生物传感器及其应用资料教学内容.ppt
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1、生物传感器及其应用资料一、什么是生物传感器一、什么是生物传感器传感器(电极或探头):能感受规定的被测量并按照一定的规律将其转换成可用信号的器件或装置,它通常由敏感元件、转化元件(换能器)及相应的机械结构和线路组成。2生物传感器:是利用生物物质作为敏感材生物传感器:是利用生物物质作为敏感材料,将所感受的生物信息转换成电信号进料,将所感受的生物信息转换成电信号进行检测的传感器。行检测的传感器。某生物参数某生物参数 感受器感受器 电、热、光电、热、光 换能器换能器 电信号电信号处理器处理器数字量数字量3生物传感器的特点:生物传感器的特点:不要求样品的清晰度,检测样品一般不需要预处理不要求样品的清晰度
2、,检测样品一般不需要预处理,也不需另加其他试剂。样品中被测组分的分离和检也不需另加其他试剂。样品中被测组分的分离和检测可以同时完成;测可以同时完成;选择性高、分析速度快、操作简易;选择性高、分析速度快、操作简易;响应快响应快,样品用量少样品用量少,并且可反复多次使用;并且可反复多次使用;灵敏度高:可检测灵敏度高:可检测0.11.0ppm浓度的物质,最小极浓度的物质,最小极限为限为10-10g/mL。稳定性相对较差:检测结果易受物理和化学环境因稳定性相对较差:检测结果易受物理和化学环境因素的影响。素的影响。可进行活体分析;可进行活体分析;可以实现连续在线监测可以实现连续在线监测,容易实现自动化测
3、量。容易实现自动化测量。4二、生物传感器的构成二、生物传感器的构成由由固定化固定化的的生物敏感材料生物敏感材料作识别元件(包作识别元件(包括酶、抗体、抗原、微生物、细胞、组织、括酶、抗体、抗原、微生物、细胞、组织、核酸等生物活性物质)与适当的物理、化核酸等生物活性物质)与适当的物理、化学换能结构器(如氧电极、光敏管、场效学换能结构器(如氧电极、光敏管、场效应管、压电晶体等等应管、压电晶体等等)及信号放大装置构)及信号放大装置构成。成。5工作原理:待测物质经扩散作用进入固工作原理:待测物质经扩散作用进入固定生物膜敏感层,经定生物膜敏感层,经分子识别分子识别而发生生而发生生物学作用,产生的信息如分
4、子浓度、光、物学作用,产生的信息如分子浓度、光、电、热、音等被相应的信号转换器变为电、热、音等被相应的信号转换器变为可定量和处理的可定量和处理的电信号电信号,再经二次仪表,再经二次仪表放大并输出,以电极测定其电流值或电放大并输出,以电极测定其电流值或电压值,从而换算出被测物质的量或浓度。压值,从而换算出被测物质的量或浓度。6生物膜的生物膜的成膜固定技术成膜固定技术与与传感器器件技术传感器器件技术是生物传是生物传感器的两大关键支撑,决定生物传感器的检测质量。感器的两大关键支撑,决定生物传感器的检测质量。7生物膜的成膜技术分为物理或化学方法:生物膜的成膜技术分为物理或化学方法:物理方法有物理物理方
5、法有物理吸附吸附与物理与物理包埋包埋。化学方法有离子交换剂法、共价结合法、胶化学方法有离子交换剂法、共价结合法、胶联共聚法等,通过化学作用结合固定生物分联共聚法等,通过化学作用结合固定生物分子。子。8传感器器件技术:是将生物的特异关联反传感器器件技术:是将生物的特异关联反应中所伴随的物理或化学变化通过热、电、应中所伴随的物理或化学变化通过热、电、光、声等信息载体转换成电信号,通过放光、声等信息载体转换成电信号,通过放大或其他方式,传递到处理系统从而显示大或其他方式,传递到处理系统从而显示被检测物质的量或质。被检测物质的量或质。9(一)根据换能器分类(一)根据换能器分类换能器:换能器:主要是主要
6、是电化学电化学或或光学光学检测元件检测元件(如:电如:电流、电位测量电极、热敏电阻、场效应晶体管、流、电位测量电极、热敏电阻、场效应晶体管、压电晶体及光纤等压电晶体及光纤等)。三、生物传感器的类型及原理三、生物传感器的类型及原理10信号转换器信号转换器生物反应产生的信号生物反应产生的信号电极式电极式各种电极活性物质,如各种电极活性物质,如O2、CO2、H+、NH4+等等热敏电阻式热敏电阻式热热光电纤维式光电纤维式光光半导体式半导体式电场电场压电晶体式压电晶体式气体气体等离子体共振式等离子体共振式 磁场磁场11(1 1)将化学变化转变成电信号将化学变化转变成电信号 以酶传感器为例以酶传感器为例,
7、酶催化特定底物发生反应酶催化特定底物发生反应,从而从而使使特定生成物的量有所增减特定生成物的量有所增减,用能把这类物质的量的,用能把这类物质的量的改变转换为电信号的装置和固定化酶耦合改变转换为电信号的装置和固定化酶耦合,即构成酶即构成酶传感器。传感器。常用转换装置有氧电极、过氧化氢。常用转换装置有氧电极、过氧化氢。12(2 2)将热变化转换成电信号)将热变化转换成电信号 固定化的生物材料与相应的被测物作用时常固定化的生物材料与相应的被测物作用时常伴有热的变化,例如大多数酶反应的热焓变化量伴有热的变化,例如大多数酶反应的热焓变化量在在25-100kJ/mol25-100kJ/mol的范围。这类生
8、物传感器的工作的范围。这类生物传感器的工作原理是把反应的热效应借原理是把反应的热效应借热敏电阻热敏电阻转换为阻值的转换为阻值的变化变化,后者通过有放大器的电桥输入到记录仪中。后者通过有放大器的电桥输入到记录仪中。13(3 3)将光信号转变为电信号将光信号转变为电信号 例如,过氧化氢酶例如,过氧化氢酶,能催化过氧化氢能催化过氧化氢/鲁米诺体鲁米诺体系发光系发光,因此如设法将过氧化氢酶膜附着在光纤或因此如设法将过氧化氢酶膜附着在光纤或光敏二极管的前端光敏二极管的前端,再和光电流测定装置相连再和光电流测定装置相连,即可即可测定过氧化氢含量。测定过氧化氢含量。还有很多细菌能与特定底物发生反应还有很多细
9、菌能与特定底物发生反应,产生荧产生荧光,也可以用这种方法测定底物浓度。光,也可以用这种方法测定底物浓度。14上述三类生物传感器共同点:上述三类生物传感器共同点:都是将分子识别元件中的生物敏感物质与待都是将分子识别元件中的生物敏感物质与待测物发生测物发生化学反应化学反应,将反应后所产生的化学或物理将反应后所产生的化学或物理变化再通过信号转换器转变为电信号进行测量变化再通过信号转换器转变为电信号进行测量,这这种方式统称为种方式统称为间接测量方式。间接测量方式。15(4 4)直接产生电信号方式直接产生电信号方式这种方式可以使酶反应伴随的电子转移、微生物细胞的这种方式可以使酶反应伴随的电子转移、微生物
10、细胞的氧化直接氧化直接(或通过电子递体的作用或通过电子递体的作用)在电极表面上发生,在电极表面上发生,根据所得的电流量即可得底物浓度。根据所得的电流量即可得底物浓度。这种方法受环境因素影响小,更稳定。这种方法受环境因素影响小,更稳定。16(一)根据感受器的生物敏感物质分类(一)根据感受器的生物敏感物质分类感受器(分子识别元件):由具有分子识别能力感受器(分子识别元件):由具有分子识别能力的的生物功能物质生物功能物质(如:酶、动植物组织切片、微生如:酶、动植物组织切片、微生物、抗原、抗体和核酸等物、抗原、抗体和核酸等)构成。构成。17酶酶传传感器感器各种酶各种酶微生物微生物传传感器感器微生物细胞
11、微生物细胞细细胞器胞器传传感器感器细胞膜、线粒体、电子传递体、微细胞膜、线粒体、电子传递体、微粒体等细胞器粒体等细胞器组织传组织传感器感器细胞组织细胞组织免疫免疫传传感器感器抗原、抗体抗原、抗体基因(基因(DNA)传传感器感器核酸(核酸(DNA、RNA)181.1.酶电极传感器酶电极传感器电极式生物传感器电极式生物传感器 电极式生物传感器的组成:电极式生物传感器的组成:19电极活性物质 电 极被测物质膜生物催化剂生物催化剂酶酶、微生物、微生物抗体、抗原抗体、抗原细胞器、细胞组织细胞器、细胞组织输出电信号电化学反应电极式生物传感器原理示意图电极式生物传感器原理示意图 20电极式生物传感器原理模式
12、:电极式生物传感器原理模式:被测物质被测物质 固定化生物催化剂膜固定化生物催化剂膜 电极活性物质电极活性物质 电电 极极 电信号电信号 生物化学反应生物化学反应电化学反应电化学反应21以葡萄糖氧化酶以葡萄糖氧化酶(GOD)(GOD)电极为例简述其工作原电极为例简述其工作原理:理:在在GODGOD的催化下的催化下,葡萄糖被氧化生成葡萄糖葡萄糖被氧化生成葡萄糖酸和过氧化氢。酸和过氧化氢。C C6 6H H1212O O6 6+O+O2 2 C C6 6H H1212O O7 7+H+H2 2O O2 2根据上述反应根据上述反应,可通过可通过氧电极氧电极(测氧的消耗测氧的消耗)、过氧化氢电极过氧化氢
13、电极(测测H2O2的产生的产生)和和pH电极电极(测酸度变化测酸度变化)来间接测定葡萄糖的含量。来间接测定葡萄糖的含量。22 葡萄糖传感器组成:葡萄糖传感器组成:葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶聚丙烯酰胺凝胶聚丙烯酰胺凝胶 包埋法包埋法葡萄糖氧化酶膜葡萄糖氧化酶膜 氧电极氧电极葡萄糖传感器葡萄糖传感器23葡萄糖传感器示意图葡萄糖传感器示意图 PbPt记录仪记录仪空气空气被被测测溶溶液液电解质溶液电解质溶液聚四氟乙稀膜聚四氟乙稀膜固定化葡萄糖氧化酶膜固定化葡萄糖氧化酶膜氧电极氧电极葡萄糖葡萄糖 酶催化反应酶催化反应 电极旁电极旁O2浓度浓度电化学反应电化学反应 电流值电流值葡萄糖浓度葡萄糖浓度 酶膜上酶
14、膜上 氧电极上氧电极上 主要性能:测量范围:主要性能:测量范围:1500 mg/L 响应时间:响应时间:1030 s 使用寿命:使用寿命:60100 day24最重要的酶有二类:即氧化还原酶和水解最重要的酶有二类:即氧化还原酶和水解酶。前者可以催化用氧气或酶。前者可以催化用氧气或NAD进行氧化进行氧化的物质,后者可以催化物质的水解反应,的物质,后者可以催化物质的水解反应,酶催化反应过程中通常伴随有酶催化反应过程中通常伴随有质子、离子、质子、离子、热量、光信号、电信号或质量热量、光信号、电信号或质量的变化。的变化。大部分生物传感器都将酶作为识别响应的大部分生物传感器都将酶作为识别响应的复合系统。
15、复合系统。25某些酶传感器一览表某些酶传感器一览表待测待测物质物质固定化酶固定化酶转换器转换器测量范围测量范围(mg/L)响应时间响应时间(min)稳定性稳定性(day)葡萄糖葡萄糖葡萄氧化酶葡萄氧化酶铂电铂电(H2O2)氧电极氧电极(O2)151031510215(S)10(S)60100100各种糖各种糖 蔗糖酶、变旋酶蔗糖酶、变旋酶葡萄糖氧化酶葡萄糖氧化酶氧电极氧电极(O2)1005000514乳酸乳酸乳酸脱氢酶乳酸脱氢酶燃料电极燃料电极(NADH)100030(S)14乙醇乙醇乙醇脱氢酶乙醇脱氢酶乙醇氧化酶乙醇氧化酶原电池原电池铂电极铂电极(H2O2)1430尿素尿素尿酶尿酶铵电极铵电
16、极(NH4+)氨电极氨电极(NH3)1010001010000.51242130青霉素青霉素 青霉素酶青霉素酶玻璃电极玻璃电极(H+)1010000.52714L-酪氨酸酪氨酸 酪氨酸脱羧酶酪氨酸脱羧酶CO2电极电极(CO2)101041220262.微生物传感器微生物传感器在酶传感器制造中酶传感器制造中,首先遇到的困难就是酶的提困难就是酶的提取与精制取与精制。微生物膜作为微生物膜作为分子识别元件分子识别元件利用:利用:利用微生物细胞内单一或多个酶的机能利用微生物细胞内单一或多个酶的机能类似于酶传感器;类似于酶传感器;利用微生物的生理机能利用微生物的生理机能呼吸活性、代谢产物等。呼吸活性、代谢
17、产物等。27(1)微生物传感器的原理与分类)微生物传感器的原理与分类酶活性测定型酶活性测定型以微生物酶催化反应的以微生物酶催化反应的活性为指标;(类似于酶传感器)活性为指标;(类似于酶传感器)呼吸活性测定型呼吸活性测定型以微生物呼吸活性为以微生物呼吸活性为指标;指标;电极活性物质测定型电极活性物质测定型以微生物代谢产以微生物代谢产物为指标。物为指标。28呼吸活性测定型呼吸活性测定型必须是必须是好气性微生物好气性微生物氧浓度氧浓度 氧电极氧电极 电流值电流值 COCO2 2生成生成 CO CO2 2电极电极 电位值电位值 氧氧 微生物利用微生物利用的被测物质的被测物质好好气气微微生生物物膜膜29
18、电极活性物质测定型电极活性物质测定型包括包括厌氧和好氧微生物厌氧和好氧微生物待测物质待测物质固固定定化化微微生生物物膜膜 COCO2 2 CO CO2 2电极电极 电位式电位式 H H2 2 铂阳极,铂阳极,AgAg2 2O O2 2阴极阴极 电流式电流式 NH NH3 3 氨电极氨电极 电位式电位式 H H+玻璃电极玻璃电极 电位式电位式 还原型辅酶还原型辅酶 燃料电极燃料电极 电流式电流式 30(2)微生物传感器特点)微生物传感器特点微生物较酶易获得,价格相对较低;微生物较酶易获得,价格相对较低;稳定性好,连续使用时间可达一个月左右;稳定性好,连续使用时间可达一个月左右;响应时间比酶传感器
19、长,多数在响应时间比酶传感器长,多数在10分钟左右;分钟左右;特异性较酶传感器差。特异性较酶传感器差。31(3)微生物传感器实例)微生物传感器实例例例1:谷氨酸传感器:谷氨酸传感器谷氨酸脱羧酶催化谷氨酸的反应为:谷氨酸脱羧酶催化谷氨酸的反应为:HOOC-(CH2)2-CHNH2-COOH 谷氨酸脱羧酶谷氨酸脱羧酶 HOOC-(CH2)2-CH2NH2+CO232传感器制备传感器制备大肠杆菌细胞大肠杆菌细胞冷冻干燥冷冻干燥用水调匀用水调匀涂布于尼龙网(涂布于尼龙网(60目,目,7mm)两面)两面置于置于CO2电极上电极上外用赛璐酚膜盖住外用赛璐酚膜盖住谷氨酸传感器谷氨酸传感器电极膜(硅橡胶膜)细
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