一次处理 回收率ABCD琼脂覆盖12345第一次处理的平均回收率： 校正因子：第一次处理最差回收率： 校正因子：备注培养结束后，对每个培养皿进行计数，透析纸计数结果需再乘以稀释倍数10检验人复核人日期日期10.2 ，附件2重复处理菌落记录表带格式的：字体：（默认）宋体，（中文）宋体带格式的：标题2,右侧：0 37厘米带格式的：字体：（默认）Arial,（中文）Arial带格式的：字体：（默认）宋体，（中文）宋体一Document No:VPBS062005Page 1 of 1带格式的：标题2,右侧：0. 37厘米10. 3 附件3：计数方法适用性检查记录中心静脉导管口导丝口洞巾

16、透析纸平行试验一口平行试验二口平行试验三名称产品批号检验日期检验依据中国药典2020版四部胰酪大豆陈琼脂培养基批号沙氏葡萄糖琼脂培养基批号细菌计数培养温度培养时间菌株铜绿假单胞菌金黄色葡萄球菌枯草芽泡杆菌试验组菌液对照组供试品对照组计算结果霉菌和酵母菌计数胰酪大豆陈琼脂培养基培养温度/时间温度：时间：沙氏葡萄糖琼脂培养基培养温度/时间温度：时间：菌株白色念珠菌黑曲霉白色念珠菌黑曲霉培养基胰酪大豆陈琼脂培养基沙氏葡萄糖琼脂培养基试验组菌液对照组供试品对照组计算结果阴性对照组无菌生长，试验组菌落数减去供试品对照组菌落数的值与菌液对照组菌落数的比值应在 0.52范围内。检验人复核人日期日期带格式的：

17、左，行距：多倍行距1.25字行，不对齐 到网格Document No:VPBS062005Page 1 of 1*0L0目的通过验证确定初始污染菌的检验方法及回收率，为日常初始污染菌检测提供支持。、带格式的：行距：多倍行距1.25字行带格式的：缩进：首行缩进：2.7字符，行距：单倍 行距，到齐到网格3M2.0范围及背景-H本确认方案适用于上海全安医疗器械初始污染菌检验的控制。，一一:带格式的：行距：多倍行距1.25字行带格式的：缩进：首行缩进：2.7字符，行距：多倍 行距1.25字行，到齐到网格便格式的：行距：多倍行距1.25字行4的3. 0参考文件编号4. 1. 1. 1 描述.一4. 1.

18、 1.2 SOP029过程确认程序*DI-T003初始污染菌检验规程GB/T19973.1-2015医疗器械的灭菌微生物学方法第1局部：产品上微生物总数的测麓中国药典四部2020版带格式的：缩进：首行缩进：0. 74厘米，制表位：不在1.71字符+ 21.6字符带格式的：两端对齐，无，缩进：首行缩进：0. 74厘米，无工程符号或编号，与下段不同页，制表位:21.6/符不在1.71字符+ 7. 97字符+带格式的：无，缩进：首行缩进：0. 74厘米，无项 目符号或编号，与下段不同页，制表位：不在1.71 字符+ 7. 97字符+ 21.6字符带格式的：缩进：首行缩进：0. 74座米，制表位: 不

19、在1.71字符+ 21.6字符带格式的：缩进：首行缩进：0. 74厘米，制表位: 不在1.71字符+ 21.6字符H设备/过程/系统识别4.1 方案简述本公司原材料及成品均需进行初始污染菌检测，本次验证选取其中代表性物料进行初始 污染菌方法学验证及回收率确实认。4.2 产品选择4. 2. 1根据GB/T 19973.L2015要求，需选择能代表产品材质的相关组件或部位进行验证，以确保验证的代表性。本公司现有9个注册产品，产品类别和主要材质信息见表lo 表1：产品类别和主要材质信息产品名称5. 1. 1. 1 注 册类别5. 1. 1.2主要组件材质：中心静脉导管套装三类中心静脉导管（TPE）穿

20、刺针（不锈钢）蓝空针（PP+橡胶）导丝（不锈钢）扩张器（PE）肝素帽（）洞巾（无纺布）包装盒（透析纸）带格式的：缩进：首行缩进：0. 74厘米，制表位: 不在1.71字符+ 21.6字符带格式的：居中，缩进：首行缩进：0字符，制表 位：不在1.71字符+ 21.6字符带格式的：缩进：首行缩进：0. 74厘米，行距：多 倍行距1.25字行带格式的：缩进：左侧：0厘米，悬挂缩进：6. 83 字符，行距：多倍行距1.25字行带格式的：缩进：首行缩进：0. 74厘米，行距：多 倍行距1.25字行带格式的：无，行距：多倍行距1.25字行,符号或编号，与下段不同页，制表位：不在 符无工程7. 97 字带格

21、式的：缩进：首行缩进：0. 74厘米，行距：多 倍行距1.25字行产品名称-k-4 注 册类别5. 1. 1.5主要组件材质：5. 1. 1.6 一次性使用有创血 压传感器三类灌注器(PC+PVC)灌注阀(PC+TPE) -压力腔、压力传感器 （PC、 TPE）液路（pvc）:三通阀、圆锥接头（PVC）堵帽、保护套（ABSX气管插管二类管身（PVC）气管切开插管二类管身（PVC）经皮扩张气管切开管套 件二类气管切开插管（PVC）注射器（PP+橡胶）：导丝（不锈钢）扩张器（PP）加强型气管插管二类管身（PVC+不锈钢） 支气管双腔插管套件二类管身(PVC)插管接头（HDPE）连接器（ABS）堵塞

22、帽（TPE）医用贴二类离型纸、无纺布、PU膜1 线面布、木基材、医用丙烯酸酯胶 占扣和泡棉一次性使用穿刺护理辅 助包二类手术衣、孔巾（无纺布）医用胶带（无纺布）：医用贴敷料剪（不锈钢）带格式的：无，行距：多倍行距1.25字行，无工程 符号或编号，与下段不同页，制表位：不在7.97字 :符带格式的：缩进：首行缩进：。74厘米，行距：多 倍行距1.25字行带格式的二居中，行距：多倍行距1.25字行i带格式的匚m便格式的：居中，行距：多倍行距1.25字行带格式的：行距：多倍行距L25字行1带格式的：行距：多倍行距1.25字行（带格式的1 j带格式的：行距：多倍行距1.25字行j带格式的1 j带格式的

23、1 :带格式的：行距：多倍行距1.25字行带格式的 带格式的：居中，行距：多倍行距1.25字行 ）4 2. 3综合表1所述信息，本公司产品“中心静脉导管套装”风险等级较高，且其组件涵盖 本公司所有产品材料类别。因此选择“中心静脉导管套装”作为本次验证的样品，相 关组件作为组件代表进行验证。具体组件信息见表2。产品代表.7组件代表5. 1. 1.8组件材质5. 1.1. 9中心静脉导管套装中心静脉导管高分子导丝不锈钢洞巾无纺布透析纸特卫强型格式的：居中，行距：多倍行距1.25字行|带格式的：两端对齐，行距：多倍行距1.25字行 1带格式的一而格式的巨：多倍行距1.25字行1I带格式的1二带格女的

24、：两端对齐，行距：多倍行距1.25字行1带格式的：下便格式的！行距：多倍行距1.25字行带格式的：丁带格式的匚亍（带格式的一带格主的:行距：多倍行距1.25字行；格格式的：居中，行距：多倍行距1.25字行（带格式的一希格式的：行距：多倍行距1.25字行 |带格式的：居中，行距：多倍行距1.25字行；（带格式的：丁带格式的！行距：多倍行距1.25字行；带格式的：居中，行距：多倍行距1.25字行1带格式的j带格式的17T带格式的：丁1带格式的：行距：多倍行距1.25字行；带格式的：行距：多倍行距1.25字行1带格式的：二带格式的：行距：多倍行距1.25字行4.检测仪器本次验证所需检测仪器信息见表3

25、o仪器编号5. 1. 1. 10仪器名称5. 1. 1. 11计量有效5. 1. 1. 12确认信息（带格式的（.（带格式的(1 （带格式的匚丁（带格式的j带格式的(序格式的：行距：多倍行距1.25字行期至5. 1. 1. 13符合J不 符合X带格式的：缩进：首行缩进：0. 74厘米，行距：多 倍行距1.25字行带格式的：缩进：首行缩进：0. 74厘米，行距：多 倍行距1.25字行带格式的：缩进：首行缩进：0. 74厘米，行距：多 倍行距1.25字行 -带格式的：缩进：首行缩进：0. 74厘米，行距：多 倍行距1.25字行带格式的：缩进：首行缩进：0. 74厘米，行距：多 倍行距1.25字行带

26、格式的：缩进：首行缩进：0. 74厘米，行距：多 倍行距1.25字行带格式的：缩进：首行缩进：0. 74厘米，行距：多 倍行距1.25字行一 一带格式的：缩进：首行缩进：0. 74厘米，行距：多 倍行距1.25字行带格式的：缩进：首行缩进：0. 74厘米，行距：多 倍行距1.25字行带格式的：缩进：首行缩进：0. 74厘米，行距：多 倍行距1.25字行检查人/日期复核人/日期.带格式的：缩进：首行缩进：0. 74厘米，行距：多 倍行距1.25字行酊05.0材料.一带格式的：行距：多倍行距1.25字行)本次验证所用培养基、菌种信息见表4。培养基信息-w带格式的：缩进：首行缩进：0. 74厘米，行

27、距：多 倍行距1.25字行培养基名称规格批号有效期是否通过适用 性试验带格式的：行距：多倍行距1.25字行:带格式的：行距：多倍行距1.25字行胰酪大豆豚液体培养基口是口许带格式的：缩进：首行缩进：0. 74厘米，行距：多 倍行距1.25字行:带格式的：行距：多倍行距1.25字行沙氏葡萄糖液体沙氏葡 萄糖琼脂培养基是喜带格式的：缩进：首行缩进：0. 74厘米，行距：多 倍行距1.25字行:带格式的：行距：多倍行距1.25字行j:带格式的：行距：多倍行距1.25字行带格式的：缩进：首行缩进：0. 74厘米，行距：多倍行距1.25字行:带格式的：行距：多倍行距1.25字行带格式的：行距：多倍行距1

28、.25字行胰酪大豆陈琼脂成品培 养基是相沙氏葡萄糖琼脂 成品培养基是臼 否胰酪大豆陈液体对照培 养基带格式的：缩进：首行缩进：0. 74厘米，行距：多 倍行距1.25字行1带格式的：行距：多倍行距1.25字行带格式的：缩进：首行缩进：0. 74厘米，行距：多 倍行距1.25字行国格式的：行距：多倍行距1.25字行带格式表格带格式的：缩进：首行缩进：0. 74厘米，行距：多 倍行距1.25字行:带格式的：行距：多倍行距1.25字行j沙氏葡萄糖琼脂对照培 养基- 11 1胰酪大豆陈琼脂对照培 养基生理盐水菌种信息:带格式的：行距：多倍行距1.25字行j带格式的：缩进：首行缩进：0. 74厘米，行距

29、：多 倍行距1.25字行1带格式的：行距：多倍行距1.25字行菌株名称菌种代码菌株代次菌株来源金黄色葡萄球菌、带格式的：行距：多倍行距1.25字行带格式的：缩进：首行缩进：0. 74厘米，行距：多 倍行距1.25字行铜绿假单胞菌带格式的：行距：多倍行距1.25字行j带格式的：缩进：首行缩进：0. 74厘米，行距：多 倍行距1.25字行带格式的：缩进：首行缩进：0. 74厘米，行距：多 倍行距1.25字行带格式的：缩进：首行缩进：0. 74厘米，行距：多倍行距1.25字行枯草芽抱杆菌白色念珠菌黑曲霉带格式的：缩进：首行缩进：0. 74厘米，行距：多 倍行距1.25字行检查人/日期复核人/日期带格

30、式的：缩进：首行缩进：0. 74厘米，行距：多 倍行距1.25字行带格式的：缩进：首行缩进：0. 74厘米，行距：多 倍行距1.25字行带格式的：缩进：首行缩进：0. 74厘米，行距：多 倍行距1.25字行带格式的：缩进：首行缩进：0. 74厘米，行距：多 倍行距1.25字行带格式的：缩进：首行缩进：0. 74厘米，行距：多 倍行距1.25字行入06. 0确认过程fij一试验环境本次无菌检验方法适用性试验中在环境洁净度10000级的阳性操作室的100级本次天 工作台及生物平安柜内生物平安柜上进行。试验环境温度应符合1828,相对湿 度应符合45%65%。、微生物限度室、超净工作台、阳性操作室及

31、生物平安柜的 工作台面应定期按照本公司文件进行悬浮粒子、沉降菌和换气次数的监测。口L2操作室应每周用0.设新洁尔灭或75%乙醇全面擦拭墙壁、设备及地面进行消毒。每次 实验前、后均应开启紫外灯消毒至少30min；在每次实验后，用0. K新洁尔灭或75% 乙醉溶液擦拭工作台面进行清场，所有实验用品经湿热灭菌后处理。口L3试验过程中应同时检查超净工作台单向流空气中的菌落数：每次操作时在超净工作台 面的左中右放置3个胰酪大豆陈琼脂培养基平板，翻开碟盖，试验结束后收集置30C 35培养48小时后取出检查，3只双碟上生长的平均菌落数应Wlcfu。6.2菌悬液制备6.2. 1将含有0.5菌量的铜绿假单胞菌、

32、枯草芽花杆菌、金黄色葡萄球菌、， 生抱梭菌、臼色念珠菌、黑曲霉用复溶液溶解后用0.9%无菌NaCl溶液10倍递增逐级 稀释为含菌量为0.5lX10：cfu/ml的菌悬液。接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、 枯草芽胞杆菌的新鲜培养物至胰酪大豆陈液体培养基中，3035培养1824小时； 接种白色念珠菌的新鲜培养物至沙氏葡萄糖液体培养基中，2025c培养2448小接种黑曲霉的新鲜培养物至沙氏葡萄糖琼脂培养基上，2025培养57天后，加入适宜的方法吸出独子悬液至无菌试管内，用含。.05% （阳1/叽）聚山梨能80的。.9%无菌 氯化钠溶液制成每1阳L含胞子数小于100 cfu的孩子悬液u6一3培养基适

33、用性检查6. 3. 1培养基接种a）取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽抱杆菌各0.1ml分别移入被检胰酪大豆陈琼 脂培养基中，均匀涂布（用涂布棒）菌悬液，直到培养基外表干燥。每一试验菌株制备 两个平皿。置3035,培养时间不超过3天。b）取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽胞杆菌各0 1ml分别移入被检胰酪大豆陈液 体培养基中。每一试验菌株制备两试管。置30、35,培养时间不超过3天。c）取白色念珠菌、黑曲霉各0. 1ml分别移入被检胰酪大豆陈琼脂培养基中，均匀涂布（川 涂布棒）菌悬液，直到培养基外表干燥。每一试验菌株制备两个平皿。置3035,培 养时间不超过5天。d）取白色念珠菌、黑曲

34、霉各0. 1ml分别移入被检沙氏葡萄糖琼脂培养基中，均匀涂布（用 棉拭子）菌悬液，直到培养基外表干燥。每一试验菌株制备两个平皿。置2025,培带格式的：行距：多倍行距1.25字行）带格式的：标题2,右侧：0. 37厘米，行距：单倍 行距，到齐到网格带格式的：标题3,两端对齐，缩进：悬挂缩进：2.7 字符，左-0.01字符，首行缩进：-2.7字符，行 距：单倍行距，到齐到网格，制表位：2. 03字符， 左对齐带格式的：标题2,右侧：0. 37厘米，行距：单倍 行距，到齐到网格带格式的：标题3,两端对齐，缩进：悬挂缩进：2.7 字符，左-0.01字符，首行缩进：-2.7字符，行 距：单倍行距，调整

35、中文与西文文字的间距，调整中 文与数字的间距，到齐到网格，制表位：2.03字符， 左对齐带格式的：（中文）中文（中国），上标带格式的：（中文）中文（中国），上标养时间不超过5天。带格式的：两端对齐，行距：多倍行距1.25字行， 编号+级别：1 +编号样式：a, b, c,+起始编 号：1 +对齐方式：左侧+对齐位置：0厘米+缩 进位置：0.74厘米，调整中文与西文文字的间距， 调整中文与数字的间距，到齐到网格带格式的：标题3,两端对齐，缩进：悬挂缩进：2.7 字符，左-0.01字符，首行缩进：-2.7字符，行 距：单倍行距，到齐到网格，制表位：2. 03字符， 左对齐+不在3. 43字符带格式

36、的：列出段落，缩进：左侧：0.5厘米，首行 缩进：0厘米，行距：单倍行距，编号+级别：1 + 编号样式:a, b, c, +起始编号：1 +对弄方式: 左侧+对齐位置：0.74厘米+缩进位置：1.48 厘米，到齐到网格，制表位：不在3.43字符带格式的：列出段落，首行缩进：0字符，行距：单 存行距,编号+级另1 +编号样式:a, b, c, +起始编号：1 +对齐方式：左侧+对齐位置：0. 74厘米+缩进位置：1.48厘米，到齐到网格，制表位：不在3.43字符0.45 dm滤膜全部过滤0.45 Mm滤膜全部过滤0.45Hm滤膜全部过滤0.45 Mm滤膜全部过滤，培养滤月,培养滤膜，培养滤膜一培

37、养滤膜e）所有被检培养基中不加菌液做阴性对照。f）用相对应的对照培养基代替被检培养基进行上述试验。结果判定a）阴性对照应无菌生长，被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基上的菌落平均数的 比值应在0.5、2范围内，R菌落形态大小与对照培养基上的菌落一致。被检液体培养基 管与对照培养基管比拟，试验菌应生长良好。b）相关结果记录在附件1中。校正因子计算通过预试验说明试验产品的生物负载非常低，依据GB/T 199739附录C的要求，选择 产品接种法。本次验证随即抽取5套经E0灭菌的无菌中心静脉导管套装，并根据组件 材质选择中心静脉导管、导丝、洞巾、透析纸做为组件代表进行试验。口T中心静脉导管、导丝、

38、洞巾的校正因子计算依据GB/4管9al附录G的要求，进行产品上生物负载方法确实认按表2所述选取 样品，采用反复洗脱的方法确认样品上微生物负载回收率本次脸证每种样品分别随b）将上述接种了菌悬液的中心静脉导管、导丝、5*5cm的洞巾分别投入装有100mL无 菌生理盐水的锥形瓶中，浸泡，手工振摇80次，制成1:100的供试液。投入装有10mL的无菌氯化钠蛋白陈缓冲溶液的试管中,用漩涡混合器（2800Mmin）, 振荡2分钟a）取1:100的供试液A,全部用0. 45 u m的微孔滤膜过滤后贴于无菌培养基上培养。 如此反复洗脱四次，或者洗脱到笫次的回收率到达90%以上，同法过滤后培养滤 膜。试验流程如

39、下：b）反复洗脱次后，将产品沥干，置于无菌培养皿内，浇注小于45的无菌培养基， 同上述滤膜一并置于适宜的温度下培养后计数。吩立阴性对照：取无菌生理盐水100ml,过滤后贴于无菌培养基上培养。UH.6.4. 1.3 结果计算培养结束后，对每个培养皿进行计数，并计算回收率及校正因子，计算公式如下:回收率（%）=洗脱液A菌落数菌落总数X1OO%带格式的：标题4,行距：单倍行距，到齐到网格, 制表位：不在3. 43字符带格式的：列出段落，缩进：左侧：0.5厘米，首行 缩进：0厘米，行距：单倍行距，编号+级别：1 + 编号样式：a, b, c,+起始编号：1 +对齐方式： 左侧+对齐位置：0. 74厘米

40、+缩进位置：1.48 厘米，到齐到网格，制表位：不在3.43字符带格式的：居中，缩进：首行缩进：0. 74厘米，行 距：多倍行距1.25字行校正因子（CF）=回收率（%）入46. 4. 2 透析纸的校正因子计算6.4.2. 1样品处理,丛整套b）透析纸采用擦拭法制备其供试液，擦拭时,将棉签头按在取样外表上,用力使其弯曲 与擦拭外表成45.,平稳而缓慢地擦拭取样外表,在向前移动的同时,将其从一边移 到另一边,擦拭过程应覆盖整个外表。翻转棉签,让棉签的另一面也进行擦拭，但与 前次擦拭移动方向垂直,每支棉签分别擦拭取样5*5cm,擦拭完成后,将棉签头剪下 放入装有10ml无菌生理盐水的试管中，浸泡，

41、手工振摇80次，制成1:10的供试 液。71-6 4. 2. 2 试验步骤a） 1:10的供试液，取1ml洗脱液A,倾注约45的琼脂培养基到平板放至凝固。如 此反复洗脱四次，或者洗脱到者次的回收率到达9096以到同法制备平板倾注后 培养。试验流程如下：带格式的：列出段落，行距：单倍行距？铜号+级 剜：1 +编号样式：a, b, c,+超始编号：1 + 对齐方式：左侧+对齐位置：（）.74厘米+缩进位 置：1.48厘米，制表位：不在3.43字符b）反复洗脱次后，将产品沥干，置于无菌培养皿内，浇注小于45c的无菌培养基，置于适宜的温度下培养后计数。由_阴性对照：取ml无菌生理盐水，置于无菌培养皿内，浇注小于45C的无菌培养 基置于适宜的温度下培养后计数。培养结束后，对每个培养皿进行计数，计数结果需乘以稀释倍数10,并计算回收率及校正因子，计算公式如下：回收率（）; 洗脱液A菌落数 X100%前落总数相格式的：居中，行距：多倍行距1.25字行校正因子CF）=100回收率（%）6. 4. 3相关结果记录在附件2中。取4种样品的平均回收率作为日常操作规程中执行的回收率值。平均回收率为。6.S计数方法适用性试验参考2020版药典 非无菌产品微生物限度检查：微生物计数法，.b）供试液从制备至加入检验用培养基,不得超过1小时。所加菌液的体积应