09.第九章 维生素类药物的分析.ppt

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1、维生素：维持人体正常代谢功能维生素：维持人体正常代谢功能 所必需的生物活性物质所必需的生物活性物质Ch.P2005:VCh.P2005:VA A，B B1 1，B B2 2，B B6 6，B B1212，C C，D D2 2，D D3 3，E E，K K1 1 叶酸、烟酰胺等原料及制剂共叶酸、烟酰胺等原料及制剂共4040多种。多种。维生素分类：维生素分类：水溶性：水溶性：B B族，族，C C 脂溶性：脂溶性：A A，D D，E E，K K等等概述概述主主要要内内容容维生素维生素E E的分析的分析维生素维生素D D的分析的分析维生素维生素B B1 1的分析的分析维生素维生素C C的分析的分析维生

2、素维生素A A的分析的分析（一）结构与性质（一）结构与性质 1 1、结构、结构 环己烯环己烯 多烯醇（共轭双键系统）多烯醇（共轭双键系统）R=HR=H V VA A醇醇(维生素维生素A A1 1)：性质活泼：性质活泼 R=CHR=CH3 3CO-CO-V VA A醋酸酯：性质稳定醋酸酯：性质稳定一、维生素一、维生素A A的分析的分析2 2、物理性质、物理性质 淡黄色或红色油状或固定物，几乎无气味，淡黄色或红色油状或固定物，几乎无气味，不溶于水，易溶于氯仿，乙醚，环己烷和油中不溶于水，易溶于氯仿，乙醚，环己烷和油中 V VA A醇：醇：maxmax(异丙醇异丙醇)325nm)325nm V VA

3、 A酯：酯：maxmax(环己烷环己烷)328nm)328nm一、维生素一、维生素A A的分析的分析3 3、化学性质、化学性质 日光照射裂解日光照射裂解 空气、氧化剂、加热或金属离子等空气、氧化剂、加热或金属离子等 产生环氧化物、醛、酸产生环氧化物、醛、酸 三氯化锑反应三氯化锑反应 蓝色产物（不稳定）、渐变成紫红色蓝色产物（不稳定）、渐变成紫红色一、维生素一、维生素A A的分析的分析（二）（二）鉴别鉴别 1 1、Carr-priceCarr-price反应（三氯化锑）反应（三氯化锑）三氯化锑的氯仿液与三氯化锑的氯仿液与V VA A作用产生蓝色作用产生蓝色 渐变成紫红色渐变成紫红色 无水：三氯化

4、锑水解、无水：三氯化锑水解、V VA A不溶不溶 无醇：乙醇能和反应中正碳离子作用无醇：乙醇能和反应中正碳离子作用一、维生素一、维生素A A的分析的分析 2 2、紫外法、紫外法 本品加无水乙醇盐酸溶解，立即紫外扫描本品加无水乙醇盐酸溶解，立即紫外扫描 326nm326nm单一吸收峰单一吸收峰(V(VA A)水浴加热水浴加热30s30s，迅速冷却，再扫描，迅速冷却，再扫描 348348、367367和和389nm389nm三个尖锐吸收峰三个尖锐吸收峰(去水去水V VA A)一、维生素一、维生素A A的分析的分析（三）含量测定（三）含量测定 紫外法（三点校正法）紫外法（三点校正法）MortonMo

5、rton和和StubbStubb（AnalystAnalyst，19461946，71:34871:348）一、维生素一、维生素A A的分析的分析1 1 、维生素、维生素A A中存在的相关物质和不相关物质中存在的相关物质和不相关物质1 1）衍生物）衍生物维生素维生素A A2 2（去氢维生素（去氢维生素A A）维生素维生素A A3 3（去水维生素（去水维生素A A）一、维生素一、维生素A A的分析的分析2 2）异构体）异构体 目前分离得到目前分离得到5 5个异构体个异构体 新维生素新维生素Aa(2-Aa(2-顺型顺型)新维生素新维生素Ab(4-Ab(4-顺型顺型)一、维生素一、维生素A A的分析

6、的分析一、维生素一、维生素A A的分析的分析新维生素新维生素Ac(2.4-Ac(2.4-顺型顺型)异维生素异维生素Aa(6-Aa(6-顺型顺型)异维生素异维生素Ab(2.6-Ab(2.6-二顺型二顺型)3 3）氧化产物：环氧化物，醛，酸）氧化产物：环氧化物，醛，酸 4 4）中间体、副产品：）中间体、副产品：5 5）裂解产物：）裂解产物：6 6）鲸醇（）鲸醇（KitolKitol）:二聚体，非生物活性二聚体，非生物活性 7 7）不相关物质：抗氧剂，稀释用油）不相关物质：抗氧剂，稀释用油 在在325325328nm328nm处均有吸收处均有吸收 不相关吸收或背景吸收不相关吸收或背景吸收一、维生素一

7、、维生素A A的分析的分析2 2、原理、原理1 1）维生素）维生素A A最大吸收波长附近（最大吸收波长附近（310310340nm340nm）杂质吸收近似一条直线杂质吸收近似一条直线2 2）物质吸收光谱的加和性）物质吸收光谱的加和性 A A总总=A AVAVA+A+A杂质杂质一、维生素一、维生素A A的分析的分析3.3.三点选择三点选择一、维生素一、维生素A A的分析的分析维生素维生素A A醇醇 1 1)三点：三点：325325、310310、334nm334nm 2 2)等吸收点：等吸收点：A A310310=A=A334334=3 3）校子公式：）校子公式：A A325325（校正）（校正

8、）=6.815A=6.815A325325-2.555A-2.555A310310-4.260A-4.260A334334一、维生素一、维生素A A的分析的分析维生素维生素A A酯酯 1 1）三点：）三点：328328、316316、340nm340nm 2 2）波长等距：）波长等距：12nm12nm 3 3）校正公式：）校正公式：A A328328（校正）（校正）=3.52(2A3.52(2A328328-A-A316316-A-A340340)一、维生素一、维生素A A的分析的分析4.4.校正公式的应用及含量计算校正公式的应用及含量计算 第一法第一法:样品样品9 91 15IU/ml5IU

9、/ml环己烷溶液环己烷溶液 max326max326329nm329nm 300 300、316316、328328、340340、360nm360nm （A A1 1、A A2 2、A A3 3、A A4 4、A A5 5)计算吸收度比值计算吸收度比值 (A A1 1/A/A3 3、A A2 2/A/A3 3、A A3 3/A/A3 3、A A4 4/A/A3 3、A A5 5/A/A3 3)计算比值差计算比值差一、维生素一、维生素A A的分析的分析吸收度比值规定值吸收度比值规定值一、维生素一、维生素A A的分析的分析波长（波长（nm）300316328340360吸收度比值吸收度比值（规定

10、）（规定）0.5550.9071.0000.8110.299max吸收度比吸收度比值范围值范围Amax含量（效价）含量（效价）3263290.02Amax(不须校正不须校正)3263290.023%-3%-15%+3%第二法第二法不在不在326329第二法第二法 第二法：第二法：a a、maxmax不在不在326326329nm329nm b b、校正与未校正吸收度比较、校正与未校正吸收度比较-+3%+3%样品：样品：9 915IU/ml15IU/ml一、维生素一、维生素A A的分析的分析max323327nm之间之间300、310、325及及334nmA300/A3250.73，计算，计算A

11、325（校正）（校正）a、校正在未校正吸收度、校正在未校正吸收度土土3%以未校正吸收度计算以未校正吸收度计算b、土土3%，以校正吸收度计算，以校正吸收度计算一、维生素一、维生素A A的分析的分析 maxmax不在不在323323327nm327nm 或或A A300300/A/A3253250.730.73 需进一步纯化需进一步纯化一、维生素一、维生素A A的分析的分析5.5.生物效价和换算因子生物效价和换算因子（Biological potency and conversion Biological potency and conversion factor,CFfactor,CF）1IU=

12、0.344g1IU=0.344g V VA A醋酸酯醋酸酯 1IU=0.300g1IU=0.300g V VA A醇醇 1g1g V VA A醋酸酯醋酸酯:2.907:2.907 10106 6IU/gIU/g 1g 1g V VA A醇醇:3.33:3.33 10106 6IU/gIU/g一、维生素一、维生素A A的分析的分析一、维生素一、维生素A A的分析的分析 换算因子：换算因子：单位百分吸收系数所相当于的效价单位百分吸收系数所相当于的效价 V VA A酯百分吸收系数酯百分吸收系数=1530=1530 V VA A醇百分吸收系数醇百分吸收系数18201820 CF CF(酯酯)=2.90

13、7)=2.907 10106 6/1530=1900/1530=1900 CF CF(醇醇)=3.33)=3.33 10106 6/1820=1830/1820=1830一、维生素一、维生素A A的分析的分析 6 6.注意问题注意问题 仪器波长校准仪器波长校准 半暗室快速进行半暗室快速进行一、维生素一、维生素A A的分析的分析 dl-Tocopheryldl-Tocopheryl AcetateAcetate 消旋消旋-生育酚醋酸酯生育酚醋酸酯 黄色油状液体，不溶于水，易溶于有机溶剂黄色油状液体，不溶于水，易溶于有机溶剂 天然天然V VE E右旋体，合成为消旋体右旋体，合成为消旋体 与生殖功能

14、有关的一类维生素总称与生殖功能有关的一类维生素总称二、维生素二、维生素E E的分析的分析(一一)结构分析结构分析二、维生素二、维生素E E的分析的分析1.苯骈二氢吡喃、苯骈二氢吡喃、C6位乙酰化的酚羟基位乙酰化的酚羟基2.紫外吸收紫外吸收3.旋光性旋光性(二）鉴别二）鉴别 1 1、本品、本品无水乙醇溶解无水乙醇溶解硝酸，硝酸，7575加热加热 鲜红色，逐渐转为橙红色。鲜红色，逐渐转为橙红色。二、维生素二、维生素E E的分析的分析 2 2、本品、本品醇制醇制KOHKOH，煮沸，煮沸 游离生育酚游离生育酚 乙醚提取乙醚提取 联吡啶、三氯化铁乙醇液联吡啶、三氯化铁乙醇液 深红色深红色 二、维生素二、

15、维生素E E的分析的分析二、维生素二、维生素E E的分析的分析（三）含量测定（三）含量测定 铈量法：硫酸铈氧化铈量法：硫酸铈氧化 荧光法：硝酸氧化，与邻苯二胺络合荧光法：硝酸氧化，与邻苯二胺络合 比色法：比色法：FeFe3+3+氧化，与联吡啶络合氧化，与联吡啶络合 GLCGLC法：法：BP,USP,Ch.PBP,USP,Ch.P HPLC HPLC法：法：JPJP二、维生素二、维生素E E的分析的分析1 1、气相色谱法：、气相色谱法：Ch.PCh.P（20052005）1 1）色谱条件及溶液配制）色谱条件及溶液配制 色谱柱：不锈钢柱或玻璃填充柱色谱柱：不锈钢柱或玻璃填充柱 载体：硅藻土或高分子

16、多孔小球载体：硅藻土或高分子多孔小球 固定液：固定液：2%OV-172%OV-17（硅酮）（硅酮）柱温：柱温：265265 检测器：检测器：FIDFID二、维生素二、维生素E E的分析的分析 内标溶液：内标溶液：正三十二烷（正三十二烷（1.0mg/ml1.0mg/ml正已烷溶液）正已烷溶液）标准溶液：标准溶液：V VE E对照品溶于内标中，对照品溶于内标中，2mg/ml2mg/ml 样品溶液：样品溶液：V VE E样品溶于内标中，样品溶于内标中，2mg/ml2mg/ml二、维生素二、维生素E E的分析的分析 2 2）系统适应性试验）系统适应性试验 （1 1）分离度：与内标峰）分离度：与内标峰R

17、 R2 2 t tR1R1、t tR2R2相邻峰保留时间相邻峰保留时间 W W1 1、W W2 2相邻峰峰底宽相邻峰峰底宽 （2 2）柱效：）柱效：V VE E峰峰n500n500 W Wh/2h/2(Y(Y1/21/2)半半(高高)峰宽峰宽二、维生素二、维生素E E的分析的分析（3 3）拖尾因子：）拖尾因子：W W0.05h0.05h为为0.050.05峰高处峰宽峰高处峰宽 T=0.95T=0.951.051.05二、维生素二、维生素E E的分析的分析（4 4）相对标准差：）相对标准差：80%80%、100%100%和和120%120%对照品溶液对照品溶液 分别进样分别进样3 3次次 计算平

18、均校正因子计算平均校正因子 RSDRSD2.0%2.0%二、维生素二、维生素E E的分析的分析 3 3）、测定）、测定 校正因子校正因子 取标准溶液，取标准溶液，13l13l进样进样 AsAs、ms ms 内标物峰面积、内标物质的量内标物峰面积、内标物质的量 ArAr、mr mr 对照品峰面积、对照品的量对照品峰面积、对照品的量 二、维生素二、维生素E E的分析的分析 样品的测定样品的测定 取样品溶液，取样品溶液，13l13l进样进样 A A s s、m m s s 内标物峰面积、内标物质的量内标物峰面积、内标物质的量 AiAi、mi mi 样品峰面积、样品的量样品峰面积、样品的量二、维生素二

19、、维生素E E的分析的分析 2 2、高效液相色谱法、高效液相色谱法 JP(14)JP(14)1 1）色谱条件）色谱条件 色谱柱：色谱柱：15cm15cm30cm30cm 4mm4mm不锈钢柱不锈钢柱 固定相：固定相：5m5m10m ODS10m ODS 流动相：甲醇流动相：甲醇-水（水（4949：1 1）检测器：检测器：292nm292nm二、维生素二、维生素E E的分析的分析 2 2）系统适应性试验）系统适应性试验 分离度：分离度：生育酚与醋酸生育酚分离度生育酚与醋酸生育酚分离度R R2.62.6 峰高的峰高的RSDRSD小于小于0.8%0.8%二、维生素二、维生素E E的分析的分析 3 3

20、）测定）测定 维生素维生素E E样品与对照品样品与对照品 分别用无水乙醇溶解分别用无水乙醇溶解 进样进样20ul,20ul,以峰高计算以峰高计算二、维生素二、维生素E E的分析的分析 （一）结构与性质（一）结构与性质 抗佝偻病维生素的总称抗佝偻病维生素的总称 至少十多种，均属甾醇衍生物至少十多种，均属甾醇衍生物三、维生素三、维生素D D的分析的分析三、维生素三、维生素D D的分析的分析D D2 2比比D D3 3多一个双键和一个甲基。多一个双键和一个甲基。（1 1）脂溶性维生素）脂溶性维生素 （2 2）旋光性）旋光性:D:D2 2有有6 6个、个、D D3 3有有5 5个手性个手性C C （3

21、 3）不稳定性）不稳定性:遇光、空气及氧化剂变质遇光、空气及氧化剂变质 （4 4）显色反应）显色反应:与强酸反应与强酸反应 （5 5）紫外吸收）紫外吸收三、维生素三、维生素D D的分析的分析 （二）鉴别（二）鉴别 1 1、显色反应、显色反应 （1 1）醋酐）醋酐-硫酸反应硫酸反应 D D2 2、D D3 3氯仿溶解氯仿溶解 醋酐和硫酸醋酐和硫酸 振摇，呈色振摇，呈色三、维生素三、维生素D D的分析的分析 （2 2）三氯化锑反应）三氯化锑反应 D D2 2、D D3 3 1,21,2二氯乙烷溶解二氯乙烷溶解 三氯化锑试液三氯化锑试液 橙红色，逐渐变为粉红色橙红色，逐渐变为粉红色三、维生素三、维生

22、素D D的分析的分析 2 2、D D2 2、D D3 3区别区别 本品本品10mg10mg溶于溶于96%96%乙醇乙醇10ml10ml中中 取出取出0.1ml0.1ml加乙醇加乙醇1ml1ml和和85%85%硫酸硫酸5ml5ml D D2 2显红色，显红色，maxmax570nm570nm D D3 3显黄色，显黄色，maxmax495nm495nm三、维生素三、维生素D D的分析的分析（三）含量测定（三）含量测定 USP:USP:化学法、色谱法和微生物法化学法、色谱法和微生物法 BP:BP:化学法、光谱法和色谱法化学法、光谱法和色谱法 Ch.P:Ch.P:正相色谱法正相色谱法三、维生素三、维

23、生素D D的分析的分析 2 2）测定）测定 第一法：无维生素第一法：无维生素A A及其他干扰及其他干扰 第二法：有干扰（皂化提取）第二法：有干扰（皂化提取）第三法：第二法不能消除干扰的第三法：第二法不能消除干扰的 （柱分离）（柱分离）三、维生素三、维生素D D的分析的分析（一）（一）结构分析结构分析 盐酸硫胺（盐酸硫胺（Thiamine Thiamine hydrochloridehydrochloride）C C1212H H1717ClNClN4 4OSOSHCl=337.27HCl=337.27四、维生素四、维生素B B1 1的分析的分析 1 1 氨基嘧啶氨基嘧啶次甲基次甲基噻唑环噻唑环

24、 2 2 噻唑环噻唑环碱性下碱性下/氧化剂氧化剂硫色素硫色素 3 3 N N杂环杂环生物碱沉淀试剂生物碱沉淀试剂 4 4 碱性中心碱性中心非水滴定非水滴定 5 5 盐根盐根硝酸银硝酸银 6 6 V VB1B1NaOH/NaOH/加热加热NaNa2 2SS加入醋酸铅加入醋酸铅 7 7 紫外吸收紫外吸收四、维生素四、维生素B B1 1的分析的分析（二）鉴别（二）鉴别 1 1、硫色素反应、硫色素反应 V VB1B1铁氰化钾铁氰化钾/OH-/OH-硫色素硫色素 硫色素硫色素溶于正丁醇溶于正丁醇(蓝色莹光蓝色莹光)酸性，莹光消失酸性，莹光消失 碱性，莹光复现碱性，莹光复现四、维生素四、维生素B B1 1

25、的分析的分析 2 2、沉淀反应、沉淀反应 碘化汞钾碘化汞钾黄白色黄白色 碘试液碘试液红色红色 硅钨酸硅钨酸白色白色四、维生素四、维生素B B1 1的分析的分析 3 3、加碱分解后与醋酸铅反应、加碱分解后与醋酸铅反应 V VB1B1+Pb(Ac)+Pb(Ac)2 2+NaOH+NaOH 加热加热 黄色、棕色、黑色黄色、棕色、黑色 +HClHCl H H2 2SS +Pb(Ac)Pb(Ac)2 2四、维生素四、维生素B B1 1的分析的分析(三三)含量测定含量测定 硅钨酸重量法硅钨酸重量法 非水碱量法非水碱量法 银量法银量法 络合量法络合量法 硫色素莹光法硫色素莹光法 比色和分光度法比色和分光度法

26、四、维生素四、维生素B B1 1的分析的分析1 1、非水滴定法（原料药）、非水滴定法（原料药）V VB1B1冰醋酸溶解、醋酸汞冰醋酸溶解、醋酸汞 喹哪啶红喹哪啶红-亚甲蓝混合指示剂亚甲蓝混合指示剂 0.1mol/L0.1mol/L高氯酸滴定高氯酸滴定 化学计量关系化学计量关系 1 1：2 2 滴定前：醋酸汞滴定前：醋酸汞四、维生素四、维生素B B1 1的分析的分析 2 2、紫外法（片剂、注射剂）、紫外法（片剂、注射剂）V VB1B1溶于盐酸（溶于盐酸（9100091000）maxmax246nm,246nm,421421四、维生素四、维生素B B1 1的分析的分析 L-L-抗坏血酸抗坏血酸 白

27、色结晶或粉末，味酸白色结晶或粉末，味酸 易溶于水，稍溶于乙醇，不溶乙醚易溶于水，稍溶于乙醇，不溶乙醚 推荐的日允许量：推荐的日允许量：婴儿婴儿35mg35mg，儿童，儿童45mg45mg，成人，成人505060mg60mg五、维生素五、维生素C C的分析的分析(一）一）结构分析结构分析 1 1、糖类十分相似、糖类十分相似五、维生素五、维生素C C的分析的分析 2 2、强还原性、强还原性 二烯醇结构二烯醇结构五、维生素五、维生素C C的分析的分析 3 3、酸性、酸性 C C3 3位羟基位羟基pKpKa1a14.174.17 C C2 2位羟基位羟基pkpka2a211.5711.57.4 4、紫

28、外吸收、紫外吸收 0.1mol/L0.1mol/L HClHCl溶液溶液 245nm245nm 中性溶液中性溶液 265nm265nm五、维生素五、维生素C C的分析的分析 5 5、水溶液不稳定性、水溶液不稳定性 微量微量CuCu2+2+氧化加速氧化加速 pH2pH7 pH7 自氧化自氧化 6 6、旋光性、旋光性 C C4 4、C C5 5手性碳手性碳 0.1g/ml0.1g/ml水溶液比旋度水溶液比旋度+20.5+20.5+21.521.5 五、维生素五、维生素C C的分析的分析 (二）鉴别二）鉴别 1 1、利用其还原性、利用其还原性 硝酸银（银镜）硝酸银（银镜）2.6-2.6-二氯靛酚二氯

29、靛酚(褪色）褪色）高锰酸钾（褪色）高锰酸钾（褪色）亚甲蓝（蓝色褪去）亚甲蓝（蓝色褪去）磷钼酸（钼蓝）磷钼酸（钼蓝）斐林氏溶液（红色氧化亚铜）斐林氏溶液（红色氧化亚铜）五、维生素五、维生素C C的分析的分析 （1 1）与硝酸银反应）与硝酸银反应 本品本品加水溶解加水溶解加硝酸银试液加硝酸银试液 银黑色沉淀（银黑色沉淀（Ch.PCh.P、BPBP采用）采用）五、维生素五、维生素C C的分析的分析（2 2）2 2，6 6二氯靛酚反应二氯靛酚反应 本品本品加水溶解加水溶解2,62,6二氯靛酚试液二氯靛酚试液 颜色消失（颜色消失（Ch.PCh.P采用）采用）五、维生素五、维生素C C的分析的分析 2 2

30、、糖类的性质、糖类的性质 三氯醋酸或盐酸存在下（酸性下水解）水解、三氯醋酸或盐酸存在下（酸性下水解）水解、脱羧、失水转变为糠醛，加入吡咯，温热作用生脱羧、失水转变为糠醛，加入吡咯，温热作用生成蓝色。成蓝色。五、维生素五、维生素C C的分析的分析 (三）含量测定三）含量测定 1 1碘量法碘量法 操作：本品，加新沸过冷水操作：本品，加新沸过冷水100ml100ml 与稀与稀HAc10mlHAc10ml的混合液的混合液淀粉指示剂淀粉指示剂 立即用立即用0.05mol/LI0.05mol/LI2 2滴定滴定 （8.806mg/ml C8.806mg/ml C6 6H H8 80 06 6=176.12

31、=176.12）原理：原理：VcVc+I+I2 2去氢抗坏血酸去氢抗坏血酸 +2HI2HI五、维生素五、维生素C C的分析的分析注意事项：注意事项：1 1）新沸冷水，减少水中溶解氧影响）新沸冷水，减少水中溶解氧影响 2 2）在酸性溶液中（）在酸性溶液中（HACHAC、H H2 2SOSO4 4、偏磷酸）、偏磷酸）VcVc相对稳定相对稳定 3 3）VcVc注射剂亚硫酸盐抗氧剂注射剂亚硫酸盐抗氧剂 滴定前加丙酮或甲醛滴定前加丙酮或甲醛五、维生素五、维生素C C的分析的分析 2 22,6-2,6-二氯靛酚法二氯靛酚法 氧化型酸性介质中红色，还原型无色氧化型酸性介质中红色，还原型无色 终点，微过量氧化型而呈玫瑰终点，微过量氧化型而呈玫瑰 无需另加指示剂无需另加指示剂五、维生素五、维生素C C的分析的分析 注意事项：注意事项：1 1）专属性，片剂、注射剂、多种维合剂）专属性，片剂、注射剂、多种维合剂 2 2）标准液分解，不稳定，需经常标化）标准液分解，不稳定，需经常标化 3 3）USPUSP、JPJP测定维测定维C C片、注射液片、注射液五、维生素五、维生素C C的分析的分析