人类疾病动物模型(精)教学提纲.ppt

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1、人类人类(rnli)(rnli)疾病动物模型疾病动物模型第一节第一节 人类疾病动模型评估及分类人类疾病动模型评估及分类第二节第二节 肿瘤疾病动物模型肿瘤疾病动物模型第三节第三节 心血管疾病动物模型心血管疾病动物模型第四节第四节 呼吸、消化呼吸、消化(xiohu)(xiohu)疾病动物模疾病动物模型型第五节第五节 内分泌、营养疾病动物模型内分泌、营养疾病动物模型第六节第六节 神经系统疾病动物模型神经系统疾病动物模型第七节第七节 骨骼系统疾病动物模型骨骼系统疾病动物模型第一页，共80页。第一节第一节 人类疾病动模型评估人类疾病动模型评估(pn)(pn)及分类及分类人类疾病动物人类疾病动物(dngw

2、)(dngw)模型模型(Animal models of human(Animal models of human diseases)diseases)：是指医学研究中建立的具有人类疾病模拟表现的是指医学研究中建立的具有人类疾病模拟表现的动物动物(dngw)(dngw)实验对象和相关材料。实验对象和相关材料。第二页，共80页。一、复制人类一、复制人类(rnli)(rnli)疾病动物模型的评估疾病动物模型的评估 1相似性相似性 复制的动物模型应尽可能近似人复制的动物模型应尽可能近似人类疾病，最好能找到与人类疾病相同的类疾病，最好能找到与人类疾病相同的自发性疾病。自发性疾病。2重复性重复性 理想的

3、人类疾病动物模型应该理想的人类疾病动物模型应该(ynggi)是可重复的，应是可标准化的，是可重复的，应是可标准化的，不能重复的动物模型是无法进行应用研不能重复的动物模型是无法进行应用研究的。究的。第三页，共80页。3可靠性可靠性 复制的动物模型应力求可靠地反映人复制的动物模型应力求可靠地反映人类疾病，即类疾病，即 可特异地反映该种疾病或某种机能、代谢、可特异地反映该种疾病或某种机能、代谢、结构变化，结构变化，同时应具备该种疾病的主要症状和体征，同时应具备该种疾病的主要症状和体征，并经受一系并经受一系 列检测列检测(如心电图、临床生理如心电图、临床生理(shngl)、生化指标检验、病理切片等生化

4、指标检验、病理切片等)得以证实。得以证实。第四页，共80页。4适用性和可控性适用性和可控性 设计复制人类疾病动物模型，应尽量考虑在今后临设计复制人类疾病动物模型，应尽量考虑在今后临床能应用和便于控制床能应用和便于控制(kngzh)其疾病的发展，以便于开其疾病的发展，以便于开展研究工作。展研究工作。5易行性和经济性易行性和经济性 复制动物模型设计，应尽量做到方法容易执行和合乎经复制动物模型设计，应尽量做到方法容易执行和合乎经济原则。济原则。第五页，共80页。二、动物模型的分类二、动物模型的分类(fn li)(fn li)按产生原因分类按产生原因分类1 1诱发性动物模型诱发性动物模型(Experi

5、mental animal model)(Experimental animal model)：是是指指研研究究者者通通过过使使用用物物理理的的、化化学学的的、生生物物的的和和复复合合(fh)(fh)的的致致病病因因素素作作用用于于动动物物，造造成成动动物物组组织织、器器官官或或全全身身一一定定的的损损害害，出出现现某某些些类类似似人人类类疾疾病病时时的的功功能能、代代谢谢或或形形态态结构方面的病变，即为人工诱发出特定的疾病动物模型。结构方面的病变，即为人工诱发出特定的疾病动物模型。第六页，共80页。物理因素物理因素 ：机械损伤、放射线损伤、气压、手术：机械损伤、放射线损伤、气压、手术化学因素

6、化学因素 ：化学药致癌、化学毒物中毒、强酸强碱烧：化学药致癌、化学毒物中毒、强酸强碱烧 伤、某种有机伤、某种有机(yuj)(yuj)成分的增加或减少成分的增加或减少导致营养导致营养 性疾病等。性疾病等。生物因素生物因素 ：细菌、病毒、寄生虫、生物毒素等：细菌、病毒、寄生虫、生物毒素等 。复合因素复合因素 ：第七页，共80页。2自发性动物模型自发性动物模型(Spontaneous animal model)：指实验动物未经任何人工处置，在自然条件下动物指实验动物未经任何人工处置，在自然条件下动物自然发生、或由于基因突变的异常表现通过遗传育种自然发生、或由于基因突变的异常表现通过遗传育种(y zh

7、ng)保留下来的动物模型。保留下来的动物模型。优点：完全在自然条件下发生的疾病，排除了人为的优点：完全在自然条件下发生的疾病，排除了人为的 因素，疾病的发生、发展与人类相应的疾病很因素，疾病的发生、发展与人类相应的疾病很 相似。相似。缺点：来源比较困难，种类有限。缺点：来源比较困难，种类有限。第八页，共80页。3抗疾病型动物模型抗疾病型动物模型(Negative animal model)：是指特定的疾病不会在某种动物身上发生，从而可以用是指特定的疾病不会在某种动物身上发生，从而可以用来探讨为何这种动物对该疾病有天然的抵抗力来探讨为何这种动物对该疾病有天然的抵抗力 的动物模型。的动物模型。4生

8、物医学动物模型生物医学动物模型(Biomedical animal model)：是指利用健康动物生物学特征是指利用健康动物生物学特征(tzhng)来提供人类疾病来提供人类疾病相似表现的疾病模型。相似表现的疾病模型。第九页，共80页。第二节第二节 肿瘤肿瘤(zhngli)(zhngli)疾病动物模型疾病动物模型分类：分类：自发性肿瘤（自发性肿瘤（spontaneous tumor）动物模型：）动物模型：指实验指实验(shyn)动物未经任何有意识的人工处动物未经任何有意识的人工处置，在自然情况下发生的肿瘤所形成的模型。置，在自然情况下发生的肿瘤所形成的模型。诱发性肿瘤（诱发性肿瘤（induced

9、 tumor）动物模型：）动物模型：是使用致癌因素在实验是使用致癌因素在实验(shyn)条件下诱发动条件下诱发动物发生肿瘤的动物模型。物发生肿瘤的动物模型。移植性肿瘤（移植性肿瘤（transplant tumor）动物模型：）动物模型：指将动物或人体肿瘤移植同种或异种动物连续指将动物或人体肿瘤移植同种或异种动物连续传代而培养出的模型。传代而培养出的模型。第十页，共80页。诱发诱发(yuf)性肿瘤模型：性肿瘤模型：方法：方法：原位诱发原位诱发(yuf)：指将致癌物直接与动物靶组织或靶：指将致癌物直接与动物靶组织或靶器官接触而诱发器官接触而诱发(yuf)该组织或器官发生肿瘤，接触该组织或器官发生肿

10、瘤，接触方法可通过涂抹、灌注、喂养或埋置等方法可通过涂抹、灌注、喂养或埋置等。异位诱发异位诱发(yuf)：将与致癌物接触后的动物组织或器：将与致癌物接触后的动物组织或器官埋置于该动物或另一正常动物皮下而产生的该组织官埋置于该动物或另一正常动物皮下而产生的该组织或器官的肿瘤。异位诱发或器官的肿瘤。异位诱发(yuf)肿瘤具有易于观察和肿瘤具有易于观察和取材的优点。取材的优点。诱癌物：诱癌物：放射线局部照射、化学致癌物（烷化剂、亚硝胺放射线局部照射、化学致癌物（烷化剂、亚硝胺类、芳香胺类）、生物毒素（黄曲酶毒素）、细菌类、芳香胺类）、生物毒素（黄曲酶毒素）、细菌（幽门螺杆菌）、肿瘤病毒感染。（幽门螺

11、杆菌）、肿瘤病毒感染。第十一页，共80页。举例：举例：二乙基亚硝胺二乙基亚硝胺(DEN)诱发小鼠肺癌诱发小鼠肺癌(fi i)：采用小鼠皮下注射采用小鼠皮下注射1DEN水溶液，每周一次，水溶液，每周一次，(每次剂量为每次剂量为56mg/kg体重，总剂量为体重，总剂量为868mg)。观察时间为。观察时间为100d左右。此模型诱左右。此模型诱发率约发率约40%。若将。若将DEN总剂量增到总剂量增到1176mg时，半年诱发率可达时，半年诱发率可达90以以上。上。亚胺基偶氮甲苯亚胺基偶氮甲苯(OAAT)诱发小鼠肝癌：诱发小鼠肝癌：用用lOAAT苯溶液涂于动物两肩胛间皮肤上，隔日苯溶液涂于动物两肩胛间皮肤

12、上，隔日1次，每次次，每次23滴、一般涂滴、一般涂100次。次。7个月以上诱发肝肿瘤约个月以上诱发肝肿瘤约55。黄曲霉素诱发大鼠肝癌：黄曲霉素诱发大鼠肝癌：在大鼠饲料中加入黄曲霉素，含在大鼠饲料中加入黄曲霉素，含0.011-0.015ppm，喂养，喂养6个月，个月，诱发率达诱发率达80。第十二页，共80页。注意：注意：必须适当选择：致瘤方法、动物种系、致癌物种类与溶剂、必须适当选择：致瘤方法、动物种系、致癌物种类与溶剂、给药剂量与途径及观察时间等尽量简便可行，有较好的重复给药剂量与途径及观察时间等尽量简便可行，有较好的重复性，并有利于与人肿瘤比较。性，并有利于与人肿瘤比较。方法和种系应对所用致

13、瘤物敏感。方法和种系应对所用致瘤物敏感。致癌物的剂量应能保证致癌物的剂量应能保证(bozhng)(bozhng)动物存活率较高、诱发期动物存活率较高、诱发期较短而又可诱发较高频率的肿瘤较短而又可诱发较高频率的肿瘤 第十三页，共80页。移植性肿瘤模型：移植性肿瘤模型：方法：方法：实体瘤移植：实体瘤移植：肿瘤细胞皮下接种肿瘤细胞皮下接种7-10d处死荷瘤动物处死荷瘤动物选选择生长良好、无坏死液化的瘤组织择生长良好、无坏死液化的瘤组织2-3mm3+生理盐生理盐水水(shnglynshu)或其它营养液或其它营养液无菌套管针抽吸无菌套管针抽吸接种同种受体动物右前腋窝皮下。接种同种受体动物右前腋窝皮下。腹

14、水瘤移植：腹水瘤移植：肿瘤细胞皮下接种肿瘤细胞皮下接种7-10d处死荷瘤动物处死荷瘤动物取腹水取腹水含葡萄糖平衡盐水稀释至适当浓度含葡萄糖平衡盐水稀释至适当浓度腹腔注射腹腔注射（腹水瘤）或皮下注射（实体瘤）。（腹水瘤）或皮下注射（实体瘤）。第十四页，共80页。评价评价:同时接种同样量的瘤细胞，生长速度较一致，个体差异较小。同时接种同样量的瘤细胞，生长速度较一致，个体差异较小。接种成活率近接种成活率近100%。对宿主影响相类似。对宿主影响相类似。可连续传代，试验周期短，条件易于控制。可连续传代，试验周期短，条件易于控制。主要主要(zhyo)问题是宿主对移植物产生免疫排斥反应。问题是宿主对移植物产

15、生免疫排斥反应。第十五页，共80页。第三节第三节 心血管疾病心血管疾病(jbng)(jbng)动物模动物模型型高脂饲料高脂饲料(slio)(slio)诱发高血脂及动脉粥样诱发高血脂及动脉粥样硬化症模型硬化症模型非喂养法诱发高血脂及动脉粥样硬化症模非喂养法诱发高血脂及动脉粥样硬化症模型型第十六页，共80页。高脂饲料诱发高血脂及动脉高脂饲料诱发高血脂及动脉(dngmi)(dngmi)粥样硬化粥样硬化症模型症模型 造模机制：造模机制：动物饲料中加入过量的胆固醇和脂肪，饲养一定动物饲料中加入过量的胆固醇和脂肪，饲养一定时间后，其主动脉时间后，其主动脉(dngmi)(dngmi)及冠状动脉及冠状动脉(d

16、ngmi)(dngmi)处逐渐形成粥样硬化斑块，并出现处逐渐形成粥样硬化斑块，并出现高血脂症。高血脂症。高胆固醇和高脂饮食，加入少量胆酸盐，可增加高胆固醇和高脂饮食，加入少量胆酸盐，可增加胆固醇的吸收，如再加入甲状腺抑制药胆固醇的吸收，如再加入甲状腺抑制药-甲甲基硫氧嘧啶或丙基硫氧嘧啶可进一步加速病基硫氧嘧啶或丙基硫氧嘧啶可进一步加速病变的形成。变的形成。第十七页，共80页。造模方法造模方法:1.1.小型猪：小型猪：选用选用GottigenGottigen系小型猪较为理想，用系小型猪较为理想，用1 12 2高脂食物饲喂高脂食物饲喂6 6个月即可形成动脉粥样硬化个月即可形成动脉粥样硬化(yngh

17、u)(ynghu)病变。病变。评价：形成动脉粥样硬化评价：形成动脉粥样硬化(ynghu)(ynghu)病变特点及病变特点及分布都与人类近似。分布都与人类近似。2.2.猴：猴：选用选用3.53.510.5kg10.5kg，3 36 6岁的恒河猴饲喂高脂岁的恒河猴饲喂高脂饲料饲料(50(50麦粉、麦粉、8 8玉米粉、玉米粉、8 8麦麸、麦麸、1 1胆固醇、胆固醇、8 8蛋黄、蛋黄、8 8猪油、猪油、1717白糖及适量的小苏打和食盐白糖及适量的小苏打和食盐)。1 1个月后造成猴的实验性高血脂症。血清胆固醇较正常个月后造成猴的实验性高血脂症。血清胆固醇较正常时升高时升高3.13.13.23.2倍。倍。

18、评价：猴的胆固醇代谢、血浆脂蛋白组成及高脂评价：猴的胆固醇代谢、血浆脂蛋白组成及高脂血症与人相似，是较理想的模型。血症与人相似，是较理想的模型。第十八页，共80页。3.3.兔：兔：选选用用2kg2kg左左右右体体重重，每每天天胆胆固固醇醇0.3g0.3g，4 4个个月月后后形形成成主主动动脉脉粥粥样样硬硬化化斑斑块块；剂剂量量增增至至0.5g0.5g，3 3个个月月出出现现斑斑块块；增增至至1.0g1.0g，可可缩缩为为2 2个个月月。在在饲饲料料中中加加人人1515蛋蛋黄黄粉粉、0.50.5胆胆固固醇醇和和5%5%猪猪油油，3 3周周后后，将将胆胆固固醇醇减减去去再再喂喂3 3周周，可可使斑

19、块发生率达使斑块发生率达100100，血清胆固醇可升高至，血清胆固醇可升高至2000mg%2000mg%。评评价价：对对喂喂饲饲(wi(wi s)s)胆胆固固醇醇非非常常敏敏感感，在在短短期期内内便便能能出出现现明明显显的的病病变变。因因为为兔兔对对外外源源性性胆胆固固醇醇的的吸吸收收率率可可高高达达75759090，对对高高血血脂脂的的清清除除能能力力低低(静静脉脉注注射射胆胆固固醇醇后后，高脂血症可持续高脂血症可持续3 34 4天天)。但但兔兔作作模模型型不不够够理理想想，主主要要表表现现为为血血源源性性泡泡沫沫细细胞胞增增多，且病变分布与人的病变也有差异。多，且病变分布与人的病变也有差异

20、。第十九页，共80页。4.4.大鼠：大鼠：配配方方一一饲饲料料(1(1-4-4胆胆固固醇醇、1010猪猪油油，0.2%0.2%甲甲基基硫硫氧氧嘧嘧啶啶、8989-86-86基基础础(jch)(jch)饲饲料料)，喂喂服服7 71010天天。可形成高胆固醇血症。可形成高胆固醇血症。配配方方二二饲饲料料(10(10蛋蛋黄黄粉粉、5 5猪猪油油、0.50.5胆胆盐盐、8585基础基础(jch)(jch)饲料饲料)，喂服，喂服7 7天可形成高胆固醇血症。天可形成高胆固醇血症。评评价价：饲饲养养方方便便、抵抵抗抗力力强强、食食性性与与人人相相近近。所所形形成成的的病病理理改改变变与与人人早早期期者者相相

21、似似，不不易易形形成成似似人人体体的的后后期期病病变变，较易形成血栓。较易形成血栓。第二十页，共80页。5.5.小鼠：小鼠：雄雄性性小小鼠鼠饲饲以以1 1胆胆固固醇醇及及1010猪猪油油的的高高脂脂饲饲料料，7 7天天后后血血清清胆胆固固醇醇即即升升为为34315mg34315mg；若若在在饲饲料料中中再再加加入入0.30.3的胆酸，连饲的胆酸，连饲7 7天，血清胆固醇可高达天，血清胆固醇可高达53036mg53036mg 评评价价：容容易易(rngy)(rngy)饲饲养养和和节节省省药药品品等等优优点点，但但是是取取血血不不便便，难做动态观察，所以较少采用。难做动态观察，所以较少采用。第二十

22、一页，共80页。6.6.鸡：鸡：4 48 8周周的的莱莱克克亨亨鸡鸡，在在饲饲料料中中加加入入1 1-2-2胆胆固固醇醇或或1515蛋蛋黄黄粉粉，再再加加5 51010猪猪油油，经经过过6 61010周周，血血胆胆固固醇醇即即升升至至1000mg1000mg4000mg4000mg，胸胸主主动动脉斑块发生脉斑块发生(fshng)(fshng)率达率达100100。评评价价：鸡鸡为为杂杂食食动动物物，仅仅在在普普通通饲饲料料中中加加入入胆胆固固醇醇，就就可可形形成成动动脉脉粥粥样样硬硬化化斑斑块块。病病变变发发生生(fshng)(fshng)较较快，在斑块中有时伴有钙化和形成溃疡。快，在斑块中有

23、时伴有钙化和形成溃疡。第二十二页，共80页。非喂养法诱发高血脂及动脉粥样硬化症模型非喂养法诱发高血脂及动脉粥样硬化症模型 造模方法造模方法:1.免疫法：免疫法：将大鼠主动脉匀浆给兔注射，可引起血胆固醇、将大鼠主动脉匀浆给兔注射，可引起血胆固醇、脂蛋白及甘油三酯升高。给兔注射马血清脂蛋白及甘油三酯升高。给兔注射马血清(xuqng)10ml/kg/次，共次，共4次，每次间隔次，每次间隔17天。天。评价评价:动脉内膜损伤率为动脉内膜损伤率为88，冠状动脉亦有粥样硬，冠状动脉亦有粥样硬化的病变，若同时给予高胆固醇饲料，病变更加化的病变，若同时给予高胆固醇饲料，病变更加明显。明显。第二十三页，共80页。

24、2.2.儿茶酚胺法：儿茶酚胺法：给给兔兔静静脉脉滴滴注注去去甲甲肾肾上上腺腺素素lmg/24hlmg/24h，时时间间为为30min30min。一一种种方方法法是是先先滴滴15min15min，休休息息5min5min后后再再滴滴15min15min。另另一一种种方法是每次点滴方法是每次点滴5min5min和休息和休息5min5min，反复，反复6 6次。次。评价评价:持持续续两两周周，均均可可引引起起主主动动脉脉病病变变，呈呈现现血血管管壁壁中中层层弱弱性性纤纤维维拉拉长长、劈劈裂裂或或断断裂裂(dun(dun li)li)，病病变变中中出出现现坏坏死死及钙化。及钙化。第二十四页，共80页。

25、3.3.半胱氨酸法：半胱氨酸法：给给兔兔皮皮下下注注射射同同型型半半胱胱氨氨酸酸硫硫代代内内酯酯每每天天202025mg/kg(25mg/kg(以以5 5葡葡萄萄糖糖溶溶液液配配成成lmg/mllmg/ml的的浓浓度度)，连连续续20202525天。天。评价：评价：成成 年年 兔兔 及及 幼幼 兔兔 均均 可可 出出 现现 动动 脉脉 粥粥 样样 硬硬 化化 的的 典典 型型(dinxng)(dinxng)病病变变。冠冠状状动动脉脉管管腔腔变变窄窄、动动脉脉壁壁内内膜膜肌肌细细胞胞增增生生、纤纤维维状状异异物物质质。如如同同时时在在饮饮料料中中加加入入2020的的胆胆固醇，则出现显著的动脉粥样

26、硬化病变。固醇，则出现显著的动脉粥样硬化病变。第二十五页，共80页。4.4.表面活化剂法：表面活化剂法：给大鼠腹腔注射给大鼠腹腔注射(zhsh)Troton WRl339 300mg/kg(zhsh)Troton WRl339 300mg/kg体重。体重。评价评价:给给药药9h9h后后可可使使血血清清胆胆固固醇醇升升高高3 34 4倍倍；20h20h后后雄雄性性大大鼠鼠血血清清胆胆固固醇醇仍仍为为正正常常的的3-43-4倍倍，而而雌雌性性大大鼠鼠却却为为6 6倍倍左左右右。用用药药后后24h24h左左右右升升脂脂作作用用达达最最高高点点，48h48h左左右右恢恢复复正正常常。其其中中以以甘甘油

27、油三三酯酯升升高高最最强强，其其次次是是磷磷脂脂、游游离离胆胆固固醇醇，对对胆胆固固醇醇酯酯没没有影响。有影响。第二十六页，共80页。第四节第四节 呼吸、消化呼吸、消化(xiohu)(xiohu)疾病动物疾病动物模型模型肝纤维化动物模型肝纤维化动物模型支气管哮喘支气管哮喘(xiochun)(xiochun)动物模型动物模型第二十七页，共80页。肝纤维化动物模型肝纤维化动物模型 模型概述：模型概述：任何可引起肝损伤的因素长期、反复作用于肝脏，均可产生肝细任何可引起肝损伤的因素长期、反复作用于肝脏，均可产生肝细胞变性、坏死，继而胞变性、坏死，继而(j r)(j r)肝细胞再生和纤维组织增生，肝细胞

28、再生和纤维组织增生，导致肝纤维化。导致肝纤维化。已有化学性损伤、免疫性、生物学、酒精性和营养性肝纤维化模已有化学性损伤、免疫性、生物学、酒精性和营养性肝纤维化模型。每种方法因致病因素不同，给药途径不同，产生肝硬化型。每种方法因致病因素不同，给药途径不同，产生肝硬化的机理、纤维化出现早晚、稳定性、出现率、重复性及机体的机理、纤维化出现早晚、稳定性、出现率、重复性及机体自然患病过程相似程度等都不尽相同。自然患病过程相似程度等都不尽相同。第二十八页，共80页。造模方法：造模方法：1.1.免疫法：免疫法：免免疫疫性性肝肝纤纤维维化化产产生生的的机机理理是是型型变变态态反反应应引引起起，白白蛋蛋白白和和

29、血血清清的的大大分分子子物物质质，作作为为异异种种抗抗原原进进入入大大鼠鼠体体内内后后，刺刺激激其其产产生生相相应应的的抗抗体体，当当抗抗原原再再次次进进人人机机体体后后抗抗原原抗抗体体结结合合，形形成成抗抗原原抗抗体体免免疫疫复复合合物物(IC)(IC)，抗抗原原的的反反复复、长长期期刺刺激激，过过量量的的免免疫疫复复合合物物来来不不及及被被清清除除，沉沉积积于于肝肝脏脏的的血血管管壁壁内内外外，引引起起血血管管炎炎，造造成成肝肝损损伤伤(snshng)(snshng)。反反复复导导致致肝肝细细胞胞变变性性、坏坏死死，再再生生，纤纤维维增增生生等等变变化化，最最后后发发展展为为肝肝纤纤维维化

30、、肝硬化。化、肝硬化。动动物物选选用用雄雄性性WistarWistar大大鼠鼠，体体重重130g130g左左右右。取取猪猪血血清清0.5ml0.5ml，腹腹腔腔内内注注射射，每每周周2 2次次，共共8 8次次(猪猪血血清清的的制制备备：取取新新鲜鲜猪猪血血，离离心心制制血血清清，滤滤过过除除菌菌，分分装装放放低低温温冰冰箱箱备备用用)。第二十九页，共80页。评价评价:大大鼠鼠第第3 3周周出出现现肝肝细细胞胞变变性性、坏坏死死，第第4 4周周增增生生的的胶胶原原纤纤维维形形成成(xngchng)(xngchng)纤纤维维束束，从从中中央央静静脉脉到到门门管管区区之之间间相相互互伸伸延延，发生纤

31、维化。发生纤维化。模型特点：模型特点：肝纤维化出现早，出现率高；肝纤维化出现早，出现率高；动物整体损伤轻微，毛发、生长情况正常；动物整体损伤轻微，毛发、生长情况正常；纤维化组织中大量胶原增生，纤维化组织中大量胶原增生，、型前胶原型前胶原mRNAmRNA增多。增多。慢慢性性活活动动性性肝肝炎炎患患者者循循环环免免疫疫复复合合物物多多为为阳阳性性，猪猪血血清清模模型型可可用用慢慢性性肝肝炎炎所所致致肝肝纤纤维维化化的的研研究究，对对于于研研究究免免疫疫复复合合物物的的形形成成(xngchng)(xngchng)，沉沉积积和和清清除除及及对对于于防防治治免免疫疫损损伤伤性性肝肝纤纤维化有效药物的筛选

32、，具有意义。维化有效药物的筛选，具有意义。第三十页，共80页。指标指标猪血清模型猪血清模型白蛋白模型白蛋白模型方法方法简单复杂价格价格经济较贵出现率出现率86.7%77.7%死亡率死亡率040%/31.6%周期周期28d95d猪血清猪血清(xuqng)(xuqng)模型与白蛋白模型模型与白蛋白模型相比相比第三十一页，共80页。2.2.化学性损伤法：化学性损伤法：雄雄性性WistarWistar大大鼠鼠，体体重重130 130 g g左左右右，用用硫硫代代乙乙酰酰胺胺腹腹腔腔内内注注射射，第第1 1次次20mg/100g20mg/100g体体重重，从从第第二二次次起起12mg/100g12mg/

33、100g体体重重，每周注射每周注射2 2次，共次，共8 8周。周。评价评价:第第3 3周周，在在肝肝小小叶叶(xioy)(xioy)间间中中间间带带出出现现大大片片的的肝肝细细胞胞变变性性坏坏死死和和炎炎细细胞胞浸浸润润，炎炎细细胞胞浸浸润润、坏坏死死细细胞胞数数和和程程度度超超过过猪猪血血清清模模型型。6 6周周后后出出现现增增生生纤纤维维束束，纤纤维维增增生生晚晚于于和和少少于于猪血清模型。大鼠肝纤维组织中有猪血清模型。大鼠肝纤维组织中有I I型胶原的型胶原的mRNAmRNA增多。增多。第三十二页，共80页。3.3.四氯化碳法：四氯化碳法：180180200g 200g WistarWis

34、tar或或SDSD大大鼠鼠，皮皮下下注注射射(p(p xi xi zh zh sh)40%-50%CCl4sh)40%-50%CCl4，油油溶溶液液(0.3ml/100g)(0.3ml/100g)，每每周周2 2次次，第第2 2周周始始，隔隔日日以以2020-30-30酒酒精精lmllml灌灌胃胃(或或作作为为唯唯一一饮饮料料)，饲饲以以单单纯纯玉玉米米面面(混混以以0.50.5胆胆固固醇醇)，共共1010周。周。评评价价：第第2 2周周出出现现小小叶叶中中心心小小片片状状肝肝细细胞胞变变性性坏坏死死，第第4 4周周开开始始有有较较薄薄的的纤纤维维间间隔隔形形成成，第第6 6周周肝肝脏脏间间隔

35、隔进进一一步步增增厚厚，有有假假小小叶叶形形成成：第第8 8周周形形成成厚厚的的纤纤维维间间隔隔，分分割形成假小叶。大鼠成活率割形成假小叶。大鼠成活率60%-80%60%-80%。该该模模型型是是目目前前国国内内外外常常采采用用的的动动物物模模型型，可可靠靠且且复复制制时时间间短短，肝肝纤纤维维化化进进展展稳稳定定，适适合合于于肝肝硬硬化化过过程程的动态研究。的动态研究。第三十三页，共80页。支气管哮喘动物模型支气管哮喘动物模型 大鼠、豚鼠和狗最常用。根据制模方式大鼠、豚鼠和狗最常用。根据制模方式(fngsh)(fngsh)可分可分为：为：主动免疫致敏动物模型：主动免疫致敏动物模型：利用哺乳类

36、大动物利用哺乳类大动物(如狗、羊和猴如狗、羊和猴)在自然状态下感染线在自然状态下感染线圆虫类寄生虫圆虫类寄生虫(主要是蛔虫主要是蛔虫)，血清中长期存在高滴度的抗某，血清中长期存在高滴度的抗某一寄生虫抗原的特应性抗体一寄生虫抗原的特应性抗体(IgE)(IgE)，再次受到这一寄生虫抗，再次受到这一寄生虫抗原的攻击，即迅速地产生抗原抗体反应，并使呼吸道产生支原的攻击，即迅速地产生抗原抗体反应，并使呼吸道产生支气管嗜喘反应；气管嗜喘反应；被动免疫致敏动物模型：被动免疫致敏动物模型：在实验前，用特殊的抗原及免疫辅佐剂注入动物体内，在实验前，用特殊的抗原及免疫辅佐剂注入动物体内，使动物致敏后，制备抗血清输

37、入动物使其被动致敏，再用同使动物致敏后，制备抗血清输入动物使其被动致敏，再用同一抗原进行攻击建立哮喘模型。一抗原进行攻击建立哮喘模型。第三十四页，共80页。卵白蛋白激发哮喘模型卵白蛋白激发哮喘模型造模机制：造模机制：过过敏敏原原卵卵白白蛋蛋白白注注入入豚豚鼠鼠体体内内，其其可可溶溶性性抗抗原原刺刺激激机机体体产产生生IgEIgE抗抗体体(kngt)(kngt)，使使机机体体处处于于致致敏敏状状态态。当当豚豚鼠鼠再再次次接接触触此此抗抗原原时时，IgEIgE介介导导发发生生抗抗原原抗抗体体(kngt)(kngt)反反应应，使使细细胞胞脱脱颗颗粒粒，释释放放出出活活性性化化学学物物质质如如组组胺胺

38、、嗜嗜酸酸性性粒粒细细胞胞趋趋化化因因子子等，作用于支气管引起气道高反应致哮喘。等，作用于支气管引起气道高反应致哮喘。第三十五页，共80页。造模方法：造模方法：豚豚鼠鼠：200200300g300g豚豚鼠鼠，第第1 1天天和和8 8天天，0.50.5卵卵白白蛋蛋白白溶溶于于生生理理(shngl)(shngl)盐盐水水10ml10ml加加至至超超声声雾雾化化吸吸入入器器，用用简简易易面面罩罩雾雾化化吸吸入入10min10min，第第16201620天天将将致致敏敏动动物物置置于于密密闭闭的的容容器器内内，用用1 1卵卵白白蛋蛋白白气气雾雾激激发发，使使动动物物暴暴露露在在卵卵白蛋白气雾中白蛋白气

39、雾中101030min30min，至出现哮喘样发作。，至出现哮喘样发作。评价：评价：出出现现咳咳嗽嗽、烦烦躁躁、口口唇唇和和四四肢肢紫紫绀绀，呼呼吸吸费费力力。生生理理(shngl)(shngl)记记录录仪仪描描记记呼呼吸吸曲曲线线，出出现现呼呼吸吸频频率率加加快快和和呼呼吸吸加加深深。病病理理检检查查发发现现毛毛细细血血管管扩扩张张，嗜嗜酸酸性性粒粒细胞浸润，腺体分泌活动亢进。细胞浸润，腺体分泌活动亢进。该该模模型型是是国国内内外外常常用用的的方方法法，方方法法简简单单，复复制制性性强强，且且豚豚鼠鼠是是最最好好的的显显示示气气道道高高反反应应型型的的特特征征动动物物，其其哮哮喘喘发发作作与

40、与人人表表现现相相似似。主主要要用用于于哮哮喘喘发发病病机机制制的的研研究究和治疗观察。和治疗观察。第三十六页，共80页。2.2.大鼠：大鼠：4 46 6周龄周龄120120180g180g雄性雄性SDSD大鼠，腹腔大鼠，腹腔(fqing)(fqing)注射卵白蛋白注射卵白蛋白100mg100mg抗原液抗原液1ml1ml，灭活百日咳杆菌疫苗，灭活百日咳杆菌疫苗51095109个和氢氧化铝干粉个和氢氧化铝干粉100mg100mg致敏。致敏。2 2周后用超声雾化器向箱内喷周后用超声雾化器向箱内喷雾雾1 1卵白蛋白，吸入卵白蛋白，吸入20min20min激发。激发。3.3.评价：评价：4.4.表现呼

41、吸气促，严重者呼吸减慢或节律不齐、轻度表现呼吸气促，严重者呼吸减慢或节律不齐、轻度紫绀、四肢瘫软、行动迟滞或俯伏不动、反应迟钝，连续激紫绀、四肢瘫软、行动迟滞或俯伏不动、反应迟钝，连续激发后大鼠体重减轻、毛色失去光泽、反应迟钝。本模型适用发后大鼠体重减轻、毛色失去光泽、反应迟钝。本模型适用于特异性抗原抗体反应的研究，有速发和迟发双相反应。于特异性抗原抗体反应的研究，有速发和迟发双相反应。第三十七页，共80页。邻苯二甲酸酐邻苯二甲酸酐(PA)(PA)致变应性哮喘模型致变应性哮喘模型(mxng)(mxng)机制：机制：苯苯酐酐是是小小分分子子化化合合物物，属属半半抗抗原原。由由于于半半抗抗原原不不

42、能能刺刺激激机机体体产产生生免免疫疫反反应应，故故需需与与蛋蛋白白结结合合成成全全抗抗原原，形形成成新新的的抗抗原原决决定定簇簇而而发发挥挥致致敏敏作作用用。据据此此实实验验制制备备了了两两种种不不同同载载体体的的苯苯酐酐全全抗抗原原即即PA-HASPA-HAS和和PA-BSAPA-BSA。用用致致敏敏的的抗抗血血清清给给正正常常动动物物注注射射使使其其致致敏敏，并并在在相相应应抗抗原吸入攻击下同样可诱发出哮喘。原吸入攻击下同样可诱发出哮喘。第三十八页，共80页。方法：方法：2-32-3月月龄龄250300g250300g豚豚鼠鼠。用用30mg30mg苯苯酐酐以以lmllml丙丙酮酮溶溶解解后

43、后，加加入入4242HAS HAS 9%9%碳碳酸酸氢氢钠钠溶溶液液中中，并并搅搅拌拌1h1h形形成成PAHSAPAHSA。同同法法制制备备PABSAPABSA。将将制制备备的的抗抗原原与与弗弗氏氏完完全全佐佐剂剂等等量量研研磨磨，使使之之成成油油包包水水状状。腹腹腔腔或或后后腿腿肌肌肉肉注注射射(zhsh)0.2(zhsh)0.20.3ml/0.3ml/只只(含含蛋蛋白白4-6mg)4-6mg)。注注射射(zhsh)3(zhsh)38 8周周后后抗抗原原吸吸入入激激发发。动动物物俯俯卧卧固固定定，激激发发前前描描记记正正常常的的呼呼吸吸曲曲线线。用用1:1000 1:1000 HSAHSA盐

44、盐水水溶溶液液雾雾化化后后吸吸入入1 13min3min，观观察察记录记录0.5h0.5h。第三十九页，共80页。模型评价：模型评价：豚豚鼠鼠吸吸入入抗抗原原后后1-10min1-10min内内，表表现现为为呼呼吸吸频频率率加加快快，由由100120100120次次/min/min增增加加到到140140160160次次/min/min；呼呼吸吸幅幅度度增增大大，同同时时伴伴有有咳咳嗽嗽、喷喷啑啑，重重者者呼呼吸吸极极度度费费力力、挣挣扎扎，有有短短暂暂窒窒息息甚甚至至死亡。发作一般持续死亡。发作一般持续303050min50min。PAPA是是确确切切的的职职业业性性致致喘喘物物质质(wzh

45、)(wzh)。苯苯酐酐哮哮喘喘属属变变应应性性哮哮喘喘，患患者者体体内内可可测测出出特特异异性性抗抗体体，苯苯酐酐抗抗原原吸吸入入激激发发试试验验常常呈呈现现阳阳性性。本本模模型型的的建建立立，为为进进一一步步研研究究该该哮哮喘喘的的病病理理变化提供了条件。变化提供了条件。第四十页，共80页。血小板活性因子血小板活性因子(PAF)(PAF)诱发哮喘模型诱发哮喘模型 造模机制造模机制 PAFPAF是是目目前前已已知知的的唯唯一一能能引引起起气气道道高高反反应应性性炎炎症症介介质质。PAFPAF引引发发哮哮喘喘发发作作的的原原因因可可能能(knng)(knng)是是PAFPAF通通过过嗜嗜酸酸性性

46、粒粒细细胞胞的的活活化化趋趋向向、脱脱颗颗粒粒、释释放放嗜嗜酸酸性性细细胞胞蛋蛋白白X(Epx)X(Epx)、嗜嗜酸酸性性细细胞胞阳阳离离子子蛋蛋白白(ECP)(ECP)和和碱碱性性蛋蛋白白等等细细胞胞毒毒性性物物质质引引起起气气道道上上皮皮细细胞胞损损伤伤和和脱脱落落。另另外外，激激活活的的嗜嗜酸酸性性细细胞胞本本身身又又合合成成和和释释放放PAFPAF，使这一过程加剧，最终引起气道高反应性。，使这一过程加剧，最终引起气道高反应性。第四十一页，共80页。方法方法:300500g300500g雄雄性性豚豚鼠鼠，激激发发实实验验当当天天，采采用用含含0.25%BSA0.25%BSA生生理理盐盐水

47、水，将将PAFPAF稀稀释释成成500ug/ml500ug/ml，按按1500ug/kg1500ug/kg的的剂剂量量雾雾化吸入，即引起化吸入，即引起(ynq)(ynq)豚鼠哮喘发作。豚鼠哮喘发作。评价评价:PAFPAF激激发发豚豚鼠鼠哮哮喘喘发发作作不不需需致致敏敏过过程程，直直接接利利用用其其特特性性而而引引发发气气道道的的高高反反应应性性，本本模模型型主主要要用用于于研研究究哮哮喘喘病病因因学学和发病机制的研究。和发病机制的研究。第四十二页，共80页。第五节第五节 内分泌、营养内分泌、营养(yngyng)(yngyng)疾病疾病动物模型动物模型糖尿病动物模型糖尿病动物模型缺铁性贫血缺铁性

48、贫血(pnxu)(pnxu)动物模型动物模型维生素维生素D D缺乏性佝偻病动物模型缺乏性佝偻病动物模型第四十三页，共80页。模型概述模型概述 糖尿病动物模型复制方法主要包括糖尿病动物模型复制方法主要包括5 5种：种：注注射射致致高高血血糖糖因因子子(ynz)(ynz)，如如生生长长激激素素、胰胰高高糖糖素素、糖糖皮皮质质激激素素以以及及儿儿茶茶酚酚胺胺类类激激素素等等，复复制制出出某某些些继继发发性性糖糖尿尿病病模模型。型。注注射射化化学学物物质质引引起起胰胰岛岛细细胞胞的的损损伤伤，如如链链脲脲佐佐菌菌素素(STZ)(STZ)、四四氧氧嘧嘧啶啶、二二苯苯硫硫代代卡卡肥肥腙腙可可造造成成胰胰岛

49、岛细细胞胞不不可可逆逆损损伤伤；环环丙丙庚庚哌哌、天天门门冬冬素素酶酶、66氨氨基基尼尼克克酰酰胺胺、22脱脱氧氧葡葡萄萄糖、甘露庚酮糖可引起糖、甘露庚酮糖可引起细胞可逆性损伤。细胞可逆性损伤。糖尿病动物模型糖尿病动物模型第四十四页，共80页。3.3.注射生物及生物制品引起注射生物及生物制品引起细胞破坏，如鼠脑炎、心肌炎病毒细胞破坏，如鼠脑炎、心肌炎病毒M M型变异可诱发若干品系的成年小鼠糖尿病，型变异可诱发若干品系的成年小鼠糖尿病，IL1IL1在一定剂量在一定剂量和范围内对和范围内对细胞有选择性细胞毒作用，导致细胞有选择性细胞毒作用，导致IDDMIDDM。4.4.手术切除胰腺的大部分或全部，

50、并给予高糖饮食刺激，引起继手术切除胰腺的大部分或全部，并给予高糖饮食刺激，引起继发性永久性糖尿病。发性永久性糖尿病。5.5.筛选、引种、繁殖遗传性及自发性糖尿病，这类动物模型更接筛选、引种、繁殖遗传性及自发性糖尿病，这类动物模型更接近人类糖尿病的自然近人类糖尿病的自然(zrn)(zrn)起病及发展，尤其适于研究糖尿起病及发展，尤其适于研究糖尿病的病因学。病的病因学。第四十五页，共80页。造模方法造模方法 病毒诱发法病毒诱发法 DBA/2DBA/2雌雌性性小小鼠鼠，皮皮下下接接种种(jizhng)(jizhng)脑脑炎炎、心心肌肌炎炎病病毒毒M M型型变变异异株株4747天天后后出出现现明明显显