最新实验7-血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳PPT课件.ppt

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1、实验实验7-7-血清蛋白醋酸纤维薄血清蛋白醋酸纤维薄膜电泳膜电泳目的n学习醋酸纤维薄膜电泳分离血学习醋酸纤维薄膜电泳分离血清蛋白质的原理和方法清蛋白质的原理和方法n学习蛋白质染色的方法学习蛋白质染色的方法n了解电泳法分离血清蛋白质的了解电泳法分离血清蛋白质的临床意义临床意义 定量n与蛋白质结合的染料可溶解于与蛋白质结合的染料可溶解于碱液，溶液颜色深浅与蛋白质碱液，溶液颜色深浅与蛋白质量呈正比量呈正比 n比色法比较各蛋白质条带溶于比色法比较各蛋白质条带溶于碱后的溶液颜色，可计算出各碱后的溶液颜色，可计算出各种蛋白质所占的百分比种蛋白质所占的百分比计算n nODOD总和总和 T T A +1+2+

2、A +1+2+n n白蛋白白蛋白 A/T 100 A/T 100n n11球蛋白球蛋白 1/T 1001/T 100n n22球蛋白球蛋白 2/T 1002/T 100n n球蛋白球蛋白 /T 100/T 100n n球蛋白球蛋白 /T 100/T 100操操 作作1、准备、准备（1 1）电泳仪的准备）电泳仪的准备（2 2）薄膜的准备：）薄膜的准备：n在薄膜无光泽面标记点样位置在薄膜无光泽面标记点样位置 n将薄膜置于巴比妥缓冲液中浸泡将薄膜置于巴比妥缓冲液中浸泡2、点样、点样（1）无光泽面朝上，吸去多余无光泽面朝上，吸去多余Buffer,Buffer,（2 2）用盖玻片蘸取少量血浆，垂直印在划

3、线）用盖玻片蘸取少量血浆，垂直印在划线 处。处。注意注意：不能超出边缘；不能重复点样；必须不能超出边缘；不能重复点样；必须与边缘平行要适量、均匀和垂直，并避免弄破与边缘平行要适量、均匀和垂直，并避免弄破薄膜薄膜。杨1.5cm8cm2cm3 3、平衡：、平衡：无光泽面朝下，点样侧位于阴极（无光泽面朝下，点样侧位于阴极（无光泽面朝下，点样侧位于阴极（无光泽面朝下，点样侧位于阴极（5min)5min)5min)5min)4 4、电泳：、电泳：打开电源，打开电源，打开电源，打开电源，U U U U160V160V160V160V或或或或I I I I1.6mA1.6mA1.6mA1.6mA t=45

4、t=45 t=45 t=4550min50min50min50min；冬季；冬季；冬季；冬季1 1 1 1小时小时小时小时5 5、染色：氨基黑、染色：氨基黑10B10B 染色充分，染色充分，染色充分，染色充分，5 5 5 510min10min10min10min6 6、漂洗：、漂洗：3 3 3 34 4 4 4个漂洗皿，洗去染料至背景无色。个漂洗皿，洗去染料至背景无色。个漂洗皿，洗去染料至背景无色。个漂洗皿，洗去染料至背景无色。临床意义 n n血浆蛋白是血浆中最主要的固体成分，含血浆蛋白是血浆中最主要的固体成分，含量为量为606080g/L 80g/L，绝大部分由肝脏合成，绝大部分由肝脏合成

5、，仅仅球蛋白由浆细胞合成球蛋白由浆细胞合成 n n正常值：正常值：白蛋白白蛋白57577272n n 1 1球蛋白球蛋白2 255 n n 2 2球蛋白球蛋白4 499 n n 球蛋白球蛋白6.56.51212 n n 球蛋白球蛋白12122020 血浆蛋白的主要功能 n维持血浆胶体渗透压维持血浆胶体渗透压 n调节血浆调节血浆pHpH值，维持酸碱平衡值，维持酸碱平衡 n运输营养物质、代谢物、激素、药运输营养物质、代谢物、激素、药物及金属离子等物及金属离子等 n免疫作用免疫作用 n n肝炎：白蛋白、肝炎：白蛋白、a1-a1-球蛋白、球蛋白、a2-a2-球蛋白、球蛋白、-球蛋白下降，球蛋白下降，球蛋白升高球蛋白升高n n肝硬化：白蛋白、肝硬化：白蛋白、a1-a1-球蛋白、球蛋白、a2-a2-球蛋白球蛋白下降明显，下降明显，球蛋白极度升高球蛋白极度升高n n肾病综合症：白蛋白降低，肾病综合症：白蛋白降低，22和和球蛋白球蛋白升高升高 临床检测：