实验五、血清中谷丙转氨酶的测定说课讲解.ppt

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1、血清(xuqng)中谷丙转氨酶的测定实验实验(shyn)五五（2,4-二硝基苯肼法）二硝基苯肼法）第一页，共9页。一、实验一、实验(shyn)目的目的掌握血清丙氨酸氨基转移酶活性测定掌握血清丙氨酸氨基转移酶活性测定(cdng)的基本原的基本原理。理。了解血清丙氨酸氨基转移酶的测定了解血清丙氨酸氨基转移酶的测定(cdng)方法及临床方法及临床意义。意义。第二页，共9页。510nm光吸收法测定光吸收法测定光吸收法测定光吸收法测定相对血清相对血清(xuqng)ALT活力活力二、实验二、实验(shyn)原理原理 丙氨酸氨基转移酶丙氨酸氨基转移酶(ALT)催化丙氨酸与催化丙氨酸与-酮戊二酸生成丙酮酸和谷

2、氨酸。丙酮酮戊二酸生成丙酮酸和谷氨酸。丙酮酸可与酸可与2,4-二硝基苯肼在酸性二硝基苯肼在酸性(sun xn)溶液中反应形成相应的溶液中反应形成相应的2,4-二硝基苯腙，二硝基苯腙，呈黄色，后者在碱性条件下呈红棕色。呈黄色，后者在碱性条件下呈红棕色。（1）丙氨酸丙氨酸+-酮戊二酸酮戊二酸 丙酮酸丙酮酸+谷氨酸谷氨酸 ALT （2）丙酮酸丙酮酸+2,4-二硝基苯肼二硝基苯肼丙酮酸丙酮酸2,4-二硝基苯肼二硝基苯肼(黄色黄色)丙酮酸丙酮酸2,4-二硝基苯肼二硝基苯肼（3）苯腙硝醌化合物苯腙硝醌化合物NaOH（黄色）（黄色）（红棕色）（红棕色）第三页，共9页。三、实验三、实验(shyn)器材器材材料

3、：人血清试剂：谷丙转氨酶测定试剂盒用具(yngj)：分光光度计，微量移液枪，试管，试管架，恒温水浴锅第四页，共9页。（1）取）取3支试管，按下表加入支试管，按下表加入(jir)试剂试剂:试剂试剂试剂空白管试剂空白管标准管标准管样品管样品管基质液基质液(uL)200200200标准液标准液(uL)50.0血清样品血清样品(uL)50.0蒸馏水蒸馏水(uL)50.0混合混合37水浴放置水浴放置30min显色剂显色剂(uL)20020020037水浴放置水浴放置20min稀释稀释NaOH(uL)200020002000四、实验四、实验(shyn)步骤步骤冷却冷却(lngqu)至室温后，至室温后，51

4、0nm处比处比色色比色方法：以空白管调零，读取标准管及比色方法：以空白管调零，读取标准管及样品样品管光密度值。管光密度值。第五页，共9页。（2）计算：）计算：依据朗伯依据朗伯-比尔定律：比尔定律：A=KLC 标准标准(biozhn)管谷丙转氨酶活力：管谷丙转氨酶活力：57U/L 样品样品(yngpn)(yngpn)管谷丙转氨酶管谷丙转氨酶活力（活力（U/LU/L）样品样品(yngpn)(yngpn)管管光密度值光密度值 标准管光密度值标准管光密度值57U样=A样A标U标第六页，共9页。参考值谷丙转氨酶谷丙转氨酶 血清血清(xuqng)参考值：参考值：0 50U/L 第七页，共9页。正确使用比色器皿：手拿比色皿的毛面；比色正确使用比色器皿：手拿比色皿的毛面；比色液应占比色皿的液应占比色皿的2/3。每次测定时都需用试剂空白每次测定时都需用试剂空白(kngbi)溶液调溶液调零，不能用蒸馏水代替零，不能用蒸馏水代替微量移液枪的正确使用微量移液枪的正确使用注意事项注意事项第八页，共9页。思考思考(sko)(sko)1、血清、血清(xuqng)谷丙转氨酶测定的临床谷丙转氨酶测定的临床意义？意义？第九页，共9页。