临床微生物学概论.ppt
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1、 临床微生物学概论临床微生物学概论(第一部分)(第一部分)n标本采集n细菌的分离培养和鉴定n抗菌药物敏感性试验主要内容主要内容正常菌群正常菌群 n在正常人体体表与外界相通的腔道:口腔、鼻咽腔、肠道、泌尿生殖道存在的多种微生物。n在机体免疫功能正常时对人体有益无害,属人类正常微生物群或环境中通常不致病的微生物,因以细菌和真菌为主,故称“正常菌群”。n正常菌群的存在是保持人体健康的重要因素n反映出在正常情况下,宿主、正常菌群和外界环境相互适应,保持平衡状态。病原微生物病原微生物n病原微生物病原微生物(pathogen):引起人类感染性疾病的微生物称为病原微生物病原微生物或致病微生物致病微生物。l细
2、菌:如痢疾志贺菌、肠杆菌科细菌、金黄色葡萄球菌、肠球菌属等l病毒:如单纯疱疹病毒、巨细胞病毒、乙型肝炎病毒等l真菌:如念珠菌属、曲霉属、毛霉属以及新型隐球菌等l其他:如支原体、衣原体、螺旋体临床常见的病原微生物临床常见的病原微生物n革兰阳性菌:革兰阳性菌:l葡萄球菌、溶血性链球菌、肠球菌n革兰阴性菌:革兰阴性菌:l需氧球菌:脑膜炎和淋病奈瑟球菌、卡他莫拉菌l需氧杆菌:不动杆菌、假单胞菌、产碱杆菌、嗜血杆菌l需氧和兼性厌氧:肠杆菌科细菌如大肠杆菌、肺杆、伤寒、志贺菌。l厌氧细菌:脆弱拟杆菌、痤疮丙酸杆菌等苛苛 养养 菌菌n定义:是一类生长需要特殊营养物质的细菌,与许多感染性疾病有关,其分离培养较
3、为困难。n营养要求高l肺炎链球菌:培养基内要加入血或血清l流感嗜血杆菌:X、V因子n比较娇嫩、对干燥、对寒冷的抵抗力均较弱。n培养条件:510CO2、35培养、24 48hn呼吸道其他快生长细菌的覆盖使分离率非常低厌厌 氧氧 菌菌n是一群专性厌氧,必须在无氧环境下才能生长繁殖的细菌。n根据能否形成芽胞,可将厌氧菌分成两大类。l厌氧芽胞梭菌属l无芽胞厌氧菌n厌氧芽胞梭菌属:破伤风梭菌、产气荚膜杆菌、肉毒梭菌、艰难梭菌n无芽胞厌氧菌:拟杆菌属、梭杆菌属、丙酸杆菌属、消化链球菌属等标本的采集标本的采集n抗菌药使用前n正确的部位n正确的时间n足够的数量n无菌的容器n特殊要求应在化验单上注明主要的临床标
4、本种类主要的临床标本种类标本类型标本类型n呼吸道标本l深部咳出痰、支气管灌洗液l咽拭子、鼻气管吸出液、气管吸出液n尿液 n血液 n脑脊液n伤口、脓液n其它体液l胸水、心包液、引流液、腹水、滑囊液标本的处理标本的处理n涂片光镜检查l诊断病原最基本和快速的方法:脑脊液l直接形态学检查l革兰染色或特殊染色n分离培养和鉴定n动物接种n免疫学检查痰标本痰标本主要病原菌:肺炎链球菌,克雷伯菌属,流感嗜血杆菌,金黄色葡萄球菌,铜绿主要病原菌:肺炎链球菌,克雷伯菌属,流感嗜血杆菌,金黄色葡萄球菌,铜绿假单胞菌。假单胞菌。非病原菌:酵母菌,草绿色链球菌,凝固酶阴性葡萄球菌非病原菌:酵母菌,草绿色链球菌,凝固酶阴
5、性葡萄球菌病人需用水清洁口腔,深咳肺部痰,不要唾液#1进行革兰染色以评价标本是否适于接种。向临床医生尽快报告重要的革兰染色结果#2#3好:很少扁平上皮细胞奥普托欣纸片CO2中孵育48小时#4接种巧克力平皿,血平皿和麦康凯平皿#5拒绝:大量 扁平上皮细胞肺炎克雷伯菌对重要病原菌进行鉴定&药敏试验金黄色葡萄球菌肺炎链球菌胆汁溶菌奥普托欣流感嗜血杆菌革兰染色评估呼吸道标本是否合格?革兰染色评估呼吸道标本是否合格?有代表性的好标本有代表性的好标本中性粒细胞多中性粒细胞多白细胞25/低倍视野鳞状上皮细胞少鳞状上皮细胞少 10/低倍视野痰标本痰标本10鳞状上皮细胞鳞状上皮细胞/每低倍视野每低倍视野=拒收拒
6、收#1bab尿培养尿培养主要病原菌:大肠埃希菌,变形杆菌,克雷伯菌,其他主要病原菌:大肠埃希菌,变形杆菌,克雷伯菌,其他革兰阴性杆菌,肠球菌,腐生葡萄球菌,纯的金葡球菌革兰阴性杆菌,肠球菌,腐生葡萄球菌,纯的金葡球菌#2接种血平皿和麦康凯平皿#3空气孵育空气孵育24小时小时收集中段尿收集中段尿a#4菌落计数菌落计数0.001ml接种环接种环若若 2 种菌生长,对种菌生长,对每种菌进行鉴定和药每种菌进行鉴定和药敏试验;敏试验;若若2种菌生长,报种菌生长,报告告“混合菌群混合菌群”#5注意注意:革兰阴性杆菌在血平革兰阴性杆菌在血平皿和麦皿和麦 康凯平皿上均康凯平皿上均生长良好生长良好革兰阳性球菌仅
7、在血革兰阳性球菌仅在血平皿上生长良好平皿上生长良好GNRGNR#675,000 cfu/ml50,000 cfu/ml100,000 cfu/mlGPCGPC脓,吸取物或组织标本脓,吸取物或组织标本主要病原菌:金葡菌,化脓链球菌,其他主要病原菌:金葡菌,化脓链球菌,其他溶血链球菌,绿脓,其他革兰阴性杆菌。溶血链球菌,绿脓,其他革兰阴性杆菌。非病原菌:凝固酶阴性葡萄球菌,少量的棒状革兰阳性杆菌非病原菌:凝固酶阴性葡萄球菌,少量的棒状革兰阳性杆菌用酒精消毒伤口周围皮肤用酒精消毒伤口周围皮肤最好的标本是吸取物和组织最好的标本是吸取物和组织最差的标本是拭子最差的标本是拭子#1接种血平皿和麦康凯平皿接种
8、血平皿和麦康凯平皿如果是吸取物或组织,进行如果是吸取物或组织,进行革兰染色,将重要结果通知革兰染色,将重要结果通知临床医生临床医生#2#3铜绿假单胞菌铜绿假单胞菌中孵育中孵育48小时小时#4对对1或或2种种重要病原菌进行鉴定重要病原菌进行鉴定&药药敏试验敏试验金黄色葡萄球菌为主金黄色葡萄球菌为主溶血链球菌溶血链球菌肺炎克雷伯菌肺炎克雷伯菌混合的混合的2种肠道革兰阴性杆菌:种肠道革兰阴性杆菌:2种均报种均报告;告;当检出当检出3种或更多病原菌时,报告种或更多病原菌时,报告“混合菌丛混合菌丛”并描述性列出假单胞菌,金葡菌,变形杆菌,肠并描述性列出假单胞菌,金葡菌,变形杆菌,肠道革兰阴性杆菌等。道革
9、兰阴性杆菌等。#5血培养血培养主要病原菌:沙门菌、布氏杆菌、其他革兰阴性杆菌、金葡菌、肺链、流感主要病原菌:沙门菌、布氏杆菌、其他革兰阴性杆菌、金葡菌、肺链、流感以下菌应视为非病原菌以下菌应视为非病原菌(除非除非1次血培养分离出次血培养分离出):芽孢杆菌属、凝固酶阴性葡萄球菌、草绿色链球菌、棒状革兰阳性杆菌芽孢杆菌属、凝固酶阴性葡萄球菌、草绿色链球菌、棒状革兰阳性杆菌从两个独立的皮肤位点采血,每瓶从两个独立的皮肤位点采血,每瓶采集采集10ml#135 自动化仪器中孵育自动化仪器中孵育5天天每天检查浊度并翻转培养瓶每天检查浊度并翻转培养瓶#2#318小时后传进行次代培养小时后传进行次代培养当培养
10、瓶显示细菌生长时进行当培养瓶显示细菌生长时进行革兰染色和传代培养革兰染色和传代培养革兰阳性球菌革兰阳性球菌接种血接种血平皿奥普托欣试验平皿奥普托欣试验革兰阴性杆菌革兰阴性杆菌接种血平皿和接种血平皿和麦康凯平皿麦康凯平皿革兰阴性双球菌或球杆革兰阴性双球菌或球杆菌菌接种巧克力平皿和接种巧克力平皿和血平皿血平皿CO2中孵育中孵育72h#5#4将重要的革将重要的革兰染色结果兰染色结果尽快通知临尽快通知临床医生床医生对重要病原菌对重要病原菌进行鉴定进行鉴定和药敏试验和药敏试验#6例如:肺炎克雷伯菌例如:肺炎克雷伯菌例如:肺炎链球菌例如:肺炎链球菌细菌的分离培养细菌的分离培养标本类型标本类型5%脱纤维脱纤
11、维羊血平皿羊血平皿巧克力巧克力 平皿平皿中国兰中国兰平皿平皿血培养瓶血培养瓶厌氧厌氧培养瓶培养瓶呼吸道标本尿液标本(菌落计数)血液标本其他无菌体腔标本细菌的分离培养细菌的分离培养n按实验室常规接种于培养基n培养条件:l35 24-48小时或l5%-10%CO2 35 24-48小时l厌氧培养具有特殊性状的细菌具有特殊性状的细菌葡萄球菌铜绿假单胞菌溶血性链球菌具有特殊性状的细菌具有特殊性状的细菌矛头状自溶现象芽胞细菌的鉴定细菌的鉴定n表型分类法l以细菌的形态、结构、生理、生化和血清学反应等细菌的表型为主要依据n分子生物学技术l基因诊断依据分析DNA的碱基组成,基因片段的大小,与比较DNA的同源性
12、关系,从而分析 细菌DNA的亲缘关系。流感嗜血杆菌的卫星现象流感嗜血杆菌的卫星现象菌种鉴定菌种鉴定鉴定到种鉴定到种n根据纯分细菌的形态、菌落特征,特征性的生化反应,选择合适的细菌鉴定系统。n如手工的API条和半自动的ATBl肠杆菌科细菌:API 20El非发酵革兰阴性杆菌:API 20NEl葡萄球菌属:Slidex Staph Plus、API Staphl链球菌属:Slidex Strepto Kit、API Strepl奈瑟菌属、嗜血杆菌属:API NHl厌氧菌:API 20A菌种鉴定菌种鉴定鉴定到种鉴定到种n自动细菌鉴定/药敏仪lVITEK 2 CompactlBD Phoenix Sy
13、stem lMicroScanlBIOMIC V3微生物鉴定系统lBIOFOSUN微生物鉴定系统n鉴定到种l葡萄球菌?l金黄色葡萄球菌!细菌鉴定和药敏试验快速化是未来的趋势细菌鉴定和药敏试验快速化是未来的趋势张嵘教授课件内容张嵘教授课件内容张嵘教授课件内容张嵘教授课件内容CTX-M-14(+)生理盐水头孢噻肟CTX-M-14(-)质谱检测黏菌素耐药鲍曼不动杆菌质谱检测黏菌素耐药鲍曼不动杆菌Clinical Infectious Diseases 2015;60(9):1295303敏感株耐药株张嵘教授课件内容抗菌药物敏感性试验抗菌药物和药敏试验抗菌药物和药敏试验n抗菌药物是指具有杀菌或抑菌活性
14、的抗生素和化学合成药物。前者是真菌、放线菌、细菌等的代谢产物,后者是经化学改造的半合成抗生素和化学合成药物。n测定抗菌药物在体外对病原微生物有无抑菌或杀菌作用的方法称为药物敏感性试验(Antimicrobial Susceptibility Testing,AST),简称药敏试验。抗菌药物敏感性试验的意义抗菌药物敏感性试验的意义n无法推测敏感或耐药n病人个体化治疗指南n提供经验治疗的依据n建立当地或国家处方政策n监测流行病学趋势n监测细菌耐药性n测试新抗菌药物的抗菌活性 n检测新耐药机制的方法抗菌药物敏感性试验分类抗菌药物敏感性试验分类n定量方法(MIC,mg/L)l琼脂稀释法l肉汤稀释法lE
15、-testn定性方法(SIR)l纸片扩散法n自动化仪器稀释法的定义稀释法的定义n以一定浓度的抗菌药与含有被试菌株的培养基进行一系列对倍数稀释,经培养后肉眼观察未见细菌生长管内所含的最低药物浓度为该药对该试验菌的最低抑菌浓度(minimal inhibitory concentration,MIC)n稀释法的最大优点是可以精确测得药物最低抑菌浓度,但需耗费较多材料、人力和时间。稀释法的分类稀释法的分类n稀释法药敏试验因介质不同可分为液体稀释法和琼脂稀释法。n因容器不同分为试管稀释法和微量稀释法,或称常量法和微量。l前者使用无菌的13mm100 mm试管,每一浓度抗菌药的量至少为1ml;l后者使用
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