动物细胞培养和核移植技术(上课用)讲课稿.ppt
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1、动物细胞培养和核移植技动物细胞培养和核移植技术术(上课用上课用)植物细胞工程常用的技术手段有哪些?植物细胞工程常用的技术手段有哪些?那么动物细胞常用的技术那么动物细胞常用的技术手段呢?手段呢?植物组织培养植物组织培养植物体细胞杂交植物体细胞杂交问题探讨问题探讨 动物细胞培养动物细胞培养动物细胞融合动物细胞融合生产单克隆抗体生产单克隆抗体动物细胞核移植动物细胞核移植动物动物细胞细胞工程工程常用常用技术技术其中其中动物细胞培养技术动物细胞培养技术是其他是其他动物细胞工程技术的基础动物细胞工程技术的基础1、简述动物细胞培养的过程、条件及、简述动物细胞培养的过程、条件及应用应用2、对比说出动物细胞培养
2、与植物组织、对比说出动物细胞培养与植物组织培养原理、条件、结果、培养目的培养原理、条件、结果、培养目的学习目标:学习目标:就是从动物机体中就是从动物机体中取出取出相关组织相关组织,将,将它分散成它分散成单个细胞单个细胞,然后,然后,放在放在适宜适宜的培养基的培养基中,让这中,让这些细胞些细胞生长和繁殖生长和繁殖。1、动物细胞培养概念:、动物细胞培养概念:2 2、原理:、原理:细胞增殖细胞增殖定义:定义:人们通常将人们通常将动物组织动物组织消化后消化后的的初次培养初次培养称为原代称为原代培养。培养。胰蛋白酶处理胰蛋白酶处理取出组织取出组织胚胎或幼龄动物器官组织胚胎或幼龄动物器官组织剪碎剪碎单个细
3、胞单个细胞细胞悬液细胞悬液转入培养瓶内培养转入培养瓶内培养(贴壁生长贴壁生长长成单层细胞。长成单层细胞。有有接触抑制接触抑制现象)现象)。原代培养原代培养3 3、过程、过程原代培养原代培养增殖能力强,分裂旺盛,分化增殖能力强,分裂旺盛,分化程度低,容易培养程度低,容易培养去掉组织间去掉组织间蛋白蛋白加培养液加培养液强调一:细胞贴壁过程强调一:细胞贴壁过程细胞贴壁:细胞贴壁:在培养瓶悬液中分散的细胞很快就贴在培养瓶悬液中分散的细胞很快就贴附在瓶壁上,称为细胞贴壁。附在瓶壁上,称为细胞贴壁。培养瓶或培养皿壁要求:培养瓶或培养皿壁要求:表面光滑、无毒、易于表面光滑、无毒、易于帖附。帖附。当贴壁细胞分
4、裂生当贴壁细胞分裂生长到表面相互接触时长到表面相互接触时,细胞就会停止分裂增细胞就会停止分裂增殖,这种现象称为细殖,这种现象称为细胞的胞的接触抑制。接触抑制。强调二:接触抑制强调二:接触抑制细胞的接触抑制细胞的接触抑制接触抑制:接触抑制:细胞在贴壁生长过程中,随着细胞分细胞在贴壁生长过程中,随着细胞分裂,数量不断增加,最后形成一个单层,此时细裂,数量不断增加,最后形成一个单层,此时细胞间相互接触,细胞分裂和生长停止,数量不再胞间相互接触,细胞分裂和生长停止,数量不再增加。增加。50代以后代以后失去接触抑制失去接触抑制接触抑制接触抑制动物细胞生长特性部分细胞突变,获部分细胞突变,获得不死性,向癌
5、细得不死性,向癌细胞方向发展,糖蛋胞方向发展,糖蛋白减少。白减少。定义:定义:当原代培养的细胞处于当原代培养的细胞处于接触抑制后接触抑制后,用用胰蛋白酶胰蛋白酶处理处理,使细胞从瓶壁上使细胞从瓶壁上脱离脱离下下来来,然后加入新的培养液然后加入新的培养液,将细胞分离稀释将细胞分离稀释,并并从原培养瓶内转接到新的培养瓶内从原培养瓶内转接到新的培养瓶内,这这个过程称个过程称传代培养传代培养.(分瓶培养的过程分瓶培养的过程)传代培养传代培养遗传物质未遗传物质未改变改变 原代细胞原代细胞4050代细胞代细胞(细胞株细胞株)遗传物质己遗传物质己改变改变无限传代(无限传代(细胞系细胞系)分瓶分瓶传代培养传代
6、培养胰蛋白酶胰蛋白酶原代培养原代培养接触抑制接触抑制传代培养传代培养细胞株细胞株:传代细胞一般能传到:传代细胞一般能传到40-5040-50代,代,遗遗传物质一般不会发生改变传物质一般不会发生改变,叫细胞株。,叫细胞株。强调:细胞株、细胞强调:细胞株、细胞系系(了解即可,老课本体系了解即可,老课本体系)细胞系细胞系:传代:传代5050代以后代以后又出现细胞生长停又出现细胞生长停滞状态,滞状态,部分细胞部分细胞遗传物质发生了改变,遗传物质发生了改变,能连续传代,获得不死性,叫细胞系。能连续传代,获得不死性,叫细胞系。细胞株和细胞系的区别细胞株和细胞系的区别:细胞系的遗传物细胞系的遗传物质改变,具
7、有癌细胞的特点,失去接触抑质改变,具有癌细胞的特点,失去接触抑制,容易传代培养。制,容易传代培养。总结:动物细胞培总结:动物细胞培养过程养过程动物胚胎或幼龄动物的动物胚胎或幼龄动物的组织、器官组织、器官配置细胞悬液配置细胞悬液剪碎用胰蛋白酶处理剪碎用胰蛋白酶处理1010代细胞代细胞转入培养瓶转入培养瓶40-5040-50代细胞代细胞传传代代培培养养无限传代无限传代单个细胞单个细胞加培养液稀释加培养液稀释传代传代1010代以内,代以内,遗传物质不改变,遗传物质不改变,保持保持正常正常二倍体核型二倍体核型。传代传代10-5010-50代左右,增长缓慢以代左右,增长缓慢以至于完全停止,至于完全停止,
8、部分细胞核型可部分细胞核型可能发生变化能发生变化(遗传物质可能改变(遗传物质可能改变)为什么用胰蛋白酶处理?为什么用胰蛋白酶处理?处理细胞间质蛋白质处理细胞间质蛋白质分瓶分瓶传代培养传代培养原代培养特点:原代培养特点:细胞贴壁、细胞贴壁、接触抑制接触抑制继续传代培养少部分细胞继续传代培养少部分细胞获得不获得不死性死性,细胞突变细胞突变,遗传物质已经遗传物质已经改变改变,等同于癌细胞等同于癌细胞。细细胞胞株株:一一般般说说遗遗传传物物质质未未改改变变细细胞胞系系:遗遗传传物物质质已已改改变变原原代代培培养养 1、为什么要对取出的动物组织进行处理,使、为什么要对取出的动物组织进行处理,使细胞分散?
9、细胞分散?分散的单个细胞容易摄取所需的营养,排出分散的单个细胞容易摄取所需的营养,排出代谢废物;而用大块组织培养时,内部细胞的营代谢废物;而用大块组织培养时,内部细胞的营养供应和代谢废物的排出都较困难。养供应和代谢废物的排出都较困难。2、用胰蛋白酶对动物组织进行处理是因为细、用胰蛋白酶对动物组织进行处理是因为细胞间的物质主要是什么?用胃蛋白酶可以吗?胞间的物质主要是什么?用胃蛋白酶可以吗?细胞间的物质主要是蛋白质(胶原纤维)。细胞间的物质主要是蛋白质(胶原纤维)。胃蛋白酶作用的适宜胃蛋白酶作用的适宜pH约为约为2,当,当pH大于大于6时,胃蛋白酶就会失去活性。胰蛋白酶作用的适宜时,胃蛋白酶就会
10、失去活性。胰蛋白酶作用的适宜环境环境pH为为7.28.4。多数动物细胞培养的适宜。多数动物细胞培养的适宜pH为为7.27.4。3、胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗?为什么?、胰蛋白酶真的不会把细胞消化掉吗?为什么?胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白外,长时胰蛋白酶除了可以消化细胞间的蛋白外,长时间的作用也会消化细胞膜蛋白,对细胞有损伤作用,间的作用也会消化细胞膜蛋白,对细胞有损伤作用,因此必须控制好胰蛋白酶的消化时间。因此必须控制好胰蛋白酶的消化时间。4、动物细胞培养能否象植物组织培养那样获、动物细胞培养能否象植物组织培养那样获得克隆个体?需要诱导其脱分化的过程吗?得克隆个体?需要诱导其脱分化的过
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