临床免疫学和病原学检查七年制.ppt

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1、临床常用免疫学和病原学检查临床常用免疫学和病原学检查福建医科大学附属协和医院福建医科大学附属协和医院 随着现代免疫学理论和技术的飞速发展，临床免疫学的检测项目也日趋增多。某些检测项目可为临床诊断、鉴别诊断、疗效观察和预后判断提供特异的和敏感的信息，以下就一些常用的免疫学检查作一些介绍。第七章第七章 临床常用免疫学临床常用免疫学体液和细胞免疫体液和细胞免疫病毒性肝炎血清标志物病毒性肝炎血清标志物感染免疫感染免疫肿瘤标志物肿瘤标志物自身免疫自身免疫第一节第一节 体液免疫检查体液免疫检查一、免疫球蛋白的检测二、血清M蛋白检测三、血清补体检测一、免疫球蛋白的检测一、免疫球蛋白的检测免疫球蛋白（免疫球蛋

2、白（immunoglobulin,Ig）：指）：指具具有抗体活性和有抗体活性和/或抗体样结构或抗体样结构的球蛋白，由的球蛋白，由浆细胞产生，存在于机体的血液、体液、浆细胞产生，存在于机体的血液、体液、外分泌液和某些细胞的膜上。外分泌液和某些细胞的膜上。按其重链性质分为按其重链性质分为IgG、A、M、D和和E五大五大类类，在血清中，在血清中IgG、A、M的含量为的含量为g/L水平，水平，而而IgD、IgE和血清以外的和血清以外的IgG、A、M仅为仅为mg/L，因此不同类的免疫球蛋白需要选择，因此不同类的免疫球蛋白需要选择不同敏感度的方法。不同敏感度的方法。免疫球蛋白常用的检测方法免疫球蛋白常用的

3、检测方法 1单向琼脂扩散法：单向琼脂扩散法：2免疫比浊法：免疫比浊法：3酶联免疫吸附法（酶联免疫吸附法（ELISA法）：法）：Ig检测的临床意义检测的临床意义1 1低低低低IgIg血症血症血症血症（1 1）先天性低）先天性低）先天性低）先天性低IgIg血症血症血症血症 体液免疫缺陷和联合免疫缺陷。如先天性无体液免疫缺陷和联合免疫缺陷。如先天性无体液免疫缺陷和联合免疫缺陷。如先天性无体液免疫缺陷和联合免疫缺陷。如先天性无丙种球蛋白血症；先天性丙种球蛋白血症；先天性丙种球蛋白血症；先天性丙种球蛋白血症；先天性IgAIgA缺乏症患者容易反复缺乏症患者容易反复缺乏症患者容易反复缺乏症患者容易反复呼吸道

4、感染、呼吸道感染、呼吸道感染、呼吸道感染、IgGIgG缺乏易患化脓性感染，而缺乏易患化脓性感染，而缺乏易患化脓性感染，而缺乏易患化脓性感染，而IgMIgM缺缺缺缺乏易引起革兰氏阴性杆菌败血症乏易引起革兰氏阴性杆菌败血症乏易引起革兰氏阴性杆菌败血症乏易引起革兰氏阴性杆菌败血症（2 2）获得性低获得性低获得性低获得性低IgIg血症血症血症血症 淋巴肉瘤、肾病综合征、中毒性骨髓瘤等可淋巴肉瘤、肾病综合征、中毒性骨髓瘤等可淋巴肉瘤、肾病综合征、中毒性骨髓瘤等可淋巴肉瘤、肾病综合征、中毒性骨髓瘤等可造成血清中造成血清中造成血清中造成血清中IgIg明显降低。明显降低。明显降低。明显降低。Ig检测的临床意义

5、检测的临床意义2 2高高高高IgIg血症血症血症血症 （1 1）非特异性免疫球蛋白增高症）非特异性免疫球蛋白增高症）非特异性免疫球蛋白增高症）非特异性免疫球蛋白增高症 慢性细菌感染、结核、慢性细菌感染、结核、慢性细菌感染、结核、慢性细菌感染、结核、慢支、风湿时慢支、风湿时慢支、风湿时慢支、风湿时IgGIgG升升升升高；急性感染早期可高；急性感染早期可高；急性感染早期可高；急性感染早期可IgMIgM升高；自身免疫性疾病、升高；自身免疫性疾病、升高；自身免疫性疾病、升高；自身免疫性疾病、胶原病、类风湿、关节炎、胶原病、类风湿、关节炎、胶原病、类风湿、关节炎、胶原病、类风湿、关节炎、SLESLE可见

6、可见可见可见IgGIgG、A A、MM均升高，肝病和肝硬化时可呈现均升高，肝病和肝硬化时可呈现均升高，肝病和肝硬化时可呈现均升高，肝病和肝硬化时可呈现IgGIgG、A A升高。升高。升高。升高。（2 2）单一免疫球蛋白增高症）单一免疫球蛋白增高症）单一免疫球蛋白增高症）单一免疫球蛋白增高症Ig检测的临床意义检测的临床意义 3 3IgD IgD 妊娠末期和吸烟者含量升高。妊娠末期和吸烟者含量升高。妊娠末期和吸烟者含量升高。妊娠末期和吸烟者含量升高。IgDIgD骨髓瘤骨髓瘤骨髓瘤骨髓瘤 患者血清患者血清患者血清患者血清IgDIgD水平比正常人高水平比正常人高水平比正常人高水平比正常人高100001

7、0000倍，是唯倍，是唯倍，是唯倍，是唯 一明确可作为确诊的证据。一明确可作为确诊的证据。一明确可作为确诊的证据。一明确可作为确诊的证据。4 4血清总血清总血清总血清总IgE IgE 对特异性疾病的诊断、治疗和探对特异性疾病的诊断、治疗和探对特异性疾病的诊断、治疗和探对特异性疾病的诊断、治疗和探 索发病机制有重要意义。寄生虫感染时索发病机制有重要意义。寄生虫感染时索发病机制有重要意义。寄生虫感染时索发病机制有重要意义。寄生虫感染时IgEIgE升升升升 高。特异性哮喘、过敏性鼻炎等患者血清中高。特异性哮喘、过敏性鼻炎等患者血清中高。特异性哮喘、过敏性鼻炎等患者血清中高。特异性哮喘、过敏性鼻炎等患

8、者血清中 IgE IgE含量升高与发病和缓解呈平行关系。含量升高与发病和缓解呈平行关系。含量升高与发病和缓解呈平行关系。含量升高与发病和缓解呈平行关系。二、血清M蛋白检测M蛋白（M protein）或称 单克隆免疫球蛋白（monoclonal immunoglobulinsmonoclonal immunoglobulins）：一种由单克隆B淋巴细胞异常增生时产生的，具有相同结构和电泳迁移率的免疫球蛋白分子或其分子片段（如轻链、重链等），一般不具有抗体活性。见于多发性骨髓瘤、巨球蛋白血症、重链病、半分子病、恶性淋巴瘤、良性M蛋白血症。三、补体的检测补体（complement）：人或动物血清中的

9、一组具有酶活性的蛋白质，在机体免疫系统中发挥抗感染和免疫调节的作用，也参与免疫病理反应。补体常用检测方法和临床意义补体常用检测方法和临床意义1 1血清总补体溶血活性（血清总补体溶血活性（血清总补体溶血活性（血清总补体溶血活性（CH50CH50）测定：）测定：）测定：）测定：主要反应补体经典激活途径的溶血功能，其结果主要反应补体经典激活途径的溶血功能，其结果与与C1-C9C1-C9各组分的量和活性均有关，但非完全相各组分的量和活性均有关，但非完全相关。不能测定补体蛋白的绝对值，也不能测定备关。不能测定补体蛋白的绝对值，也不能测定备解素系统中的成分。解素系统中的成分。临床意义：临床意义：临床意义：

10、临床意义：CH50CH50增高见于急性肾炎、组织损伤、恶增高见于急性肾炎、组织损伤、恶性肿瘤等；而降低见于急性肾小球肾炎、性肿瘤等；而降低见于急性肾小球肾炎、SLESLE活活动期、类风关、亚急性细菌性心内膜炎、动期、类风关、亚急性细菌性心内膜炎、严重肝严重肝病尤其是肝坏死病尤其是肝坏死CH50CH50降低甚至测不出来，有助于降低甚至测不出来，有助于判断肝受损的程度。判断肝受损的程度。补体常用检测方法和临床意义补体常用检测方法和临床意义2补体成分C3、C4的测定 （1 1）C3C3、C4C4含量测定：单向琼脂扩散法和免含量测定：单向琼脂扩散法和免 疫比浊法疫比浊法 （2 2）C3C3、C4C4的

11、活性测定：免疫溶血法的活性测定：免疫溶血法 （3 3）临床意义：）临床意义：C3C3含量降低常见于反复感染、含量降低常见于反复感染、急性肾小球肾炎、免疫复合物病和膜增生急性肾小球肾炎、免疫复合物病和膜增生 性肾小球肾炎等。性肾小球肾炎等。C4C4含量降低常见于先天含量降低常见于先天 性补体性补体C4C4缺陷、遗传性血管水肿发作和原缺陷、遗传性血管水肿发作和原 发性混合性冷球蛋白血症患者发性混合性冷球蛋白血症患者 第二节 细胞免疫检查 人体的淋巴细胞分为T、B和NK等细胞群，它们又可以分为若干个亚群，各有其特异的表面标志和功能。临床上各种免疫疾病均可出现不同群淋巴细胞数量和功能上的变化，对它们进

12、行检测可以判断细胞免疫功能。一、T淋巴细胞的检测（一）、数量的检测：1花环形成实验 2T细胞分化抗原测定：免疫荧光法 和流式细胞检测法（二）、功能的检测：淋巴细胞转化试验 1 形态学方法 23H-TdR掺入法（三）（三）T淋巴细胞的检测临床意义淋巴细胞的检测临床意义 1 1降低：见于免疫缺陷性疾病，如恶性肿瘤、某些降低：见于免疫缺陷性疾病，如恶性肿瘤、某些 病毒感染、大面积烧伤等。病毒感染、大面积烧伤等。2 2升高：见于甲亢、甲炎、重症肌无力、慢活升高：见于甲亢、甲炎、重症肌无力、慢活 肝、肝、SLESLE活动期和移植排斥反应等。活动期和移植排斥反应等。3 3CD3CD3降低：见于自身免疫性疾

13、病，如降低：见于自身免疫性疾病，如SLESLE、类风、类风 湿关节炎等；湿关节炎等；CD4 CD4降低：见于恶性肿瘤、爱滋病、遗传性免疫降低：见于恶性肿瘤、爱滋病、遗传性免疫缺陷症、应用免疫抑制剂等。缺陷症、应用免疫抑制剂等。CD4/CD8CD4/CD8减低减低 常见于爱滋病，而在器官移植时常见于爱滋病，而在器官移植时 CD4/CD8 CD4/CD8增高增高 预示可能发生排斥反应。预示可能发生排斥反应。二、B淋巴细胞的检测（一）数量的检测（一）数量的检测 1 1B B细胞膜表面免疫球蛋白测定：细胞膜表面免疫球蛋白测定：免疫荧光法和免疫荧光法和 (SmIg)(SmIg)流式细胞检测法流式细胞检测

14、法 2 2B B细胞分化抗原检测：细胞分化抗原检测：（二）功能的检测（二）功能的检测 1 1溶血空斑试验溶血空斑试验 2 2抗体的检测抗体的检测（三）临床意义（三）临床意义 1 1降低降低 见于各种原发性和继发性免疫缺陷病见于各种原发性和继发性免疫缺陷病 2 2升高升高 见于淋巴增殖性疾病如慢粒和多毛细胞白见于淋巴增殖性疾病如慢粒和多毛细胞白 血病等。血病等。第三节 感染免疫检测 病原体（细菌、病毒、立克次体、寄生虫等）及其代谢产物刺激人体免疫系统，产生相应的免疫产物，后者进入血液或其他体液当中；这些产物可利用凝集试验、补体结合试验、ELISA、免疫荧光和放射免疫法等免疫学手段进行检测，从而辅

15、助疾病的诊断和判断机体的免疫状态。一、肝炎标志物的检测：1甲型肝炎病毒标志物的检测（1）甲型肝炎病毒抗原和RNA测定：ELISA和RT-PCR法（2）甲型肝炎病毒抗体测定：ELISA（3）甲型肝炎病毒抗体IgM阳性表明机体 正在感染甲肝，它是早期诊断甲肝的 特异性指标。而IgG阳性提示既往感 染，可作为流行病学调查的指标。HAV 病毒图谱衣壳单链RNA甲肝血清转换图2乙型肝炎病毒标志物的检测（1）乙肝两对半的检查：ELISA（2）乙肝病毒DNA的测定：PCR法和斑 点杂交试验（3）临床意义：乙肝两对半的检测反应 机体对乙肝病毒的免疫 状态，而乙肝病毒DNA 是诊断乙型肝炎的佐证。乙肝病毒图谱D

16、aneDane颗粒颗粒DNA多聚酶HBsAgHBcAgHBeAg双链DNA一般机体感染HBV后产生相应的免疫反应，形成三种不同的抗原抗体系统。乙肝病毒表面抗原乙肝病毒表面抗原（hepatitis B virus surface antigen,hepatitis B virus surface antigen,HBsAgHBsAg）乙肝病毒表面抗体乙肝病毒表面抗体（hepatitis B virus surface antibody,hepatitis B virus surface antibody,HBsAbHBsAb）乙肝病毒乙肝病毒e e抗原抗原（hepatitis B virus e

17、 antigen,hepatitis B virus e antigen,HBeAgHBeAg）乙肝病毒乙肝病毒e e抗体抗体（hepatitis B virus e antibody,hepatitis B virus e antibody,HBeAb/HBeAb/anti-anti-HBeHBe）乙肝病毒核心抗原乙肝病毒核心抗原（hepatitis B virus core antigen,hepatitis B virus core antigen,HBcAgHBcAg）乙肝病毒核心抗体乙肝病毒核心抗体（hepatitis B virus core antibody,hepatitis

18、B virus core antibody,HBcAbHBcAb）乙肝血清转换图 HBsAg HBsAb HBeAg HBeAb HBcAb HBsAg HBsAb HBeAg HBeAb HBcAb 1 1 +-+-携带者携带者 2 2 +-+-+-+-急性感染早期急性感染早期,HBV,HBV复制活跃复制活跃 3 3 +-+-+-+-+急性或慢性感染急性或慢性感染,复制活跃复制活跃 4 4 +-+-+急性或慢性感染急性或慢性感染,复制减弱或停止复制减弱或停止 5 5 -+-+既往感染既往感染,未出现表抗未出现表抗,窗口期窗口期 6 6 -+-+既往感染既往感染,未出现表抗未出现表抗,窗口期窗

19、口期 7 7 -+-+-+-+恢复期恢复期 8 8 -+-+-+-+恢复期恢复期 9 9 -+-+-病后或接种疫苗后获得性免疫病后或接种疫苗后获得性免疫 10 10 +-+-+不同亚型的感染不同亚型的感染3丙型肝炎病毒标志物的检测（1 1）丙型肝炎病毒）丙型肝炎病毒RNARNA测定：斑点杂交法和测定：斑点杂交法和 RT-PCR RT-PCR法法（2 2）丙型肝炎病毒抗体测定：）丙型肝炎病毒抗体测定：ELISAELISA和和RIARIA法法（3 3）急性丙肝患者，发病后）急性丙肝患者，发病后1-41-4周丙型肝炎病周丙型肝炎病 毒抗体毒抗体IgMIgM即可阳性，可持续即可阳性，可持续1-41-4

20、周。周。6 6个月痊愈者，抗个月痊愈者，抗-HCVIgM-HCVIgM转阴，反之将转转阴，反之将转 为为慢性丙型肝炎；慢性丙型肝炎；而而IgGIgG阳性表明已有阳性表明已有HCVHCV感感染，输血后肝炎有染，输血后肝炎有80%-90%80%-90%患者抗患者抗-HCVIgG-HCVIgG阳性。阳性。4 4丁型肝炎病毒标志物的检测丁型肝炎病毒标志物的检测(缺陷缺陷RNARNA病毒）病毒）（1 1）丁型肝炎病毒抗原和）丁型肝炎病毒抗原和RNARNA测定：测定：ELISA ELISA 和和 RT-PCRRT-PCR法法 （2 2）丁型肝炎病毒抗体测定：）丁型肝炎病毒抗体测定：ELISAELISA （

21、3 3）抗）抗-HDVIgG-HDVIgG只能在只能在HBsAgHBsAg阳性的血清中阳性的血清中检测到，是诊断丁型肝炎的可靠指标，抗检测到，是诊断丁型肝炎的可靠指标，抗-HDV IgMHDV IgM出现较早，可用于早期诊断。出现较早，可用于早期诊断。5 5戊型肝炎病毒标志物的检测：戊型肝炎病毒标志物的检测：ELISAELISA检测抗检测抗体体6 6庚型肝炎病毒标志物的检测：庚型肝炎病毒标志物的检测：ELISAELISA检测抗检测抗体，也多见于输血后感染。体，也多见于输血后感染。小结肝炎病毒的检测方法:1.抗原的检测:ELISA法或免疫荧光法2.抗体的检测:ELISA法或放免法3.基因的检测:

22、DNA病毒用PCR法4.RNA病毒用RT-PCR法二、细菌感染的免疫检测（一）血清抗链球菌溶血素“O”试验（二）伤寒和副伤寒沙门菌免疫测定（三）结核分枝杆菌抗体（一）血清抗链球菌溶血素“O”试验 链球菌溶血素链球菌溶血素链球菌溶血素链球菌溶血素“O”O”是一种是一种是一种是一种A A群溶血性链球菌群溶血性链球菌群溶血性链球菌群溶血性链球菌的毒素，属蛋白质，能溶解红细胞，杀伤白细胞和的毒素，属蛋白质，能溶解红细胞，杀伤白细胞和的毒素，属蛋白质，能溶解红细胞，杀伤白细胞和的毒素，属蛋白质，能溶解红细胞，杀伤白细胞和血小板，它具有抗原性，可使人产生相应抗体，称血小板，它具有抗原性，可使人产生相应抗体

23、，称血小板，它具有抗原性，可使人产生相应抗体，称血小板，它具有抗原性，可使人产生相应抗体，称抗链球菌溶血素抗链球菌溶血素抗链球菌溶血素抗链球菌溶血素“O”O”（anti-streptolysin anti-streptolysin“O”O”,ASO,ASO），也叫抗，也叫抗，也叫抗，也叫抗OO或或或或ASOASO。一般当机体受到一般当机体受到一般当机体受到一般当机体受到A A群溶血性链球菌感染群溶血性链球菌感染群溶血性链球菌感染群溶血性链球菌感染2-32-3周，周，周，周，血清中出现抗血清中出现抗血清中出现抗血清中出现抗OO，这种抗体滴度直至病愈后数月到，这种抗体滴度直至病愈后数月到，这种抗体

24、滴度直至病愈后数月到，这种抗体滴度直至病愈后数月到半年才下降至正常水平。半年才下降至正常水平。半年才下降至正常水平。半年才下降至正常水平。检测方法检测方法检测方法检测方法：胶乳凝集法和：胶乳凝集法和：胶乳凝集法和：胶乳凝集法和ELISAELISA临床意义：抗“O”升高（滴度大于1：400）表示近期内有A群溶血性链球菌感染。常见于活动性风湿热、风湿性关节炎、急性肾小球肾炎、急性上感、皮肤和软组织感染等。抗体有高滴度逐渐下降时，可认为疾病缓解，抗体恒定在高水平时，多为活动期。（二）伤寒和副伤寒沙门菌免疫测定 人体被伤寒沙门菌感染后，该菌体“O”抗原和鞭毛“H”抗原，刺激人体产生相应抗体。副伤寒的鞭

25、毛“H”抗原分别为甲（A）乙（B）丙（C）三型，它们均有各自的菌体抗原和鞭毛抗原，这些抗原也可在人体内刺激机体产生各自相应的抗体。1肥达氏反应（Widal reaction，WR）WR是利用伤寒和副伤寒沙门菌液为抗原，检测病人血清中有无相应抗体的一种凝集试验。参考值:直接凝集法 “O”1：80 伤寒“H”1：160；副伤寒 A、B、C都1：80。临床意义 WR阳性一般出现在伤寒发病后一周，阳性率10%；第二周上升为60-70%；第四周可达90%以上。单份血清抗体效价“O”大于1：80及“H”大于1：160者有诊断意义；若动态观察，WR持续超过参考值或较原效价升高4倍以上者更有价值。2伤寒和副伤

26、寒沙门菌抗体IgM测定参考值:ELISA法 正常人为阴性或滴度1：20对诊断伤寒带菌者也有意义。它的敏感性和特异性均优于肥达氏反应。3伤寒和副伤寒沙门菌可溶性抗原测定 伤寒沙门菌在体内繁殖、破裂，患者血及尿液内出现伤寒沙门菌抗原。用相应的抗血清致敏胶乳，与患者血及尿液中伤寒沙门菌可溶性抗原反应，可产生凝集。参考值：胶乳凝集法为阴性 临床意义：阳性对确诊沙门菌感染更有重要 意义（三）结核分枝杆菌结核分枝杆菌抗体结核分枝杆菌DNA三、其他病毒感染免疫检测（一）柯萨奇病毒的检测（二）轮状病毒的检测（三）EB病毒的检测（一）柯萨奇病毒的检测：柯萨奇病毒是一种单链的小柯萨奇病毒是一种单链的小RNARNA

27、病毒，可分为病毒，可分为A A、B B两群，两群，A A群又有群又有2424个血清型，个血清型，B B群则有群则有6 6个个血清型。血清型。检测方法检测方法 抗体：间接血凝法、抗体：间接血凝法、IFAIFA法或法或 ELISAELISA RNA RNA：RT-PCRRT-PCR法法临床意义临床意义 IgMIgM阳性提示现症感染，阳性提示现症感染，IgGIgG则为既往则为既往感染，感染，RNARNA阳性对柯萨奇病毒感染的诊断更有阳性对柯萨奇病毒感染的诊断更有意义，也提示现症感染。意义，也提示现症感染。A A群主要引起无菌性脑膜炎、新生儿肺炎、皮群主要引起无菌性脑膜炎、新生儿肺炎、皮疹和普通的感冒

28、；疹和普通的感冒；B B群则主要引起心肌炎、无菌性脑膜炎、上感群则主要引起心肌炎、无菌性脑膜炎、上感和成人的肺炎。和成人的肺炎。（二）轮状病毒的检测：轮状病毒属胃肠病毒科，是双链RNA病毒，是引起人病毒性胃肠炎最常见的病原体，婴幼儿腹泻50%是由轮状病毒所致。检测的方法基本和柯萨奇病毒相似，这里就不再祥述了。（三）EB病毒的检测EB病毒（Epstein-Barr virus,EBV）：属疱疹病毒科，是一种嗜淋巴细胞的DNA病毒，主要侵犯B淋巴细胞。EB病毒衣壳抗原（VCA），抗-VCA IgM 测定对传染性单核细胞增多症，抗-VCA IgA测定对鼻咽癌的诊断有重要意义。四、寄生虫感染免疫的检测

29、 弓形虫感染为人畜共患原虫疾病，可引弓形虫感染为人畜共患原虫疾病，可引起中枢神经系统、眼的疾病，也可以引起流起中枢神经系统、眼的疾病，也可以引起流产、先天畸形等。产、先天畸形等。检测方法检测方法 抗体：间接血凝法、抗体：间接血凝法、IFAIFA法或法或ELISAELISA DNA DNA：用：用PCRPCR法法 临床意义临床意义 IgMIgM阳性是近期感染的指标，阳性是近期感染的指标，IgGIgG则则提示既往感染；提示既往感染；双份血清抗体滴度双份血清抗体滴度4 4倍以上增高或单份抗体滴倍以上增高或单份抗体滴度大于度大于1 1：512512时，提示近期感染可能性大。时，提示近期感染可能性大。D

30、NADNA阳性对弓形虫病的诊断有重要意义。阳性对弓形虫病的诊断有重要意义。五、性传播疾病免疫检测性传播疾病（sexually transmitted disease,STD）简称性病，是一组通过性行为传播的，可侵犯皮肤、性器官和全身多脏器的感染性疾病。包括：艾滋病、梅毒、淋病、软下疳、性病淋巴肉芽肿、非淋菌性尿道炎、尖锐湿疣、细菌性阴道病、滴虫病和乙肝等。（）人类获得性免疫缺陷病毒抗体及RNA测定 人类获得性免疫缺陷病毒(human(human immunodeficiencey virus,HIV)immunodeficiencey virus,HIV)是爱滋病（acquired immun

31、e deficiency acquired immune deficiency syndrome,AIDSsyndrome,AIDS）的病原体，它是一种逆转录病毒，是一种单链RNA病毒，HIV侵犯CD4+T淋巴细胞。可分为HIV-1和HIV-2型，当机体感染HIV数周到半年后绝大多数患者体内可出现抗HIV抗体。HIV检测参考值参考值参考值参考值 （1 1）筛选试验：）筛选试验：）筛选试验：）筛选试验：ELISAELISA法和快速蛋白印迹法和快速蛋白印迹法和快速蛋白印迹法和快速蛋白印迹法均为阴性法均为阴性法均为阴性法均为阴性 （2 2）确认试验：蛋白印迹试验和）确认试验：蛋白印迹试验和）确认试验

32、：蛋白印迹试验和）确认试验：蛋白印迹试验和RT-PCRRT-PCR检检检检HIV-RNAHIV-RNA均为阴性均为阴性均为阴性均为阴性临床意义临床意义临床意义临床意义：筛选试验敏感性高，但特异性不高，故有假筛选试验敏感性高，但特异性不高，故有假筛选试验敏感性高，但特异性不高，故有假筛选试验敏感性高，但特异性不高，故有假阳性，所以筛选试验阳性时需用确诊试验证实。阳性，所以筛选试验阳性时需用确诊试验证实。阳性，所以筛选试验阳性时需用确诊试验证实。阳性，所以筛选试验阳性时需用确诊试验证实。确诊试验阳性，特别是确诊试验阳性，特别是确诊试验阳性，特别是确诊试验阳性，特别是RT-PCRRT-PCR法检测法

33、检测法检测法检测HIV-HIV-RNARNA阳性，对肯定诊断和早期诊断颇有价值。阳性，对肯定诊断和早期诊断颇有价值。阳性，对肯定诊断和早期诊断颇有价值。阳性，对肯定诊断和早期诊断颇有价值。（二）梅毒螺旋体抗体检测（二）梅毒螺旋体抗体检测 人体感染梅毒螺旋体后，血清中可出现人体感染梅毒螺旋体后，血清中可出现特异性抗体特异性抗体（针对密螺旋体抗原），还出（针对密螺旋体抗原），还出现现非特异性抗体非特异性抗体（反应素）（针对类脂抗（反应素）（针对类脂抗原）原）1非特异性抗体（反应素）的试验非特异性抗体（反应素）的试验（1）检测方法：）检测方法：快速血浆反应素试验（快速血浆反应素试验（RPR）不加热血

34、清反应素试验（不加热血清反应素试验（USR）美国性病研究实验室实验（美国性病研究实验室实验（VDRL）（2）非特异性抗体（反应素）非特异性抗体（反应素）试验临床意义试验临床意义 适用于梅毒的筛选。一般在感染梅毒螺旋体后1-2周阳性检出率为76，二期梅毒为95-100%，晚期梅毒为70-95%，隐性感染期为70-80%，但该试验易出现假阳性反应，见于SLE、疟疾、结核、瘤型麻风病等。可作半定量，用于疗效观察。2梅毒螺旋体特异性抗体试验梅毒螺旋体特异性抗体试验（1）检测方法检测方法：梅毒螺旋体血凝试验（梅毒螺旋体血凝试验（TPHA）荧光螺旋体抗体吸收试验（荧光螺旋体抗体吸收试验（FTA-ABS）（

35、2）临床意义临床意义 筛选试验阳性的情况下必须筛选试验阳性的情况下必须做确认试验，阳性可肯定梅毒的诊断。做确认试验，阳性可肯定梅毒的诊断。确诊试验灵敏度高，特异性强，不受药确诊试验灵敏度高，特异性强，不受药物治疗的影响，特异性抗体可持续数年甚物治疗的影响，特异性抗体可持续数年甚至终身。不能用于疗效观察。至终身。不能用于疗效观察。六、六、TORCH感染免疫检测感染免疫检测TORCHTORCH是指一组病原微生物的英文名称缩写。是指一组病原微生物的英文名称缩写。是指一组病原微生物的英文名称缩写。是指一组病原微生物的英文名称缩写。T T即刚地弓形虫或弓形虫即刚地弓形虫或弓形虫即刚地弓形虫或弓形虫即刚地

36、弓形虫或弓形虫 (toxoplasma gondii)(toxoplasma gondii)，O O即其它病原微生物即其它病原微生物即其它病原微生物即其它病原微生物 (others)(others)，R R即风疹病毒即风疹病毒即风疹病毒即风疹病毒(rubella virus)(rubella virus)，C C即巨细胞病毒即巨细胞病毒即巨细胞病毒即巨细胞病毒(cytomegalovirus)(cytomegalovirus)，H H即单纯疱疹病毒即单纯疱疹病毒即单纯疱疹病毒即单纯疱疹病毒 (herpes simplex virus)(herpes simplex virus)。这组病原体常可

37、通过胎盘传给胎儿，引起围生这组病原体常可通过胎盘传给胎儿，引起围生这组病原体常可通过胎盘传给胎儿，引起围生这组病原体常可通过胎盘传给胎儿，引起围生期感染，导致流产、死胎、早产、先天畸形和期感染，导致流产、死胎、早产、先天畸形和期感染，导致流产、死胎、早产、先天畸形和期感染，导致流产、死胎、早产、先天畸形和智力障碍等各种异常结果。智力障碍等各种异常结果。智力障碍等各种异常结果。智力障碍等各种异常结果。TORCHTORCH感染的抗感染的抗感染的抗感染的抗体检查在许多地区已作为体检查在许多地区已作为体检查在许多地区已作为体检查在许多地区已作为孕期检查孕期检查孕期检查孕期检查的常规项目。的常规项目。的

38、常规项目。的常规项目。（一）巨细胞病毒的检测（一）巨细胞病毒的检测 它是一种双链它是一种双链DNA疱疹病毒，由于它疱疹病毒，由于它能使感染的细胞变大，故称巨细胞病毒。能使感染的细胞变大，故称巨细胞病毒。检测方法检测方法 抗体：抗体：IFA（免疫荧光法）和（免疫荧光法）和ELISA DNA：分子杂交或：分子杂交或PCR法法巨细胞病毒的检测巨细胞病毒的检测临床意义IgM阳性：现症感染或活动期；IgG阳性：既往感染或潜伏感染，人群中有90%以上可呈阳性；若双份血清效价有4倍以上增长，提示近期有感染，DNA阳性提示现症感染。先天性感染一般由母婴通过胎盘或产道感染，后天性则通过接触传播。巨细胞病毒感染易

39、导致流产、畸胎和死胎，对婴幼儿来说易导致发育不良或弱智。(二)风疹病毒抗体测定风疹病毒(rubella virus)直径为60nm，具单股RNA。是儿童风疹的病原体，一般症状较轻。但孕妇若在妊娠头3个月内感染风疹病毒，易引起胎儿畸形。参考值参考值 ELISA：阴性 RT-PCR法：阴性 风疹病毒抗体测定临床意义临床意义 易感人群为易感人群为1 15 5岁的儿童及孕妇，据统计，岁的儿童及孕妇，据统计，孕妇在怀孕孕妇在怀孕1 16 6周时感染风疹者约周时感染风疹者约50%50%可致流产、可致流产、死胎、早产；若胎儿存活出生，也可能发生先天死胎、早产；若胎儿存活出生，也可能发生先天性风疹综合征，表现

40、为先天性白内障，先性风疹综合征，表现为先天性白内障，先 心，心，神经性耳聋，神经性耳聋，小头畸形和智力障碍等。小头畸形和智力障碍等。IgM IgM抗体阳性，提示有近期感染，必要时终止妊娠。抗体阳性，提示有近期感染，必要时终止妊娠。IgG IgG抗体阳性，表示机体已受过风疹病毒感染，具抗体阳性，表示机体已受过风疹病毒感染，具有免疫力。有免疫力。(三)单纯疱疹病毒抗体测定单纯疱疹病毒单纯疱疹病毒单纯疱疹病毒单纯疱疹病毒(herpes simplex virus(herpes simplex virus，HSV)HSV)：双链双链双链双链DNADNA，根据限制性内切酶切点不同，根据限制性内切酶切点不

41、同，根据限制性内切酶切点不同，根据限制性内切酶切点不同，分分分分HSV-IHSV-I和和和和HSV-IIHSV-II二型。二型。二型。二型。HSVHSV原发感染后，机体最先出现原发感染后，机体最先出现原发感染后，机体最先出现原发感染后，机体最先出现IgMIgM，随后出，随后出，随后出，随后出现现现现IgAIgA及及及及IgGIgG，抗体能防止病毒播散，但不能阻，抗体能防止病毒播散，但不能阻，抗体能防止病毒播散，但不能阻，抗体能防止病毒播散，但不能阻止复发。止复发。止复发。止复发。检出特异性检出特异性检出特异性检出特异性IgMIgM阳性或双份血清特异性阳性或双份血清特异性阳性或双份血清特异性阳性

42、或双份血清特异性IgGIgG抗体抗体抗体抗体效价上升效价上升效价上升效价上升4 4倍或倍或倍或倍或4 4倍以上，可提示倍以上，可提示倍以上，可提示倍以上，可提示HSVHSV近期感染。近期感染。近期感染。近期感染。参考值参考值参考值参考值 间接血凝试验，间接血凝试验，间接血凝试验，间接血凝试验，ELISAELISA：阴性：阴性：阴性：阴性 单纯疱疹病毒抗体测定临床意义临床意义 HSVHSV主要引起疱疹性口腔炎、疱疹性角膜结主要引起疱疹性口腔炎、疱疹性角膜结主要引起疱疹性口腔炎、疱疹性角膜结主要引起疱疹性口腔炎、疱疹性角膜结膜炎、疱疹性脑膜炎、疱疹性外阴阴道炎、湿疹膜炎、疱疹性脑膜炎、疱疹性外阴阴

43、道炎、湿疹膜炎、疱疹性脑膜炎、疱疹性外阴阴道炎、湿疹膜炎、疱疹性脑膜炎、疱疹性外阴阴道炎、湿疹性疱疹、新生儿疱疹等。性疱疹、新生儿疱疹等。性疱疹、新生儿疱疹等。性疱疹、新生儿疱疹等。生殖器官以外部位的生殖器官以外部位的生殖器官以外部位的生殖器官以外部位的HSVHSV感染多由感染多由感染多由感染多由 HSV-IHSV-I型型型型引起引起引起引起 (占占占占95%)95%)，生殖器官的生殖器官的生殖器官的生殖器官的HSVHSV感染主要由感染主要由感染主要由感染主要由HSV-IIHSV-II型引起型引起型引起型引起 (占占占占78%)78%)。孕早期感染孕早期感染孕早期感染孕早期感染HSVHSV者可

44、导致流产，妊娠中、晚者可导致流产，妊娠中、晚者可导致流产，妊娠中、晚者可导致流产，妊娠中、晚期感染者，可引起胎儿和新生儿发病。期感染者，可引起胎儿和新生儿发病。期感染者，可引起胎儿和新生儿发病。期感染者，可引起胎儿和新生儿发病。第五节、肿瘤标志物的检测第五节、肿瘤标志物的检测 概念：概念：肿瘤标志物（肿瘤标志物（tumor marker,TM）是是指在肿瘤发生和增殖过程中，由肿瘤细胞指在肿瘤发生和增殖过程中，由肿瘤细胞本身合成、释放或者是由机体对肿瘤细胞本身合成、释放或者是由机体对肿瘤细胞反应而产生的一类物质。反应而产生的一类物质。这类物质可反映细胞恶变各阶段表型这类物质可反映细胞恶变各阶段表

45、型及基因特征性。与正常组织相比，标志物及基因特征性。与正常组织相比，标志物明显增高，并存在于血液、细胞、组织或明显增高，并存在于血液、细胞、组织或体液中。体液中。肿瘤标志物的检测主要检测方法：主要检测方法：放射免疫法（RIA）、酶联免疫吸附法（ELISA）化学发光免疫分析法（CLIA）肿瘤标志物检测的意义：肿瘤标志物检测的意义：肿瘤普查、辅助诊断、观察疗效 和判断预后。早期发现、早期诊断、早期治疗早期发现、早期诊断、早期治疗最主要的是早期发现：肿瘤特异性标志物最主要的是早期发现：肿瘤特异性标志物高危人群 标本 DNA PCR 基因检测 变异基因分析 特异性蛋白表达 单抗 检测试剂盒或检测芯片常

46、用的肿瘤标志物及其主要的常用的肿瘤标志物及其主要的临床意义临床意义 1甲胎蛋白（甲胎蛋白（AFP）：是一种胎儿早期）：是一种胎儿早期由肝脏合成的糖蛋白原发性肝癌时可明由肝脏合成的糖蛋白原发性肝癌时可明显升高，在病毒性肝炎、肝硬化时显升高，在病毒性肝炎、肝硬化时AFP也有不同程度的升高，但升高的程度不也有不同程度的升高，但升高的程度不如原发性肝癌明显。如原发性肝癌明显。参考范围：参考范围：血清血清300ug/L病毒性肝炎、肝硬化：AFP不同程度升高，但300ug/L。生殖腺胚胎性肿瘤：睾丸癌、畸胎瘤等，血清AFP可升高。妊娠3个月后，血清AFP开始升高，7、8个月达高峰，但一般400ug/L。A

47、FP异质体：通常LCA结合型AFP25%提示原发性肝癌。2癌胚抗原（CEA）：它是一种含多糖的蛋白复合物，胎儿早它是一种含多糖的蛋白复合物，胎儿早期的消化管及某些组织均有合成期的消化管及某些组织均有合成CEA的能的能力，但孕后力，但孕后6个月以后含量减少，出生后含个月以后含量减少，出生后含量极底。量极底。参考范围：参考范围：血清血清5ug/L临床意义：临床意义：血清血清CEA升高主要见于结肠癌、升高主要见于结肠癌、直肠癌、胰腺癌等；用于恶性肿瘤术后和直肠癌、胰腺癌等；用于恶性肿瘤术后和化疗的疗效观察。化疗的疗效观察。3前列腺特异抗原（PSA）：PSA是一种由前列腺细胞分泌的单链糖蛋白，它具有前

48、列腺特异性，但不具前列腺癌特异性，一般前列腺癌时，血清PSA水平明显升高，但一部分前列腺增生的病人也会增高。为鉴别诊断，于是人们又发现游离PSA和总PSA的百分比，可在诊断灰区发挥较好的鉴别诊断作用。参考范围：参考范围：血清 t-PSA4.0ug/L f-PSA0.25临床意义：临床意义：前列腺癌：前列腺癌：t-PSA4.0ug/L 前列腺肥大、前列腺炎、泌尿生殖系统疾前列腺肥大、前列腺炎、泌尿生殖系统疾病：病：PSA一般在一般在4.010.0ug/L灰区的判断：灰区的判断：f-PSA/t-PSA25%提示前列腺增生。提示前列腺增生。4糖链抗原19-9（CA19-9）：也是一种糖蛋白，对消化系

49、肿瘤，特别是胰腺癌的诊断比较有意义。5糖链抗原72-4（CA72-4）：它是胃肠道肿癌和卵巢癌的标志物，常和CEA、CA19-9联合检测提高胃癌的检出率；和CA125联合提高卵巢癌的检出率。6-L-岩藻糖苷酶（AFU）：它是一种溶酶体酸性水解酶，在原发性肝癌患者血清中增高，常与AFP联合检测，提高肝癌的检出率。7神经元特异烯醇化酶（NSE）：神经母细胞瘤的的特异标志物，也是小细胞肺癌高特异性和高敏感性的标志物。8癌抗原125（CA125）：卵巢癌病人血清CA125水平明显升高。9癌抗原15-3（CA15-3）：对乳腺癌的诊断有重要的辅助作用。10前列腺酸性磷酸酶（PAP）：可辅助诊断前列腺癌，

50、但敏感性和特异性皆不如PSA。第六节第六节 自身免疫检测自身免疫检测 在正常情况下，机体的免疫系统对在正常情况下，机体的免疫系统对自身抗原表现为不应答，即自身抗原表现为不应答，即自身免疫耐自身免疫耐受受。当某些原因消弱或破坏正常的自身当某些原因消弱或破坏正常的自身耐受时，免疫系统即会对自身组织或成耐受时，免疫系统即会对自身组织或成分产生免疫应答，由此而产生的疾病称分产生免疫应答，由此而产生的疾病称为为自身免疫病自身免疫病。诊断自身免疫疾病的重要方法是做自身诊断自身免疫疾病的重要方法是做自身免疫检测。免疫检测。一种自身免疫病可检出多种抗体，而检一种自身免疫病可检出多种抗体，而检出一种自身抗体可涉