高三生物一轮复习基础知识微生物的实验室培养.docx

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1、课题1 微生物的实验室培养1、根据培养基的物理性质/功能可将培养基可以分为哪几种？P14按物理性质分为：液体培养基、固体培养基（常用于微生物的分离、鉴定、活菌计数、菌种保藏(加入琼脂等，注意：琼脂不能为微生物提供能源)按功能分为：选择培养基、鉴别培养基2、培养基一般都含有哪几类营养物质？另外还需要满足微生物生长对哪些因素的要求？P15碳源、氮源、水、无机盐； PH、特殊营养物质、氧气3、牛肉膏、蛋白胨都可为微生物提供什么营养？碳源、氮源、维生素4、常见微生物培养中对特殊成分的需求？ 乳酸杆菌维生素；霉菌pH调至酸性；细菌pH调至中性或微碱性；厌氧微生物无氧；5、获得纯净培养物的关键是？P15防

2、止外来杂菌的污染6、消毒的概念？常用的消毒方法有哪些？使用较温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的部分微生物（不包括芽孢和孢子）；常用的消毒方法有：煮沸消毒法、巴氏消毒法、化学药剂消毒法、紫外线消毒（喷洒石炭酸或煤酚皂溶液加强消毒效果）。煮沸消毒法：100煮沸5-6分钟巴氏消毒法：70-75煮30分钟，或80煮15分钟化学药剂消毒法：70-75酒精皮肤消毒、氯气消毒水源紫外线消毒：紫外线照射30分钟7、灭菌的概念？灭菌的常用方法有哪些？使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物，包括芽孢和孢子。杀菌的常用方法有：灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌。灼烧灭菌：直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧；接

3、种工具（如接种环、接种针）或金属用具、试管口或瓶口等容易被污染的部位。干热灭菌（干热灭菌箱，160-170加热1-2h）：耐高温、需要保持干燥的物品，如玻璃器皿和金属用具高压蒸汽灭菌（高压蒸汽灭菌锅，压力100kPa,温度121,灭菌15-30分钟） 8、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的方法步骤是？P17计算 称量 融化 灭菌 倒平板9、倒平板环节一般需要注意什么事项？培养基灭菌后，需要冷却50左右，才能倒平板（用手触摸感觉）；锥形瓶瓶口须迅速通过火焰（通过灼烧灭菌，防止瓶口微生物污染培养基）；倒平板时培养皿打开一条稍大于瓶口的隙缝，倒完之后立即盖上皿盖；防止培养基溅在皿盖与皿底之间的部位（容易滋

4、生微生物，最好不用）；倒完平板冷却后，将平板倒置（防止皿盖上水珠落入培养基造成污染；减少培养基水分的散失）10、微生物接种的方法有哪些？其中常用的方法是？平板划线法、稀释涂布平板法、斜面接种法、穿刺接种法等。其中最常用的是平板划线法、稀释涂布平板法。11、平板划线法的操作过程？优点？缺点？通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线的操作，将聚集的菌种逐步稀释分散到培养基表面。操作步骤见书P18。优点：可观察菌落特征，对混合菌进行分离，一般用于菌种纯化。缺点：不能计数。12、平板划线法，为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？操作的第一步灼

5、烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。13、在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？以免接种环温度太高，杀死菌种。14、在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐步减

6、少，最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。15、稀释涂布平板法的操作过程？优点？缺点？将菌液进行一系列梯度稀释，并将不同稀释度菌液分别涂布到琼脂固体培养基上进行培养，从而能在培养基表面形成单个菌落。操作步骤见书P19。优点：可观察菌落特征，可计数，一般用于筛选菌落。缺点：较麻烦。16、稀释涂布平板法操作过程中需要注意什么？稀释方法：1mL9mL，n次，稀释10n倍；稀释时用手指轻压移液管上的橡皮头，吹吸三次，使菌液与水充分混匀；涂布器未用时一定要放置于70%的酒精，用时，灼烧冷却；系列稀释和涂布平板的所有操作都应在酒精灯火焰附近操作。17、培养基的制作是否合格？接种操作是否符合无菌要求？ P20

7、 如果未接种的培养基在恒温箱中保温12 d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的，否则需要重新制备。如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致，并符合大肠杆菌菌落的特点，则说明接种操作是符合要求的；如果培养基上出现了其他菌落，则说明接种过程中，无菌操作还未达到要求，需要分析原因，再次练习。18、菌种的保藏有几种方法？P20（1）临时保藏（适合频繁使用菌种）：过程：将菌种接种到试管的固体斜面培养基培养，在合适的温度下培养，菌落长成后，放入4冰箱中保藏，以后每36个月，转移一次新的培养基。缺点：保存时间较短，菌种容易被污染或产生变异。（2）长期保存方法：甘油管藏法，（1ml灭菌的甘油+菌液-20冰冻箱保藏）学科网（北京）股份有限公司