人教版教学课件专题2-课题1-微生物的实验室培养.ppt
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1、专题专题2 2微生物的培养与应用微生物的培养与应用课题课题1 1微生物的实验室培养微生物的实验室培养.微生物的类群微生物的类群微微生生物物原核类原核类:真核类真核类非细胞类:非细胞类:细菌、支原体、放线菌、蓝藻细菌、支原体、放线菌、蓝藻个体微小、结构简单个体微小、结构简单酵母菌、霉菌、食用菌酵母菌、霉菌、食用菌真菌:真菌:原生生物:原生生物:显微藻类、原生生物显微藻类、原生生物(如:草履虫、变形(如:草履虫、变形虫等)虫等)病毒、类病毒、朊病毒病毒、类病毒、朊病毒微生物的共同特点:微生物的共同特点:一一.微生物基础知识微生物基础知识1.1.细菌的形态细菌的形态球菌球菌弧菌弧菌杆菌杆菌二分裂二分
2、裂2.2.细菌的繁殖细菌的繁殖3.3.细菌的菌落细菌的菌落.定义:定义:单个或者少数单个或者少数细菌在固体培养基上大量细菌在固体培养基上大量繁殖时,会形成一个肉眼可见的、具有繁殖时,会形成一个肉眼可见的、具有一定形态结构的一定形态结构的子细胞群体子细胞群体,叫做菌落。,叫做菌落。.特征:特征:大小、形状、光泽度、颜色、硬度、大小、形状、光泽度、颜色、硬度、透明度等。透明度等。.功能:功能:每种细菌在一定条件下所形成的菌落,每种细菌在一定条件下所形成的菌落,可以可以作为菌种鉴定的重要依据作为菌种鉴定的重要依据。为抵抗不良环境可形成细菌的休眠体为抵抗不良环境可形成细菌的休眠体为抵抗不良环境可形成细
3、菌的休眠体为抵抗不良环境可形成细菌的休眠体芽孢芽孢芽孢芽孢几种菌落及其形态几种菌落及其形态微生物需要的五大类营养要素物质是:微生物需要的五大类营养要素物质是:.微生物需要的营养物质及功能微生物需要的营养物质及功能1.1.碳源碳源 2.2.氮源氮源 3.3.生长因子生长因子 4.4.无机盐无机盐 5.5.水水:凡是能为微生物提供所需:凡是能为微生物提供所需碳元素碳元素的的营养物质。营养物质。无机碳源:无机碳源:COCO2 2;NaHCONaHCO3 3等等有机碳源:有机碳源:糖类糖类、脂肪酸、花生、脂肪酸、花生粉饼、石油等粉饼、石油等构成细胞物质和一些代谢产物构成细胞物质和一些代谢产物异养微生物
4、的能源异养微生物的能源.概念概念.来源:来源:.作用:作用:1.1.微生物的碳源微生物的碳源无机氮源:无机氮源:无机氮源:无机氮源:N N N N2 2 2 2、NHNHNHNH4 4 4 4+、NONONONO3 3 3 3-、NHNHNHNH3 3 3 3等。等。等。等。有机氮源:有机氮源:有机氮源:有机氮源:尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨尿素、牛肉膏、蛋白胨、氨基酸等基酸等基酸等基酸等凡是能够为微生物提供凡是能够为微生物提供凡是能够为微生物提供凡是能够为微生物提供N N N N元素元素元素元素的营养物质。的营养物质。的营养物质。的营养物质。主要用
5、于合成蛋白质、核酸及含主要用于合成蛋白质、核酸及含主要用于合成蛋白质、核酸及含主要用于合成蛋白质、核酸及含N N N N的代谢产的代谢产的代谢产的代谢产物。物。物。物。2.2.微生物的氮源微生物的氮源.概念:概念:概念:概念:.来源:来源:来源:来源:.作用:作用:作用:作用:3.3.生长因子生长因子.常见的生长因子:常见的生长因子:常见的生长因子:常见的生长因子:.概念:概念:概念:概念:.作用:作用:作用:作用:微生物生长不可缺少的微量有机物。微生物生长不可缺少的微量有机物。微生物生长不可缺少的微量有机物。微生物生长不可缺少的微量有机物。酶和核酸的组成成分。酶和核酸的组成成分。酶和核酸的组
6、成成分。酶和核酸的组成成分。维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等。维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等。维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等。维生素、氨基酸、嘌呤、嘧啶等。.培养基培养基 1.1.概念:培养基(培养液)是由人工方法配制概念:培养基(培养液)是由人工方法配制而成的,专供微生物生长繁殖使用的营养基质。而成的,专供微生物生长繁殖使用的营养基质。3 3.培养基的类型和用途培养基的类型和用途2.2.培养基的成分:培养基的成分:一般都含有一般都含有水水、碳源碳源、氮源氮源、无机盐无机盐等营养物等营养物质,另外还需要满足微生物生长对质,另外还需要满足微生物生长对pHpH、特殊营特殊营养物质养物质以及以及氧气氧气等的
7、要求。等的要求。P14P14P15P15培养基的种类培养基的种类不加凝固剂不加凝固剂加凝固剂,如加凝固剂,如琼脂琼脂工业生产工业生产观察微生物的运动、观察微生物的运动、分类鉴定分类鉴定微生物分离、鉴定、微生物分离、鉴定、活菌计数、保藏菌活菌计数、保藏菌种种含化学成分不明确的天然物含化学成分不明确的天然物质质工业生产工业生产培养基成分明确培养基成分明确分类、鉴定分类、鉴定在培养基中加入某种化学物在培养基中加入某种化学物质质,以抑制不需要的微生物以抑制不需要的微生物的生长的生长,促进所需要的微生促进所需要的微生物的生长物的生长培养、分离出特培养、分离出特定微生物定微生物在培养基中加入某种指示剂在培
8、养基中加入某种指示剂或化学药品或化学药品,用以鉴别不同用以鉴别不同种类的微生物种类的微生物鉴别不同种类微鉴别不同种类微生物生物选择培养基选择培养基液体培养基液体培养基半固体培养基半固体培养基固体培养基固体培养基P84P84练习练习1.不能作不能作为为异养微生物碳源的是(异养微生物碳源的是()A牛肉膏牛肉膏B含碳有机物含碳有机物C石油石油D含碳无机物含碳无机物D D2.自养型微生物与异养型微生物的培养基的自养型微生物与异养型微生物的培养基的主要差主要差别别是(是()A碳源碳源B氮源氮源C无机无机盐盐D生生长长因子因子 A A3.下列关于生下列关于生长长因子的因子的说说法中,不正确的一法中,不正确
9、的一项项是是()A是微生物生是微生物生长长不可缺少的微量有机物不可缺少的微量有机物B是微生物生是微生物生长长不可缺少的微量不可缺少的微量矿质矿质元素元素C主要包括主要包括维维生素、氨基酸和碱基等生素、氨基酸和碱基等D一般是一般是酶酶和核酸的和核酸的组组成成分成成分B B4 4.通过选择培养基可以从混杂的微生物群体中分离出所需的通过选择培养基可以从混杂的微生物群体中分离出所需的微生物。在碳源为纤维素的培养基上,大部分微生物无法生长;微生物。在碳源为纤维素的培养基上,大部分微生物无法生长;在培养基中加入青霉素,可以抑制细菌和放线菌。利用上述方法在培养基中加入青霉素,可以抑制细菌和放线菌。利用上述方
10、法能从混杂的微生物群体中分别分离出()能从混杂的微生物群体中分别分离出()大肠杆菌大肠杆菌霉菌霉菌放线菌放线菌纤维素分解菌纤维素分解菌A.A.B.B.C.C.D.D.解析:解析:选选A A。本题考查了微生物分离知识。纤维素分解菌可。本题考查了微生物分离知识。纤维素分解菌可以利用纤维素,大部分微生物却不能;培养基中加入青霉素可以利用纤维素,大部分微生物却不能;培养基中加入青霉素可以抑制细菌和放线菌,但霉菌能够生长。以抑制细菌和放线菌,但霉菌能够生长。5 5右表是某微生物培养右表是某微生物培养基成分,请据此回答:基成分,请据此回答:(1 1)右表培养基可培养)右表培养基可培养的微生物类型是的微生物
11、类型是 。(2 2)若不慎将过量若不慎将过量NaClNaCl加入培养基中。如不加入培养基中。如不想浪费此培养基,可再加想浪费此培养基,可再加入入 ,用于培,用于培养养 ,自养型微生物自养型微生物 含碳有机物含碳有机物 金黄色葡萄球菌金黄色葡萄球菌(3 3)若除去成分)若除去成分,加入,加入(CH2OCH2O),该培养基可用于培),该培养基可用于培养养 。(4 4)表中营养成分共有)表中营养成分共有 类。类。(5 5)不论何种培养基,在各种成)不论何种培养基,在各种成分都溶化后分装前,要进行的是分都溶化后分装前,要进行的是 。(6 6)右表中各成分重量确定的原)右表中各成分重量确定的原则是则是
12、。(7 7)若右表培养基用于菌种鉴定,)若右表培养基用于菌种鉴定,应该增加的成分应该增加的成分 。固氮微生物固氮微生物 3 调整调整pHpH 依微生物的生长需要确定依微生物的生长需要确定 琼脂(或凝固剂)琼脂(或凝固剂)思考:思考:1.获得纯净培养物的关键获得纯净培养物的关键?2.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外,还有什么目的?(外来微生物污染外,还有什么目的?(P15旁栏思考)旁栏思考)3.消毒和灭菌有何不同?消毒和灭菌有何不同?4.常用的消毒和灭菌方法有哪些?常用的消毒和灭菌方法有哪些?无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感
13、染无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。.无菌技术无菌技术防止外来杂菌的入侵防止外来杂菌的入侵消毒与灭菌的比较消毒与灭菌的比较煮沸消毒法:煮沸消毒法:100100煮沸煮沸5-6min5-6min。巴氏消毒法:巴氏消毒法:70-7570-75下煮下煮30min30min或或 8080下煮下煮15min15min。化学药剂消毒法:用化学药剂消毒法:用75%75%酒精、新洁尔酒精、新洁尔灭等进行皮肤消毒;氯气消毒水源。灭等进行皮肤消毒;氯气消毒水源。紫外线消毒。紫外线消毒。.消毒的方法:消毒的方法:3.3.常用的消毒与灭菌的方法常用的消毒与灭菌的方法表面灭菌和空气表面灭菌和空气灭菌等使用灭菌等
14、使用 紫紫外线外线 灭菌法,灭菌法,所用器械是所用器械是 紫紫外灯外灯 。照射照射30min30min,可先喷,可先喷洒石炭酸或煤酚洒石炭酸或煤酚皂皂溶液加强消毒溶液加强消毒效果。效果。(2)灭菌)灭菌a 灼烧灭菌灼烧灭菌 b 干热灭菌干热灭菌 c 高压蒸汽灭菌高压蒸汽灭菌a.灼烧灭菌灼烧灭菌微生物的微生物的接种工具接种工具(接接种环、接种针种环、接种针)或其或其他金属用具直接在火他金属用具直接在火焰的充分燃烧层灼烧焰的充分燃烧层灼烧注意适用范围注意适用范围b.干热灭菌干热灭菌 c.160170;12h能耐高温的需要保持干能耐高温的需要保持干燥的物品燥的物品(玻璃器皿玻璃器皿)c.高压蒸汽灭菌
15、高压蒸汽灭菌 d.100kPa 121 e.15-30min通常用于培养基的灭菌通常用于培养基的灭菌请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要,请选择合适的方法。如果需要,请选择合适的方法。培养细菌用的培养基与培养皿培养细菌用的培养基与培养皿玻棒、试管、烧瓶和吸管玻棒、试管、烧瓶和吸管实验操作者的双手实验操作者的双手答:(答:(1 1)、()、(2 2)需要灭菌;)需要灭菌;(3 3)需要消毒。)需要消毒。P P1616旁栏思考旁栏思考二二.实验操作实验操作(以培养大肠杆菌为例以培养大肠杆菌为例).制备牛肉膏蛋白胨培养基制备牛肉膏蛋白胨培养基1
16、.1.计算计算2.2.称量称量3.3.溶化溶化4.4.灭菌灭菌:将锥形瓶放入高压蒸气灭菌锅,在压力为将锥形瓶放入高压蒸气灭菌锅,在压力为100kPa100kPa、温度为、温度为121121,灭菌,灭菌151530min30min。5 5.倒平板倒平板:待培养基冷却到待培养基冷却到50 50 左右时,在酒精灯左右时,在酒精灯附近倒平板。附近倒平板。2d2d后观察平板,无杂菌污染才可后观察平板,无杂菌污染才可用来接种。用来接种。倒倒平平板板操操作作答:可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶,感觉答:可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶,感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时,就可以进锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时,
17、就可以进行倒平板了。行倒平板了。2.2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰?为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰?答:通过灼烧灭菌,防止瓶口的微生物污染培答:通过灼烧灭菌,防止瓶口的微生物污染培养基。养基。问题讨论问题讨论1.1.培养基灭菌后,需要冷却到培养基灭菌后,需要冷却到50 50 左右时,左右时,才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度?的温度?3.3.平板冷凝后,为什么要将平板倒置?平板冷凝后,为什么要将平板倒置?4.4.在倒平板的过程中,如果不小心将培养基溅在倒平板的过程中,如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位,这个平板还能用来在皿盖与
18、皿底之间的部位,这个平板还能用来培养微生物吗?为什么?培养微生物吗?为什么?答:答:平板冷凝后,皿盖上会凝结水珠,凝固后平板冷凝后,皿盖上会凝结水珠,凝固后的培养基表面的湿度也比较高,将平板倒置,的培养基表面的湿度也比较高,将平板倒置,既可以使培养基表面的水分更好地挥发,又可既可以使培养基表面的水分更好地挥发,又可以以防止皿盖上的水珠落入培养基防止皿盖上的水珠落入培养基,造成污染。,造成污染。答:空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的答:空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生,因此最好不要用这个平板培养培养基上滋生,因此最好不要用这个平板培养微生物。微生物。关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养
19、基的叙述中,错误的是()关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述中,错误的是()A.A.操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌B.B.牛肉膏溶化并与称量纸分离后,用玻棒取出称量纸牛肉膏溶化并与称量纸分离后,用玻棒取出称量纸C.C.待培养基冷却至待培养基冷却至5050左右时,进行倒平板左右时,进行倒平板D.D.待平板冷却凝固约待平板冷却凝固约5min5min10min10min后,将平板倒过来放置后,将平板倒过来放置解析:选A。本题考查了牛肉膏蛋白胨固体培养基的制备过程。其顺序为:计算称量溶化灭菌倒平板,故A项错误。.纯化大肠杆菌纯化大肠杆菌平板划线法平板划
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