动物实验教学教材.ppt
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1、动物实验动物实验一、动物实验的基本过程一、动物实验的基本过程二、动物实验设计二、动物实验设计三、影响动物实验结果的因素及其控制三、影响动物实验结果的因素及其控制 四、动物实验中实验动物选择的基本原则四、动物实验中实验动物选择的基本原则2一、动物实验的基本过程一、动物实验的基本过程选题选题报批报批提出假说提出假说实验条件实验条件准备准备草拟实验草拟实验方案方案选择实验选择实验对象对象预实验修正与实施实修正与实施实验方案验方案评估与报告评估与报告3二、动物实验设计二、动物实验设计动物实验(动物实验(animal experiment):把动物作为实验对象在动物身上进行实验,根据获把动物作为实验对象
2、在动物身上进行实验,根据获得的结果逐步过度到人体。得的结果逐步过度到人体。动物实验设计动物实验设计(experimental animal design):运用实验动物学、统计学理论和方法来进行实验设运用实验动物学、统计学理论和方法来进行实验设计,确保动物实验内容安排合理,对实验结果进行高效计,确保动物实验内容安排合理,对实验结果进行高效率的统计分析,以使用最少的实验动物得出相对最优的率的统计分析,以使用最少的实验动物得出相对最优的结果和可靠的结论。结果和可靠的结论。4二、动物实验设计二、动物实验设计(一)动物实验的三个基本要素(一)动物实验的三个基本要素 处理因素处理因素(study fac
3、tor,treatment)受试对象受试对象(study subject)实验效应实验效应(experimental effect)5处理因素处理因素处理因素处理因素受试对象受试对象受试对象受试对象实验效应实验效应实验效应实验效应6(一)动物实验的基本要素(一)动物实验的基本要素1、处理因素:、处理因素:研究者根据研究目的欲施加或欲观察的能研究者根据研究目的欲施加或欲观察的能作用于受试对象并引起直接或间接效应的因素。作用于受试对象并引起直接或间接效应的因素。l非处理因素:非处理因素:与处理因素相对应的,也能使受试对象与处理因素相对应的,也能使受试对象产生效应的因素,混杂在处理因素中间,会干扰实
4、验产生效应的因素,混杂在处理因素中间,会干扰实验效应,所以又称混杂因素(效应,所以又称混杂因素(confounding factorconfounding factor)7l明确处理因素与非处理因素明确处理因素与非处理因素处理因素:牛磺酸、罗格列酮;非处理因素:大鼠的年龄,性别,体重,营养状况,进食量、环境因素、技术因素等。尽可能使非处理因素在所比较的各组中齐同。l处理因素标准化处理因素标准化如药物:剂量、出厂批号、给药方式和时间等。8(一)动物实验的基本要素(一)动物实验的基本要素2、受试对象:、受试对象:是根据研究目的而确定的是根据研究目的而确定的实验动物实验动物。受试对象的基本条件:受试
5、对象的基本条件:l对处理因素敏感对处理因素敏感l反应稳定反应稳定l统一标准统一标准9(一)动物实验的基本要素(一)动物实验的基本要素3 3、实验效应:、实验效应:处理因素作用于动物的反应和结果,它通过具体的观察处理因素作用于动物的反应和结果,它通过具体的观察指标来表达。指标来表达。选择观察指标的依据:选择观察指标的依据:客观性、特异性、敏感性高客观性、特异性、敏感性高l客观指标:借助仪器等手段进行测量来反映观察结果,人为影响因客观指标:借助仪器等手段进行测量来反映观察结果,人为影响因素较少。尽量选用客观的、定量的指标。素较少。尽量选用客观的、定量的指标。l特异性高的指标容易揭示处理因素的作用,
6、不易受到混杂因素的干特异性高的指标容易揭示处理因素的作用,不易受到混杂因素的干扰,可减少假阳性。表示观察指标能鉴别真阴性的能力。扰,可减少假阳性。表示观察指标能鉴别真阴性的能力。l敏感性高表示该指标检出真阳性的能力强。敏感性高表示该指标检出真阳性的能力强。10肿瘤动物模型的活体成像观察肿瘤动物模型的活体成像观察11一、动物实验设计一、动物实验设计(二)动物实验设计的三大原则(二)动物实验设计的三大原则对照原则对照原则(control)随机化原则随机化原则(Randomization)重复原则重复原则(Replication)12对照原则对照原则 1、对照的意义对照的意义区分处理因素与非处理因素
7、的效应,是比较的必要基础区分处理因素与非处理因素的效应,是比较的必要基础消除或减少实验误差消除或减少实验误差实验组:实验组:对照组:对照组:比较结果比较结果非处理因素非处理因素+处理效应处理效应+非处理效应非处理效应处理因素处理因素处理效应处理效应非处理因素非处理因素非处理效应非处理效应处理因素处理因素13对照原则对照原则2、对照的种类对照的种类空白对照空白对照(正常组)实验对照实验对照(手术组)(手术组)标准对照标准对照(阳性对照)(阳性对照)自身对照自身对照相互对照相互对照14对照原则对照原则空白对照:空白对照:对照组不施加任何处理因素。对照组不施加任何处理因素。实验组:实验组:灌胃给药灌
8、胃给药对照组:对照组:无任何实验操作无任何实验操作15对照原则对照原则实验对照:实验对照:对照组不施加处理因素,但施加基础对照组不施加处理因素,但施加基础实验条件(非处理因素),包括实验条件(非处理因素),包括操作技术、被试操作技术、被试因素的溶媒因素的溶媒等。凡对实验效应产生影响的实验条等。凡对实验效应产生影响的实验条件,宜采用此法。件,宜采用此法。抗卒中药物抗卒中药物+手术手术+非处理因素非处理因素药物效应药物效应+手术效应手术效应+非处理因素效应非处理因素效应手术手术+非处理因素非处理因素手术效应手术效应+非处理因素效应非处理因素效应药物药物药物效应药物效应非处理因素非处理因素非处理因素
9、效应非处理因素效应16对照原则对照原则标准对照:标准对照:用现有的标准方法或常规方法作对照。如在药理用现有的标准方法或常规方法作对照。如在药理学研究中,学研究中,用已知的有效药物、有效疗法或公认的标准疗法作对用已知的有效药物、有效疗法或公认的标准疗法作对照。照。自身对照:自身对照:实验在同一受试对象上进行。此法简单易行,使实验在同一受试对象上进行。此法简单易行,使用广泛,但若实验前后某些环境或自身因素发生改变,并且会影用广泛,但若实验前后某些环境或自身因素发生改变,并且会影响实验结果,就难以说明问题。响实验结果,就难以说明问题。相互对照:相互对照:几个实验相互对照,如比较几种药物治疗同一疾几个
10、实验相互对照,如比较几种药物治疗同一疾病的疗效。病的疗效。17肾宁胶囊对肾宁胶囊对2型糖尿病大鼠肾脏的型糖尿病大鼠肾脏的保护作用保护作用l表表1肾宁胶囊对糖尿病大鼠血糖、肾宁胶囊对糖尿病大鼠血糖、24h尿蛋白、血尿尿蛋白、血尿素氮、血肌酐比较素氮、血肌酐比较(x s)组别组别n 血糖血糖(mmol/L)24h尿蛋白尿蛋白(mg)血尿素氮血尿素氮(mmol/L)血肌酐血肌酐(mol/L)对照组对照组106.41.010.01.35.01.149.58.9模型组模型组1116.52.1a130.826.7a10.61.8a62.319.6a治疗组治疗组1112.61.5ac61.623.3ac6.
11、11.0c49.58.5c思考:对照组设计是否合理?思考:对照组设计是否合理?18随机化原则随机化原则1、随机化的意义随机化的意义随机随机随意随意2、随机化的应用随机化的应用在实验对象的在实验对象的抽样抽样、分组分组和和实验顺序实验顺序中均应随机中均应随机化。化。提高组间均衡性提高组间均衡性得到随机变量得到随机变量19随机化原则随机化原则抽样随机:抽样随机:每一个符合条件的实验对象参加实验的机会相同,每一个符合条件的实验对象参加实验的机会相同,即总体中每个个体有相同的机会被抽到样本中来。这样可即总体中每个个体有相同的机会被抽到样本中来。这样可保证所得到的样本具有代表性,使实验结果具有普遍意义。
12、保证所得到的样本具有代表性,使实验结果具有普遍意义。分组随机:分组随机:每个实验对象分到处理组和对照组的机会相同,每个实验对象分到处理组和对照组的机会相同,以保证各处理组间实验对象尽可能均衡一致,以提高各组以保证各处理组间实验对象尽可能均衡一致,以提高各组间的可比性。间的可比性。实验顺序随机:实验顺序随机:每个实验对象接受处理先后的机会相同,以每个实验对象接受处理先后的机会相同,以消除不平衡的实验顺序所产生的偏差。消除不平衡的实验顺序所产生的偏差。20随机化原则随机化原则3、随机化的方法随机化的方法抽签法抽签法 随机数字表法随机数字表法 随机排列表法随机排列表法其他:计算机产生随机数法等其他:
13、计算机产生随机数法等21随机化原则随机化原则例:将例:将10只大鼠应用随机数字表分配到只大鼠应用随机数字表分配到A、B两组。两组。(1)动物编号;)动物编号;(2)从随机数字表查得)从随机数字表查得10个两位随机数;个两位随机数;(3)将随机数从小到大排列得序号)将随机数从小到大排列得序号R,规定,规定R15者者为为A组,组,R610者者为为B组。组。动动物物12345678910随机数随机数93225364390710637635序号序号R10368512794分分组组BABBAAABBA22重复原则重复原则1.重复的意义重复的意义实验样本含量的大小实验样本含量的大小实验的样本量必须足够大,
14、在相同实验条件下有实验的样本量必须足够大,在相同实验条件下有充分的重复,以避免实验结果的偶然性,突出表现充分的重复,以避免实验结果的偶然性,突出表现其必然规律。其必然规律。重复次数的多少重复次数的多少任何实验结果的可靠性应经得起重复实验的考验,任何实验结果的可靠性应经得起重复实验的考验,重复实验是重复实验是检查实验结果可靠性检查实验结果可靠性的惟一方法。的惟一方法。23重复原则重复原则2.确定样本量的方法确定样本量的方法粗估法粗估法 估算方法:当实验者给定估算方法:当实验者给定和和,并对,并对和和作出作出估算后用公式进行估计样本量。估算后用公式进行估计样本量。动物种类每组例数 计量资料 计数资
15、料小动物1030例/组不少于10不少于30中等动物820例/组不少于8不少于20大动物620例/组不少于6不少于2024第二节第二节 影影 响响 动动 物物 实实 验验 效效 果果 的的 因因 素素动物因素动物因素环境因素环境因素营养因素营养因素技术因素技术因素25(一)、动物因素对动物实验的影响(一)、动物因素对动物实验的影响1.1.种属:不同种属的动物,在解剖、生理特征和对各种因素(药种属:不同种属的动物,在解剖、生理特征和对各种因素(药代、药效)等的反应上,各有特性。代、药效)等的反应上,各有特性。2.2.品种、品系品种、品系:各个品系均有其独特的品系特征。:各个品系均有其独特的品系特征
16、。3.3.年龄及体重年龄及体重:动物的解剖生理特征和反应性可随年龄而有明显:动物的解剖生理特征和反应性可随年龄而有明显的变化。的变化。4.4.性别性别:不同性别动物对同一药物的敏感性差异较大。:不同性别动物对同一药物的敏感性差异较大。5.5.生理状况:怀孕、哺乳的动物不宜选用生理状况:怀孕、哺乳的动物不宜选用6.6.健康状况:健康动物对药物的耐受量比有病的动物健康状况:健康动物对药物的耐受量比有病的动物要大。要大。261.种属种属 大、小鼠对催吐药不产生呕吐反应,而犬则容易产生。大、小鼠对催吐药不产生呕吐反应,而犬则容易产生。吗吗啡啡对对家家犬犬、兔兔、猴猴、大大鼠鼠和和人人主主要要作作用用是
17、是中中枢枢抑抑制制,而对小鼠和猫主要作用是兴奋。而对小鼠和猫主要作用是兴奋。苯苯胺胺及及其其衍衍生生物物对对家家犬犬、猫猫和和豚豚鼠鼠能能引引起起与与人人相相似似的的病病理理变变化化,产产生生变变性性血血红红蛋蛋白白,但但对对家家兔兔则则不不易易产产生生变性血红蛋白,大鼠则完全不产生。变性血红蛋白,大鼠则完全不产生。基础代谢率相差很大基础代谢率相差很大:小鼠、鸽、豚鼠、大鼠、猪。小鼠、鸽、豚鼠、大鼠、猪。272.品系品系例:例:DBA/1DBA/1与与DBA/2:DBA/2:对对NewcastleNewcastle病病毒毒反反应应:前前者者肺肺炎炎,后者脑炎。后者脑炎。噪音噪音:DBA/2:D
18、BA/2敏感,敏感,C57BL/6C57BL/6不敏感。不敏感。肾上腺皮质激素肾上腺皮质激素:C57BL:C57BL敏感程度高于敏感程度高于DBA12DBA12倍。倍。放射线:放射线:BALB/cAnNBALB/cAnN敏感,敏感,C57BR/CdJNC57BR/CdJN具有抵抗力。具有抵抗力。肿瘤移植成功率:裸鼠低于严重联合免疫缺陷小鼠肿瘤移植成功率:裸鼠低于严重联合免疫缺陷小鼠28狗与人的年龄对应(年)狗与人的年龄对应(年)狗狗12345678910 11 1213 14 15 16人人 15 24 28 34 40 42 44 48 52 56 60 64 68 72 76 803.3.
19、年龄和体重年龄和体重对实验处理的敏感程度:幼年老年成年29部分实验动物的年龄对照表部分实验动物的年龄对照表303.3.体重和年龄体重和年龄l动物的体重与年龄有一定的关系,也可按体重推算年动物的体重与年龄有一定的关系,也可按体重推算年龄,应注意的是,动物体重除与年龄密切相关外龄,应注意的是,动物体重除与年龄密切相关外,与动与动物品种、品系、营养状态、饲养管理等因素有关。物品种、品系、营养状态、饲养管理等因素有关。常规实验:成年动物常规实验:成年动物肿瘤接种实验肿瘤接种实验314.4.性别性别l一般来说,实验若对动物性别无特殊要求,则一般来说,实验若对动物性别无特殊要求,则宜选用雌雄各半。宜选用雌
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