一轮复习微生物的培养与应用.ppt

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1、第第38讲微生物的培养与应用讲微生物的培养与应用最最新新考考纲纲1.微微生生物物的的分分离离和和培培养养。2.培培养养基基对对微微生生物物的的选选择择作作用。用。3.某种微生物数量的某种微生物数量的测测定。定。4.微生物在其他方面的微生物在其他方面的应应用。用。考点一微生物的实验室培养考点一微生物的实验室培养1.培养基培养基(1)概念：人概念：人们们按照微生物按照微生物对对的的不不同同需需求求，配配制制出出供其供其的的营营养基养基质质。(2)营营养养组组成：一般都含有成：一般都含有和和无无机机盐盐。此此外外，还还需要需要满满足微生物生足微生物生长对长对、氧气以及、氧气以及的要求。的要求。(3)

2、种种类类：按照物理性：按照物理性质质可分可分为为培养基和固体培养基。培养基和固体培养基。营养物质营养物质生长繁殖生长繁殖水、碳源、氮源水、碳源、氮源pH特殊特殊营营养物养物质质液体液体2.无菌技术无菌技术(1)含含义义：指在培养微生物的操作中，所有防止：指在培养微生物的操作中，所有防止的方法。的方法。(2)关关键键：防止：防止的入侵。的入侵。(3)不同不同对对象的无菌操作方法象的无菌操作方法(连线连线)杂杂菌菌污污染染外来外来杂杂菌菌3.大肠杆菌的纯化培养大肠杆菌的纯化培养(1)制制备备牛肉膏蛋白牛肉膏蛋白胨胨固体培养基固体培养基操作步操作步骤骤倒平板的方法及注意事倒平板的方法及注意事项项称量

3、称量灭灭菌菌倒平板倒平板a.请请用文字和箭用文字和箭头头写出正确的倒平板操作流程：写出正确的倒平板操作流程：。b.甲、乙、丙中的甲、乙、丙中的灭灭菌方法是菌方法是。c.丁中的操作需要等待丁中的操作需要等待才能才能进进行。行。(2)纯纯化大化大肠肠杆菌的方法杆菌的方法纯纯化培养原理：想方化培养原理：想方设设法在培养基上得到法在培养基上得到_的肉眼可的肉眼可见见的的，即可，即可获获得得较纯较纯的菌种。的菌种。纯纯化大化大肠肠杆菌的关杆菌的关键键步步骤骤：。常用的微生物接种方法有两种常用的微生物接种方法有两种a.平板划平板划线线法：是通法：是通过过在在琼琼脂固体培养基表面脂固体培养基表面_的操作，将

4、聚集的菌种逐步稀的操作，将聚集的菌种逐步稀释释分散到培养基的表面。分散到培养基的表面。丙丙乙乙甲甲丁丁灼灼烧灭烧灭菌菌平板冷却凝固平板冷却凝固由一个由一个细细胞繁殖而来胞繁殖而来菌落菌落接种接种接种接种环环连续连续划划线线b.法：是将菌液法：是将菌液进进行一系列的行一系列的，然后将然后将的的菌菌液液分分别别涂涂布布到到琼琼脂脂固固体体培培养养基基的的表表面面，进进行培养。行培养。(3)菌种的保存方法菌种的保存方法对对于于频频繁使用的菌种，可以采用繁使用的菌种，可以采用的方法。的方法。对对于需要于需要长长期保存的菌种，可以采用期保存的菌种，可以采用的方法。的方法。稀稀释释涂布平板涂布平板梯度稀梯

5、度稀释释不同稀不同稀释释度度临时临时保藏保藏甘油管藏甘油管藏1.(教教材材P16旁旁栏栏思思考考题题解解答答)请请你你判判断断以以下下材材料料或或用用具具是是否否需需要要消消毒或毒或灭灭菌。如果需要，菌。如果需要，请选择请选择合适的方法。合适的方法。培养培养细细菌用的培养基与培养皿菌用的培养基与培养皿 玻棒、玻棒、试试管、管、烧烧瓶和吸管瓶和吸管 实验实验操作者的双手操作者的双手提示提示、需要灭菌；需要灭菌；需要消毒。需要消毒。为为什么需要使什么需要使锥锥形瓶的瓶口通形瓶的瓶口通过过火焰？火焰？提示提示通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。平板冷凝

6、后，平板冷凝后，为为什么要将平板倒置？什么要将平板倒置？提提示示平平板板冷冷凝凝后后，皿皿盖盖上上会会凝凝结结水水珠珠，凝凝固固后后的的培培养养基基表表面面的的湿湿度度也也比比较较高高，将将平平板板倒倒置置，既既可可以以使使培培养养基基表表面面的的水水分分更更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。2.(教材教材P17“倒平板操作讨论倒平板操作讨论”解答解答)3.下下图图甲、乙是微生物接种常用的两种方法，甲、乙是微生物接种常用的两种方法，请请思考：思考：(1)图图甲甲是是利利用用_法法进进行行微微生生物物接接种种，图图乙乙是是

7、利利用用_法法进进行行微微生生物物接接种种。这这两两种种方方法法所所用用的的接接种种工工具具分分别别是是_和和_；对对这这两两种种接接种种工工具具进进行行灭灭菌菌和和消消毒毒的的方法依次是方法依次是_和酒精消毒。和酒精消毒。(2)接种操作接种操作为为什么一定要在火焰附近什么一定要在火焰附近进进行？行？_。(3)下下图图是是采采用用上上述述接接种种方方法法接接种种后后培培养养的的效效果果图图解解，其其接接种种方方法法是是_(填填“图图甲甲”或或“图图乙乙”)。提提示示(1)平平板板划划线线稀稀释释涂涂布布平平板板接接种种环环涂涂布布器器灼灼烧烧灭灭菌菌(2)火焰附近存在着无菌区域火焰附近存在着无

8、菌区域(3)图乙图乙1.(2016全全国国课课标标卷卷，39)空空气气中中的的微微生生物物在在重重力力等等作作用用下下，可可以以一一定定程程度度地地沉沉降降。某某研研究究小小组组欲欲用用平平板板收收集集教教室室空空气气中中的的微微生生物物，以以了了解解教教室室内内不不同同高高度度空空气气中中微微生生物物的的分分布布情情况况。实实验验步步骤骤如下：如下：配置培养基配置培养基(成分：牛肉膏、蛋白成分：牛肉膏、蛋白胨胨、NaCl、X、H2O)；制作无菌平板；制作无菌平板；设设置空白置空白对对照照组组和若干和若干实验组实验组，进进行相关操作；行相关操作；将将各各组组平平板板置置于于37恒恒温温箱箱中中

9、培培养养一一段段时时间间，统统计计各各组组平平板板上菌落的平均数。上菌落的平均数。回答下列回答下列问题问题：(1)该该培培养养基基中中微微生生物物所所需需的的氮氮来来源源于于_。若若要要完完成成步步骤骤，该该培养基中的成分培养基中的成分X通常是通常是_。(2)步步骤骤中，中，实验组实验组的操作是的操作是_。(3)若若在在某某次次调调查查中中，某某一一实实验验组组平平板板上上菌菌落落平平均均数数为为36个个/平平板板，而而空空白白对对照照组组的的一一个个平平板板上上出出现现了了6个个菌菌落落，这这种种结结果果说说明明在在此此次次调调查查中中出出现现了了_现现象象。若若将将30(即即366)个个/

10、平平板板作作为为本本组组菌落数的平均菌落数的平均值值，该该做法做法_(填填“正确正确”或或“不正确不正确”)。解解析析(1)牛牛肉肉膏膏和和蛋蛋白白胨胨都都含含有有蛋蛋白白质质的的水水解解产产物物，都都可可以以作作为为氮氮源源；平平板板为为固固体体培培养养基基，故故需需要要加加入入凝凝固固剂剂琼琼脂脂。(2)实实验验探探究究的的是是教教室室内内“不不同同高高度度空空气气”中中微微生生物物的的分分布布，其其中中变变量量为为不不同同高高度度，故故需需在在不不同同高高度度下下放放置置开开盖盖平平板板。同同时时，为为了了保保证证单单一一变变量量，需需要要保保证证开开盖盖放放置置时时间间一一致致。为为了

11、了保保证证实实验验可可靠靠性性，需需要要设设置置多多个个平平行行组组。(3)在在完完全全正正确确的的操操作作情情况况下下，空空白白对对照照组组中中不不应应出出现现菌菌落落。若若出出现现菌菌落落，表表明明操操作作过过程程中中存存在在杂杂菌菌污污染染，属属于于实实验失误，所有实验数据均不应采用。验失误，所有实验数据均不应采用。答答案案(1)牛牛肉肉膏膏、蛋蛋白白胨胨琼琼脂脂(2)将将各各实实验验组组平平板板分分别别放放置置在教室不同高度的位置上，开盖暴露一段在教室不同高度的位置上，开盖暴露一段时间时间(3)污污染不正确染不正确2.(2016深深圳圳六六校校联联盟盟模模拟拟)人人们们使使用用含含三三

12、丁丁基基锡锡、三三苯苯基基锡锡等等有有机机锡锡化化合合物物的的油油漆漆涂涂于于船船只只、海海洋洋建建筑筑物物等等的的表表面面，有有效效防防止止了了海海洋洋生生物物附附着着生生长长，但但近近年年来来的的研研究究发发现现油油漆漆中中的的有有机机锡锡可可释释放放入入海海，对对多多种种生生物物造造成成毒毒害害。现现欲欲从从海海洋洋底底泥泥中中分离分解三丁基分离分解三丁基锡锡的微生物。回答下列的微生物。回答下列问题问题：(1)为为了了获获得得能能降降解解三三丁丁基基锡锡的的微微生生物物菌菌种种，可可在在被被三三丁丁基基锡锡污污染染的的海海洋洋底底泥泥中中取取样样，并并应应选选用用以以为为碳碳源源的的培培

13、养养基基进进行行选选择择培培养养。除除含含有有碳碳源源外外，培培养养基基还还应应含含有有_、_、_、无机、无机盐盐和蒸和蒸馏馏水等。水等。(2)实实验验过过程程中中，玻玻璃璃器器皿皿和和金金属属用用具具可可以以采采用用干干热热灭灭菌菌法法来来灭灭菌，原因是菌，原因是_。(3)常常用用的的微微生生物物接接种种方方法法有有两两种种，但但只只有有_可可用用于于微微生生物物的的计计数数，运运用用该该方方法法计计数数的的结结果果往往往往比比实实际际数数目目_(填填“高高”或或“低低”)。在在平平板板划划线线操操作作中中，接接种种环环在在使使用前要先灼用前要先灼烧烧，其目的是，其目的是_，第第二二次次及及

14、其其后后的的划划线线都都要要从从上上一一次次划划线线的的末末端端开开始始，其其目目的的是是_。(4)将将获获得得的的3种种待待选选微微生生物物甲甲、乙乙、丙丙分分别别接接种种在在含含少少量量三三丁丁基基锡锡的的相相同同培培养养液液中中培培养养(培培养养液液中中其其他他营营养养物物质质充充裕裕、条条件件适适宜宜)，观观测测从从实实验验开开始始到到微微生生物物停停止止生生长长所所用用的的时时间间，甲甲、乙乙、丙丙分分别别为为33小小时时、15小小时时、46小小时时，则则应应选选择择微微生生物物_作作为为菌菌种种进进行后行后续续培养。培养。答答案案(1)三三丁丁基基锡锡氮氮源源琼琼脂脂(2)玻玻璃璃

15、器器皿皿和和金金属属用用具具能能耐耐高高温温，且且要要保保持持干干燥燥(3)稀稀释释涂涂布布平平板板法法低低杀杀灭灭接接种种环环上上的的微微生生物物使使微微生生物物数数目目能能够够随随着着划划线线次次数数的的增增加加而而逐逐步步减减少少，以以达达到分离的效果到分离的效果(4)乙乙3.工工厂厂的的污污水水池池含含有有一一种种有有害害的的、难难以以降降解解的的有有机机化化合合物物A。研研究究人人员员用用化化合合物物A、磷磷酸酸盐盐以以及及微微量量元元素素配配制制的的培培养养基基，成成功功筛筛选选到到能能高高效效降降解解化化合合物物A的的细细菌菌(目目的的菌菌)。实实验验的的主主要要步步骤骤如如下下

16、图图所示。所示。请请分析回答下列分析回答下列问题问题。(1)加加入入化化合合物物A的的培培养养基基属属于于_培培养养基基。化化合合物物A可可为为目目的的菌菌提提供供生生长长所所需需的的_等等营营养养物物质质。若若想想对对初初步步筛筛选选得得到到的的 目目 的的 菌菌 进进 行行 纯纯 化化 并并 计计 数数，可可 采采 用用 的的 接接 种种 方方 法法 是是_。(2)微微生生物物培培养养过过程程中中，防防止止杂杂菌菌污污染染的的关关键键技技术术是是_，为为了排除了排除杂杂菌菌污污染如何染如何设计对设计对照照实验实验_。(3)在在农农业业生生产产研研究究中中，常常需需要要进进行行微微生生物物的

17、的培培养养和和计计数数。下下图图是是利利用用平平板板划划线线法法进进行行微微生生物物接接种种，把把聚聚集集的的菌菌种种逐逐步步稀稀释释分分散散到到培培养养基基的的表表面面，为为达达到到这这一一目目的的，操操作作上上有有很很多多注注意意事事项项。请请列列举举两两项项。答案答案(1)选择选择碳源和氮源稀碳源和氮源稀释释涂布平板法涂布平板法(2)无无菌菌技技术术用用不不接接种种的的空空白白培培养养基基作作对对照照，证证明明培培养养基基制制备备是是否被否被杂杂菌菌污污染染(3)每每次次划划线线前前要要灼灼烧烧接接种种环环冷冷却却后后从从上上一一区区划划线线末末端端开开始划始划首尾区不重叠首尾区不重叠(

18、任任选选两个答案两个答案)1.无菌技术无菌技术条件条件结果结果常用方法常用方法应用范围应用范围消毒消毒较为温和较为温和的物理或的物理或化学方法化学方法仅杀死物体表面仅杀死物体表面或内部的部分微或内部的部分微生物生物煮沸消毒法煮沸消毒法日常用品日常用品巴氏消毒法巴氏消毒法不耐高温的液体不耐高温的液体化学药剂消毒法化学药剂消毒法用酒精擦拭双手，用酒精擦拭双手，用氯气消毒水源用氯气消毒水源灭菌灭菌强烈的理强烈的理化因素化因素杀死物体内外所杀死物体内外所有的微生物，包有的微生物，包括芽孢和孢子括芽孢和孢子灼烧灭菌法灼烧灭菌法接种工具接种工具干热灭菌法干热灭菌法玻璃器皿、金属玻璃器皿、金属用具用具高压蒸

19、汽灭菌法高压蒸汽灭菌法培养基及容器培养基及容器2.两种纯化细菌的方法的比较两种纯化细菌的方法的比较项目项目优点优点缺点缺点适用范围适用范围平板划线平板划线法法可以观察菌落特可以观察菌落特征，对混合菌进征，对混合菌进行分离行分离不能计数不能计数适用于好氧菌适用于好氧菌稀释涂布稀释涂布平板法平板法可以计数，可以可以计数，可以观察菌落特征观察菌落特征吸收量较少，吸收量较少，较麻烦，平板较麻烦，平板不干燥效果不不干燥效果不好，容易蔓延好，容易蔓延适用于厌氧菌适用于厌氧菌和兼性厌氧菌和兼性厌氧菌考点二微生物的筛选和计数考点二微生物的筛选和计数1.土壤中分解尿素的细菌的分离与计数土壤中分解尿素的细菌的分离

20、与计数项目项目详细内容详细内容实验实验原理原理(1)能合成能合成_的的细细菌才能分解尿素菌才能分解尿素(2)配制以配制以_为为唯一氮源的培养基，能唯一氮源的培养基，能够够生生长长的的细细菌就是菌就是能分解尿素的能分解尿素的细细菌菌数量数量统计统计(1)_法法(显显微微镜镜下用特定下用特定细细菌菌计计数板或血数板或血细细胞胞计计数板数板)(2)间间接接计计数法：数法：_实验实验流程流程土壤取土壤取样样配制土壤溶液和制配制土壤溶液和制备备培养基培养基_涂布平板涂布平板与培养与培养菌落菌落_脲脲酶酶尿素尿素直接直接计计数数稀稀释释涂布平板法涂布平板法系列稀系列稀释释计计数数2.分解纤维素的微生物的分

21、离分解纤维素的微生物的分离(1)纤维纤维素素酶酶组组成：成：纤维纤维素素酶酶是一种是一种，一一般般认认为为它它至至少少包包括括三三种种组组分，即分，即。作用作用复合复合酶酶C1酶酶、Cx酶酶和葡萄糖苷和葡萄糖苷酶酶纤维纤维二糖二糖葡萄糖葡萄糖(2)纤维纤维素分解菌的素分解菌的筛选筛选原理原理筛选筛选方法：方法：染色法，即通染色法，即通过过是否是否产产生生来来筛选纤维筛选纤维素分解菌。素分解菌。培养基：以培养基：以为为唯一碳源的唯一碳源的选择选择培养基。培养基。红红色复合物色复合物透明圈透明圈刚刚果果红红透明圈透明圈纤维纤维素素实验实验流程流程纤维纤维素素选择选择培养基培养基梯度稀梯度稀释释鉴别

22、纤维鉴别纤维素分解菌素分解菌透明圈透明圈(3)分离分离纤维纤维素分解菌所用的两种培养基比素分解菌所用的两种培养基比较较分离分离纤维纤维素分解菌的素分解菌的实验实验中先用中先用培养基，再用培养基，再用培培养基。养基。选择选择培养基培养基为为培培养养基基，以以纤纤维维素素作作为为碳碳源源和和能能源源的的微生物可以正常生微生物可以正常生长长，而其他，而其他绝绝大多数微生物不能正常生大多数微生物不能正常生长长。鉴别鉴别培养基含培养基含琼琼脂，脂，为为培培养养基基，细细菌菌可可在在培培养养基基上上形形成肉眼可成肉眼可见见的菌落。的菌落。刚刚果果红红染色法染色法应应用的就是用的就是鉴别鉴别培养基。培养基。

23、选择选择鉴别鉴别液体液体固体固体3.结果分析与评价结果分析与评价内容内容现现象象结论结论有无有无杂杂菌菌污污染的判断染的判断对对照的培养皿中无菌落生照的培养皿中无菌落生长长未被未被杂杂菌菌污污染染培养物中菌落数偏高培养物中菌落数偏高被被杂杂菌菌污污染染菌落形菌落形态态多多样样，菌落数偏高，菌落数偏高培养物中混入培养物中混入其他氮源其他氮源选择选择培养基培养基的的筛选筛选作用作用牛肉膏培养基上的菌落数目牛肉膏培养基上的菌落数目大于大于选择选择培养基上的数目培养基上的数目选择选择培养基具培养基具筛选筛选作用作用样样品的稀品的稀释释操作操作得到得到2个或个或2个以上菌落数目个以上菌落数目在在3030

24、0的平板的平板操作成功操作成功重复重复组组的的结结果果若若选选取同一种土取同一种土样样，统计结统计结果果应应接近接近1.(2016四四川川卷卷，10)图图甲甲是是从从土土壤壤中中筛筛选选产产脲脲酶酶细细菌菌的的过过程程，图图乙是乙是脲脲酶酶基因基因转录转录的的mRNA部分序列。部分序列。(1)图图中中选选择择培培养养基基应应以以_为为唯唯一一氮氮源源；鉴鉴别别培培养养基基还还需需添添加加_作作指指示示剂剂，产产脲脲酶酶细细菌菌在在该该培培养养基基上上生生长长一一段段时时间间后后，其菌落周其菌落周围围的指示的指示剂剂将将变变成成_色。色。(2)在在5个个细细菌菌培培养养基基平平板板上上，均均接接

25、种种稀稀释释倍倍数数为为105的的土土壤壤样样品品液液0.1mL，培培养养一一段段时时间间后后，平平板板上上长长出出的的细细菌菌菌菌落落数数分分别别为为13、156、462、178和和191。该该过过程程采采取取的的接接种种方方法法是是_，每每克克土土壤壤样样品品中中的的细细菌菌数数量量为为_108个个；与与血血细细胞胞计计数数板板计计数数法法相相比比，此此计计数数方方法法测测得的得的细细菌数菌数较较_。(3)现现有有一一菌菌株株的的脲脲酶酶由由于于基基因因突突变变而而失失活活，突突变变后后基基因因转转录录的的mRNA在在图图乙乙箭箭头头所所示示位位置置增增加加了了70个个核核苷苷酸酸，使使图

26、图乙乙序序列列中中出出现现终终止止密密码码(终终止止密密码码有有UAG、UGA和和UAA)。突突变变基基因因转转录录的的mRNA中中，终终止止密密码码为为_，突突变变基基因因表表达达的的蛋蛋白白质质含含_个氨基酸。个氨基酸。解解析析(1)脲脲酶酶能能够够催催化化尿尿素素分分解解为为氨氨，故故图图中中选选择择培培养养基基应应以以尿尿素素作作为为唯唯一一氮氮源源。由由于于尿尿素素被被分分解解成成了了氨氨，氨氨会会使使培培养养基基的的碱碱性性增增强强，pH升升高高，使使酚酚红红指指示示剂剂变变红红色色。(2)用用于于计计数数细细菌菌菌菌落落数数的的接接种种方方法法是是稀稀释释涂涂布布平平板板法法，统

27、统计计的的菌菌落落数数应应介介于于30300之之间间，故故选选择择细细菌菌菌菌落落数数为为156、178和和191的的平平板板计计数数，每每克克土土壤壤样样品品中中的的细细菌菌数数量量为为(156178191)/30.11051.75108。由由于于两两个个或或多多个个细细菌菌连连接接在在一一起起时时，往往往往统统计计的的是是一一个个菌菌落落，故故用用此此方方法法测测得得的的细细菌菌数数偏偏少少。(3)密密码码子子由由三三个个相相邻邻的的碱碱基基组组成成，271个个碱碱基基和和后后面面2个个碱碱基基一一起起共共构构成成91个个密密码码子子，插插入入的的70个个核核苷苷酸酸和和后后面面2个个碱碱

28、基基一一起起共共构构成成24个个密密码码子子，紧紧随随其其后后是是UGA，应为终止密码，翻译结束，因此表达的蛋白质含应为终止密码，翻译结束，因此表达的蛋白质含115个氨基酸。个氨基酸。答答案案(1)尿尿素素酚酚红红红红(2)稀稀释释涂涂布布平平板板法法1.75少少(3)UGA1152.(2016河河南南郑郑州州二二模模)某某同同学学要要分分离离土土壤壤中中能能分分解解尿尿素素的的细细菌菌，并并统统计计每每克克土土壤壤样样品品中中活活菌菌数数目目，培培养养基基配配方方如如下下。将将各各种种物物质质溶溶解解后后，用用蒸蒸馏馏水水定定容容到到1000mL，再再经经高高温温灭灭菌菌，制制成成固固体培养

29、基体培养基备备用。用。(1)根根据据培培养养基基的的成成分分判判断断，该该同同学学能能否否分分离离出出土土壤壤中中分分解解尿尿素素的的细细菌？菌？_(填填“能能”或或“不能不能”)，原因是，原因是_。KH2PO4Na2HPO4MgSO47H2O蛋白蛋白胨胨葡萄糖葡萄糖尿素尿素琼琼脂脂1.4g2.1g0.2g1.0g10.0g1.0g15.0g(2)培培养养基基用用_方方法法灭灭菌菌，培培养养皿皿用用_方方法法灭灭菌菌，待待培培养养基基冷冷却却到到_(填填“20”、“30”、“40”或或“50”)左左右右时时，在在_附附近近倒倒平平板板，等等平平板板冷冷却却凝凝固固后后，将将平平板板倒倒过过来来

30、放放置置，可以防止可以防止_，以免造成以免造成污污染。染。(3)要要统统计计每每克克土土壤壤样样品品中中活活菌菌数数目目，宜宜采采用用_法法接接种种，根根据据土土壤壤样样品品的的稀稀释释倍倍数数和和接接种种稀稀释释液液的的体体积积，统统计计平平板板上上的的_就能大就能大约约推推测测出出样样品中活菌数。品中活菌数。(4)培培养养分分解解尿尿素素的的细细菌菌时时，在在接接种种前前需需要要检检测测培培养养基基是是否否被被污污染染。对对于固体培养基于固体培养基应应采用的采用的检测检测方法是方法是_。(5)某某同同学学在在稀稀释释倍倍数数为为106的的培培养养基基中中测测得得平平板板上上菌菌落落数数的的

31、平平均均值值为为234，那那么么每每克克样样品品中中的的菌菌落落数数是是(涂涂布布平平板板时时所所用用稀稀释释液液的的体体积为积为0.1mL)_。解析解析(1)据表分析，表中的蛋白胨可以为微生物的生存提供氮源，据表分析，表中的蛋白胨可以为微生物的生存提供氮源，所以不能分离尿素分解菌，筛选纤维素分解菌需要以纤维素为唯所以不能分离尿素分解菌，筛选纤维素分解菌需要以纤维素为唯一的碳源的选择培养基。一的碳源的选择培养基。(2)微生物培养中的培养基常用高压蒸汽微生物培养中的培养基常用高压蒸汽灭菌法灭菌，玻璃器皿可以使用干热灭菌。倒平板时需要培养基灭菌法灭菌，玻璃器皿可以使用干热灭菌。倒平板时需要培养基冷

32、却至冷却至50左右时在酒精灯火焰旁进行，等平板冷却凝固后，左右时在酒精灯火焰旁进行，等平板冷却凝固后，将平板倒过来放置，可以防止培养皿盖上的水珠落入培养基造成将平板倒过来放置，可以防止培养皿盖上的水珠落入培养基造成污染。污染。答答案案(1)不不能能培培养养基基含含蛋蛋白白胨胨，尿尿素素不不是是唯唯一一氮氮源源，不不能能选选择择出出只只以以尿尿素素为为氮氮源源的的微微生生物物(培培养养基基含含蛋蛋白白胨胨，蛋蛋白白胨胨中中含含有有氮氮元元素素)(2)高高压压蒸蒸汽汽灭灭菌菌干干热热灭灭菌菌50酒酒精精灯灯火火焰焰培培养养皿皿盖盖上上的的水水珠珠落落入入培培养养基基(3)(稀稀释释)涂涂布布平平板

33、板菌菌落落数数目目(4)将将未未接接种种的的培培养养基基在在适适宜宜温温度度下下放放置置适适宜宜的的时时间间，观观察察培培养养基基上上是是否否有菌落有菌落产产生生(5)2.341093.秸秸秆秆还还田田技技术术既既是是减减少少秸秸秆秆焚焚烧烧的的重重要要措措施施，也也是是农农业业可可持持续续发发展展的的战战略略抉抉择择。某某校校生生物物兴兴趣趣小小组组研研究究发发现现，秸秸秆秆还还田田的的过过程中施加外源程中施加外源纤维纤维素素酶酶能起到能起到较较好的效果。好的效果。请请回答下列回答下列问题问题：(1)纤纤维维素素酶酶是是一一种种_酶酶，包包括括C1酶酶、CX酶酶和和葡葡萄萄糖糖苷苷酶酶 三三

34、 种种，其其 中中 能能 够够 将将 纤纤 维维 二二 糖糖 分分 解解 为为 葡葡 萄萄 糖糖 的的 是是_。(2)自自然然界界中中纤纤维维素素分分解解菌菌大大多多分分布布在在_的的环环境境中中。从从该该环环境境取取回回的的土土样样中中含含有有多多种种微微生生物物，该该兴兴趣趣小小组组可可在在培培养养基基中中加加入入_来来帮帮助助筛筛选选纤纤维维素素分分解解菌菌。若若下下图图为为培培养养结结果果，应选择应选择的菌株的菌株为为_(填填“菌菌”“”“菌菌”或或“菌菌”)。(3)对对筛筛选选得得到到的的微微生生物物还还需需进进一一步步纯纯化化培培养养以以增增加加菌菌种种的的数数量量，为为方便后方便

35、后续续的的计计数，宜采用的数，宜采用的纯纯化方法是化方法是_。(4)为为了了确确定定得得到到的的是是纤纤维维素素分分解解菌菌，还还需需要要进进行行_的的实实验验。利利用用纤纤维维素素酶酶能能催催化化纤纤维维素素分分解解为为还还原原性性的的葡葡萄萄糖糖这这一一特特性性，可可利利用用_试试剂剂判判断断微微生生物物提提取取物物是是否否起起到到了了降降解解纤纤维维素素的的作作用。用。答答案案(1)复复合合葡葡萄萄糖糖苷苷酶酶(2)富富含含纤纤维维素素刚刚果果红红菌菌(3)稀稀释释涂布平板法涂布平板法(4)发发酵酵产产生生纤维纤维素素酶酶斐林斐林1.菌株筛选原理的比较菌株筛选原理的比较土壤中分解尿素的细

36、菌土壤中分解尿素的细菌分解纤维素的微生物分解纤维素的微生物选择培养基的成分：尿素选择培养基的成分：尿素作为唯一的氮源作为唯一的氮源鉴定方法：在培养基中加鉴定方法：在培养基中加入酚红指示剂，若入酚红指示剂，若pH升高，升高，指示剂变红，说明细菌能分指示剂变红，说明细菌能分解尿素解尿素选择培养基的成分：纤维选择培养基的成分：纤维素作为唯一的碳源素作为唯一的碳源鉴定方法：刚果红染色法，鉴定方法：刚果红染色法，即刚果红与纤维素形成红色即刚果红与纤维素形成红色复合物，当纤维素被分解后，复合物，当纤维素被分解后，培养基出现以纤维素分解菌培养基出现以纤维素分解菌为中心的透明圈为中心的透明圈2.选择培养基与鉴

37、别培养基的比较选择培养基与鉴别培养基的比较种类种类制备方法制备方法原理原理用途用途举例举例选择培选择培养基养基培养基中加培养基中加入某些化学入某些化学物质物质依据某些微生物对某依据某些微生物对某些物质或环境条件的些物质或环境条件的嗜好、抗性而设计嗜好、抗性而设计从众多微生物从众多微生物中分离所需的中分离所需的微生物微生物加入青霉素分加入青霉素分离得到酵母菌离得到酵母菌和霉菌和霉菌鉴别培鉴别培养基养基培养基中加培养基中加入某种指示入某种指示剂或化学药剂或化学药品品依据微生物产生的某依据微生物产生的某种代谢产物与培养基种代谢产物与培养基中的特定试剂或化学中的特定试剂或化学药品反应，产生明显药品反应

38、，产生明显的特征变化而设计的特征变化而设计鉴别不同种类鉴别不同种类的微生物的微生物伊红美蓝培伊红美蓝培养基可以鉴别养基可以鉴别大肠杆菌大肠杆菌易错易错防范清零防范清零易易错错清零清零易错点易错点1误认为所有微生物培养基中均需加入误认为所有微生物培养基中均需加入“生长因子生长因子”点点拨拨碳碳源源、氮氮源源、水水分分、无无机机盐盐、生生长长因因子子是是微微生生物物生生长长必必需需的的五五大大营营养养成成分分，但但大大多多数数培培养养基基中中都都含含碳碳源源、氮氮源源、水水分分、无无机机盐盐四四类类物物质质，可可能能不不需需额额外外添添加加“生生长长因因子子(如如维维生生素素)”，这这是是因因为为

39、许许多多微微生生物物可可自自行行合合成成这这些些生生长长因因子子，而而对对那那些些合合成成能能力力有有限限或或不不能能合合成成生生长长因因子子的的微微生生物物(如如乳乳酸酸菌菌)，则需在培养基中添加诸如维生素等生长因子。，则需在培养基中添加诸如维生素等生长因子。易错点易错点2混淆两种混淆两种“对照组对照组”与与“重复组重复组”点拨点拨(1)两种对照组作用比较两种对照组作用比较判判断断培培养养基基中中“是是否否有有杂杂菌菌污污染染”，需需将将未未接接种种的的培培养养基基同时进行培养。同时进行培养。判判断断选选择择培培养养基基“是是否否具具有有筛筛选选作作用用”，需需设设立立牛牛肉肉膏膏蛋蛋白白胨

40、胨培培养养基基进进行行接接种种后后培培养养，观观察察两两种种培培养养基基上上菌菌落落数数目目，进行对比得出结论。进行对比得出结论。(2)重复组的设置及作用重复组的设置及作用为为排排除除偶偶然然因因素素对对实实验验结结果果的的干干扰扰，在在每每一一稀稀释释度度下下宜宜设设置置3个个平平板板作作重重复复组组，选选择择菌菌落落数数均均在在30300且且数数目目相相差差不不大大的的三个平板，用三个平板，用“平均值平均值”代入计数公式予以计算菌落数。代入计数公式予以计算菌落数。易错点易错点3混淆消毒与灭菌混淆消毒与灭菌点点拨拨对对于于活活体体宜宜消消毒毒不不可可说说成成灭灭菌菌，而而对对于于培培养养基基

41、、接接种种工具、培养皿等必须灭菌。工具、培养皿等必须灭菌。易易错错点点4不不明明确确每每次次划划线线操操作作中中“灼灼烧烧接接种种环环”的的目目的的或或误误认认为划线结束后为划线结束后“不必灼烧接种环不必灼烧接种环”点点拨拨平平板板划划线线法法纯纯化化大大肠肠杆杆菌菌时时不不同同阶阶段段灼灼烧烧接接种种环环的的目目的不同的不同第一次操作：杀死接种环上原有的微生物。第一次操作：杀死接种环上原有的微生物。每每次次划划线线之之前前：杀杀死死上上次次划划线线后后接接种种环环上上残残留留的的菌菌种种，使使下次划线的菌种直接来源于上次划线的末端。下次划线的菌种直接来源于上次划线的末端。划划线线结结束束后后

42、：杀杀死死接接种种环环上上残残存存的的菌菌种种，避避免免细细菌菌污污染染环环境和感染操作者。境和感染操作者。易错点易错点5不知道菌落计数比实际值不知道菌落计数比实际值“偏高偏高”还是还是“偏低偏低”点拨点拨稀释涂布平板法统计样品中菌落的数目往往比实际数稀释涂布平板法统计样品中菌落的数目往往比实际数目目“低低”。这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上。这是因为当两个或多个细胞连在一起时，平板上观察到的只是一个菌落。而显微计数法中由于不能区分死菌观察到的只是一个菌落。而显微计数法中由于不能区分死菌与活菌，故所得数值可能与活菌，故所得数值可能“偏高偏高”。规规范答范答题题甲甲醛醛是是一一种种来来

43、源源广广泛泛的的挥挥发发性性有有机机污污染染物物，具具有有强强烈烈的的致致癌癌和和致致畸畸作作用用，利利用用微微生生物物降降解解甲甲醛醛来来治治理理甲甲醛醛污污染染，具具有有高高效效、环环保保、无无二二次次污污染染等等优优点点。如如图图甲甲为为采采集集活活性性污污泥泥作作为为优优良良菌菌源源，通通过过筛筛选选分分离离出出能能以以甲甲醛醛为为唯唯一一碳碳源源的的高高效效降降解解菌菌的的实实验验过过程程。请请分分析回答下列析回答下列问题问题：(1)上上述述实实验验材材料料中中，不不需需要要进进行行灭灭菌菌处处理理的的是是_，培培养养基基灭灭菌菌的的常常用用方方法法为为_。该该实实验验过过程程所所用

44、用 的的 选选 择择 培培 养养 基基 只只 能能 以以 甲甲 醛醛 作作 为为 唯唯 一一 碳碳 源源，其其 原原 因因 是是_。(2)由由的的分分离离活活性性污污泥泥中中细细菌菌的的接接种种方方法法(如如图图乙乙)为为_法法，接接种种时时，对对接接种种环环应应进进行行_，在在第第二二次次及及以以后后划划线线时时，总总是是从从上上一一次次划划线线的的末末端端开开始始，这这样样做做的的目目的的是是_。(3)图图乙乙表表示示在在平平板板培培养养基基上上的的第第一一次次和和第第二二次次划划线线，请请在在图图乙乙中中画出第三次划画出第三次划线线。(4)为为研研究究甲甲醛醛初初始始浓浓度度对对菌菌株株

45、降降解解甲甲醛醛能能力力的的影影响响，进进行行了了相相应应实实验验。当当甲甲醛醛的的初初始始浓浓度度小小于于1200mg/L时时，菌菌株株可可以以完完全全降降解解甲甲醛醛；当当甲甲醛醛的的初初始始浓浓度度增增高高至至1600mg/L时时，48小小时时后后菌菌株株对对甲甲醛醛的的降降解解能能力力很很弱弱，甚甚至至失失去去降降解解能能力力，其其原原因因可可能能是是_。为为了了使使该该实实验验所所得得结结果果准准确确可可靠靠，还还应应该该设设置置_的的对对照照实实验验，以以排排除除甲甲醛醛自自然然挥挥发发对对实实验验结结果的干果的干扰扰。答卷采答卷采样样原原处纠错处纠错纠错纠错依据依据答答题题不不规规范范记忆记忆不准确不准确混淆混淆“消毒消毒”与与“灭灭菌菌”混淆两种混淆两种对对照照组组